分子生物學期末試題

1、分子生物學期末考試試題、名詞解釋1、反式作用因C能直接或間接地識別或結(jié)合各類順式作用元件核心序列，參與調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄效率的蛋白質(zhì)。2、基因家族:3、C值矛厲：C值是指真核生物單倍體的DNA含量，般的，真核生物的進化程度越高，C值越人，但在些兩棲類生物中，其C值卻比哺乳動物大的現(xiàn)象。原因是 它含有大量的重復序列，而且功能DNA序列大多彼不編碼蛋白質(zhì)的非功能DNA所隔開。4、核型：指個物種所特有的染色體數(shù)目和每條染色體所特有的形態(tài)特征。5、RNA editing：轉(zhuǎn)錄后的RNA在編碼區(qū)發(fā)生堿基的突變、加入或丟失等現(xiàn)象。二、判斷：1、真核生物所有的mRNA都有POIyA結(jié)構(gòu)。 （X ）組蛋白的mRN

2、A沒有2、由于密碼子存在搖擺性，使得-種IRNA分子常常能夠識別-種以上同一種氨基酸的密碼子。（）3、人腸桿菌的連接醐以ATP作為能量來源。（X）以NAD作為能量來源4、IRNA只在蛋白質(zhì)合成中起作用。（X ） tRNA還有其它的生物學功能，如可作為逆轉(zhuǎn)錄酶的引物5、DNA聚合酶和RNA聚合酚的催化反應都需要引物。（X ）RNA聚合酶的催化反應不需要引物6、真核生物蛋白質(zhì)合成的起始氨基酸是甲酰甲硫氨酸（X ）真核生物蛋白質(zhì)合成的起始氨基酸是甲硫氨酸7、質(zhì)粒不能在宿主細胞中獨立自主地進行復制（X ）質(zhì)粒具有復制起始原點，能在宿主細胞中獨立自主地進行復制8、RNA W為不含有DNA基因組，所以根據(jù)

3、分了遺傳的中心法則，它必須先進行反轉(zhuǎn)錄，才能復制和增殖。（X ）不定，有的RNA病看可直接進行RNA復制和翻譯9、細菌的RNA聚合酶全勢由核心酶和P因了組成。（X ）細菌的RNA聚合酶全酶由核心酶和因了組成10、核小體在復制時組蛋口八聚體以全保留的方式傳遞給了代。（）11、色氨酸操縱了中含有衰減子用列（）12、SOS框是所有din基因（SOS基因）的操縱了都含有的20bp的IeXA結(jié)合位點。（ ）三、填空:11、原核生物的啟動了的四個保守區(qū)域為轉(zhuǎn)錄起始點、-10區(qū)、35區(qū)、10區(qū)與35區(qū)的距離O2、根據(jù)對DNA序列和蛋白質(zhì)因了的要求，可以把重組分為同源重組、位點專性重組/特異位點重組、轉(zhuǎn)座重組

4、、異常重組四類。3、研究啟動了功能的主要方法是啟動了的突變，研究酶與啟動了間識別與結(jié)合的方法有足跡法和堿基修飾法o、堿性一殼氨酸拉鏈（bZIP）o4、真核生物中反式作用因了的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域有螺旋一轉(zhuǎn)角一螺W（HTH）.堿性一螺旋環(huán)螺旋（bHLH）.鋅指nc finger）5、根據(jù)DNA復性動力學，DNA序列可以分成哪四種類型？單序列、輕度重復序列、中度重復序列、高度重復序列四、選擇題（10分，每題1分）1、在真核基因農(nóng)達調(diào)控中，（B）調(diào)控元件能促進轉(zhuǎn)錄的速率。A、衰減了 B、增強了 C、repressor D、TATA BOX2、核基因mRNA、的內(nèi)元拼接點序列為（D ）。A、AGGUB.

5、GA.UGC. UGGAD、GUAG3、下列何種因子不會誘變DNA（ D ）A、亞硝酸B、UVC、丫旋橙D、飽和脂肪乳劑4、RNA聚合酶1的功能是（C）A轉(zhuǎn)錄IRNA和5sRNA基因；B轉(zhuǎn)錄蛋白質(zhì)基因和部分SnRNA基因：C只轉(zhuǎn)錄rRNA基因；D轉(zhuǎn)錄多種基因5、如果段DNA產(chǎn)生了+ 1的譯碼突變，可以加以校正的是（D）A突變型氨fi IRNA合成勢B有突變型反密碼/的IRNAC有切割個核甘酸的酚D有四個堿展長的反密碼/的IRNA6、參與重組修復的勢系統(tǒng)中，具有交換DNA鏈括性的是（D）A DNA聚合酚I B ReCB蛋白C ReCC蛋白D ReCA蛋白7、原核RNA POl識別的啟動（位于：（

6、A）A、轉(zhuǎn)錄起始點的上游：B、轉(zhuǎn)錄起始點的下游：1、原核生物的啟動了的四個保守區(qū)域為轉(zhuǎn)錄起始點、JO區(qū)、35區(qū)、10區(qū)與35區(qū)的距離O2、根據(jù)對DNA序列和蛋白質(zhì)因了的要求，可以把重組分為同源重組、位點專性重組/特異位點重組、轉(zhuǎn)座重組、異常重組四類。3、研究啟動了功能的主要方法是啟動了的突變，研究酶與啟動了間識別與結(jié)合的方法有足跡法和堿基修飾法o、堿性一殼氨酸拉鏈(bZIP)o4、真核生物中反式作用因了的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域有螺旋一轉(zhuǎn)角一螺W(HTH).堿性一螺旋環(huán)螺旋(bHLH).鋅指nc finger)C、轉(zhuǎn)錄終點的下游：D、無定位置:98、在研丸原核翻譯過程中，可用不同的抑制劑研究翻譯諸階段

7、，其中鏈霉素可抑制：（CA、起始B、延長C、肽基有P位移至A位D、核糖體移位9、在什么情況下，乳箱操縱子的轉(zhuǎn)錄活性最高（A ）A高乳糖，低葡萄糖B高乳糖，高葡萄糖C低乳糖，低葡萄糖D低乳糖，高葡萄糖10、設密碼/為5XYZ3,反密碼了為5,ABC 3*,則處于擺動位置上的堿基為（C ）A X-C B Y-B C Z-A五、簡答：1. 敘述由段DNA序列形成多種蛋白產(chǎn)物的機制。答：由段DNA形成多種蛋白產(chǎn)物的可能機制有：閱讀框不同、抗終止作用、可變剪切和RNA編輯。重疊基因在X174中最早發(fā)現(xiàn)，兩個鄰近的基因以種巧妙的方式發(fā)生重疊，轉(zhuǎn)錄出來的mRNA以不同的閱讀框閱讀并被農(nóng)達，產(chǎn)生兩種以上的蛋白

8、產(chǎn)物C在噬 菌體中有不同時期農(nóng)達的操縱（，如左向早期操縱/可以轉(zhuǎn)錄出兩種mRNA,這是由于依賴于Pw r-的終II：作用以及早期基因編碼的抗終II：蛋白的抗終II：作用造成的。 抗終止蛋口與RNA聚合酶結(jié)合后修飾了酶的構(gòu)象，使其不再識別弱終II： P,從而使段DNA可以轉(zhuǎn)錄出多種mRNA,從而產(chǎn)生兩種以上的蛋白產(chǎn)物。真核生物的hnRNA含有內(nèi)含&通過剪接可將其出去形成Mrna.但有的高等真核細胞存在可變剪接，即來自-個基因的RNA,其某個內(nèi)含了的5 '供體在不同的條 件下和不同內(nèi)含子的3'受體進行剪接，從而將來自個基因的mRNA前體剪接產(chǎn)生多種mRNA,翻譯出不同的蛋口

9、質(zhì)。另外，在真核生物中存在RNA編輯，將mRNA 在轉(zhuǎn)錄后進行插入、缺失或核昔酸的替換，改變DNA模板的遺傳信息，從而翻譯出氨基酸序列不同的多種蛋白質(zhì)。1、各種二核昔酸對的排列顧序不同，對雙螺旋結(jié)構(gòu)的影響不同。（1）請問那種的Tm最低？答：的Tm值最低。（2）含這種二核昔酸的序列有那些，為什么？（7分）答：含有A/T的主要有復制起始點、原核生物啟動了的-IO區(qū)、真核生物啟動了的TATA框，此外，還有生物體選 擇以UAA作為最有效的終止密碼r=DNA在復制和轉(zhuǎn)錄時要在起始原點和啟動了區(qū)形成起始復合物，復制起始點、原核生物啟動（的-IO區(qū)、真核生物啟動/的TATA框富含AT對，二者之間有兩條氫鍵，

10、 在此處易于解開雙鏈，容易形成起始復合物，使復制和轉(zhuǎn)錄過程順利進行。生物體選擇以UAA作為最有效的終止密碼了，I対為在64的密碼（中，假使UAA具有和它配對的 反密碼了，所形成的產(chǎn)物在生理條件下也是不穩(wěn)定的，有利于肽鏈的釋放，而且UAA很少發(fā)生無義抑制突變，有利于肽鏈的正常終止。3、詳述人腸桿菌色氨酸操縱/的調(diào) 控機理。（】2分答：人腸桿菌色氨酸操縱/的轉(zhuǎn)錄受阻遏和衰減兩種機制的控制，前者通過阻遏蛋白和操縱基因的作用控制轉(zhuǎn)錄的起始，后者通過前導序列形成特殊的空 間結(jié)構(gòu)控制轉(zhuǎn)錄起始后是否進行下去。1）色氨酸操縱/的可阻遏系統(tǒng)：在阻遏系統(tǒng)中，起負調(diào)控的調(diào)節(jié)基因的產(chǎn)物是個無活性的阻遏蛋白，色氨酸是輔

11、阻遏物：當色氨酸不足時，阻遏蛋口無活性，不能和操縱 基因結(jié)合，色氨酸操縱了能夠轉(zhuǎn)錄：當色氨酸充足時，阻遏蛋白和它結(jié)合而彼激活，從而結(jié)合到操縱基因上，而色氨酸操縱/的操縱基因位于啟動基因內(nèi)，I大1此，潔性阻遏 物的結(jié)合排斥了 RNA聚合酶的結(jié)合，從而抑制了結(jié)構(gòu)基因的農(nóng)達。2）色氨酸操縱子的衰減調(diào)控在色氨酸操縱/的操縱基1対和第個結(jié)構(gòu)基因之間有-段前導序列L,在前導序列上游部分有個核糖體結(jié)合位點，后面是以起始密碼AUG開頭的14個氨基酸的編碼區(qū)， 編碼區(qū)有兩個緊密相連的色氨酸密碼（，后面是個終II：密碼Y- UGA,在開放閱讀框下游有個不依賴PWr的終止了，是段富含G/C的回文序列，可以形成發(fā)夾結(jié)

12、 構(gòu)，因此可以在此處終止轉(zhuǎn)錄。另外前導序列包含4個能進行堿基互補配對的片斷1區(qū)、2區(qū)、3區(qū)和4區(qū)。它們能以1、2和3、4或2、3的方式 進行配對，從而使前導序 列形成二級結(jié)構(gòu)的變化。在細菌中，翻譯與轉(zhuǎn)錄偶連，-旦RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄出IrPmRNA中的前導肽編碼區(qū)，核糖體便立即結(jié)合上去翻譯這序列。當細胞中缺乏色氨酸 時，TrP-IRNATm的濃度很低，核確體翻譯前導肽至兩個連續(xù)的色氨酸密碼了處就陷入停頓，這時核穂體只占據(jù)1區(qū)，由RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄的2區(qū)和3區(qū)便可配對，4區(qū)游離 在外，這樣就不能形成終止了結(jié)構(gòu)，RNA聚合圜就可以直轉(zhuǎn)錄下去，最后完成trp全部結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄，得到完整的mRNA分J當細胞

13、中存在色氨酸時，就有定濃度 的Trp-IRNATm,核糖體便能順利通過兩個連綻的色氨酸密碼了而翻譯出整個前導肽，直到前導肽序列后面的終止密碼f UGA處停ll：。此時，核糖體占據(jù)了 I區(qū)和2區(qū)， 結(jié)果3區(qū)和4區(qū)配對，形成轉(zhuǎn)錄終II：/結(jié)構(gòu)，使RNA聚合酶終止轉(zhuǎn)錄。實現(xiàn)衰減調(diào)控的關鍵在于時間和空間上的巧妙安扌II、在空間上，兩個色氨酸密碼f的位置很重要, 不可隨意更改；在時間上，核糖體停頓于兩個色氨酸密碼f上時，序列4應當還未轉(zhuǎn)錄出來。分子生物學試卷一、名詞解釋（共10題，每題2分，共20分）1、質(zhì)粒：2、目的基因：3、轉(zhuǎn)錄：4、染色體：5、原核生物：6、基因組：7、翻譯：8、復制：9、基因農(nóng)達

14、：10、HGP二、填空題（共28空，每空1.5分，共42分）1、DNA與RNA在組成成分上的基本區(qū)別包括，DNA含有、，而RNA含有、。2、RNA主要包括、共三種。3、真核生物基因組的基本特征包扌舌、-而原核生物基因組的基本特征包描、。4、DNA復制是個的過程，即子代分子的來自親代，而是新合成的。這個復制特點保的。5、基因工程包括五個基本流程：、和。6、病毒根據(jù)其遺傳物質(zhì)可分為：病毒和病毒。7、基因農(nóng)達主要生成：、。三、簡答題：（共3題，每題6分，共18分）1 PCR技術有哪三人基本環(huán)節(jié)？2 tRNA和DNA的二級結(jié)構(gòu)各有何基本特點？3逆轉(zhuǎn)錄過程的基本原理是什么？有何醫(yī)學意義？四、問答題：（共

15、2題，每題10分，共20分） 1、真核生物與原核生物基因農(nóng)達調(diào)控各自有何基本特點？其意義是什么？2、何謂人類基因組計劃，其意義如何？江西省高等教育考試（非主干課程）分子生物學試卷參考答案一、名詞解釋（共10題,每題2分,共20分）I、細菌核外環(huán)狀DNA2、生物技術中的應用基因3、RNA的合成過程4、核內(nèi)遺傳信息貯存形式5、早期細胞類型6、 物種全部基因之和7、蛋白質(zhì)合成過程8、DNA合成過程9、轉(zhuǎn)錄加翻譯的信息實現(xiàn)過程10、人類基因組計劃二、填空（共28空,每空1.5分,共42分）1、脫氧核糖，T,核糖，U2、tRNA.InRNA. Rrna,3、斷裂基因，基因家族，重復序列多，細胞器基因；操

16、縱子，連續(xù)基因，重復序列少,無細胞器基閃4、半保留，i半，另一半，高保真性5、分，切接,轉(zhuǎn),篩，6、DNARNA7、RNA蛋白質(zhì)三、簡答（共3題,每題6分,共18分）1、變性,退火,延伸，（各2分）2、IRNA含氨基酸臂與反密碼環(huán).（3分）DNA含兩條平行螺旋鏈與堿基互補（3分）3、逆轉(zhuǎn)錄酸以病毒RNA為模板合成CDNA進步在縮主細胞轉(zhuǎn)變成前病毒（4分）并予進步說明醫(yī)學意義（2分）四、問答（共2題,每題IO分,共20分）1、特點：從兩類調(diào)控的環(huán)節(jié)與主耍環(huán)節(jié)與方式加以區(qū)別（6分前者環(huán)節(jié)多于后者,后者以操縱了模式并進步說明意義（4分）2、對人類自身基因序列等的研究（4分，其總義可從基礎,醫(yī)學,藥學

17、等方而說明（6分）分子生物學試題及答案分子生物學試題及答案一、名詞解釋1. CDNA與CCCDNA： CDNA是由mRNA通過反轉(zhuǎn)錄酶合成的雙鏈DNA； CCCDNA是游離于染色體之外的質(zhì)粒雙鏈閉合環(huán)形DA。2. 標準折疊單位：蛋口質(zhì)二級結(jié)構(gòu)單元a螺旋與B 折疊通過各種連接多肽可以組成特殊兒何排列的結(jié)構(gòu)塊，此種確定的折疊類型通常稱為超二級結(jié)構(gòu)。兒乎所有的三級結(jié)構(gòu)都可以用這些折疊類型，乃至他們的組合型來予以描述，因此乂將其稱為標準折疊單位。3. CAP：環(huán)腺昔 酸（CAMP）受體蛋口 CRP （CAMP receptor PrOtein ）, CAMP 與 CRP 結(jié)合后所形成的復合物稱激活蛋口

18、 CAP （CAMP activated PrOtein ）4. 回文序列：DA片段上的一段所具有的反向互補序列，常是限制性酶切位點。5. micRNA：互補干擾RNA或稱反義RNA,與RNA序列互補， 可抑制mRNA的翻譯。6.核酶：具有催化活性的RNA,在RNA的剪接加工過程中起到自我催化的作用。7模體：蛋白質(zhì)分子空間結(jié)構(gòu)中存在 著某些立體形狀和拓撲結(jié)構(gòu)頗為類似的局部區(qū)域8.信號肽：在蛋白質(zhì)合成過程中N端有1齊36個氨基酸殘基的肽段，引導蛋口質(zhì)的跨膜。9. 弱化子：在操縱區(qū)與結(jié)構(gòu)基因之間的一段可以終止轉(zhuǎn)錄作用的核昔酸序列。10.魔斑：當細菌生長過程中，遇到氨基酸全面缺乏時，細菌 將會產(chǎn)生一

19、個應急反應，停止全部基因的表達。產(chǎn)生這一應急反應的信號是鳥昔 四磷酸（PPGPP）和鳥背五磷酸（PPPGPP） o PPGPP與PPPGPP 的作用不只是一個或兒個操縱子，而是影響一大批，所以稱他們是超級調(diào)控子或稱 為魔斑。11上游啟動子元件：是指對啟動子的活性起到一種調(diào)節(jié)作用的DNA序列，-10區(qū)的TATA、-35區(qū)的TGACA及增強子，弱化子等。12DNA探 針：是帶有標記的一段已知序列DNA,用以檢測未知序列、篩選目的基因等方面廣泛應用。13SD序列：是核糖體與mRNA結(jié)合序列，對翻譯起到調(diào)控作用。14單克隆抗體：只針對單一抗原決定簇起作用的抗體。13.考斯質(zhì)粒：是 經(jīng)過人工構(gòu)建的一種外

20、源DNA載體，保留噬菌體兩端的CoS區(qū)，與質(zhì)粒連接構(gòu)成。16.藍-白斑篩選：含LaCZ基因（編碼半乳糖昔酶）該 酶能分解生色底物X-gal （5-澳-4-氯-3-呵味-B-D-半乳糖昔）產(chǎn)生藍色，從而使菌株 變藍。當外源DM插入后，LaCZ基因不能表達，菌株呈 白色，以此來篩選重組細菌。稱之為藍-口斑篩選。17順式作用元件：在DNA中一段特殊的堿基序列，對基因的表達起到調(diào)控作用的基因元件。18 KIenOW酶：DNA聚合酶I大片段，只是從 DNA聚合酶I全酶中去除了 5' 3'外切酶活性19.錨定PCR：用于擴增已知一端序列的的DA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然 后

21、分別用多聚dC和已知的序列作為引物進行PCR擴增。20.融合蛋白：真核蛋口的基因與外源基因連接，同時表達翻譯出的原基因蛋口與外源蛋白結(jié)合在一起所組成的蛋口質(zhì)。二、填空1. ' DNA的物理圖譜是DNA分子的邙艮制性內(nèi)切酶酶解）片段的排列順序。2. RNA酶的剪切分為（自體催化）、（異體催化）兩種類型。3. 原核生物中有三種起始因子分別是（IF-1）、（ IF-2 ）和（IF-3 ）。4.蛋口質(zhì)的跨膜需要（信號肽）的引導，蛋口伴侶的作用是（輔助肽鏈折疊成天然構(gòu)象的蛋白質(zhì)）。5.啟動子中的元件通?？梢苑譃閮煞N：（核心啟動子元件）和（上游啟動子元件 ）。6.分子生物學的研究內(nèi)容主要包含（結(jié)構(gòu)

22、分子生物學）、（基因表達與調(diào)控）、（DNA重組技術）三部分。7證明DNA是遺傳物質(zhì)的兩個關鍵性實驗是（肺炎球菌感染小鼠）、（T2噬菌體感染大腸桿菌）這兩個實驗中主要的論點證據(jù)是：（生物 體吸收的外源DXA改變了其遺傳潛能）。8. hnRNA與mRNA之間的差別主要有兩點：（hnRNA在轉(zhuǎn)變?yōu)閙RNA的過程中經(jīng)過剪接，）、（mRNA的5末端被加上一個m7pGppp帽子，在mRNA3z末端多了一個多聚腺昔酸（POIyA）尾巴）。9. 蛋口質(zhì)多亞基形式的優(yōu)點是（亞基對DA的利用來說是一種經(jīng)濟的方法）、（可以減少蛋Cl質(zhì)合成過程中隨機的錯誤對蛋白質(zhì)活性的影 響）.（活性能夠非常有效和迅速地被打開和被關

23、閉）。10. 蛋口質(zhì)折疊機制首先成核理論的主要內(nèi)容包括（成核）、（結(jié)構(gòu)充實）、（最后重排）。11半乳糖對細菌有雙重作用；一方面（可以 作為碳源供細胞生長）；另一方面（它乂是細胞壁的成分）。所以需要一個不依賴于CAMP-CRP的啟動子S2進行本底水平的永久型合成； 同時需要一個依賴于CAMP-CRP的啟動子Sl對高水平合成進行調(diào)節(jié)。有G時轉(zhuǎn)錄從（S2 ）開始，無G時轉(zhuǎn)錄從（SI ）開始。12DNA重組技術也稱為（基因克隆）或（分子克?。?。最終H的是（把一個生物體中的遺傳信息DNA轉(zhuǎn)入另一個生物體）。典型的DA重 組實驗通常包含以下兒個步驟： 提取供體生物的Ll的基因（或稱外源基因），酶接連接到另

24、一 DNA分子上（克隆載體）,形成一個新的重組DXA分子。 將這個重組DNA分子轉(zhuǎn)入受體細胞并在受體細胞中復制保存，這個過程稱為轉(zhuǎn)化。 對那些吸收了重組DNA的受體細胞進行篩選和鑒定。 對含有重組DNA的細胞進行大量培養(yǎng)，檢測外援基因是否表達。13、質(zhì)粒的復制類型有兩種：受到宿主細胞蛋口質(zhì)合成的嚴格控制的稱為（嚴緊型質(zhì)粒），不受宿主細胞蛋口質(zhì)合成的嚴格控制稱為（松弛 型質(zhì)粒）。14PCR的反應體系要具有以下條件：a、被分離的IJ的基因兩條鏈各一端序列相互補的DNA引物（約20個堿基左右）。b、具有熱穩(wěn)定性的酶如：TagDXA聚合酶。c、dNTPd、作為模板的目的DNA序列15PCR的基本反應過

25、程包括：（變性）、（退火）、（延伸）三個階段。16、轉(zhuǎn)基因動物的基本過程通常包括：將克隆的外源基因?qū)氲揭粋€受精卵或胚胎干細胞的細胞核中；接種后的受精卵或胚胎干細胞移植到雌性的子宮；完成胚胎發(fā)育，生長為后代并帶有外源基因；利用這些能產(chǎn)生外源蛋白的動物作為種畜，培育新的純合系。17雜交瘤細胞系的產(chǎn)生是山（脾B）細胞與（骨髓瘤）細胞雜交產(chǎn)生的，山于（脾細胞）可以利用次黃卩票吟，（骨細胞）提供細胞分裂功 能，所以能在HAT培養(yǎng)基中生長。18.隨著研究的深入第一代抗體稱為（多克隆抗體）、第二代（單克隆抗體）、第三代（基因工程抗 體）。19. IJ前對昆蟲病毒的基因工程改造主要集中于桿狀病毒，表現(xiàn)在引入

26、（外源毒蛋口基因）；（擾亂昆蟲正常生活周期的基因）；（對病毒基因進行修飾）。20.哺乳類RNA聚合酶II啟動子中常見的元件TATA、GC、CAAT所對應的反式作用蛋白因子分別是（TFllD ）、（ SP-I ）和（CTFNF1 ） o 21. RNA聚合酶II的基本轉(zhuǎn)錄因子有、TFn-AS TFn-B. TFII-D. TFn-E他們的結(jié)合順序是：（D、A、B、E ）。其中TFll-D的功能是（與TATA盒結(jié)合 ）22.與DA結(jié)合2勺轉(zhuǎn)錄因子大多以二聚體形式起作用，轉(zhuǎn)錄因子與DNA結(jié)合的功能域常見有以下兒種（螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋）、（鋅指模體）、（堿性-亮氨酸拉鏈模體）。23限制性內(nèi)切酶的切割方式

27、有三種類型分別是（在對稱軸5'側(cè)切割產(chǎn)生5'粘端）、（在對稱軸3'側(cè)切割產(chǎn)生3'粘端（在對稱軸處切 割產(chǎn)生平段）。124.質(zhì)粒DNA具有三種不同的構(gòu)型分別是：（SC構(gòu)型）、（ OC構(gòu)型）、（L構(gòu)型）。在電泳中最前面的是（SC構(gòu)型）。25外源基因表達系統(tǒng)，主要有（大腸桿菌）、（酵母）、（昆蟲）和（哺乳類細胞表）。26.轉(zhuǎn)基因動物常用的方法有：（逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法）、（DM顯微注射法）、（胚胎干細胞法）。三、簡答1. 分別說出5種以上RNA的功能？轉(zhuǎn)運RNAtRNA轉(zhuǎn)運氨基酸核蛋口體rRNA核蛋口體組成成信使RNAmRNA蛋白質(zhì)合成模板不均一核hnRNA成熟mRNA的

28、前體小核RNASnRNA參與hnRNA的剪接小胞漿RNASCRNA/7SL-RNA蛋口質(zhì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位合成的信號識別體的組成成分反義RNAanRNA/micRNA對基因的表達起調(diào)節(jié)作用核酶RibOZyme RNA有酶活性的RNA2. 原核生物與真核生物啟動子的主要差別？原核生物TTGACA - TATAAT起始位點-35 -10真核生物增強子-GC -CAAT-TATAA-5mGpp-起始位點-IIo -70 -253. 對天然質(zhì)粒的人工構(gòu)建主要表現(xiàn)在哪些方面？天然質(zhì)粒往往存在著缺陷，因而不適合用作基因工程的載體，必須對之進行改造構(gòu)建：3、加入合適的選擇標記基因，如兩個以上，易于用作選擇,通常是抗

29、生素基因。b、增加或減少合適的酶切位點，便于重組。C、縮短長度，切去不必要的片段，提高導入效率，增加裝載量。d、改變復制子，變嚴緊為松弛，變少拷貝為多拷貝。e、根據(jù)基因工程的特殊要求加裝特殊的基因元件4舉例說明差示篩選組織特異cDA的方法？制備兩種細胞群體，IJ的基因在其中一種細胞 中表達或高表達，在另一種細胞中不表達或低表達，然后通過雜交對比找到目的基因。例如：在腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中，腫瘤細胞會呈現(xiàn)與正常細胞表達水平不同的mRXA,因此，可以通過差示雜交篩選出與腫瘤相關的基因。也可 利用誘導的方法，篩選出誘導表達的基因。5. 雜交瘤細胞系的產(chǎn)生與篩選？脾B細胞+骨髓瘤細胞，加聚乙二醇（PEG

30、 ）促進細胞融合，HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)（內(nèi)含次黃瞟吟、氨基蝶吟、T ）生長出來的脾B-骨髓 瘤融合細 胞繼續(xù)擴大培養(yǎng)。細胞融合物中包含：脾-脾融合細胞：不能生長，脾細胞不能體外培養(yǎng)。骨-骨融合細胞：不能利用次黃瞟吟，但可通過第二途徑利用葉酸還原酶合成卩票嶺。氨基蝶吟對葉酸還原酶有抑制作用，因此不能生長。骨- 脾融合細胞：在HAT中能生長，脾細胞可以利用次黃卩票吟，骨細胞提供細胞分裂功能。6、利用雙脫氧末端終止法（Sanger法）測定DNA 一級結(jié)構(gòu)的原理與方法？原理是釆用核昔酸鏈終止劑一2, , 3, -雙脫氧核昔酸終止DNA的 延長。由于它缺少形成3/5/磷酸二脂鍵所需要的3-0H, 旦參入到DM鏈中，此DNA鏈就不能進一步延長。根據(jù)堿基配對原則，每當DNA 聚合酶需要dNMP參入到正常延長的DNA鏈中時，就有兩種可能性，一是參入ddNTP,結(jié)果導致脫氧核昔酸鏈延長的終止；二是參入dTP,使 DNA鏈仍可繼續(xù)延長，直至參入下一個ddNTPo根據(jù)這一方法，就可得到一組以ddNTP結(jié)尾的長短不一的DNA片段。方法是分成四組分別為ddAMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP反應后，聚丙烯酰胺凝膠電泳按泳帶可讀岀DNA序列。7、激活蛋口（CAP）對轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控作用？環(huán)腺昔酸（CAMP）受體蛋口 CRP （CAMP receptor PrOtein） , CAMP與