藥材顯微鑒別檢查法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、文件藥材顯微鑒別檢查法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī) 程編號SOP?09?1006版本2 頁用 1/4編制日期替代/審定日期頒發(fā)質(zhì)量保障部批準(zhǔn)日期生效年1月20日發(fā)放質(zhì)保中心目的：建立顯微鑒別法檢查標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程范圍：確定藥材中有效成份在組織中分布狀況及其特征1 .儀器與用具1.1 不儀器生物光譜顯微鏡架盤天平1.2 用具1.2.1 放大鏡、刀片、銀子、剪刀1.2.2 載玻片、蓋玻片1.2.3 培養(yǎng)皿或小燒杯（放切片用、切片后的處理均可在其中進(jìn)行），酒精燈、滴瓶、玻璃棒（粗與細(xì)）1.2.4 鉛筆、濾紙、火柴2 .試液2.1 水合氯醛試液：按架盤天平標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程稱取水合氯醛50g，加水15ml,與甘油10ml使溶解即

2、得?；蚴垢煽s的細(xì)胞壁膨脹而透明，并能溶解淀粉， 樹脂、蛋白質(zhì)及揮發(fā)油等。2.2 甘油醋酸試液：取甘油，冰醋酸與水各等份，混合即得，此液專用于觀 察淀粉形態(tài)，可使淀粉粒不膨變形。便于測量大小。2.3 甘油一乙醇溶液：取甘油1份，50%乙醇1份，混合即得。此液為封 藏液，用于保存植物材料及臨時切片，有軟化組織的作用。3 .顯微標(biāo)本片的制作3.1 切片制作標(biāo)本片（橫切或縱切）3.1.1 藥材的預(yù)處理先將藥材表面泥沙刷洗干凈，將應(yīng)觀察的部位，切成適 當(dāng)大小的塊或段，一般長3cm,寬1cm為宜，切面削平整。質(zhì)地軟硬適中的藥材可直接進(jìn)行切除；質(zhì)地堅硬的則須先使其軟化后再切片。軟化方法可放在水中浸軟或煮軟。

3、有些根、根據(jù)莖、莖及木類藥材，質(zhì)地雖堅實(shí)，可將削平的切面浸水中片刻，表面潤濕時取出，直接切片也能切成較完整的薄片。過于柔軟的材料，可將其浸入7095乙醇中，約20分鐘后可變硬些，即可進(jìn)行切片。對于細(xì)小，柔軟而薄的藥材，如種子或葉片，不便直接手持切片。藥材在預(yù)處理時應(yīng)注意不能影響要觀察的顯微鏡鑒別特征。如要觀察菊糖，粘液等在軟化、切片、裝片等過程中，均不可與水接觸，以免溶解消失，觀察揮發(fā)油，樹脂等則不可與高濃度乙醇或其它有機(jī)溶媒接觸。3.1.2 徒手切片在檢驗工作中，此法最常用，操作簡便，迅速，制成的切片保持其細(xì)胞內(nèi)含物的固有形態(tài)，便于進(jìn)行各種顯微鏡化學(xué)反應(yīng)觀察。3.1.2.1 切片 右手持刀片

4、，左手拇指和食指夾持藥材，中指拖著藥材的底部，使藥材略高出食，拇二指指，肘關(guān)節(jié)應(yīng)固定，使材料的切面保持水平，刀口向內(nèi)并使刀刃從左前方向右后方切削，即可切得薄片。操作時材料的切面和刀刃須經(jīng)常加水或50%乙醇保持濕潤，防止切片粘在刀片上。切好的切片用毛筆蘸水輕輕從刀片上移到盛有水或50%乙醇的培養(yǎng)皿中。3.1.2.2 裝片 選取平整的切片置載薄片上，根據(jù)所需觀察的內(nèi)容要求，滴加適宜的試液1 2 滴， 蓋好蓋玻片，即可在顯微鏡下觀察。如加水合氯醛試液透化、將薄片移到載薄片上，滴加1 2 滴水合氯醛試液，在酒精燈下微微加熱至透化完全為止；加熱溫度不能過高，以防止水合氯醛試液沸騰，使組織內(nèi)帶入氣泡；加熱

5、時應(yīng)將載玻片不斷移動，不宜對準(zhǔn)一處燒，以免受熱不均而炸裂；透化后放冷，加甘油乙醇試液1 2 滴加后封蓋玻片，貼上標(biāo)簽。冬日室溫較低時，透化后不得放冷即滴加甘油乙醇液，以防水合氯醛結(jié)晶析出而防礙觀察。水合氯醛試液有潔凈透明作用，并能使已收縮的細(xì)胞膨脹，對草酸鈣結(jié)晶無作用，為觀察草酸鈣結(jié)晶的良好試劑，如需觀察菊糖等一些多糖物質(zhì)則加水合氯醛試液不加熱。3.2 粉末制片主要用于粉末狀的藥材粉末制成的成方制劑觀察3.2.1 粉末制備藥材要先干燥，磨或銼成細(xì)粉、裝瓶、貼上標(biāo)簽。粉末制備時，注意取樣的代表性，應(yīng)注意各部位的全面性；例如：根要切成根頭，根中段及根尾部等，必須全部磨成粉，不得丟棄渣頭。并需通過4

6、 號篩，混合均勻。干燥時，一般溫度不能超過60避免經(jīng)受高溫，使淀粉粒糊化，難以觀察其完整者。3.2.2 制片法 用鮮剖針挑取粉末少許，置載玻片的中央偏右的位置，加適宜的試液滴，用針攪勻(如為酸或堿時，應(yīng)用細(xì)玻璃棒代替針)待液體滲入粉末時， 用左手食指與拇指夾持蓋玻片的邊緣，使其左側(cè)與藥液層左側(cè)接觸，再用右手持小鑷子或解剖針拖住蓋玻片的右側(cè)，輕輕下放，則液體逐漸擴(kuò)充滿蓋玻片下方， 如液體未滿蓋玻片，應(yīng)從空隙相對邊緣滴加液體，以防產(chǎn)生氣泡；若片下方。如液體過多，用濾紙片吸取益出的液體，最后在載玻的左端貼上檢品的標(biāo)簽或書寫上標(biāo)記。1顯微測量顯微鑒定時應(yīng)用測量方法以測定細(xì)胞內(nèi)含物等的大小，應(yīng)用最多的則

7、是長度測定。常用的量具是目鏡測微尺與載物臺測微尺。4.1 目鏡測微尺，又稱目鏡量尺或目微尺。它是放大回鏡內(nèi)的一種標(biāo)尺，是一個直徑1820mm勺圓形玻璃片，中央刻有精確等距離的平行線刻度，常為 50 條或 100 條。目鏡測微尺是用以直接測量物體用的，但其刻度所代表的長度是根據(jù)顯微放大倍數(shù)不同而改變，故使用前必須用載物臺測微尺來標(biāo)化。4.2 載物臺測微尺，又稱鏡臺測微尺或臺微尺，它是一種特制的載玻片，中央貼有一小圓形玻片，上刻有將1mm(2mm)ft確等分為100(200)小格長為10um,它是用以標(biāo)化目鏡測微尺的4.3 目鏡測微尺的標(biāo)化，以確定使用同一顯微鏡及特定倍數(shù)的物鏡，目鏡和鏡筒長度時，

8、目鏡測微尺每一格所代表的實(shí)際長度。標(biāo)化方法：將載物臺測微尺置于顯微鏡臺上， 按常規(guī)對光調(diào)焦，并移動測微 尺物象于視野中央，從鏡筒中取上目鏡，旋下接目鏡蓋，將目鏡測微尺放入目鏡 筒中部的光纜上（應(yīng)正面向上），旋上目鏡蓋后返置鏡筒上。此時在視野中除鏡臺測微尺的象外，還 同時可觀察到目鏡測微尺的分度小格。移動鏡臺測微尺和旋轉(zhuǎn)目鏡，使兩種量尺的刻度平行。 左邊的“0”刻度重合尋找第二條重合刻度，記錄兩刻度的讀數(shù)，并根據(jù)此值計 算出目鏡測微尺每一小格的刻度，記錄該物鏡條件下所相應(yīng)的長度（mm,例如： 接目鏡為10X接物鏡為40X時，目鏡測微尺每17小格相當(dāng)于載體物臺量尺4小 格，則目鏡測微尺每小格的長度

9、為 4X10un 17=2.35um4.4 測定細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)含物的方法：將載物臺測微尺取下，換以裝有待測的標(biāo)本載片。對光調(diào)焦，移動載片，使需測 量的目的物置于目鏡量尺范圍內(nèi)，調(diào)泊物象，記數(shù)出目的物占測微尺的小格數(shù)， 乘以目鏡量尺每 1小格的長度值即得。計算公式：鏡臺測微尺于目鏡測微尺重合時所具的長（um）待測物體長度（um） = x所測物體占有目目鏡測微尺于鏡臺測微尺重合時所占的格式鏡測微尺的格數(shù)例如：測得淀粉長徑為 20小格，每小格長2.35um,20X2.35um=47um5.事項5.1 粉碎用具用畢后，必須處理干凈，干燥后才能使用另一種藥材。5.2 所有蓋玻片和載玻片應(yīng)絕對干凈。新片要用洗液浸泡或用肥皂水煮半個 小時，用水沖洗。再用蒸儲水沖洗 12次，置于7090%乙醇中，取出烘干。5.3 進(jìn)行顯微鏡鑒別試驗時有一定的步驟，一般先進(jìn)行甘油醋酸片的觀察， 后進(jìn)行水合氯醛片觀察，最后再進(jìn)行滴加試劑或結(jié)合其它理化試劑的顯微