洋金花中生物堿的提取、純化與鑒定

1、精選優(yōu)質文檔-傾情為你奉上洋金花中生物堿的提取、純化與鑒定洋金花是茄科植物毛曼陀羅（Daturainnoxia）或白曼陀羅（D. metel）的花，所以也叫曼陀羅花。洋金花的主要化學成分為莨菪烷類生物堿，其中主要是東莨菪堿，還有少量的莨菪堿、去甲基莨菪堿等。這些生物堿都具有強烈的生理活性，莨菪堿及其外消旋體阿托品有解痙鎮(zhèn)痛、解有機磷農(nóng)藥中毒和散瞳作用；東莨菪堿除具有莨菪堿的生理活性外，還具有鎮(zhèn)靜、麻醉的作用。具有最新研究成果表明，洋金花中生物堿還有改善微循環(huán)作用、戒毒即抗嗎啡成癮性作用。民間用洋金花治療老年性哮喘具有明顯的療效。主要成分的結構與性質：東莨菪堿（Hyosine or scopol

2、amine），含量較高，是洋金花主成分。棕色粘稠狀液體，水溶性較強?？扇苡谒兹苡跓崴?、乙醇、丙酮、乙醚、氯仿，難溶于四氯化碳、苯等強親脂性溶劑。莨菪堿（Hyoscyamine or atropine），結晶性固體，親脂性強于東莨菪堿，易溶于乙醇、氯仿，可溶于四氯化碳、苯，難溶于水、乙醚。莨菪堿為左旋體，生理活性強，不穩(wěn)定，經(jīng)消旋化處理得阿托品（atropine）。 東莨菪堿莨菪堿本次實驗從洋金花中提取總生物堿，并對其進行純化和檢識。因莨菪堿含量太低，就不再進行制備性分離。一、 實驗目的：1了解離子交換樹脂的處理與使用方法。2掌握用陽離子交換樹脂提取生物堿的原理與操作。二、實驗原理：洋金花中

3、所含生物堿都屬于叔胺堿，能與酸成鹽而溶于水中，因此，可用酸水將洋金花中生物堿提取出來。生物堿在酸水中以陽離子狀態(tài)存在，能與陽離子交換樹脂上的H+交換而被吸附在樹脂上。再將樹脂堿化，使生物堿游離出來，用有機溶劑洗脫（EtOH），即可得到洋金花總生物堿。交換原理：B + HCl BH+Cl- R-H+ + BH+Cl- R-BH+ + HCl R-BH+ + NH4OH R-NH4+ + B + H2O三、 離子交換樹脂簡介和應用：離子交換樹脂是一種合成高分子化合物，一般呈球狀或無定形粒狀，按功能基特性可分為以下類型：樹脂母體上含有可解離出離子的基團（交換基），在水溶液中能與其它離子產(chǎn)生可逆交換，

4、因此，可用于中藥水提液中離子型化合物的分離和純化。（一） 影響離子交換的有關因素：1交聯(lián)度：表示離子交換樹脂中交聯(lián)劑的含量。交聯(lián)度越大，樹脂孔眼越小，大離子就不容易進入，反之，交聯(lián)度小，樹脂網(wǎng)孔直徑大，則易于離子的擴散與交換。市售樹脂的交聯(lián)度一般為116，提取生物堿常用交聯(lián)度為14（因生物堿離子較大）。2溶液的酸堿度：它對離子交換影響很大。離子交換樹脂可以理解為高分子不溶的酸或堿。當交換溶液中H+濃度過高時，由于同離子效應，抑制了陽離子交換樹脂中H+的電離，離子交換反應就很少進行，甚至不進行。同理，當交換溶液中OH-濃度過高時，也會抑制陰離子樹脂的交換反應。使用強酸性陽離子交換樹脂交換液的pH

5、 > 2使用弱酸性陽離子交換樹脂交換液的pH > 6使用強堿性陰離子交換樹脂交換液的pH > 12使用弱堿性陰離子交換樹脂交換液的pH > 73交換溶劑的影響：通常在水中進行交換，亦可采用含水的極性溶劑，如稀MeOH,稀EtOH，但在極性小的溶劑中難以進行交換或不交換。4交換溶液的濃度：濃度低的溶液解離度大，有利于離子交換。濃度高時，解離度趨向減少，過高時，還會引起樹脂表面及內(nèi)部交聯(lián)網(wǎng)孔收縮，影響離子進入網(wǎng)孔。所以，所用溶液的濃度應略稀。（二） 離子交換樹脂的使用：市售的離子交換樹脂呈鹽型，即Na+型或Cl-型，因鹽型穩(wěn)定性好，耐熱性也好（如：Na+型耐熱95，H型40

6、。又如：Zerolit FF樹脂，Cl型耐熱100，OH型60），易于保存。 例如，游離堿（-OH）型，超過40-45就不穩(wěn)定，而鹽型（Cl-型）在60-80左右交換當量也不會發(fā)生變化，因此，陽樹脂常以Na+型，陰樹脂常以Cl-型保存。但游離型交換性能好，所以，在交換前應將樹脂轉為H+型或OH-。鹽型(Na+或Cl-型)轉型游離型(OH-或H+)(保存態(tài))(穩(wěn)定性、耐熱性好)轉型(交換態(tài))(交換性能好)市售樹脂含有一定量雜質，另外，呈收縮狀態(tài)，使用前須經(jīng)預處理。即用水浸泡，酸堿酸反復浸泡或裝入柱中，使酸堿流過，使用后的樹脂在下次使用前，應經(jīng)過再生處理(即用過的樹脂使其恢復原狀的方法)。 交換

7、預處理后樹脂 使用后的樹脂 再生后樹脂 再生 四、實驗方法1提取 洋金花粗粉50g(揉碎) 500ml 0.5%HCl(V/V,自配)冷浸兩次各30分鐘300ml 棉花過濾，濾液再用濾紙加硅藻土抽濾一次 藥渣 酸水液(用碘化鉍鉀檢識B存在)2裝柱與預處理層析柱的處理：將柱洗凈，旋塞部位涂上凡士林，試驗不得漏水，底部墊上松緊適宜的棉花。裝柱：稱取已充分溶脹的強酸型陽離子交換樹脂(Na型)60g，置燒杯中，加100ml蒸餾水，邊攪拌邊倒入柱中。打開下部活塞，使水慢慢流出，并輕輕振動柱子，使樹脂沉降勻實，當水面高出樹脂2ml時，關閉旋塞，上面放少許棉花，防止加液時樹脂上浮。樹脂：用約樹脂10倍量的2

8、N HCl進行交換(轉H型)蒸餾水洗至中性10倍量2N NaOH(或NaCl)進行交換(轉Na型)蒸餾水洗至中性(pH<8)10倍量2N HCl 交換(轉H型)蒸餾水洗至中性備用(600ml 2N HCl約濃HCl 100ml)。3交換與洗脫 轉型過的樹脂 洋金花酸水液以10ml/分左右通過 樹脂柱(速度過快,交換不完全) 交換后樹脂 流出液 用蒸餾水洗至流出液無色(除去樹脂表面固體懸浮物及水溶性雜質)以95%EtOH100ml沖洗(除醇溶性雜質)以4N NH4OH/EtOH200ml洗脫12ml/分(自配,須濃氨水53.4ml) 樹脂柱 流出液7%NaCl(w/v) 水浴回收氨醇至10

9、ml左右，移入小分液漏斗中， 100ml沖洗 CHCl3萃取兩次(10ml,5ml)Na型樹脂，倒入回收瓶中 水層(上層) CHCl3(下層) 無水硫酸鈉(半匙)脫水(輕輕振搖) CHCl3液 轉入干燥小三角瓶中，水浴揮去部分CHCl3剩約5ml，(加塞保存，供檢識和點樣用) 洋金花總堿4鑒定沉淀反應：取1ml總堿CHCl3液，加5ml稀硫酸酸化，酸水液分倒3支試管中，分別滴加碘化鉍鉀、碘化汞鉀、硅鎢酸試劑，觀察沉淀反應。薄層鑒定：吸附劑：硅膠G板展開劑：乙酸乙酯甲醇氨水（17：2：1）顯色劑：改良碘化鉍鉀噴霧樣品： 洋金花總堿CHCl3液對照品：東莨菪堿CHCl3液五、注意事項：1加硅藻土過濾，是為了防止堵塞。2結果：碘化鉍鉀：桔紅色沉淀；碘化汞鉀：乳白色（淺黃色）乳狀混濁。硅鎢酸：乳白色絮狀沉淀。3薄層檢識用的儀器必須干燥無水(提前一周洗滌,晾干)。4回收氨醇要充分回收，盡量至醇、氨揮散完畢（水浴、冷凝回收），若氨醇液回收不充分，液量較大，加CHCl3后可能不分層。5酸、堿溶液配制：2N NaOH的配制：80gNaOH加水1L；2N HCl的配制：濃鹽酸167ml加水1L。當量濃度：1L溶液中溶質的克當量數(shù)?？水斄浚核?堿釋出1mo