胸腔積液的細(xì)胞學(xué)檢查進(jìn)展

1、胸腔積液的細(xì)胞學(xué)檢查進(jìn)展    積液是臨床常見癥狀之一。正確鑒別積液的性質(zhì)對(duì)疾病的診治預(yù)后有重要意義。隨著實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)的提高，近年來胸腔積液的檢測(cè)在細(xì)胞形態(tài)學(xué)、     積液是臨床常見癥狀之一。正確鑒別積液的性質(zhì)對(duì)疾病的診治預(yù)后有重要意義。隨著實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)的提高，近年來胸腔積液的檢測(cè)在細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞染色體及免疫細(xì)胞化學(xué)等方面都有著較大的進(jìn)展，為臨床提供了更可靠的依據(jù)。本文對(duì)此作一簡(jiǎn)要綜述。 一、沉渣涂片瑞吉氏染色瑞吉氏染色能清楚地顯示細(xì)胞漿成份和細(xì)胞核染色質(zhì)結(jié)構(gòu)，易于良惡性細(xì)胞的判別。 1.惡性細(xì)胞見到典型惡

2、性瘤細(xì)胞即可確診為惡性胸液。王東鋼1報(bào)道該法瘤細(xì)胞檢出率38.8。若用腦脊液細(xì)胞玻片離心沉淀器收集細(xì)胞，由于細(xì)胞收集高達(dá)80.4，故敏感性大大提高，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值達(dá)93.5。李亞紅2報(bào)道積液送檢量增至250ml，取新鮮下層積液離心涂片染色，瘤細(xì)胞首次檢出率為83.3，三次以上送檢檢出率達(dá)100。我們通過對(duì)胸液標(biāo)本（510ml）兩次離心濃集細(xì)胞涂片瑞吉氏染色，先低倍鏡掃描全片，遇有可疑細(xì)胞時(shí)再轉(zhuǎn)油鏡鑒定細(xì)胞性質(zhì)，惡性細(xì)胞檢出率達(dá)78，特異性為94.33。 2.血細(xì)胞粘附腫瘤細(xì)胞花環(huán)3在含惡性腫瘤細(xì)胞的胸腹水或心包積液的涂片中，將3個(gè)白細(xì)胞（淋巴、粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞）或紅細(xì)胞粘附于瘤細(xì)胞胞漿邊緣周圍，形

3、成花環(huán)樣，稱之為血細(xì)胞粘附腫瘤細(xì)胞花環(huán)。我室在查見惡性細(xì)胞的179例胸腹水涂片中，79例查見血細(xì)胞粘附腫瘤細(xì)胞花環(huán)，每份涂片約56cm2，平均花環(huán)數(shù)9.6±5.7個(gè)。追蹤隨訪，有16例在首次查見血細(xì)胞粘附腫瘤細(xì)胞花環(huán)后的1551天內(nèi)病故。由此可見，血細(xì)胞粘附腫瘤細(xì)胞花環(huán)的出現(xiàn)可能提示部分腫瘤的惡性發(fā)展4。 3.免疫島巨噬細(xì)胞與周圍已轉(zhuǎn)化和未轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞的堆積團(tuán)稱為免疫島。免疫島可能是由于腫瘤抗原及病原微生物刺激機(jī)體免疫反應(yīng)所致。在120例患者的胸腹液涂片中發(fā)現(xiàn)52例（43.3）患者的胸腹液中存在免疫島。結(jié)核和腫瘤患者，占77。14例結(jié)核性胸腹液中11例查見免疫島，每份涂片面積（2.

4、0cm×2.5cm），平均免疫島數(shù)59.6±12.8個(gè)；60例惡性胸腹液中29例查見免疫島，每份涂片面積同上，平均免疫島數(shù)39.2±18.9個(gè)3、5。 4.其他胸腹液涂片瑞吉氏染色鏡檢還可見到分葉核細(xì)胞包裹桿菌現(xiàn)象3，提示細(xì)菌或結(jié)核桿菌感染；化膿性炎癥所致胸水的中性粒細(xì)胞明顯升高，并可見分葉核細(xì)胞噬菌現(xiàn)象；在并發(fā)真菌感染的胸水涂片中可見噬真菌細(xì)胞或分葉核細(xì)胞包裹真菌。若同時(shí)做抗酸染色、革蘭氏染色及培養(yǎng)可進(jìn)一步鑒定病原。 二、沉渣涂片細(xì)胞化學(xué)染色王應(yīng)6等對(duì)胸水中的瘤細(xì)胞進(jìn)行多種化學(xué)染色，結(jié)果顯示瘤細(xì)胞的過氧化物酶染色（POX）、蘇丹黑B染色（SB）均呈陰性；而糖原染

5、色（PAS）、堿性磷酸酶染色（ALP）、特異性脂酶染色（ASD-CE）、非特異性脂酶染色（-NAE）、酸性磷酸酶染色（ACP）等呈不同程度的陽(yáng)性反應(yīng)。 三、熒光染色用吖啶橙熒光染色，由于腫瘤細(xì)胞增生旺盛，細(xì)胞漿及核仁內(nèi)有大量的RNA，染色后呈桔紅或火焰色熒光；細(xì)胞核中有大量的DNA則呈黃綠色熒光。該法檢測(cè)惡性胸水陽(yáng)性率達(dá)78.3，假陽(yáng)性率14.37。 四、核仁組成區(qū)嗜銀蛋白染色（AgNOR）陳麗珠8等用Croker染色方法對(duì)150例胸腹水中的良惡性細(xì)胞進(jìn)行分析，結(jié)果表明：良性組中的淋巴細(xì)胞、間皮細(xì)胞及非典型增生間皮細(xì)胞的AgNOR核顆粒均數(shù)都小于1.98個(gè)細(xì)胞核，且87的顆粒為規(guī)則小圓形，三種

6、細(xì)胞間也無明顯差異（P0.05）。惡性組中瘤細(xì)胞AgNOR顆粒都超過4.98個(gè)細(xì)胞核，82以上的顆粒為不規(guī)則型及彌散型分布，與良性組比較有顯著差異（P0.05)小莉9等以類似方法分析60例惡性胸腹水細(xì)胞和70例良性胸腹水細(xì)胞，前者細(xì)胞AgNOR顆粒數(shù)平均為每核4.35±2.18個(gè)，后者平均為1.80±0.79個(gè)，若以良性組AgNOR顆粒均值加一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差（即2.59）為判斷良惡性的閾值，對(duì)惡性胸腹水診斷的敏感性為75，特異性為86.5。我室漿膜腔積液涂片的AgNOR顆粒分布形態(tài)分為四種：核仁型、核仁內(nèi)型、聚集型及彌散型。AgNOR顆粒數(shù)，惡性細(xì)胞16.7±3.8個(gè)核

7、、異型間皮細(xì)胞6.9±3.5個(gè)核、巨噬細(xì)胞2.1±0.8個(gè)核，有明顯差異，AgNOR顆粒數(shù)高于上述文獻(xiàn)。我們認(rèn)為胸水AgNOR能提供淋巴細(xì)胞與小細(xì)胞型瘤細(xì)胞，以及非典型增生細(xì)胞與腺癌細(xì)胞的鑒別依據(jù)。該法也可在其他脫落細(xì)胞的檢查中推廣應(yīng)用。 五、免疫細(xì)胞化學(xué)染色可采用ABC法10，即親和素-生物素復(fù)合物法（Avidin-BiotinCom-plex，ABC）。根據(jù)細(xì)胞的顯色反應(yīng)判斷細(xì)胞表面或漿內(nèi)是否有相應(yīng)的瘤細(xì)胞抗原，如用癌胚抗原（CEA）抗體檢測(cè)腺癌細(xì)胞的CEA表達(dá)，用甲胎蛋白（AFP）抗體檢測(cè)肝癌細(xì)胞的AFP表達(dá)等。本法特異性高，可確定癌瘤細(xì)胞的來源及類型，但影響因素多。

8、張素娟11等用淋巴細(xì)胞分離液去除紅細(xì)胞和血漿蛋白，減少了背景染色，利于結(jié)果觀察和提高陽(yáng)性檢出率。Spehn12報(bào)道用BerEP4抗體進(jìn)行細(xì)胞免疫化學(xué)染色，59例細(xì)胞學(xué)陰性的胸液中，有34例染色陽(yáng)性，16例被確診；而良性細(xì)胞無假陽(yáng)性反應(yīng)。作者認(rèn)為該染色為一高敏感性、高特異性的檢測(cè)惡性瘤細(xì)胞的方法。 六、染色體檢查人體正常細(xì)胞染色體為二倍體（2n46）。瘤細(xì)胞由于異常增生，常出現(xiàn)超二倍體。文獻(xiàn)13報(bào)道有61.9的惡性胸水有超二倍體；而結(jié)核性胸水中細(xì)胞核型為二倍體，也可出現(xiàn)少量亞二倍體，但極少超過5。胸液也是細(xì)胞的良好培養(yǎng)基，若病理分裂像超過10，對(duì)惡性胸液有一定診斷意義。我們3對(duì)948例胸腹水染色

9、體檢查統(tǒng)計(jì)分析，222例有染色體異常，最后診斷惡性腫瘤者204例，陽(yáng)性符合率91.9。異常染色體為多倍體、內(nèi)復(fù)制、超二倍體、亞二倍體、假二倍體和標(biāo)志染色體等。 七、淋巴細(xì)胞亞群分析可能是由于結(jié)核桿菌及其代謝產(chǎn)物的強(qiáng)抗原性刺激，結(jié)核性胸水中有大量T淋巴細(xì)胞聚集，且CD4CD81，而腫瘤性胸液則比例倒置，但兩組胸液中CD8細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)無明顯差異（P0.05）14。 八、流式細(xì)胞分析（FCM）15FCM可以大量快速地測(cè)定單個(gè)細(xì)胞的DNA含量，80的瘤細(xì)胞DNA含量異常。FCM可將正常二倍體細(xì)胞與瘤細(xì)胞區(qū)分開來。結(jié)合免疫熒光技術(shù)，F(xiàn)CM可用于瘤細(xì)胞抗原的測(cè)定；分析胸水中淋巴細(xì)胞的免疫表現(xiàn)型，發(fā)現(xiàn)淋巴細(xì)

10、胞畸變的表型，從而獲得淋巴瘤的診斷。由此，F(xiàn)CM不失為一個(gè)有前瞻的鑒別良惡性胸液的手段。 九、電鏡檢查電鏡由于其顯示超微結(jié)構(gòu)能力，對(duì)瘤細(xì)胞的性質(zhì)或組織起源尤其是神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤、白血病和小圓細(xì)胞腫瘤的鑒別診斷具有決定作用16。毛細(xì)胞白血病電鏡下細(xì)胞表面有較多細(xì)長(zhǎng)的胞漿突起，50病例胞漿內(nèi)出現(xiàn)核糖體板層復(fù)合體（RLC），借此可確診。神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞電鏡下找到神經(jīng)內(nèi)分泌顆粒，同時(shí)可根據(jù)顆粒形態(tài)變化給予分類。 參考文獻(xiàn) 1 王東鋼，李萬亭細(xì)胞玻片離心沉淀器在漿膜腔積液細(xì)胞學(xué)診斷中的應(yīng)用中國(guó)腫瘤臨床1994；21（10）756 2李亞紅，莫長(zhǎng)青，劉等漿膜腔積液細(xì)胞學(xué)檢查的診斷價(jià)值貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)1995

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