蜂蜜酶值快速檢測的研究 - 標(biāo)準(zhǔn)參考比色板法-

1、提出的是,太湖豬和歐美豬種的繁殖力在經(jīng)過同樣比較后也存在這種現(xiàn)象,因而更有可能是后一方面的原因。也就是說妊娠早期胚胎死亡率較低的有可能妊娠后期胚胎死亡率較高,但目前還沒有這方面的研究報道,因此有必要就妊娠后期胚胎死亡率是否也存在豬種差異進(jìn)行研究。參考文獻(xiàn):1許振英.中國地方豬種種質(zhì)特性M.杭州:浙江科學(xué)技術(shù)出版社,1989.2張照.中國太湖豬M.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1991.3T ergui M,et al.Chinese Pig Sym posiumM.France:1992,19-32.4趙尚吉,等.J.畜牧獸醫(yī)學(xué)報,1988,19(1:30-34.5Xu shiqing.The h

2、ighly prolific characteristics and phisiological蜂蜜酶值快速檢測的研究標(biāo)準(zhǔn)參考比色板法黃金林,王秉棟(揚(yáng)州大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院,江蘇揚(yáng)州225009摘要:蜂蜜中淀粉酶活性值(酶值DN是評定蜂蜜質(zhì)量的一項(xiàng)重要指標(biāo),新鮮的蜂蜜其酶值較高,營養(yǎng)價值好。本文在傳統(tǒng)檢測方法,試管碘反應(yīng)目測法和分光光度比色法的基礎(chǔ)上,結(jié)合兩者的優(yōu)點(diǎn),采用標(biāo)準(zhǔn)參考比色板法,該方法具有方便、易行、快速可靠等優(yōu)點(diǎn)。關(guān)鍵詞:蜂蜜;淀粉酶值(DN;檢測中圖分類號:S896.1;S852文獻(xiàn)標(biāo)識碼:B文章編號:0258-7033(200106-0033-03蜂蜜中含有少量的淀粉酶及自身的轉(zhuǎn)

3、化酶,其中淀粉酶活性值(酶值DN是評定蜂密質(zhì)量的一項(xiàng)重要指標(biāo),酶值的高低反映了蜂蜜的新鮮程度及其營養(yǎng)價值,新鮮的蜂蜜其酶值較高,營養(yǎng)價值好。但蜂蜜往往由于加工不當(dāng)、貯存不良而破壞酶的活性或因人為地?fù)郊俚冉档土嗣傅幕钚?致使蜂蜜品質(zhì)下降。為了保證蜂蜜的品質(zhì),國際上規(guī)定普通蜂蜜中的淀粉酶值在8.0以上,我國規(guī)定出口蜂蜜的酶值在8.3以上,而所用的檢測方法目前有二種:一是我國商業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的試管碘反應(yīng)目測法;二是AOAC規(guī)定的分光光度比色法。此法也是國際上通用的方法。但是,就我國目前的檢測條件,尤其對于基層收購和加工生產(chǎn)單位的檢測條件而言,上述兩法因存在諸多條件限制而未能廣泛應(yīng)用。第一種方法因操作繁

4、瑣,工作量大,所用試劑多,檢測費(fèi)時(1h以上而難以使用。第二種方法因許多基層單位缺乏儀器及專門技術(shù)人員而不能普遍開展。因此,在實(shí)際工作中,蜂蜜的質(zhì)量檢測大多數(shù)還僅僅停留在感觀檢查上,這就使我國蜂蜜的品質(zhì)長期得不到控制,也給一些人以可乘之機(jī),給國家、人民造成巨大經(jīng)濟(jì)損失,同時,也影響了我國蜂密投放國際市場。為了加強(qiáng)我國蜂蜜質(zhì)量的控制,做到方便、易行、快速可靠,我們查閱了有關(guān)資料,旨在AOAC法的基礎(chǔ)上將上述兩法結(jié)合起來,揚(yáng)長避短,經(jīng)我們的試驗(yàn)證明采用標(biāo)準(zhǔn)參考比色板法是可行和可信的。1原理蜂蜜中的淀粉酶在一定狀態(tài)下酶解淀粉,一定時間后剩余的淀粉與碘絡(luò)合成有色化合物,顏色由藍(lán)色藍(lán)紫色紅紫色黃色,吸光

5、度在660nm波長下由高到低,其中吸光度0.235所對應(yīng)顏色為紅紫色,此時從達(dá)到0.235吸光度的時間得出相對應(yīng)的酶植。為此,以0.235吸光度的管作為標(biāo)準(zhǔn)管(顏色為紅紫色,結(jié)合碘目測法,只要記錄到與標(biāo)準(zhǔn)管顏色一致所需的時間,便可得到蜜樣的淀粉酶的估測值。2儀器與試劑(1721分光光度計;(250ml具塞試管、100ml容量瓶、吸管等;(3碘貯存溶液:稱取K12.2g溶于4ml 水中,取0.88g碘溶于KI液中,并用水稀釋定容到100ml;(40.0007m ol/L碘液:稱取KI20g于燒杯中,加水40ml、溶解,加碘貯存液5.0ml混勻,轉(zhuǎn)移至500ml容量瓶中定容,每隔兩天重配;(51.

6、59m ol/L乙酸緩沖液(pH5.3:稱取乙酸鈉(CH3C OONa3H2O87g于400ml 水中,加冰乙酸10.5ml,可用pH計或精密pH試紙以乙酸鈉或乙酸調(diào)整pH為5.3,以水定容量到500ml;(60.5m ol/LNaCl溶液:稱取NaCl14.5g溶于煮沸過的水中,并定溶至500ml;(72%淀粉溶液:稱取馬鈴薯淀33經(jīng)驗(yàn)交流粉2.000g 于錐形瓶中加水90ml ,煮沸,不斷攪拌,沸騰3min ,冷卻,轉(zhuǎn)移到100ml 容量瓶中,40水浴并定容。3分析方法3.12%淀粉溶液的標(biāo)定取40時2%淀粉液5ml于盛有10ml 水的試管中混勻,再吸取此液1ml 于盛有10m10.000

7、7m ol/L 碘液及40ml 水的錐形瓶中,立即混勻,再以波長660nm ,杯徑1cm ,水調(diào)零比色,吸光度要求在0.76+/-0.020之間,如達(dá)不到該值,可略微調(diào)整用水量。3.2標(biāo)準(zhǔn)參考比色板的制備稱取蜂蜜10.0g 于50ml 具塞試管中,加1.59m ol/L 乙酸緩沖液5ml ,混勻,加0.5m ol/NaCl 液3ml ,混勻,加水定容至刻度。取上述10ml 待測液于試管中,置 40水浴15min ,加40保溫的淀粉液5ml ,混勻記時,每隔5min ,吸1ml 上述酶解液于盛有10ml 碘液及40ml 水的錐形瓶中,混勻,于波長660nm ,杯徑1cm ,以水調(diào)零比色,記下吸光

8、度A ,將吸光度A 為0.235的顯色液倒入試管中,以此作為標(biāo)準(zhǔn)管,拍成彩色照片,制成標(biāo)準(zhǔn)參考比色板。3.3樣品的測定稱取20g 樣品,處理及測定步驟同前,在吸取1ml 酶解液于盛有10ml 碘液、40ml 水的錐形瓶中混勻顯色后,將顯色液注入同樣規(guī)格的試管中,其顏色與標(biāo)準(zhǔn)參考比色板比較,記錄兩者顏色達(dá)到一致或相近所需酶解的時間。3.4計算酶值(DN =150/t其中:t 為達(dá)到與標(biāo)準(zhǔn)參考雙色板顏色一致或相近,酶解所需要的時間。4結(jié)果與討論4.1條件選擇樣其他條件一致的情況下,分別稱取不同量的蜜樣(M 1進(jìn)行酶濃度對酶解反應(yīng)速度的影響試驗(yàn),結(jié)果見表1。表1不同酶濃度對反應(yīng)速度的影響蜜樣(g 吸

9、光度達(dá)0.235所需時間(m in 樣1樣2樣3樣4樣5 -18-表1表明520g 蜜樣中的酶濃度與反應(yīng)速度基本上成M 3t =常數(shù)的關(guān)系,與AOAC 法比較有M 0t 0/M 1t 1=1, 淀粉酶值=300M 0/M 1t 1,為加快檢測速度,本法中選定取樣20.0g ,則酶值可表示為:酶值(DN =300/2t 1。一處理,于不同水浴溫度下測定吸光度A 達(dá)0.235所需時間(t 的試驗(yàn),其結(jié)果見圖1:圖1不同水溶溫度對酶活力的影響表明,在55以下,隨著溫度的升高酶的活力隨圖2不同pH 緩沖液對酶活力的影響表明,在pH4.56.5時酶的活性最大,且較穩(wěn)定,43中國畜牧雜志2001年第37卷第6期驗(yàn),其結(jié)果見下表:表2兩種方法測定結(jié)果的比較樣品分光光度法標(biāo)準(zhǔn)參考比色板法9.410.0表明:使用本法基本上能反映真實(shí)酶值,具有較好的可靠性。4.3在生產(chǎn)實(shí)際中的應(yīng)用后,可由公式計算,酶值(DN =300/2t ,得出具體酶值的高低。斷,酶值降低的原因是由于加工不良、貯存不當(dāng)或摻假等。正常新鮮蜂蜜中一旦摻假,不論摻了何種物質(zhì),其酶值均將有所下降,甚至大幅度下降,詳見表3。表3蜂蜜中摻入不同物質(zhì)的酶值變化摻入物質(zhì)飴糖糊精淀粉羧甲基纖維素鈉酶值800表4蜂蜜中摻入蔗糖后酶值與還原糖的變化序號蜂蜜蔗糖酶值還原糖(%備注110%90%-感觀不良22