眩暈定方對兔血管性眩暈氣虛血瘀證模型血液流變學(xué)和腦血流圖的影

1、眩暈定方對兔血管性眩暈氣虛血瘀證模型血液流變學(xué)和腦血流圖的影響    【摘要】 目的 探討眩暈定方對兔血管性眩暈氣虛血瘀證模型血液流變學(xué)和腦血流圖的影響。方法 建立實驗性血管性眩暈氣虛血瘀證家兔模型，以西比靈膠囊為陽性對照藥進(jìn)行比較，觀察眩暈定方干預(yù)前后血液流變學(xué)和腦血流圖等改變情況。結(jié)果 眩暈定方作用于氣虛血瘀型血管性眩暈動物模型后，中劑量組全血黏度中切為2.56±0.15，高切為3.20±0.26；分別低于西比靈對照組的3.45±0.13、4.92±0.23；差異有顯著統(tǒng)

2、計學(xué)意義（P<0.01）；中劑量組腦血流圖速率（V）為（0.009 2±0.002 4）?贅，高于西比靈組的（0.007 6±0.001 8）?贅，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。結(jié)論 眩暈定方可有效增加該模型兔的腦血流量，降低血液黏度。【關(guān)鍵詞】 眩暈定方；血管性眩暈；氣虛血瘀；動物模型；兔；血液流變學(xué)；腦血流圖  To investigate the effect of Xuanyunding(XYD), a

3、60;formula of Chinese drugs for dizziness, on REG and blood rheology in vascular vertiginous model rabbit with the pattern of Qi deficiency and blood stasis(QDBS). Methods

4、0;The vascular vertiginous model rabbits with QDBS were prepared, and compared with medicine sibelium, the effects of XYD on REG and blood rheology in these models were&#

5、160;evaluated. Results The blood rheological scores in treatment group with middle dosage were respectively 2.56±0.15 and 3.20±0.26，while these in control group were respectively&#

6、160;3.45±0.13 and 4.92±0.23, the differences were significant(P<0.01) between them. The REG velocity score in treatment group with middle dosage were 0.0092±0.0024，while that

7、60;in control group were 0.007 6±0.001 8, the differences were significant(P<0.01). Conclusion XYD is effective to increase blood volume and decrease blood viscosity in bra

8、in circulation.  Xuanyunding; vascular vertigo; Qi deficiency and blood stasis; animal model; rabbits; blood rheology; REG眩暈是神經(jīng)內(nèi)科最常見的癥狀，也是常見的使病人最痛苦的癥狀，絕大多數(shù)人一生中經(jīng)歷過此癥。據(jù)史玉泉教授報告國內(nèi)人群眩暈患病率約為5，占神經(jīng)內(nèi)科門診患者5%10%，占住院患者的6.7%，占耳科門診患者的

9、7%1。眩暈是目前醫(yī)學(xué)界所面臨的一個很有挑戰(zhàn)性的課題，已被列入“十一五”國家科技支撐計劃。筆者通過多年臨床經(jīng)驗總結(jié)的自擬方“眩暈定方”在臨床應(yīng)用中療效滿意2，因此對該方進(jìn)行了深入的實驗研究，以期探討該方的作用機(jī)制，為進(jìn)一步研發(fā)該方提供實驗依據(jù)。         1 材料與方法         1.1 材料         1.1.1

10、60;動物 健康日本大耳白兔70只（湖南中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，動物合格證號：湘醫(yī)動字D20-003號，環(huán)境合格證號：湘醫(yī)動字D20-001號），雌雄各半，清潔級，體質(zhì)量（2.0±0.3）kg，兔齡34月，室溫1820 ，濕度65%70%，除正常組自由飲水進(jìn)食外，其余家兔自由進(jìn)水、控制進(jìn)食高脂飼料喂養(yǎng)。         1.1.2 藥物與試劑 眩暈定方濃縮液：該濃縮液由黃芪，當(dāng)歸，黨參，川芎，赤芍，地龍，葛根，丹參等組成。以上中藥材購于湖南中醫(yī)藥大學(xué)杏林藥號，浸

11、泡，水煎2次，每次煎得200 mL，合并煎液，濃縮至125 mL，每毫升含生藥1 g；西比靈膠囊：5 mg/粒，西安楊森制藥有限公司生產(chǎn)，批號：20040203；消痔靈注射液：吉林集安制藥集團(tuán)，批號：20040416；硫化鈉：上海昊化化工有限公司，批號：20031206。         1.1.3 儀器 REG-IG2型血流圖診斷儀（湖南益靈新技術(shù)有限公司），參數(shù)依據(jù)受試對象作相應(yīng)調(diào)整設(shè)置；DV-錐板式血液黏度計（美國Brookfield公司）；“可調(diào)速

12、動物眩暈產(chǎn)生儀”：用湘潭華成機(jī)電設(shè)備有限公司生產(chǎn)的YCT112-4A型調(diào)速電機(jī)改制（由湖南誠信機(jī)械加工廠協(xié)助完成），在其直流調(diào)速電機(jī)前加一個調(diào)速器，使旋轉(zhuǎn)速度0150 r/min自由可調(diào)，再在電機(jī)上連一個圓形金屬盒放置家兔用，大小（直徑×高）：35 cm×35 cm；“逃避刺激反射訓(xùn)練箱”：自制一大小為（長×寬×高）：70 cm×65 cm×65 cm的木籠子，底板為鐵絲網(wǎng)，在籠內(nèi)安裝1個25 cm的高臺，其面積為65 cm×30 cm

13、大小，配套塑料球形刷1把作為疼痛刺激工具。         1.1.4 高脂飼料 每100 g高脂飼料中含膽固醇1 g，蛋黃粉15 g，豬油5 g（由湖南中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供）。         1.2 方法         1.2.1 造模方法 選取清潔級健康成

14、年日本大耳白兔70只，體質(zhì)量（1.9±0.3）kg, 雌雄各半，隨機(jī)抽取其中8只作為正常組，予以普通飼料80 g/（kg·d），每天分兩次喂給，不作任何干預(yù)；其余62只采用饑餓高脂飼料旋轉(zhuǎn)頸椎旁注射硬化劑復(fù)合方法造模，以跳臺耗時、腦血流圖為血管性眩暈評價指標(biāo)，以行為、體質(zhì)量、毛發(fā)、胸腺、肝臟的DNA含量為氣虛評價指標(biāo)，以舌苔、血液流變?yōu)檠鲈u價指標(biāo)。造模時間：先予以頸椎旁注射硬化劑（記為實驗開始第1天），1周后重復(fù)1次，6周造模成功；予以高脂飼料10 g/（kg·d），時限16周；予以饑餓干預(yù)，即在高脂飼料干預(yù)之外，另給予普通飼料15

15、 g/（kg·d）同時一次投予，時限16周；在第3941天時進(jìn)行逃避刺激反射訓(xùn)練，第42天旋轉(zhuǎn)，測定旋轉(zhuǎn)前后的跳臺耗時。第42天對正常組和造模家兔全部復(fù)查體質(zhì)量、腦血流圖、血液流變學(xué)，得出結(jié)果后對家兔進(jìn)行系統(tǒng)評分，按照預(yù)試造模成功率約為70，約有40只家兔可望造模成功。         1.2.2 動物分組及給藥方法 在評估上述已造模動物后，將評分結(jié)果為陽性的家兔選出，每組按體質(zhì)量由小到大編號，采用完全隨機(jī)設(shè)計方法再分為模型組、西藥對照組、XYDF低、中、高劑量組5組，雌雄各

16、半。各組恢復(fù)正常喂養(yǎng)；西藥對照組予以西比靈1.205 mg/（kg·d）溶于35 mL蒸餾水中灌胃；低、中、高劑量分別予以眩暈定方濃縮液4.45、8.91、17.82 mL/（kg·d）灌胃，灌胃藥液總量不足35 mL者加蒸餾水配齊，1 d 1次，時限為第4656天。第57天起停止灌胃并休息5 d，第61天再測體質(zhì)量、腦血流圖、血液流變及旋轉(zhuǎn)前與后跳臺耗時。比較干預(yù)前后腦血流圖、血液流變學(xué)的改變情況。         1.2.

17、3 腦血流圖的描記與分析方法 采用REGIG2型血流圖自動分析診斷儀（由湖南益靈新技術(shù)有限公司據(jù)預(yù)試結(jié)果已對參數(shù)作相應(yīng)調(diào)整設(shè)置），在造模前后各測定腦血流圖1次，比較硬化劑注射側(cè)（左側(cè)）椎基底動脈系統(tǒng)前后腦血流圖各指標(biāo)的變化。方法：硫化鈉脫毛后第3天在安靜清醒狀態(tài)下測量家兔腦血流圖，先把家兔俯臥固定在固定架上，采用枕-乳突導(dǎo)聯(lián)，然后將改良后的矩形電極放置在前額正中、左右乳突和枕后，主振頻率90 kHz，二電極法，定標(biāo)Z=0.1，記錄家兔腦血流圖，由計算機(jī)采樣作拐點分析（包括二階導(dǎo)數(shù)），計算波幅、面積（S）、速率（V）、阻力指數(shù)（F1）、彈力指數(shù)（Z1）等參數(shù)的變化3

18、7-9。         1.2.4 血液流變學(xué)指標(biāo)的測定及分析方法 動物空腹禁食、禁水8 h后，抽取耳緣靜脈血2 mL（加1.25萬u/mL肝素0.2 mL），經(jīng)循環(huán)水浴（37 ），通過DV-錐板式血液黏度計測定全血粘度，每次樣本量為0.5 mL，每個樣本測量3次，取其均值，黏度計轉(zhuǎn)速范圍為100 s-1（低切）、1 000 s-1（高切），測得數(shù)據(jù)由計算機(jī)自動記錄Rheocalc32軟件（Brookfield公司

19、）。         1.3 統(tǒng)計學(xué)分析計量資料以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”（±）表示；多組樣本均數(shù)間比較采用方差分析；兩兩比較用Q檢驗；使用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。         2 結(jié)果         2.1 血液流變學(xué)改變比較全血黏度分高切變和低切變，高切變黏度反映紅細(xì)胞的變形能力，紅細(xì)胞變形能力低的血液

20、，其高切變黏度就高；低切變黏度反映紅細(xì)胞的聚集能力，紅細(xì)胞相互聚集的血液，其低切變黏度增高。本實驗取外周靜脈血作全血黏度比較，見表1。表1資料經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理表明：模型組與正常組比較差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），提示模型組血黏度明顯高于正常組；西比靈組與模型組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），提示西比靈無降低血黏度作用；眩暈定方中、高劑量組與正常組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），提示眩暈定方中、高劑量干預(yù)模型家兔后血黏度基本恢復(fù)至正常水平。         2.2 腦血流圖

21、比較腦血流圖的主要觀察指標(biāo)有：波幅、面積、速率、阻力指數(shù)Z1、彈力指數(shù)F1等，其中速率面積/時間，反映血流速度變化快慢，是指某一時刻流入的血流量，是最為集中反映腦血流量的有效指標(biāo)。結(jié)果見表2、圖12。         表2資料經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理表明：模型組與正常組比較差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），提示模型組腦血流圖速率明顯低于正常組，腦血流圖速率這一指標(biāo)可以衡量造模是否成功。眩暈定方高、中劑量組與西比靈組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05和P<0.01），提示眩暈定方低、中劑量組增加腦血流圖速率

22、作用優(yōu)于西比靈組；西比靈、眩暈定方藥物干預(yù)組與正常組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），提示各藥物干預(yù)模型家兔后基本恢復(fù)至正常水平。         3 討論         血管性眩暈是指由于前庭系統(tǒng)的血液灌注不足而導(dǎo)致前庭系統(tǒng)功能障礙, 使患者感到眩暈。前庭系統(tǒng)血液灌注不足主要取決于椎-基底動脈系統(tǒng)的血管狀態(tài)、血液成分及血流灌注壓4。對于血管性眩暈的發(fā)病機(jī)制當(dāng)前認(rèn)識如下5-8。  &#

23、160;      由于動脈粥樣硬化、血液黏稠度增高、血壓偏低等原因?qū)е聝?nèi)聽動脈或其他動脈血栓形成或短暫性腦缺血發(fā)作，進(jìn)而導(dǎo)致腦干缺血和內(nèi)耳缺血缺氧，血管壁滲透性增高，膜迷路積水，從而使神經(jīng)元代謝受損，包括氧化損傷和鈣穩(wěn)態(tài)失衡，突觸效能下降，眩暈出現(xiàn)，若缺血反復(fù)發(fā)作或長期存在致前庭器官及神經(jīng)退行性變；此外，由于旋轉(zhuǎn)致自主神經(jīng)調(diào)節(jié)障礙，內(nèi)聽動脈痙攣引發(fā)內(nèi)耳缺血缺氧也是血管性眩暈的發(fā)病機(jī)制之一。         在目前幾種用于測量腦血流量的方法中，腦血流圖是一種無創(chuàng)性的

24、反映搏動性腦供血情況、估計腦血管的充盈狀況、腦血管調(diào)節(jié)機(jī)能和血管彈性的檢查方法，正是由于其無創(chuàng)性，利于實驗動物多次檢測。另一方面，腦血流圖是一種較好的定量評定指標(biāo)，可客觀有效地評價家兔眩暈實驗中椎動脈血流變化情況，從而間接的評價眩暈的有無。腦血流圖的基本特征是隨心動周期而變化的周期性，分析指標(biāo)的核心是周期性曲線上各拐點的變化以及各拐點之間的相關(guān)性。腦血流圖分析的依據(jù)是血液流體動力學(xué)原理，分析的重點是流入與流出關(guān)系37-9。腦血流圖上波形曲線上的拐點，可通過二階微分函數(shù)識別，為腦血流圖分析客觀化、數(shù)量化、標(biāo)準(zhǔn)化和自動化解決了關(guān)鍵技術(shù)9。腦血流圖的觀察指標(biāo)有：波幅、面積、速率、阻力指數(shù)Z1、彈力指

25、數(shù)F1等，其中速率面積/時間，反映血流速度變化快慢，是指某一時刻流入的血流量，是最為集中反映腦血流量的有效指標(biāo)。模型組速率較造模前及正常組、藥物干預(yù)組明顯降低，顯示腦血流量減少，可能是椎動脈局部狹窄、動脈彈性降低、血液黏稠度增高的結(jié)果，而藥物干預(yù)后腦血流圖速率較模型組高，可能是眩暈定方擴(kuò)張微血管、降低血黏度的結(jié)果。         血液流變學(xué)與中醫(yī)血瘀的關(guān)系密切，血流流變學(xué)指標(biāo)反映血液的黏滯性、濃稠性、聚集性和凝固性，是血瘀證病理變化的重要參數(shù)。全血黏度主要由紅細(xì)胞和變性能力所決定，家兔的紅細(xì)胞與人相同，均為無核紅

26、細(xì)胞，其聚集性與人相對接近，當(dāng)血液黏滯度增高、顯著的高黏狀態(tài)，這勢必影響微循環(huán)的灌注；全血黏度增高則血液流動性差，最終導(dǎo)致微循環(huán)障礙。在灌注壓和血管口徑不變的情況下，腦血流量與血液粘滯度成反比，即血液黏滯度升高時腦血流量降低10。本研究采用錐板粘度計方法，在不同切變率下進(jìn)行檢測，較全面地反映了不同切變率下的全血黏度變化。與正常組比較，造模后模型組低、高切變率明顯增高，說明本法造?？稍黾蛹彝醚旱酿?；眩暈定方對低、高切變率(特別是高切)下的全血黏度有顯著降低作用，從一個側(cè)面證明了該方確有化瘀作用。根據(jù)本研究結(jié)果，眩暈定方可有效增加該模型家兔的腦血流量，降低血黏度?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1 史玉泉，周孝達(dá).實用神經(jīng)病學(xué)（第3版）M.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2004：1 480.2 王凈凈，