臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法

1、臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法第一章 總 則      第一條 為規(guī)范臨床基因擴增檢驗實驗室管理，保證臨床基因擴增檢驗質(zhì)量，使臨床診斷和治療更為科學、合理，特制定本辦法。     第二條 臨床基因擴增檢驗技術(shù)指以臨床診斷治療為目的，以擴增檢測DNA或RNA為方法的檢測技術(shù)，如聚合酶鏈反應（PCR）、連接酶鏈反應（LCR）、轉(zhuǎn)錄依賴的放大系統(tǒng)（TAS）自主序列復制系統(tǒng)（3SR）和鏈替代擴增（SDA）等。     第三條 本辦法適用于開展臨床基因擴增檢驗的實驗室。臨床基因擴增

2、檢驗實驗室設立在二級以上醫(yī)院。     第四條 臨床基因擴增檢驗實驗室必須使用經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局批準的臨床檢驗試劑開展臨床基因擴增檢驗項目。     第五條 衛(wèi)生部臨床檢驗中心（以下簡稱衛(wèi)生部臨檢中心）和省、自治區(qū)、直轄市臨床檢驗中心（以下簡稱省臨檢中心）負責對所轄行政區(qū)域內(nèi)臨床基因擴增檢驗實驗室的質(zhì)量監(jiān)督管理工作。第二章 實驗室設置和驗收      第六條 擬設置臨床基因擴增檢驗實驗室的醫(yī)療機構(gòu)按照臨床基因擴增檢驗實驗室基本設置標準（見附件）籌建實驗室；籌建完成后，由法定

3、代表人向衛(wèi)生部臨檢中心提出技術(shù)驗收申請。申請時需提交以下材料：     （一）醫(yī)療機構(gòu)執(zhí)業(yè)許可證復印件；     （二）可行性研究報告；     1、 擬設臨床基因擴增檢驗實驗室機構(gòu)的所在地醫(yī)療衛(wèi)生資源狀況、本機構(gòu)的基本情況、對臨床基因擴增檢驗的需求以及臨床基因擴增實驗室運行的預測分析；     2、 擬設臨床基因擴增檢驗實驗室的設置平面圖；     3、 擬設臨床基因擴增檢驗實驗室將開展的檢驗項

4、目、實驗設備條件和有關技術(shù)人員資料     第七條 衛(wèi)生部臨檢中心和省臨檢中心共同組織相關專業(yè)的專家組（以下簡稱專家組），按照臨床基因擴增檢驗實驗室基本設置標準對提出申請的臨床基因擴增檢驗實驗室進行技術(shù)驗收。驗收完成后，在20日內(nèi)將驗收報告寄送至申請機構(gòu)。     第八條 經(jīng)專家組技術(shù)驗收合格的醫(yī)療機構(gòu)將本辦法第六條規(guī)定的材料及專家組驗收報告送至省級行政部備案。在將符合規(guī)定的全部材料送達省級衛(wèi)生行政部門后15日內(nèi)未收到省級衛(wèi)生行政部門不同意的意見，方可開展專家組技術(shù)驗收合格的臨床基因擴增檢驗項目。 

5、60;   第九條 未經(jīng)專家組驗收合格并報省級衛(wèi)生行政部門備案的醫(yī)療機構(gòu)不得擅自開展臨床基因擴增檢驗項目。第三章 實驗室監(jiān)督管理      第十條 臨床基因檢驗實驗室必須按照臨床基因擴增檢驗實驗室工作規(guī)范（另發(fā)）開展臨床基因擴增檢驗工作。     第十一條 臨床基因擴增檢驗實驗室技術(shù)人員必須進行上崗培訓。經(jīng)培訓合格者，由培訓單位發(fā)給合格證書，并將培訓合格人員名單報衛(wèi)生部臨檢中心備案。獲得培訓合格證書者方可從事臨床基因擴增檢驗工作。     培訓單位為衛(wèi)生部

6、臨檢中心，或由省級衛(wèi)生行政部門指定并經(jīng)衛(wèi)生部臨檢中心認定的機構(gòu)。培訓時使用規(guī)定的統(tǒng)一教材。     第十二條 以科研為目的的基因擴增檢驗項目。不得向臨床出具檢驗報告，不得向病人收取任何費用。     第十三條 臨床基因擴增檢驗實驗室必須按照臨床基因擴增實驗室工作規(guī)范開展室內(nèi)質(zhì)量控制，并參加衛(wèi)生部臨檢中心組織的室內(nèi)質(zhì)量評價。第十四條 衛(wèi)生部臨檢中心按照本方法和臨床基因擴增實驗室工作規(guī)范協(xié)調(diào)、組織省臨檢中心對臨床基因擴增檢驗實驗室的檢驗質(zhì)量進行監(jiān)測。監(jiān)測結(jié)果報省級衛(wèi)生行政部門，同時抄送被監(jiān)測的臨床基因擴增檢驗實驗室所在

7、醫(yī)療機構(gòu)。      第十五條 衛(wèi)生部臨檢中心或省級臨檢中心受省級以上衛(wèi)生行政部門委托可對臨床基因擴增檢驗實驗室進行現(xiàn)場檢查，現(xiàn)場檢查工作人員在履行職責時應出示證件。在進行現(xiàn)場檢查時，檢查人員有權(quán)調(diào)閱有關資料，被檢查機構(gòu)不得拒絕或隱瞞。     第十六條 衛(wèi)生部臨檢中心對在室間質(zhì)量評價中不合格的臨床基因擴增檢驗實驗室提出警告，對連續(xù)二次或三次中有二次發(fā)現(xiàn)臨床基因擴增檢驗結(jié)果不合格的臨床基因擴增檢驗實驗室，衛(wèi)生部臨檢中心報省級以上衛(wèi)生行政部門由省級以上衛(wèi)生行政部門責令其暫停有關臨床基因擴增檢驗項目，限期整改。經(jīng)專家組

8、進行再次技術(shù)驗收并合格，并報省級衛(wèi)生行政部門核準后，方可重新開展臨床基因擴增檢驗項目。     第十七條 對于未經(jīng)衛(wèi)生部臨檢中心組織的專家組技術(shù)驗收合格并報省級衛(wèi)生部門備案，擅自開展臨床基因檢驗項目的醫(yī)療機構(gòu)，由省級衛(wèi)生行政部門依據(jù)醫(yī)療機構(gòu)管理條例第四十七條和醫(yī)療機構(gòu)管理條例實施細則第八十條予以處罰，并予以公告。公告所需費用由被公告機構(gòu)支付。     第十八條 出現(xiàn)下列情況之一的臨床基因擴增檢驗實驗室，由省級衛(wèi)生行政部門責令其停止開展臨床基因擴增檢驗，并對其所在醫(yī)療機構(gòu)予以公告。公告所需費用由被公告機構(gòu)支付：

9、60;    （一） 開展超出衛(wèi)生部臨檢中心組織的技術(shù)驗收合格并報省級衛(wèi)生行政部門備案 臨床基因擴增檢驗項目的；     （二） 使用未經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局批準的試劑開展臨床基因擴增檢驗的；     （三） 在臨床基因擴增檢驗中未開展室內(nèi)質(zhì)量控制的；     （四） 在臨床基因擴增檢驗中未參加室間質(zhì)量評價的；     （五） 在臨床基因擴增檢驗中弄虛作假的；    

10、（六） 以科研為目的的基因擴增檢驗項目向病人收取費用的；     （七） 使用未經(jīng)培訓合格的專業(yè)技術(shù)人員從事臨床基因擴增檢驗的；第四章 附 則      第十九條 對采供血機構(gòu)的基因擴增檢驗實驗室開展基因擴增檢驗項目的管理，參照本辦法執(zhí)行。     第二十條 衛(wèi)生部臨檢中心組織的專家組對申請開展臨床基因擴增檢驗的實驗室進行技術(shù)驗收所需費用按國家有關規(guī)定執(zhí)行。     第二十一條 本辦法由衛(wèi)生部負責解釋。   

11、;  第二十二條 本辦法自發(fā)布之日起施行。     附：臨床基因擴增檢驗實驗室基本設置標準根據(jù)臨床檢驗擴增檢驗實驗室管理暫行辦法，制定本標準      一、 臨床基因擴增檢驗實驗室區(qū)域設置原則     （一） 臨床基因擴增檢驗實驗室區(qū)域設置原則     1、 試劑儲存和準備區(qū)     2、 標本制備區(qū)     3、 擴增反應混合物配制和擴增區(qū)

12、60;    4、 擴增產(chǎn)物分析區(qū)     如使用全自動分析儀，區(qū)域可適當合并。（二） 各工作區(qū)域必須有明確的標記，避免不同工作區(qū)域內(nèi)的設備、物品混用。     （三） 進入各工作區(qū)域必須嚴格按照單一方向進行，即試劑儲存和準備區(qū) >標本制備區(qū)>擴增反應混合物配制和擴增區(qū)>擴增產(chǎn)物分析區(qū)。     （四） 不同的工作區(qū)域使用不同的工作服（例如不同的顏色）。工作人員離開各工作區(qū)域時，不得將工作服帶出。  

13、0;  二、 工作區(qū)域儀器設備配置標準     （一） 試劑儲存和準備區(qū)     1、2-8C和-15C冰箱     2、混勻器     3、微量加樣器（覆蓋1-1000ul）     4、移動紫外燈（近工作臺面）     5、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）    

14、 6、專用工作服和工作鞋     7、專用辦公用品     （二） 標本制備區(qū)     1、2-8C冰箱、-20C或-80C冰箱     2、高速臺式冷凍離心機     3、混允器     4、水浴箱或加熱模塊     5、微量加樣器（覆蓋1-1000ul）     6、可移動紫

15、外燈（近工作臺面）     7、超凈工作臺     8、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）     9、專用工作服和工作鞋     10、專用辦公用品     如需處理大分子DNA，應具有超聲波水浴儀。     （三） 擴增反應混合物配制和擴增區(qū)     1、 核酸擴增儀

16、0;    2、 微量加樣器（覆蓋1-1000ul）     3、 可移動紫外燈（近工作臺面）     4、 消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）     5、 專用工作服和工作鞋     6、 專用辦公用品     (四)擴增產(chǎn)物分析區(qū)     視檢驗方法不同而定?；緝x器設備如下：

17、60;    1、 微量加樣器（覆蓋1-1000ul）     2、 可移動紫外燈（近工作臺面）     3、 消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、加樣器吸頭（帶濾心）     4、 專用工作服和工作鞋     5、 專用辦公用品    為了對以個特定序列進行PCR做重復檢測,需要三個不同的區(qū)域,每一個區(qū)域的具體技術(shù)操作和試劑在下面詳細列出.  1、樣品準備區(qū)

18、    這個區(qū)域?qū)ｉT用作樣品的準備，在制備和操作用于核酸提取的試劑時應該采    取預防措施：    1）PCR產(chǎn)物和帶有要擴增序列的DNA克隆不能在這個房間操作。    2）組織培養(yǎng)物、組織標本和血清樣品都帶進樣品準備間處理，以根據(jù)應用的需要提取DNA或RNA。    3）用于樣品處理的工具不能被用作普通分子克隆的工具，也不能用作操作靶序列。    4）D

19、NA樣品應該用有專門的防護或正壓活塞式移液管操作，以防止在吸取樣品時有氣溶膠遺留。    5）大體積樣品應該用單獨包裝的無菌一次性移液管吸取。    6）管子打開前都要簡短離心以減少氣溶膠的產(chǎn)生，而且管子不能用力崩開，這樣會產(chǎn)生氣溶膠。    7）任何時候都應該穿實驗服和帶手套，手套要經(jīng)常更換，尤其在抽提過程中每一步之間都要更換。實驗服要專門用于樣品準備間，經(jīng)常清洗。    2、樣品準備和RNA-PCR   

20、0; RNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作，這樣增加了樣品之間污染的機會。為了避免這一問題，反轉(zhuǎn)錄一步可以在樣品準備區(qū)進行。在RNA-PCR中應用UNG以防止污染的方法也有報道。    3、前PCR區(qū)    必須有專門用于準備各種反應的區(qū)域，這個區(qū)域必須保持干凈，而且沒有來自克隆和樣品準備的污染。前PCR區(qū)必須要有試劑和準備，特別是專門用于前PCR區(qū)的正壓活塞式移液管。    4、PCR實驗室試劑的操作    1）所用的

21、所有溶液都應該沒有核酸和（或）核酸酶（DNase和RNase）污染。    2）所有PCR試劑中使用的水都應該是高質(zhì)量的新鮮蒸餾的去離子水，用0.22m過濾的，并且是高壓滅菌。    3）在20到25貯存的試劑建議加點像疊氮鈉一類的抗微生物劑，在擴增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴增反應。    4）所用試劑都應該以大體積配制，實驗一下看試劑是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量進行貯存。    5）所有試劑和樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。    6）新配制的試劑在用于準備新的標本之前應該加以檢驗。    7）樣品準備和前PCR區(qū)所使用的移液管在不使用時都應該小心保存。    5、在前PCR區(qū)建立PCR混合物    1）可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分裝并保存在-20或4，在實驗室只涉及到擴增一種或少數(shù)幾種特異序列時這樣做很有用。  &#