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文檔簡介
1、組織脫細(xì)胞應(yīng)用的試劑及方法試劑/方法 作用方式對(duì)ECM的影響 化學(xué)方法酸堿 溶解細(xì)胞質(zhì)成分、破碎核酸、使蛋白質(zhì)變性可能破壞膠原、GAG及生長因子上下滲 破裂細(xì)胞、打斷DNA與蛋白質(zhì)之間的相互作用能夠有效地裂解細(xì)胞,但是不能夠有效的去除細(xì)胞殘骸非離子去污劑TritonX-100 打破DNA-蛋白質(zhì)之間的相互作用,破裂脂-脂及脂-蛋白之間的相互作用作用效果依據(jù)組織不同而不同,對(duì)較薄的組織脫細(xì)胞更有效,局部破壞ECM超微構(gòu)造并局部的去除GAG,效果較SDS差離子去污劑SDS 溶解細(xì)胞和核膜,使蛋白變性有效地去除致密組織中的細(xì)胞核殘留及細(xì)胞質(zhì)蛋白,去除GAG和生長因子,破壞膠原脫氧膽酸鹽 根據(jù)組織的厚
2、度不同效果不同,對(duì)ECM超微構(gòu)造的局部破壞及局部的去除GAGTritonX-200 能夠較好的去除較薄組織中的細(xì)胞,但對(duì)ECM超微構(gòu)造的破壞比其他去污劑更嚴(yán)重兩性離子去污劑CHAPS 兼具離子去污劑及非離子去污劑的特性較好的去除較薄組織中的細(xì)胞,伴隨輕微的超微構(gòu)造的破壞SB-10, SB-16 較好的去除較薄組織中的細(xì)胞,伴隨輕微的超微構(gòu)造的破壞其他溶劑醇類通過脫水作用使細(xì)胞溶解,溶解并去除脂肪有效去除致密組織中的細(xì)胞,滅活致熱源,使包括膠原在內(nèi)的蛋白發(fā)生交聯(lián)和沉淀丙酮 通過脫水作用使細(xì)胞溶解,溶解并去除脂肪有效去除致密組織中的細(xì)胞,滅活致熱源,使包括膠原在內(nèi)的蛋白發(fā)生交聯(lián)和沉淀TBP 與金屬
3、形成穩(wěn)定的復(fù)合物,打斷蛋白-蛋白之間的相互作用根據(jù)組織不同效果不同,損失致密組織中的膠原,但對(duì)機(jī)械性能的影響輕微生物學(xué)方法-酶法核酸酶催化核糖核苷酸和脫氧核糖核苷酸鏈的水解難于將其從組織中去除,可能引起免疫反響胰酶將C端多肽降解成精氨酸和賴氨酸過長時(shí)間的胰酶作用會(huì)破壞ECM的超微構(gòu)造,去除ECM的組分如膠原、層粘連蛋白、纖連蛋白、彈力蛋白和GAG,對(duì)GAG的去除作用較去污劑緩慢中性蛋白酶降解特定的肽,主要是纖維連接蛋白和IV型膠原長時(shí)間作用會(huì)破壞ECM的超微構(gòu)造,去除ECM的組分如纖維連接蛋白和IV型膠原螯合物EDTA,EGTA結(jié)合金屬離子,因此破壞細(xì)胞對(duì)ECM的黏附一般與酶共用如胰酶也可與其他試劑連用,單獨(dú)作用效果不明顯物理學(xué)及其他方法溫度凍融細(xì)胞內(nèi)形成冰晶導(dǎo)致細(xì)胞破裂冰晶形成能夠使EMC發(fā)生斷裂壓力壓力能破裂細(xì)胞,主要用于松軟的組織壓力能夠破裂ECM電穿孔脈沖電刺激能夠裂解細(xì)胞膜能夠破裂ECM灌注法使化學(xué)試劑作用充分,有利于細(xì)胞的去除壓力結(jié)合灌注可使ECM發(fā)生斷裂組織梯度壓力使化學(xué)試劑作用充分,有利于細(xì)胞的去除可使ECM發(fā)生斷裂超臨界流體壓力可使細(xì)胞破裂,超臨界流體使化學(xué)試劑作用充分,有利于細(xì)胞的去除可使ECM發(fā)生斷裂攪拌能夠裂解細(xì)胞,
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