茶多酚的含量測(cè)定

1、茶多酚的含量測(cè)定高錳酸鉀直接滴定法目的：掌握高錳酸鉀直接滴定法測(cè)定茶葉中茶多酚含量的原理及操作原理茶葉中茶多酚易溶于熱水，在用靛紅作指示劑的情況下，樣液中能被高錳酸鉀氧化的物質(zhì)基本上都屬于茶多酚物質(zhì)。根據(jù)消耗1mL0.318g/mL的高錳酸鉀相當(dāng)于5.82mg茶多酚的換算系數(shù)，可計(jì)算茶多酚的含量。儀器與試劑儀器：分析天平、電動(dòng)磁力攪拌器、電熱水浴鍋、500mL白瓷皿。試劑：1、0.1%靛紅溶液：稱取靛紅1g加入少量水?dāng)噭蚝螅俾尤胂鄬?duì)密度為1.84的濃硫酸50mL，冷卻后用蒸餾水定容至1000mL，如果靛紅不純，可下法磺化處理是：稱取靛紅1g，加濃硫酸50mL，在80烘箱或水浴中加熱磺化4

2、6h，用蒸餾水定容至1000mL，過(guò)濾后貯于棕色瓶中。2、0.630%草酸溶液：準(zhǔn)確稱取草酸6.3034g,用蒸儲(chǔ)水溶解后定容至1000mL。3、高鎰酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取AR的高鎰酸鉀1.27g,用蒸儲(chǔ)水溶解后定容至1000mLo準(zhǔn)確吸取0.630%草酸溶液10mL,放入250ml錐形瓶中（平行3份），加入蒸儲(chǔ)水50mL,再加入相對(duì)密度為1.84的濃硫酸10mL,搖勻，在7080c水浴中保溫5分鐘，取出后用高鎰酸鉀進(jìn)行滴定。開始慢滴，待紅色消失后再滴第二滴，以后可逐漸加快，邊滴邊搖，待溶液出現(xiàn)淡紅色保持1分鐘不變即為終點(diǎn)。計(jì)算高錳酸鉀溶液的百分比濃度。測(cè)定步驟1、供測(cè)試液的準(zhǔn)備：準(zhǔn)確稱取茶葉磨碎

3、樣品1g，放在250mL錐形瓶中，加入沸蒸餾水80mL，在沸水浴中浸提30分鐘，然后抽濾、洗滌，濾液倒入100mL容量瓶中，冷至室溫，最后用蒸餾水定容至100mL，搖勻。2、測(cè)定：取200ml蒸餾水放入白瓷皿中，加入0.1%靛紅溶液5mL,再加入供測(cè)試液5mL,開動(dòng)磁力攪拌器，用已標(biāo)定的高鎰酸鉀溶液邊攪拌邊滴定，滴定速度以1滴/s為宜，接近終點(diǎn)時(shí)應(yīng)慢滴。直到溶液由深藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)榱咙S色為止，記下消耗的高錳酸鉀毫升數(shù)。同時(shí)做空白測(cè)定。五、結(jié)果計(jì)算式中：X一茶多酚白含量，%,B空白消耗的高鎰酸鉀毫升數(shù)，mLA一樣品消耗的高鎰酸鉀毫升數(shù)，mL3-高鎰酸鉀的濃度，%,m樣品的質(zhì)量g,V1測(cè)定用供測(cè)試液的體

4、積，mL，V2-供測(cè)試液的體積，mL酒石酸鐵比色法原理：茶葉中多酚類物質(zhì)占茶嫩梢干重的20%35%,由約30種以上的酚類物質(zhì)所組成，通稱茶多酚。按其化學(xué)結(jié)構(gòu)分為四類：（1）兒茶素類，屬黃烷醇類；（2）黃酮及黃酮醇類；（3）花白素及花青素，即羥基-4-黃烷醇及其鉀鹽；（4）醋酸及縮酚酸類。其中以黃烷醇類化合物最重要（占多酚的80左右）。純兒茶素一般為白色無(wú)定形粉末，在空氣中極易氧化成棕色物，能溶于水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯等有機(jī)溶劑中。茶多酚能溶于水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯，微溶于油脂。對(duì)熱、酸較穩(wěn)定，2%的溶液加熱至120并保持30min，無(wú)明顯變化。在堿性條件下易氧化變質(zhì)。酒石酸鐵能

5、與茶多酚生成紫褐色絡(luò)合物，絡(luò)合物溶液顏色的深淺與茶多酚的含量成正比。因此可以用比色方法測(cè)定。該法可避免高錳酸鉀滴定法所產(chǎn)生的人為視覺(jué)誤差。茶多酚的測(cè)定方法有高錳酸鉀直接滴定法和酒石酸鐵比色法，由于高錳酸鉀直接滴定法操作比較復(fù)雜，且靠肉眼觀察顏色判斷終點(diǎn)，如果樣品溶液顏色較深時(shí)，可能影響測(cè)定結(jié)果。本實(shí)驗(yàn)將應(yīng)用酒石酸鐵比色法測(cè)定茶多酚的含量。儀器與試劑儀器：分光光度計(jì)試劑：（1）酒石酸鐵溶液：稱取FeSO4-7H2O1.000g,含4個(gè)結(jié)晶水的酒石酸鉀鈉5.000g,加蒸儲(chǔ)水溶解后，用蒸儲(chǔ)水稀釋至1000mL（2）pH7.5的磷酸緩沖液：60.2gNa2HPO412H2O,5.00gNaH2P04

6、2H2O,加蒸儲(chǔ)水溶解后.用蒸儲(chǔ)水稀釋至1000mL.步驟（l）樣品溶液的制備方法：準(zhǔn)確稱取茶葉磨碎樣品1g于200mL三角燒瓶中，加入沸水80mL，在沸水浴中浸提30min,然后過(guò)濾、洗滌，濾液倒人100mL容量瓶中，冷至室溫，最后用蒸餾水定容至刻度，搖勻，備用。搖勻，再加入pH7.5磷酸緩沖液稀釋至刻度。以蒸餾水代替樣品溶液加入同樣的試劑作空白。選擇540nm波長(zhǎng)和1cm的比色杯測(cè)定吸光度。計(jì)算式中：3一茶多酚的含量，,A樣品溶液的吸光度值，T樣品溶液的總體積，mLV測(cè)定用樣品溶液的量，mL,m樣品質(zhì)量，g3.913用1cm比色杯，當(dāng)吸光度為1.0時(shí)，試液中茶多酚的濃度為3.913mg/m

7、L說(shuō)明及注意事項(xiàng)1、磷酸鹽緩沖液在常溫下容易生長(zhǎng)霉菌，放冰箱中保存或臨用時(shí)現(xiàn)配。2、樣品溶液制備中的注意事項(xiàng)：1）較透明的樣液，如果味茶飲料，將樣液充分搖勻后，直接取樣測(cè)定(2)較渾濁的樣液，如果汁茶飲料、奶茶飲料等，稱取充分混勻的樣液25mL于50mL容量瓶中，加95%的乙醇15mL充分混勻，放置15min，用水定容至刻度，過(guò)濾。(3)含有碳酸氣的樣液，如農(nóng)夫汽茶，量取充分混勻的樣液100mL于250mL的燒杯中，稱取其總量，于電爐上加熱至沸，在微沸狀態(tài)下加熱10min，以將二氧化碳排除，放冷，用水補(bǔ)足原來(lái)的質(zhì)量，搖勻，備用。測(cè)定準(zhǔn)確吸取試液1ml，注人25mL的容量瓶中，加水4ml和酒石酸亞鐵溶液5ml，充分混合，再加pH7.5磷酸鹽緩沖液至刻度，用10mm比色杯，在波長(zhǎng)540nm處，以試劑空白溶液作參比，測(cè)定吸光度(A)高效液相色譜采用高效液相色譜法測(cè)定綠茶中茶多酚