黃芪失笑散對血管內(nèi)皮功能的影響

1、黃芪失笑散對血管內(nèi)皮功能的影響 作者：祝光禮 魏麗萍 方偉 錢寶慶【摘要】 目的 觀察黃芪失笑散對大鼠血管內(nèi)皮功能的保護(hù)作用。方法 將SD大鼠隨機(jī)分為正常對照組、模型組、氟伐他汀組、黃芪失笑散大、中、小劑量組共6個實驗組，除正常對照組外分別予以高脂飼料喂養(yǎng)， 12周時觀察血清一氧化氮(NO)、血漿內(nèi)皮素(ET)的變化。結(jié)果 黃芪失笑散各劑量組均能明顯升高NO，降低ET，與模型組比較有顯著差異（P0.05）。結(jié)論 黃芪失笑散具有調(diào)節(jié)NO/ET的平衡，有效保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能。 【關(guān)鍵詞】 黃芪失笑散 血管內(nèi)皮功能 一氧化氮 血漿內(nèi)皮素【Abstract】 Objective To invest

2、igate the protective effect of Astragalus Shixiao Decoction on vascular endothelial function in rats. Methods SD rats were randomly divided into six groups: control group, model group, fluvastatin group, large-dosage Astragalus Shixiao Decoction group, moderate dosage Astragalus Shixiao Decoction gr

3、oup, small-dosage Astragalus Shixiao Decoction group.The fatty foodstuff were given to the treated groups and model group, but none to control group. The nitricoxid (NO) and endothelin(ET)in the serum were determined at the 12th week. Results The function in reducing ET and increasing the concentrat

4、ion of NO is similar between the Astragalus Shixiao Decoction groups and the fluvastatin group（P0.05）,but different from the model group（P0.05）. Conclusions Astragalus Shixiao Decoction plays an essential role in keeping the vascular endothelial function by the balance of NO/ET.【Key words】 Astragalu

5、s shixiao Decoction vascular endothelial function nitricoxid endothelin 動脈粥樣硬化(AS)的形成包括一系列病理過程，其中血管內(nèi)皮細(xì)胞功能受損是導(dǎo)致AS形成的始動環(huán)節(jié)。血管內(nèi)皮細(xì)胞具有代謝活性，分泌許多活性物質(zhì)，通過分泌內(nèi)皮源性血管收縮因子和內(nèi)皮源性血管舒張因子調(diào)節(jié)血管平滑肌張力，前者包括內(nèi)皮素、血栓素A2(TXA2)、前列腺素H2等，后者包括一氧化氮(NO)、前列環(huán)素(PGI2)、內(nèi)皮源性超極化因子等。這些因子調(diào)節(jié)著血管壁的舒縮功能和平滑肌細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)和增殖，并在血液和血管內(nèi)壁的界面上調(diào)節(jié)著凝血、纖溶、白細(xì)胞黏附與遷移的過

6、程。內(nèi)皮功能失常使這些調(diào)節(jié)過程發(fā)生障礙而導(dǎo)致AS發(fā)生、。 中醫(yī)并無動脈粥樣硬化這一病名，根據(jù)其癥候、病因、病機(jī)，多散見于“心痛”、“胸痹”、“痰飲”、“眩暈”、“水腫”等病癥門類中。其病機(jī)為本虛標(biāo)實，心肝脾腎虛損為本，血瘀痰濁為標(biāo)，尤以氣虛血瘀多見，上以益氣活血居多。黃芪失笑散是由大劑量的黃芪合用失笑散而成，具有補(bǔ)益心脾之氣，活化心胸之瘀滯的功效。為驗證其療效及進(jìn)一步闡述其機(jī)理，我們設(shè)計了這一實驗來觀察其對大鼠血管內(nèi)皮功能的保護(hù)作用，為進(jìn)一步闡釋該方抗動脈粥樣硬化機(jī)制打下基礎(chǔ)。1 材料與方法1.1 材料動物：清潔級SD大鼠48只，一級質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，雄性，體重(13020)g，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動物實

7、驗中心提供。藥物與試劑：黃芪失笑散(由黃芪30g、蒲黃20g、五靈脂20g組成)，煎煮濃縮成2g/ml的生藥煎劑，實驗前用蒸餾水配成相應(yīng)的濃度備用；氟伐他汀鈉(北京諾華制藥有限公司)，用時以蒸餾水配置成1mg/ml的液體；一氧化氮試劑盒（南京生物工程研究所生產(chǎn)）；內(nèi)皮素放免試劑盒（解放軍總科技中心放免所生產(chǎn)）；維生素D3（上?；瘜W(xué)試劑公司生產(chǎn)）。1.2 方法動物分組與造模：選用健康成年SD大鼠48只，隨機(jī)分為六組：正常對照組（A組）、模型組（B組）、氟伐他汀組（C組）、黃芪失笑散大劑量組（D組）、黃芪失笑散中劑量組（E組）、黃芪失笑散小劑量組（F組）。正常對照組喂以普通飼料加蒸餾水灌胃；黃芪失

8、笑散大、中、小劑量組喂以造模飼料加黃芪失笑散相應(yīng)劑量（分別為成人劑量的20倍、10倍、5倍，即28g/kgd、14g/kgd、7g/kgd）灌胃；氟伐他汀組喂以造模飼料加氟伐他?。ㄏ喈?dāng)于成人劑量10倍，即8mg/kgd）灌胃；模型組喂以造模飼料加蒸餾水灌胃。黃芪失笑散各組、模型組和氟伐他汀組在喂食開始時一次性腹腔注射維生素D360萬IU/kg，正常對照組給予同等體積的生理鹽水，實驗為期12周。造模飼料成分：普通飼料+3%膽固醇粉+0.5%膽酸鈉5%蛋黃粉+10%豬油5%白糖。儀器：主要儀器有SN-682放射免疫r計數(shù)器（院上海原子核研究日環(huán)儀器廠），分光光度儀（上海第二儀器廠），高速離心機(jī)（上

9、海醫(yī)用分析儀器廠），電熱恒溫水浴箱（上海精宏實驗設(shè)備有限公司）等。1 1.3 指標(biāo)檢測(1)血清NO的測定：實驗12周從大鼠股靜脈采取靜脈血，3000prm離心15min，分離血清，-20冰箱保存待測。采用硝酸還原酶法，硝酸還原酶法按試劑盒說明進(jìn)行。分三管：空白管內(nèi)置雙蒸水0.1ml，試劑 0.2ml，試劑 0.2ml；標(biāo)準(zhǔn)管內(nèi)置100mmol/L 試劑 0.2ml和試劑 0.2ml；測定管 內(nèi)置樣本0.1ml，試劑0.2ml，試劑0.2ml。三管均震混勻，于37水浴60min，然后各管加入試劑 0.2ml和試劑0.1ml，充分旋渦混勻30s,室溫靜置10min，35004000轉(zhuǎn)/min，離

10、心10min，取上清顯色(上清液各0.5ml，顯色劑各0.6ml)混勻，室溫靜置10min，蒸餾水調(diào)零，550nm，0.5cm光徑，測各管吸光度值。公式： NO含量（ummol/L）=測定管吸光度-空白管吸光度標(biāo)準(zhǔn)管吸光度-空白管吸光度標(biāo)準(zhǔn)品濃度 樣品測試前倍數(shù)（100ummol/L）血漿ET的測定：實驗12周結(jié)束后從大鼠股靜脈采取靜脈血2ml，注入含10EDTA二鈉30ul和抑肽酶40ul，混勻4，3000prm離心10min，分離血漿，-20冰箱保存待測。(2)血漿內(nèi)皮素檢測：采用放射免疫法檢測，放免法按試劑盒說明進(jìn)行。1.4 統(tǒng)計學(xué)方法計量資料以（xs）表示，用SPSS 12.0 統(tǒng)計軟

11、件對其進(jìn)行單因素方差分析。2 結(jié)果2.1 黃芪失笑散對大鼠血清NO的影響 見表1，模型組大鼠血清NO水平比正常對照組顯著降低(P0.01), 黃芪失笑散各組、氟伐他汀組與模型組相比明顯升高(P0.05），黃芪失笑散各組與氟伐他汀組比較也無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05），但各治療組之間的療效存在著一定的趨勢，依次為黃芪失笑散大劑量組、氟伐他汀組、黃芪失笑散中劑量組、黃芪失笑散小劑量組。表1 黃芪失笑散對大鼠血清NO的影響（略）注：與模型組比較，P0.05，P0.012.2 黃芪失笑散對大鼠血漿ET的影響結(jié)果見表2，模型組大鼠血漿ET水平比正常對照組顯著升高(P0.01)，黃芪失笑散各組、氟伐他汀組與模

12、型組相比明顯降低(P0.05），黃芪失笑散各組與氟伐他汀組比較也無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05），但各治療組之間的療效存在著一定的趨勢，依次為黃芪失笑散大劑量組、氟伐他汀組、黃芪失笑散中劑量組、黃芪失笑散小劑量組。表2 黃芪失笑散對大鼠血漿ET的影響n=6，(略)注：與模型組比較，P0.05，P0.013 討論 根據(jù)動脈粥樣硬化的病因特點，益氣活血方藥在動脈粥樣硬化的治療中發(fā)揮了更多的優(yōu)勢。黃芪失笑散是由大劑量的黃芪合失笑散而成，全方以益氣為本，活血化淤為標(biāo)，標(biāo)本同治，虛實兼顧。我們在長期的臨床實踐中摸索出應(yīng)用的黃芪失笑散可以降低血脂，延緩甚至消退動脈粥樣硬斑塊。方中黃芪味甘，性溫，歸脾、肺經(jīng)，是補(bǔ)

13、氣中的要藥。藥理研究表明，其具有保護(hù)血管內(nèi)皮及血管平滑肌、促進(jìn)NO合成等作用。五靈脂配蒲黃，二藥相須為用共奏活血散結(jié)、祛瘀止痛之效。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，蒲黃具有保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞，抗血小板聚集與抗血栓形成等作用，蒲黃中的不飽和脂肪酸榭皮素有明顯的抗動脈粥樣硬化作用；五靈脂具有抗炎、抗血小板聚集、清除自由基作用。 血管內(nèi)皮細(xì)胞在維持血管正常功能方面起著重要作用，人們把內(nèi)皮細(xì)胞視為治療和預(yù)防心血管疾病的靶點。內(nèi)皮細(xì)胞不僅是血液和組織間進(jìn)行交換的屏障，而且它也是一種多功能的細(xì)胞，可合成和分泌多種生物活性物質(zhì)，如NO、ET。NO是以L-精氨酸為底物在血管內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合酶(NOS)作用下合成的血管活性物質(zhì)。其是一種重要的內(nèi)皮源性血管舒張因子，還具有抗氧化、抑制白細(xì)胞和血小板黏附與激活、抑制SMC增殖與誘導(dǎo)SMC凋亡等多種生理和病理作用。ET是內(nèi)皮細(xì)胞分泌的一種由21個氨基酸組成的血管多肽，是目前發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的內(nèi)源性縮血管物質(zhì)。當(dāng)ET增高到一定程度時，引起冠狀動脈痙攣，從而損害內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)AS的形成，并通過刺激SMC增殖的作用，進(jìn)一步加重AS的4。NO/ET是一對具有拮抗效應(yīng)的血管活性物質(zhì)，兩者合成釋放作用的協(xié)調(diào)是維持血管張力的主要因素之一，是反映血管內(nèi)皮功能的主要生物學(xué)指標(biāo)。動脈粥樣硬化的始動環(huán)節(jié)是血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，當(dāng)內(nèi)皮損傷時，NO合成減少，導(dǎo)致血管舒張功能障礙，加速血小板的