三物黃芩顆?？箘?dòng)物Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)及其機(jī)制研究

1、三物黃芩顆粒抗動(dòng)物型變態(tài)反應(yīng)及其機(jī)制研究*(1)【摘要】 目的 運(yùn)用模型動(dòng)物觀察三物黃芩顆粒的抗過(guò)敏作用，并通過(guò)其作用環(huán)節(jié)的影響，初步探討其抗過(guò)敏機(jī)制。方法 用大鼠被動(dòng)皮膚過(guò)敏法建立型變態(tài)反應(yīng)動(dòng)物模型，觀察反應(yīng)藍(lán)斑直徑；測(cè)定血清中總IgE含量；觀察顱骨骨膜肥大細(xì)胞脫顆粒情況及對(duì)外源性組胺的拮抗作用。結(jié)果 該顆粒大、中劑量組能非常顯著地抑制大鼠背部皮膚藍(lán)色反應(yīng)斑的直徑（P0.05），能夠減低致敏大鼠血清中總IgE含量，大劑量組與模型組比較差異有顯著性（P0.05）。顯微鏡下拍攝實(shí)驗(yàn)大鼠顱骨骨膜貼片，可見(jiàn)大、中、小劑量組均有一定程度的肥大細(xì)胞脫顆?，F(xiàn)象，但與模型組比較有所減少。該顆粒大、中劑量組對(duì)

2、外源性組胺引起的大鼠瘙癢致癢閾，與正常對(duì)照組比較有明顯提高（P0.01）。結(jié)論 三物黃芩顆粒能有效對(duì)抗型變態(tài)反應(yīng)，具有良好的抗過(guò)敏作用?！娟P(guān)鍵詞】 三物黃芩顆粒；型變態(tài)反應(yīng)；動(dòng)物模型；抗過(guò)敏三物黃芩顆粒（由黃芩、苦參、生地制備成顆粒劑）源于古方，本課題旨在從實(shí)驗(yàn)角度，探討三物黃芩顆粒的抗型變態(tài)反應(yīng)動(dòng)物模型作用及其機(jī)制，從一個(gè)方面為該藥的臨床提供依據(jù)，同時(shí)探討該藥治療型變態(tài)反應(yīng)類(lèi)疾病的可行性。本次實(shí)驗(yàn)在我院動(dòng)物室（SPF級(jí)）進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)藥物三物黃芩浸膏粉（其顆粒制劑已于2004年獲SFDA臨床批文）由四川維奧制藥有限公司提供，每克浸膏粉含原生藥5g，批號(hào)：030203。臨床擬定劑量為每日8g浸膏粉

3、（40g原生藥），按成人一般體重60kg計(jì)算，人日用劑量為0.67g原生藥/kg。設(shè)三物黃芩顆粒大、中、小劑量組（13.4g原生藥/kg、6.7g原生藥/kg、3.35g原生藥/kg)，相當(dāng)于臨床擬定劑量的20倍、10倍、5倍。實(shí)驗(yàn)時(shí)按20%、10%、5%濃度配制藥液，以1ml/100g體重灌胃。1 抗型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD大鼠，雌雄各半，體重（18020）g，四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，并配給飼料。合格證號(hào)：川實(shí)動(dòng)管質(zhì)99-32。1.2 實(shí)驗(yàn)藥物和試劑 強(qiáng)的松片：5mg/片，每次510mg，每日1060mg，仙居制藥有限公司提供，批號(hào)：020257。1%卵白蛋白：中國(guó)醫(yī)藥

4、集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司生產(chǎn)，批號(hào)F20010702。百日咳三聯(lián)疫苗：成都生物制品研究所提供，批號(hào)20020403。0.5%伊文思藍(lán)溶液：中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司生產(chǎn)，批號(hào)F20020913。1.3 實(shí)驗(yàn)儀器、設(shè)備 ACS-3H-B電子秤：中山市金利電子衡器有限公司；LG10-2.4型離心機(jī)：北京醫(yī)療儀器修理廠制造。1.4 實(shí)驗(yàn)方法1.4.1 動(dòng)物分組 動(dòng)物購(gòu)回后，取體重160200g健康SD大鼠50只，按體重隨機(jī)分為正常對(duì)照組、三物黃芩顆粒大劑量組、中劑量組、小劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組5組，每組10只，雌雄各半。1.4.2 給藥方法 正常對(duì)照組給予生理鹽水，各組均以1ml/100g體重體積灌胃給藥

5、，每日1次，連續(xù)7天。1.4.3 劑量設(shè)計(jì) 陽(yáng)性對(duì)照組用強(qiáng)的松5mg/kg，相當(dāng)于臨床劑量的10倍。1.5 觀察指標(biāo)及測(cè)試方法1.5.1 抗血清的制備 取健康SD大鼠5只，用1%卵白蛋白生理鹽水溶液按10mg/kg肌注射于后腿兩側(cè)，同時(shí)腹腔注射百日咳疫苗21010/只。12天后，處死大鼠采血，血液以500r/min低速離心，分離血清，此血清置冰箱備用。1.5.2 正式實(shí)驗(yàn) 各組大鼠灌胃給藥，每天1次，連續(xù)7天。第6天用乙醚淺麻醉大鼠，在其背中線兩側(cè)、距脊柱1.5cm處剪光被毛，每側(cè)剪3點(diǎn)，每點(diǎn)間隔1.5cm。取上述含IgE的抗血清，用生理鹽水稀釋成130、140、150三種不同稀釋度，按不同濃

6、度抗血清次序，皮內(nèi)注射于剪毛的各點(diǎn)，每點(diǎn)0.1ml。第8天進(jìn)行抗原攻擊：尾靜脈注射0.5%伊文思藍(lán)溶液1ml，內(nèi)含卵白蛋白1mg。經(jīng)20min后，斷頸處死大鼠，剪下背部皮膚，檢查注射各點(diǎn)的藍(lán)色反應(yīng)斑直徑。1.6 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 見(jiàn)表1。 表1 三物黃芩顆粒對(duì)大鼠被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)的影響 （xs）注：與對(duì)照組相比，*P0.05；*P0.01如表1所示，正常對(duì)照組皮斑直徑最大，表明造模成功。三物黃芩顆粒大、中劑量組連續(xù)給藥7天，能顯著地抑制各個(gè)稀釋度抗血清引起的大鼠背部皮膚藍(lán)色反應(yīng)斑的直徑（t檢驗(yàn)，P0.05），但不如強(qiáng)的松組（P0.01)，并且稀釋度越大，抑制越明顯。表明一定劑量的三物黃芩顆粒具有明顯對(duì)

7、抗型變態(tài)反應(yīng)模型的作用。2 對(duì)型變態(tài)反應(yīng)作用環(huán)節(jié)的實(shí)驗(yàn)2.1 對(duì)大鼠IgE的影響2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD大鼠，雌雄各半，體重（18020）g，四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，并配給飼料。合格證號(hào)：川實(shí)動(dòng)管質(zhì)99-32。2.1.2 實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性藥物和試劑 強(qiáng)的松片、1%卵白蛋白、百日咳三聯(lián)疫苗來(lái)源同前?？辔端嵊蓮V東臺(tái)山化工廠生產(chǎn)。2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器、設(shè)備 血清總IgE免疫放射分析測(cè)定盒：北京北方生物技術(shù)研究所提供，批號(hào)030731。ACS-3H-B電子秤：中山市金利電子衡器有限公司。LG10-2.4型離心機(jī)：北京醫(yī)療儀器修理廠制造。2.1.4 動(dòng)物分組 動(dòng)物購(gòu)回后，取體重160200g健康SD

8、大鼠60只，按體重隨機(jī)分為正常對(duì)照組（不致敏）、模型組（要致敏）、三物黃芩顆粒大劑量組、中劑量組、小劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組6組，每組10只，雌雄各半。2.1.5 給藥方法 正常對(duì)照組及模型組給予1ml/100g生理鹽水，各組均以1ml/100g體重體積灌胃給藥，每日1次，連續(xù)7天。2.1.6 觀察指標(biāo)及測(cè)試方法 實(shí)驗(yàn)第1天，除正常對(duì)照組外，用卵白蛋白生理鹽水溶液按10mg/kg肌內(nèi)注射于后腿兩側(cè)，同時(shí)腹腔注射百日咳疫苗21010/只，各組按給藥方法灌胃7天。第13天（IgE高峰時(shí)間），處死動(dòng)物采血，血液低速離心，分離血清，送成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院放免科測(cè)血清總IgE含量。2.1.7 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 見(jiàn)表

9、2。 表2 三物黃芩顆粒對(duì)致敏大鼠血清IgE含量的影響 （x 本篇論文是由3COME文檔頻道的網(wǎng)友為您在網(wǎng)絡(luò)上收集整理餅投稿至本站的，論文版權(quán)屬原作者，請(qǐng)不要用于商業(yè)用途或者抄襲，僅供參考學(xué)習(xí)之用，否者后果自負(fù)，如果此文侵犯您的合法權(quán)益，請(qǐng)聯(lián)系我們。s） 由表2可見(jiàn)，空白組與模型組比較差異有顯著性(t檢驗(yàn)，P0.05），說(shuō)明造模成功。三物黃芩顆粒大、中、小劑量組連續(xù)灌胃給藥7天，能夠減低致敏大鼠血清中總IgE含量，其中大劑量組與模型組比較差異有顯著性（P0.05），說(shuō)明三物黃芩顆粒大劑量組能夠明顯減低致敏大鼠血清中總IgE含量。2.2 大鼠顱骨骨膜肥大細(xì)胞脫顆粒實(shí)驗(yàn)2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD大

10、鼠，雌雄各半，體重（18020）g，四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，并配給飼料。合格證號(hào)：川實(shí)動(dòng)管質(zhì)99-32。2.2.2 實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性藥物和試劑 強(qiáng)的松片、苦味酸、1%卵白蛋白、百日咳三聯(lián)疫苗同前。0.5%伊文思藍(lán)溶液：中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑公司生產(chǎn)，批號(hào)F20020913。2.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器、設(shè)備 ACS-3H-B電子秤：中山市金利電子衡器有限公司；LG10-2.4型離心機(jī)：北京醫(yī)療儀器修理廠制造。2.2.4 動(dòng)物分組 動(dòng)物購(gòu)回后，取體重 160200g健康SD大鼠24只，按體重隨機(jī)分為空白組（不用藥，不注射抗血清，只進(jìn)行抗原攻擊：大鼠頭部皮下注射0.5%伊文思藍(lán)溶液1ml，內(nèi)含卵白蛋白

11、1mg)、模型組（不用藥，但注射抗血清，進(jìn)行抗原攻擊）、西藥組（注射抗血清，進(jìn)行抗原攻擊）、中藥小劑量組（小劑量組，注射抗血清，進(jìn)行抗原攻擊）、中藥中劑量組（中劑量組，注射抗血清，進(jìn)行抗原攻擊）、中藥大劑量組（大劑量組，注射抗血清，進(jìn)行抗原攻擊）6組，每組4只，雌雄各半。2.2.5 給藥方法 空白組給予生理鹽水，各組均以1ml/100g體重體積灌胃給藥，每日1次，連續(xù)7天。2.2.6 觀察指標(biāo)及測(cè)試方法 制備抗血清：另取健康SD大鼠4只，體重160200g，用卵白蛋白生理鹽水溶液按10mg/kg肌內(nèi)注射于后腿兩側(cè)，同時(shí)腹腔注射百日咳疫苗21010/只。第13天（IgE高峰時(shí)間），處死動(dòng)物采血，

12、血液低速離心，分離血清，此血清置冰箱備用。正式實(shí)驗(yàn)：（1）各組按給藥方法灌胃7天；（2）第6天，接種抗血清，除空白組外，其余5組大鼠頭部皮下注射稀釋成 120大鼠抗血清0.1ml；（3）第8天進(jìn)行抗原攻擊，30min后斷頭處死。取顱骨，經(jīng)脫水、固定、染色后，流水沖洗，細(xì)心剝離顱骨骨膜，展于載玻片晾干，在光鏡下進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察并拍攝照片。2.2.7 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析 顯微鏡下拍攝實(shí)驗(yàn)大鼠顱骨骨膜貼片，可見(jiàn)空白組實(shí)驗(yàn)大鼠顱骨骨膜血管周?chē)姆蚀蠹?xì)胞幾乎無(wú)脫顆?，F(xiàn)象；而模型組有大量肥大細(xì)胞脫顆?，F(xiàn)象，且可見(jiàn)細(xì)胞破裂，說(shuō)明造模成功。西藥組（30mg/kg)和中藥大、中、小劑量組有一定程度的肥大細(xì)胞脫顆?，F(xiàn)象，均明顯少于造模組。4個(gè)治療組比較，肥大細(xì)胞脫顆粒現(xiàn)象最少為西藥組，其次為大、中、小劑量組。說(shuō)明三物黃芩顆粒能抑制肥大細(xì)胞脫顆粒，但作用弱于強(qiáng)的松。3 結(jié)論本課題利用型變態(tài)反應(yīng)動(dòng)物模型，研究了三物黃芩顆粒的抗過(guò)敏作用，結(jié)果該顆粒能有效對(duì)抗型變態(tài)反應(yīng)，具有良好的抗過(guò)敏作用。其大、中劑量連續(xù)給藥天，對(duì) 30、1、50三