多功能酶標(biāo)儀spectramai3的操作規(guī)程

1、多功能酶標(biāo)儀SpectraMax i3的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程Standard Operation of SpectraMax i3部門簽名/日期Departme ntSig nature/Date起草人：樊小川，Xiaochua n FanPrepared byQC審核人：黃思佳，Sijia Hua ngReviewed byQC審核人：褚夫蘭，F(xiàn)ula n ChuReviewed byQA批準(zhǔn)人：張伯彥，Boyan Zha ngApproved by質(zhì)量負責(zé)人頒發(fā)部門Issued by質(zhì)量保證部-QA執(zhí)行日期Effective Date替換文件Replaced ForVersio n 00復(fù)審日期R

2、eview Date分發(fā)部門Distributed toQA QC1目的建立多功能酶標(biāo)儀SpectraMax i3的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，規(guī)范SpectraMax i3多功能酶標(biāo) 儀檢測時的操作。2適用范圍本規(guī)程適用于所有對多功能酶標(biāo)儀SpectraMax i3的操作3術(shù)語或定義多功能酶標(biāo)儀：指功能較強、精度較高的單體臺式酶標(biāo)儀，可檢測吸光度（Abs）、熒光強度（FL）、時間分辨熒光（TRF）、化學(xué)發(fā)光（Lum）等04責(zé)任4.1儀器負責(zé)人負責(zé)多功能酶標(biāo)儀的日常及定期維護，出現(xiàn)故障時負責(zé)聯(lián)系廠家維修，保 證運行正常。4.2實驗操作人員需嚴格按照本規(guī)程執(zhí)行，保證儀器正常使用，每次用完后填寫儀器使用 記錄，

3、且使用后及時清理臺面，保持儀器潔凈。5EHS要求N/A6程序6.1儀器安裝儀器與電腦連接完畢并連接電源以后，按儀器背面的按鈕可以直接啟動儀器，經(jīng)過幾分 鐘后的儀器自檢后就可以開始用于檢測。在連有電源的情況下，保持24小時開機，不要罩防塵罩以保持透氣，隔1-2月關(guān)機重啟一次。6.2 SoftMax Pro軟件操作基本步驟打開軟件點擊“SoftMax Pro”圖標(biāo)，打開SoftMax Pro軟件，出現(xiàn)Plate Setup Helper對連接儀器話框。若無則點擊kJ圖標(biāo)。點擊豈Choose a diffecient instrument，打開Tnstrument Connection對話框，在“A

4、vailible In strume nts”菜單中選擇儀器連接線與電腦所接的串口號（COM。選擇所購買的酶標(biāo)儀型號SpectraMax i3或添加模塊卡盒型號。最后點擊“OK鍵連接。儀器檢測參數(shù)設(shè)定點擊U圖標(biāo)后出現(xiàn) “Sett in gs”對話框，對話框最上方出現(xiàn)ReadMode（讀板模式）和ReadType（讀板類型）兩個選項，讀板模式有ABS光吸收）、FL（熒光強度）、LUM化學(xué)發(fā)光）和TRF時間分辨熒光），讀板類型有終點檢測（Endpoint）、動力學(xué)（Kinetic）、 單孔掃描（Well Scan）和光譜掃描（Spectrum）四種。使用者根據(jù)實驗需要選擇合適 的讀板模式和讀板類型

5、。對話框下方左側(cè)列表有如下選項，從上往下依次用鼠標(biāo)點中選項，并在右欄中選擇 對應(yīng)的參數(shù)設(shè)定。1）Wavelengths（波長）可以選擇檢測幾種波長，光吸收模式最多為6種，其他模式均為4種。a）對于光吸收模式，可以在Lm1后面的框中填入檢測所用波長。b）對于熒光強度，時間分辨熒光和熒光偏振模式，可以在2個框中分別填入激發(fā)波 長和發(fā)射波長。Cutoff一般選為自動（Auto）。c）對于化學(xué)發(fā)光模式，一般使用All。當(dāng)同時檢測不止一色化學(xué)發(fā)光的時候可 填入相應(yīng)的檢測波長。2）Plate Type（板型）對于不同實驗可以選擇6-384孔板及其具體的板型。3）Read Area（讀板區(qū)域）可用鼠標(biāo)先選中

6、起始孔按住不放，進行拖曳直到選中微孔板上所有需要檢測的孔。4）PathCheck（光徑校正）僅用于光吸收模式，即將微孔板檢測得到的原始光吸收值通過參比校正到1cm光徑長度時的光吸收值?？蛇x擇“Water Constant”（以水做參比）和“Cuvette Refenee”（在 比色皿中加入相應(yīng)溶液預(yù)讀一次作為參比）。一般情況下可以不用校正。5)shake選中Before First Read后可以選擇讀板之前震板，可選擇0-999秒。一般不選擇。6)Speed Read可加速讀數(shù)速度，為準(zhǔn)確所讀數(shù)值，默認不加速，一般不選擇。7)More Sett ingRead order可按實驗要求選擇 按

7、列(Column)、排(Row)或者孔(Well)掃 描讀數(shù)。全部設(shè)定完后按對話框右下角的“OK確認，回到Plate Setup Helper對話框。6.2.4檢測樣品分組設(shè)定按，鍵后出現(xiàn) Template Edite對話框，先用鼠標(biāo)拖曳選中要進行編輯的孔， 被選中的空會變黑，然后點擊Groups欄中的下拉菜單選擇所要進行的分組。具體設(shè)定 步驟如下：1)設(shè)定本底參照(BLANK)進入上述界面后，點擊Assignment Option欄中的下拉菜單選中“Plate blank”， 則其他的數(shù)據(jù)結(jié)果均顯示為扣除本底平均值的結(jié)果。2)設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)樣品(Standards)當(dāng)有一系列已知濃度梯度的樣品做為

8、標(biāo)準(zhǔn)樣品時，點擊Groups欄中的“Standards”，再點擊“assign”進行標(biāo)記，繼而點擊“series”進行設(shè)定，新出現(xiàn)的對話框中“Start from”中“Top to Bottom”、“Bottom to Top”、“Left to Right”或“Right to Left” 表示該組內(nèi)樣品排列次序，根據(jù)實驗進行選擇；右上方的“pattern of Replicates”會自動顯示復(fù)孔數(shù)目；下方的“Starting value”表示起始樣品的濃度，可以在框內(nèi)填 入相應(yīng)數(shù)值，“Step by”表示以什么方式設(shè)置濃度梯度，前面下拉框可以選擇“+、-、*、/”，后面框內(nèi)可以填入相應(yīng)的

9、值，比如起始濃度是2,增加2,則選擇“+”，輸入“2”。設(shè)定完畢，點對話框右下角“0K確認。在上一界面中點右邊的“Edit”，新 對話框中“Sample Descriptor”下的“Column name根據(jù)實驗情況命名，默認是“Concen trati on”，“Un its”后面可以填入適當(dāng)?shù)臐舛葐挝唬?設(shè)置好后退出“TemplateEdite3）設(shè)定未知樣品（Unknowns）對未知樣品進行分組設(shè)定時，進入“Template Edite”界面，選中微孔，點擊“Groups” 欄“Unknowns下的“Unknowns，若未知樣品已知濃度，選“Unk-dilution”，具體 設(shè)定同標(biāo)準(zhǔn)樣

10、品。4）有多個標(biāo)準(zhǔn)樣品或樣品時點Groups欄中的“add”，可以添加新組，其它設(shè)置同上。6.2.5數(shù)據(jù)分析設(shè)定1）在“standardCurve”進行數(shù)據(jù)分析設(shè)定，點擊 丄 圖標(biāo)，進入PlotEdite- standardcurve進行圖表設(shè)置，在該對話框中，“Grafe Title”中填入該圖的名 稱，即以后在數(shù)據(jù)計算中要引用的名字。“Plot Name中填入該條曲線的名稱，“X-Axis” 和“Y-Axis”可以通過下拉欄選擇該曲線橫坐標(biāo)和縱坐標(biāo)所引用的數(shù)據(jù)，如選擇“Concentration”和“MeanValuW。在“Plot Attributes”中可選擇圖中每個點的形狀和顏色。一

11、張圖中可以有多條曲線，按“add”可在該圖中增加曲線。2）“Curve Fit”右邊的下拉菜單可選擇曲線擬合的方式，如四參數(shù)方程“4-Parameter” ，根據(jù)實驗要求進行選擇。6.2.6設(shè)定溫度儀器可以設(shè)定溫度，可在室溫以上加溫。當(dāng)開啟溫度控制后需使儀器的微孔板插槽置于 關(guān)閉狀態(tài)保持所設(shè)溫度，如果處于打開狀態(tài)，儀器會發(fā)出報警聲，然后自動關(guān)閉微孔板 插槽。6.2.7參數(shù)設(shè)置保存實驗檢測參數(shù)都設(shè)定完畢后，所有檢測條件的設(shè)定、樣品類型的設(shè)定、實驗結(jié)果、數(shù)據(jù) 分析結(jié)果等，可以另存為兩種格式：1）*.sda格式，即數(shù)據(jù)格式。該文檔含有包括參數(shù)設(shè)定，實驗數(shù)據(jù)，結(jié)果分析等所有 實驗內(nèi)容。2）*.spr格

12、式，即模版格式。該文檔含有參數(shù)設(shè)定，分析公式等實驗設(shè)定內(nèi)容，可以 應(yīng)用于多次重復(fù)實驗而使用統(tǒng)一模版。為避免覆蓋原有數(shù)據(jù)，每次使用需新建模板或?qū)贆z測模版讀數(shù)，禁止使用已保存的原始檢測數(shù)據(jù)作為模版。628運行程序1）按“open/close”可以控制儀器微孔板插槽的打開和關(guān)閉，微孔板插槽打開后， 將酶標(biāo)板水平放置到微孔板插槽，點“open/close”關(guān)閉微孔板插槽。2）點擊 7 開始讀數(shù)。讀數(shù)完畢后保存文件即可。軟件安裝后默認用戶在做完實驗后自己保存數(shù)據(jù)。如果用戶希望每次實驗檢測后自動保存可以在“Save DataAfter Read”前打勾。6.3結(jié)果分析在實驗結(jié)束后，自動根據(jù)所設(shè)參數(shù)進行結(jié)

13、果分析以及曲線擬合。在結(jié)果中包括了所讀數(shù)值及曲線相關(guān)的數(shù)據(jù)，內(nèi)容包括樣品序號、樣品數(shù)值（value）、SD（StandardDeviation）值和CVS（coefficient of variation），在曲線圖下方，軟件還會自動計算出曲線的各種參數(shù)如EC50S等。數(shù)據(jù)分析完后，建議將其屬性更改為只讀，以防止 誤刪。6.4其他分析SpectraMax i3還包括相關(guān)性分析等分析模塊，可根據(jù)不同實驗需要選用。6.5儀器保養(yǎng)注意1）有良好的電源，保持24小時開機。2） 保持避光和干凈的室內(nèi)環(huán)境，維持一定的濕度（30%-80%）。3）維持室內(nèi)比較恒定的溫度，以20-22度為最適宜。4） 適用6-384孔板。96孔微孔板內(nèi)每孔可檢測100-300ul溶液，最佳檢測體積為200ul。384孔微孔板內(nèi)每孔可檢測50-100ul溶液，最佳檢測體積為80ul。5） 檢測后的微孔板不要長期置于儀器插槽中，檢測完后就從儀器中取出，避免溶液 蒸發(fā)腐蝕或損壞儀器內(nèi)部光路系統(tǒng)。如果為有腐蝕性或揮發(fā)性溶液，請帶蓋檢測。6） 對于可見光吸收檢測，使用全透明微孔板；紫外光吸收檢測，使用紫外可透全透 明微孔板；熒光強度和熒光偏振，使用黑色不透明板，需要檢測底讀的用黑色底透微孔板；化學(xué)發(fā)光和時間分辨熒光，使用白色不透明微孔板7附件N/A8參考或引用文件SoftMax? Pro Micro