分子生物學實驗室常用儀器設備簡介精

1、實驗一 分子生物學實驗室常用儀器設備簡介實驗室主要儀器，設備的簡介及使用方法微量移液器微量移液器是連續(xù)可調的、計量和轉移液體的專用儀器，其裝有直接讀數(shù)容量計。 微量移液器有多種規(guī)格，在移液器量程范圍內能連續(xù)調節(jié)讀數(shù)。移液器常見的四種規(guī)格分別是： 0.510l(讀數(shù)窗顯示0.510.0,每轉1檔為0.1l); 10100l(讀數(shù)窗顯示10.0100, 每轉1檔為1l); 20200l(讀數(shù)窗顯示20200, 每轉1檔1l); 1001000l(讀數(shù)窗顯示1001000, 每轉1檔為5l).    量液的操作步驟： 1 將微量移液器裝上吸頭（不同規(guī)格的移液器用不同的吸

2、頭）2 將微量移液器按鈕輕輕壓至第一停點；3 垂直握持微量移液器，使吸嘴浸入液樣面下幾毫米，千萬不要將吸嘴直接插到液體底部；4 緩慢、平穩(wěn)地松開控制按鈕，吸上樣液。否則液體進入吸嘴太快，導致液體倒吸入移液器內部，或吸入體積減少；5 等一秒鐘后將吸嘴提離液面6 平穩(wěn)地把按鈕壓到第一停點，再把按鈕壓至第二停點以排出剩余液體；7 提起微量移液器，然后按吸嘴彈射器除去吸嘴。 量液操作注意問題： 1 未裝吸嘴的微量移液器絕對不可用來吸取任何液體。 2 一定要在允許量程范圍內設定容量，千萬不要將讀數(shù)的調節(jié)超出其適用的刻度范圍，否則會造成損壞。3 不要橫放帶有殘余液體吸嘴的移液器。4 不要用大量程的移液器移

3、取小體積樣品。5. 移液器使用完后，將刻度調到最大刻度，收藏。低溫臺式高速離心機離心機的分類低速：每分鐘幾千轉 高速：每分鐘1 3萬轉 超速：每分鐘3萬轉以上 離心機的功能： 分離，純化低速：細胞等大分子 高速：DNA，蛋白等 超速:  病毒，蛋白等，根據(jù)用途又可分為分析超速離心 機和制備超速離心機。 低溫分離技術是分子生物學研究中必不可少的手段基因片段的分離、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物樣品的分離制備實驗中都離不開低溫離心技術 本實驗室所用離心機為臺式高速離心機（IBM），配有角式轉頭：24×1.5ml；極限轉速20000rpm 臺式高速離心機使用步驟1、把離

4、心機放置于平面桌或平面臺上，目測使之平衡，用手輕搖一下離心機，檢查離心機是否放置平衡。2、打開門蓋，將離心管放入轉子內，離心管必須成偶數(shù)對稱放入，且要事先平衡，完畢用手輕輕旋轉一下轉子體，使離心管架運轉靈活。3、關上門蓋，注意一定要使門蓋鎖緊，完畢用手檢查門蓋是否關緊。4、插上電源插座，按下電源開關（電源開關在離心機背面，電源座上方）。5、設置轉子號、轉速、時間：在停止狀態(tài)下時，用戶可以設置轉子號、轉速、時間，此時離心機處于設置狀態(tài)，停止燈亮、運行燈閃爍；按下啟動離心開始（常用，最高轉速為13000r/min，時間最長為20分鐘）； 注意：對應的轉子一定要設置在相應的轉速范圍內，不可超速使用，

5、否則對試管或轉子有損壞。6、離心機時間倒計時到“0”時，離心機將自動停止，當轉子停轉后，打開門蓋取出離心管，關斷電源開關。注意事項：1、離心機在運轉時，不得移動離心機，不要打開門蓋。2、安放離心機的臺面應堅實平整，四只橡膠機腳都應與臺面接觸和均勻受力，以免產生振動。3、離心前，離心管加液要平衡，若加液差異過大運轉時會產生大的振動，此時應停機檢查，使加液符合要求，離心試管必須成偶數(shù)對稱放入。4、若運轉時有離心試管破裂，會引起較大振動應立即停機處理。5、離心機徹底停止后，才可開蓋，取樣恒溫氣浴搖床使用及性能：搖床（振蕩器）為實驗室的常規(guī)設備。廣泛用于對溫度和振蕩頻率有較高要求的細菌培養(yǎng)、發(fā)酵、雜交

6、、生物化學反應以及酶和組織研究等。實驗室常用的液體搖勻，微生物、細菌和細胞培養(yǎng)。SHK-99-型臺式空氣恒溫搖床，采用微電腦控制系統(tǒng)，溫度范圍：室溫560，精度±0.5；時間范圍：1分鐘99小時59分鐘；轉速范圍：60RPM250RPM 操作程序：1）樣品瓶牢固放入彈簧夾中2）接通電源開關，儀器進入準備狀態(tài) 3）參數(shù)設定，（設定溫度、時間、轉速等參數(shù) ）4） 按啟動鍵儀器開始工作，按暫停鍵可暫停托盤的旋轉； 5）按下控制面板的電源鍵兩秒，顯示屏顯示消失，關閉電源總開關超凈工作臺使用及性能：超凈工作臺為分子生物學無菌操作提供可能，分為垂直送風和水平送風兩種。超凈臺由三相電機作鼓風動力，

7、功率145260W左右，將空氣通過由特制的微孔泡沫塑料片層疊合組成的“超級濾清器”后吹送出來，形成連續(xù)不斷的無塵無菌的超凈空氣層流，即所謂“高效的特殊空氣”，它除去了大于0.3m的塵埃、真菌和細菌孢子等等。超凈空氣的流速為2430m/min，這已足夠防止附近空氣可能襲擾而引起的污染，這樣的流速也不會妨礙采用酒精燈或本生燈對器械等的灼燒消毒。工作人員就在這樣的無菌條件下操作，保持無菌材料在轉移接種過程中不受污染。 操作程序：1）使用工作臺時，先經過清潔液浸泡的紗布擦拭臺面，然后用消毒劑擦拭消毒。 2）接通電源，提前30分鐘打開紫外燈照射消毒，處理凈化工作區(qū)內工作臺表面積累的微生物，15分鐘后，關

8、閉紫外燈，開啟送風機。 3）工作臺面上，不要存放不必要的物品，以保持工作區(qū)內的潔凈氣流不受干擾。 4）操作結束后，清理工作臺面，收集各廢棄物，關閉風機及照明開關，用清潔劑及消毒劑擦拭消毒。 5）最后開啟工作臺紫外燈，照射消毒30分鐘后，關閉紫外燈，切斷電源。 注意事項：操作時一定注意關掉紫外，防止對實驗人員造成傷害滅菌鍋使用及性能：細菌和細胞培養(yǎng)以及核酸等有關實驗所用的試劑、器皿及實驗用具，應嚴格滅菌；應將實驗器械，試劑等進行高壓消毒。對于經過導入DNA重組分子的菌株，操作后必須進行嚴格的高壓消毒滅活處理 ；大批實驗物品、試劑、培養(yǎng)基等可以使用大型消毒器進行消毒。一些不能經受高壓、高溫消毒的試

9、劑可用濾器濾膜除菌，器皿可用紫外線照射、75%乙醇或0.1%的十二烷基硫酸鈉（SDS）浸泡消毒。所有的細胞培養(yǎng)、細菌培養(yǎng)的操作，都應在紫外線消毒后的超凈工作臺中進行 操作程序：1）開蓋：轉動手輪，使鍋蓋離開密封圈，添加蒸餾水剛沒至板上2）通電：將控制面板上電源開關按至ON處，若水位低（LOW）紅燈亮 3）堆放物品：需包扎的滅菌物品，體積不超過200mm×100mm×100mm為宜，各包裝之間留有間隙，堆放在金屬框內，這樣有利于蒸汽的穿透，提高滅菌效果 ，滅菌時間： 121， 20min，；如為液體，液體必須裝在可耐高溫的玻璃器皿中，且不可裝滿，2/3即可， 121， 18-

10、20min3）密封高壓鍋：推橫梁入立柱內，旋轉手輪，使鍋蓋下壓，充分壓緊 4）設定時間和溫度，開始滅菌5）滅菌結束，所有東西放入干燥箱干燥，排盡水氣注意事項：如是手動的滅菌鍋，在滅菌過程中，應注意排凈鍋內冷空氣，鍋內冷空氣如排放不凈，會影響滅菌效果，達不到徹底滅菌的目的。要等溫度降為“0”，才可打開滅菌鍋鍋蓋；由于高壓蒸汽滅菌時，要使用溫度高達120、兩個大氣壓的過熱蒸汽，操作時，必須嚴格按照操作規(guī)程操作，否則容易發(fā)生意外事故。 PCR儀PCR儀，也稱DNA熱循環(huán)儀、基因擴增儀，是使一對寡核苷酸引物結合到正負DNA鏈上的靶序列兩側，從而酶促合成拷貝數(shù)為百萬倍的靶序列DNA片段，它的每一循環(huán)包括

11、在三種不同溫度進行DNA變性、引物復性、DNA聚合酶催化的延伸反應的三個過程 PCR儀主要應用于基礎研究和應用研究等許多領域，如基因分析、序列分析、進化分析、臨床診斷、法醫(yī)學等等操作步驟1、開機：打開開關，視窗上顯示“SELF TEST”,顯示10秒中后，顯示RUN-ENTER菜單 準備執(zhí)行程序。 2、放入樣品管，關緊蓋子。 3、如果要運行已經編好的程序，則直接按Proceed， 用箭頭鍵選擇已儲存的程序，按Proceed，則屏幕顯示按Proceed選擇ENABLE，則開始執(zhí)行程序。 4、如果要輸入新的程序，則在RUN-ENTER菜單上用箭頭鍵選擇ENTER PROGRAM

12、,按Proceed，1）命名新的程序，最多8個字母，輸入后按Proceed確認(如何輸入字母、數(shù)字)。 2）輸入程序步驟：名字輸入后，確認，然后輸入相關程序5、輸入完成的程序后，到RUN-ENTER菜單，選擇新程序，開始運行。 6、其它：用pause可以暫停一個運行的程序，再按一次繼續(xù)程序。 用stop或Cancel可停止運行的程序。 如何設置一個PCR程序： 一般分為8步： 1、預變性：可用9495，210min,一般用 5min。 2、變性：一般用95，30s2min,一般 45s1min。 3、退火：溫度自定，30s2min。 4、延伸：72，對于1kb=1min,每增加 1kb加1mi

13、n。 5、循環(huán)數(shù)：一般2535個循環(huán)(2,3,4步循環(huán)）。 6、最終延伸：72，515min。 7、保存：4，時間設為0。 8、END。 電泳儀電泳技術是分子生物學研究不可缺少的重要分析手段。電泳一般分為自由界面電泳和區(qū)帶電泳兩大類，自由界面電泳不需支持物，如等電聚焦電泳、等速電泳、密度梯度電泳及顯微電泳等，這類電泳目前已很少使用。而區(qū)帶電泳則需用各種類型的物質作為支持物，常用的支持物有濾紙、醋酸纖維薄膜、非凝膠性支持物、凝膠性支持物及硅膠-G薄層等，分子生物學領域中最常用的是瓊脂糖凝膠電泳 應用電泳法可以對不同物質進行定性或定量分析，或將一定混合物進行組份分析或單個組份提取制備。實驗室所用D

14、YY-12型電腦三恒多用電泳儀（北京六一儀器廠）操作程序：1 首先用導線將電泳槽的兩個電極與電泳儀的直流輸出端聯(lián)接，注意極性不要接反。2按電源開關，顯示屏出現(xiàn)“歡迎使用DYY-12型電腦三恒多用電泳儀”等字樣后，同時系統(tǒng)初始化，蜂鳴4聲，設置常設置。屏幕轉成參數(shù)設置狀態(tài)，根據(jù)工作需要選擇穩(wěn)壓穩(wěn)流方式及電壓電流范圍。3確認各參數(shù)無誤后，按“啟動”鍵，啟動電泳儀輸出程序。在顯示屏狀態(tài)欄中顯示Start! 并蜂鳴4聲，提醒操作者電泳儀將輸出高電壓，注意安全。之后逐漸將輸出電壓加至設置值。同時在狀態(tài)欄中顯示“Run”，并有兩個不斷閃爍的高壓符號，表示端口已有電壓輸出。在狀態(tài)欄最下方，顯示實際的工作時間

15、（精確到秒） 4電泳結束，儀器顯示：“END”，并連續(xù)蜂鳴提醒。此時按任一鍵可止鳴注意事項1 電泳儀通電進入工作狀態(tài)后，禁止人體接觸電極、電泳物及其它可能帶電部分，也不能到電泳槽內取放東西，如需要應先斷電，以免觸電。同時要求儀器必須有良好接地端，以防漏電。2 儀器通電后，不要臨時增加或撥除輸出導線插頭，以防短路現(xiàn)象發(fā)生，雖然儀器內部附設有保險絲，但短路現(xiàn)象仍有可能導致儀器損壞。3 由于不同介質支持物的電阻值不同，電泳時所通過的電流量也不同，其泳動速度及泳至終點所需時間也不同，故不同介質支持物的電泳不要同時在同一電泳儀上進行。4.使用過程中發(fā)現(xiàn)異?，F(xiàn)象，如較大噪音、放電或異常氣味，須立即切斷電源

16、，進行檢修，以免發(fā)生意外事故。 作業(yè)列出分子生物學常用儀器的名稱，用途及操作時的注意事項。一，微量移液器微量移液器是連續(xù)可調的、計量和轉移液體的專用儀器，其裝有直接讀數(shù)容量計。量液操作注意問題 1 未裝吸嘴的微量移液器絕對不可用來吸取任何液體。2 一定要在允許量程范圍內設定容量，千萬不要將讀數(shù)的調節(jié)超出其適用的刻度范圍，否則會造成損壞。3 不要橫放帶有殘余液體吸嘴的移液器。4 不要用大量程的移液器移取小體積樣品。5. 移液器使用完后，將刻度調到最大刻度，收藏。二，離心機的功能： 分離，純化注意事項：1、離心機在運轉時，不得移動離心機，不要打開門蓋。2、安放離心機的臺面應堅實平整，四只橡膠機腳都

17、應與臺面接觸和均勻受力，以免產生振動。3、離心前，離心管加液要平衡，若加液差異過大運轉時會產生大的振動，此時應停機檢查，使加液符合要求，離心試管必須成偶數(shù)對稱放入。4、若運轉時有離心試管破裂，會引起較大振動應立即停機處理。5、離心機徹底停止后，才可開蓋，取樣三，恒溫氣浴搖床使用及性能：搖床（振蕩器）為實驗室的常規(guī)設備。廣泛用于對溫度和振蕩頻率有較高要求的細菌培養(yǎng)、發(fā)酵、雜交、生物化學反應以及酶和組織研究等。實驗室常用的液體搖勻，微生物、細菌和細胞培養(yǎng)。四超凈工作臺使用及性能：超凈工作臺為分子生物學無菌操作提供可能，分為垂直送風和水平送風兩種。注意事項：操作時一定注意關掉紫外，防止對實驗人員造成

18、傷害五滅菌鍋使用及性能：細菌和細胞培養(yǎng)以及核酸等有關實驗所用的試劑、器皿及實驗用具，應嚴格滅菌；應將實驗器械，試劑等進行高壓消毒注意事項：如是手動的滅菌鍋，在滅菌過程中，應注意排凈鍋內冷空氣，鍋內冷空氣如排放不凈，會影響滅菌效果，達不到徹底滅菌的目的。要等溫度降為“0”，才可打開滅菌鍋鍋蓋；由于高壓蒸汽滅菌時，要使用溫度高達120、兩個大氣壓的過熱蒸汽，操作時，必須嚴格按照操作規(guī)程操作，否則容易發(fā)生意外事故。六PCR儀PCR儀，也稱DNA熱循環(huán)儀、基因擴增儀，是使一對寡核苷酸引物結合到正負DNA鏈上的靶序列兩側，從而酶促合成拷貝數(shù)為百萬倍的靶序列DNA片段，它的每一循環(huán)包括在三種不同溫度進行D

19、NA變性、引物復性、DNA聚合酶催化的延伸反應的三個過程 PCR儀主要應用于基礎研究和應用研究等許多領域，如基因分析、序列分析、進化分析、臨床診斷、法醫(yī)學等等七電泳儀電泳技術是分子生物學研究不可缺少的重要分析手段。電泳一般分為自由界面電泳和區(qū)帶電泳兩大類，自由界面電泳不需支持物，如等電聚焦電泳、等速電泳、密度梯度電泳及顯微電泳等，這類電泳目前已很少使用。而區(qū)帶電泳則需用各種類型的物質作為支持物，常用的支持物有濾紙、醋酸纖維薄膜、非凝膠性支持物、凝膠性支持物及硅膠-G薄層等，分子生物學領域中最常用的是瓊脂糖凝膠電泳 注意事項1 電泳儀通電進入工作狀態(tài)后，禁止人體接觸電極、電泳物及其它可能帶電部分

20、，也不能到電泳槽內取放東西，如需要應先斷電，以免觸電。同時要求儀器必須有良好接地端，以防漏電。2 儀器通電后，不要臨時增加或撥除輸出導線插頭，以防短路現(xiàn)象發(fā)生，雖然儀器內部附設有保險絲，但短路現(xiàn)象仍有可能導致儀器損壞。3 由于不同介質支持物的電阻值不同，電泳時所通過的電流量也不同，其泳動速度及泳至終點所需時間也不同，故不同介質支持物的電泳不要同時在同一電泳儀上進行。4.使用過程中發(fā)現(xiàn)異?，F(xiàn)象，如較大噪音、放電或異常氣味，須立即切斷電源，進行檢修，以免發(fā)生意外事故。 實驗二 瓊脂糖凝膠電泳的制備及核酸檢測帶電荷的物質在電場中的趨向運動稱為電泳。電泳的種類多，應用非常廣泛，它已成為分子生物學技術中

21、分離生物大分子的重要手段。瓊脂糖凝膠電泳由于其操作簡單、快速、靈敏等優(yōu)點，已成為分離和鑒定核酸的常用方法。實驗目的掌握瓊脂糖凝膠電泳的原理;學習瓊脂糖凝膠電泳的操作。實驗原理瓊脂糖是一種天然聚合長鏈狀分子，沸水中溶解，45開始形成多孔性剛性濾孔，凝膠孔徑的大小決定于瓊脂糖的濃度。DNA分子在堿性環(huán)境中帶負電荷，在外加電場作用下向正極泳動。DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時，有電荷效應與分子篩效應。不同DNA，其分子量大小及構型不同，電泳時的泳動率就不同，從而分出不同的區(qū)帶。瓊脂糖凝膠電泳法分離DNA，主要是利用分子篩效應，遷移速度與分子量的對數(shù)值成反比關系。溴化乙錠（EB）為扁平狀分子，在紫外照射

22、下發(fā)射熒光。EB可與DNA分子形成EB-DNA復合物，其發(fā)射的熒光強度較游離狀態(tài)EB發(fā)射的熒光強度大10倍以上，且熒光強度與DNA的含量成正比。用肉眼觀察，可檢測到5 ng以上的DNA。1影響DNA在瓊脂糖凝膠中遷移速率的因素： 1)DNA分子大小        遷移速率U與logN成反比（N為堿基對數(shù)目）。分子大小相等，電荷基本相等（DNA結構重復性）。分子越大，遷移越慢。等量的空間結構緊密的電泳快（超螺旋>線性DNA）2) 瓊脂糖濃度：不同的凝膠濃度，分辨不同范圍的DNA   

23、0;Agarose：  0.5%：  1-30 kb；                  0.7%：  0.8-12 kb 1.2%：  0.4-7 kb；              

24、60;  1.5%：  0.2-3 kb.3)DNA構象：一般遷移速率超螺旋環(huán)狀>線狀DNA>單鏈開環(huán)。4)所加電壓：低電壓時，線狀DNA片段的遷移速率與所加電壓成正比。使分辨效果好，凝膠上所加電壓不應超過5V/cm 5)堿基組成與溫度：一般影響不大4 -30 6)嵌入染料的存在：降低線性DNA遷移率，(不提倡加在電泳液中)7)電泳緩沖液的組成及其離子強度影響DNA的遷移率，無離子存在時，核酸基本不泳動，離子強度過大產熱厲害，熔化凝膠并導致DNA變性，一般采用1×TAE，1×TBE，1×TPE（均含EDTA  pH8.0）。 2溴化乙錠（EB）為致癌劑，操作時應戴手套，盡量減少臺面污染。3電泳指示劑：核酸電泳常用的指示劑有兩種，溴酚藍（bromophenol blue, Bb）呈藍紫色；二甲苯晴（xylene cyanol, Xc）呈藍色，它攜帶的電荷量比溴酚藍少，在凝膠中的遷移率比溴酚藍慢。儀器和試劑儀器 微量移液器，電泳儀，電泳槽，微波爐 試劑 瓊脂糖：1.0%； 電泳緩沖液（50 × TAE 電泳緩沖液取Tris24