Chapter5固定化技術(shù)及其應(yīng)用

1、僅供個(gè)人參考Chapter 5固定化技術(shù)及其應(yīng)用Section 1固定化技術(shù)1、發(fā)展歷史：1953年，德國(guó)的格魯布霍費(fèi)(Grubhofer)和施萊思(Schleith )首次制成固定化酶。19691973年，日本的千煙一郎首次在工業(yè)生產(chǎn)上連續(xù)生產(chǎn)L-氨基酸、L-天冬氨酸，開創(chuàng)了固定化酶和固定化微生物細(xì)胞應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)的先例；1976年，法國(guó)首次用固定化酵母細(xì)胞生產(chǎn)啤酒和酒精。1978年，日本固定化枯草桿菌細(xì)胞生產(chǎn)”-淀粉酶的研究取得成功。1986年，我國(guó)用固定化枯草桿菌原生質(zhì)體生產(chǎn)堿性磷酸酶，用固定化黑曲霉原生質(zhì)體 生產(chǎn)葡萄糖氧化酶，用谷氨酸棒桿菌原生質(zhì)體生產(chǎn)谷氨酸脫氫酶。2、優(yōu)勢(shì)固定化細(xì)胞和

2、固定化原生質(zhì)體以酶等各種代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)為目的，可以代替游離細(xì)胞進(jìn)行酶的發(fā)酵生產(chǎn)，具有提高產(chǎn)酶率、縮短發(fā)酵周期并可連續(xù)發(fā)酵生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)，在酶的發(fā)酵生產(chǎn)中有廣闊的發(fā)展前景。3、現(xiàn)狀在工業(yè)上使用的固定化酶還僅限于葡萄糖異構(gòu)酶、葡萄糖氧化酶和青霉素?；傅葹閿?shù)不多的十幾個(gè)酶種，仍需大力研究開發(fā)使更多的固定化酶和細(xì)胞能適用于工業(yè)規(guī)模生產(chǎn)。Section 2酶的固定化為了解決酶的穩(wěn)定性較差、酶的一次性使用、酶的分離純化等困難，獲得的改善方法 之一就是固定化技術(shù)的應(yīng)用。固定化酶(Immobilized Enzyme)：固定在一定載體上并在一定的空間范圍內(nèi)進(jìn)行催化反應(yīng)的酶。酶的固定化：采用各種方法，將酶與水不溶

3、性載體結(jié)合，制備固定化酶的過程。(一)制備方法固定化酶的制備方法很多，常用的有吸附法、包埋法、結(jié)合法和交聯(lián)法。根據(jù)酶自身的 性質(zhì)、應(yīng)用目的、應(yīng)用環(huán)境來選擇固定化載體和方法。1)吸附法(adsorption)：利用各種固體吸附劑將酶吸附在其表面上固定的方法，是固定化 中最簡(jiǎn)單的方法?？煞譃槲锢砦椒ê碗x子吸附法。物理吸附法(physical adsorption)：通過物理方法將酶直接吸附在水不溶性載體(纖維素、淀粉、面筋、活性炭、多孔玻璃、硅膠等)表面而使酶固定化的方法，是制備固定化酶最早采用的方法。離子吸附法(ion adsorption)：通過離子鍵使酶與載體相結(jié)合的固定化方法。常用載體有

4、DEAE-纖維素、四乙氨基乙基 (TEAE)-纖維素、CMC等。吸附容量一般大于物理吸附法。卜卜，一，一、八 ，一，一 一，、-(E) nHE)吸附法制備固定化酶，操作簡(jiǎn)便，條件溫和，載體廉_雷q價(jià)易得，且可反復(fù)使用。但結(jié)合力較弱，酶與載體結(jié)合不匚匚:牢固而容易脫落。2)包埋法(entrapment)：將酶或含酶菌體包埋在各種多孔，目,J載體中，使酶固定化的方法。 根據(jù)載體材料的不同，可分 次出 口 ，電/父H星司朝下寅中為凝膠包埋法和微膠囊包埋法。不得用于商業(yè)用途僅供個(gè)人參考凝膠包埋法：酶被包埋成網(wǎng)格型。常用的載體有天然凝膠、合成凝膠或樹脂等。微膠囊包埋法：酶被包埋成微膠囊。常用于制造微膠囊

5、的材料有聚酰胺、火棉膠、醋酸 纖維素等。使酶存在于類似細(xì)胞內(nèi)的環(huán)境中，可以防止酶的脫落，防止酶與微囊外的環(huán)境直 接接觸，從而增加了酶的穩(wěn)定性。3）結(jié)合法（binding）：將酶與聚合物載體以共價(jià)鍵或離子鍵結(jié)合的固定化方法，是固定化酶 研究中最活躍的一大類方法。用結(jié)合法制備的固定化酶，酶和載體之間結(jié)合相當(dāng)牢固，即使用高濃度底物溶液或鹽溶液，也不會(huì)使酶分子從載體上脫落下來，具有酶穩(wěn)定性好、可連續(xù) 使用較長(zhǎng)時(shí)間的優(yōu)點(diǎn)。表4-1各種固定化方法的比較4）交聯(lián)法吸附法-包埋法共價(jià)鍵結(jié)合法交聯(lián)法(cross-linkin物理吸附法離子吸附法g）：借助雙功制備易易較難難較難結(jié)合程度弱中等強(qiáng)強(qiáng)強(qiáng)能試劑使酶分活力

6、回收率高，但酶易流失高高低中等子之間相互交再生可能可能不可能不可能不可能固定化成本低低低高中等聯(lián)呈網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)底物專一性不變不變不變可變可變的固定化方法。應(yīng)用最廣泛的雙功能試劑是戊二醛。以上四種固定化酶方法各有其優(yōu)缺點(diǎn)。往往一種酶可以用不同方法固定化，但沒有一種固定化方法可以普遍地適用于每一種酶。在實(shí)際應(yīng)用時(shí)，常將兩種或數(shù)種固定化方法并用， 以取長(zhǎng)補(bǔ)短。（二）固定化酶的優(yōu)缺點(diǎn)1、優(yōu)點(diǎn)：1）無需進(jìn)行酶的分離純化，大大降低成本；2）提高了酶的穩(wěn)定性和對(duì)污染的抵抗力；3）細(xì)胞生長(zhǎng)停滯時(shí)間短，反應(yīng)快。2、缺點(diǎn)：1）固定化酶的活力有所損失；2）必須保持菌體的完整，需防止菌體的自溶；3）載體、細(xì)胞膜或細(xì)胞壁會(huì)

7、造成底物滲透與擴(kuò)散的障礙。Section 3細(xì)胞的固定化固定化細(xì)胞：固定在一定載體上并在一定的空間范圍內(nèi)進(jìn)行生命活動(dòng)的細(xì)胞。細(xì)胞的固定化：采用各種方法，將細(xì)胞與水不溶性載體結(jié)合，制備固定化細(xì)胞的過程。細(xì)胞固定化方法：吸附法、包埋法。（一）固定化微生物細(xì)胞的特點(diǎn)1、保持了細(xì)胞的完整結(jié)構(gòu)和天然狀態(tài)，穩(wěn)定性好，可按照原來的代謝途徑進(jìn)行新陳代謝，并進(jìn)行有效的代謝調(diào)節(jié)控制。2、發(fā)酵穩(wěn)定性好，可以反復(fù)使用或者連續(xù)使用較長(zhǎng)的一段時(shí)間。3、密度提高，可以提高產(chǎn)率。（二）固定化植物細(xì)胞的特點(diǎn)1、由于有載體的保護(hù)作用，可提高植物細(xì)胞的存活率和穩(wěn)定性。2、細(xì)胞被束縛在一定的空間范圍內(nèi)進(jìn)行生命活動(dòng)，不容易聚集成團(tuán)。3

8、、可反復(fù)使用或連續(xù)使用較長(zhǎng)的一段時(shí)間，大大縮短生產(chǎn)周期，提高產(chǎn)率。4、易于與培養(yǎng)液分離，利于產(chǎn)品的分離純化，提高產(chǎn)品質(zhì)量。僅供個(gè)人參考（三）固定化動(dòng)物細(xì)胞的特點(diǎn)1、由于有載體的保護(hù)作用，可提高動(dòng)物細(xì)胞的存活率。2、動(dòng)物細(xì)胞固定化后，可先在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖，使細(xì)胞在載體上形成最佳分布并達(dá) 到一定的細(xì)胞密度后，轉(zhuǎn)移至發(fā)酵培養(yǎng)基，控制發(fā)酵條件，使細(xì)胞從生長(zhǎng)期轉(zhuǎn)變到生產(chǎn)期， 以利于提高產(chǎn)率。3、可反復(fù)使用或連續(xù)使用較長(zhǎng)的時(shí)間。4、易于與產(chǎn)物分開，利于產(chǎn)物分離純化，提高產(chǎn)品質(zhì)量。Section4原生質(zhì)體的固定化固定化細(xì)胞只能用于生產(chǎn)細(xì)胞外酶和其他能夠分泌到細(xì)胞外的產(chǎn)物；而且由于載體的影響、使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)

9、和產(chǎn)物的擴(kuò)散受到一定的限制；為解決這些問題，很多人從不同的角度進(jìn)行 研究。微生物細(xì)胞和植物細(xì)胞除去細(xì)胞壁后，就可獲得原生質(zhì)體。原生質(zhì)體很不穩(wěn)定，容易破 裂，若將原生質(zhì)體用多孔凝膠包埋起來，制成固定化原生質(zhì)體，由于有載體的保護(hù)作用，就 會(huì)使原生質(zhì)體的穩(wěn)定性提高，免至破裂。同時(shí)，固定化原生質(zhì)體由于去除了細(xì)胞壁這一擴(kuò)散 障礙，有利于氧的傳遞、營(yíng)養(yǎng)成分的吸收和胞內(nèi)產(chǎn)物的分泌。固定化原生質(zhì)體的制備主要包括原生質(zhì)體的制備和原生質(zhì)體固定化兩個(gè)階段。一、原生質(zhì)體的制備將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞收集起來，懸浮在含有滲透壓穩(wěn)定劑的高滲緩沖液中。然后加入適宜的細(xì)胞壁水解酶，在一定的條件下作用一段時(shí)間，使細(xì)胞壁破壞。分離除去

10、細(xì)胞壁碎片、 未作用的細(xì)胞以及細(xì)胞壁水解酶，而得到原生質(zhì)體。要進(jìn)行原生質(zhì)體固定化，必須將微生物細(xì)胞和植物細(xì)胞的細(xì)胞壁破壞而分離出原生質(zhì) 體。同時(shí)要在破壞細(xì)胞壁的時(shí)候，不能影響到細(xì)胞膜的完整性，更不能使細(xì)胞內(nèi)部的結(jié)構(gòu)受到破壞，為此只能使用對(duì)細(xì)胞壁有專一性作用的酶。細(xì)菌原生質(zhì)體制備時(shí)主要采用從蛋清中得到的溶菌酶；酵母細(xì)胞壁采用1,3-葡聚糖酶；霉菌的細(xì)胞壁需有幾丁質(zhì)酶與其他有關(guān)酶共同作用；植物細(xì)胞壁應(yīng)用纖維素酶和果膠酶。二、原生質(zhì)體固定化原生質(zhì)體制備好后，把離心收集到的原生質(zhì)體重新懸浮在含有滲透壓穩(wěn)定劑的緩沖液 中，配成一定濃度的原生質(zhì)體懸浮液，然后采用包埋法制成固定化原生質(zhì)體。原生質(zhì)體固定化一般

11、采用凝膠包埋法。常用的凝膠有瓊脂凝膠、海藻酸鈣凝膠、角叉菜 膠和光交聯(lián)樹脂等。固定化原生質(zhì)體具有下列特點(diǎn)。由于解除了細(xì)胞壁這一擴(kuò)散屏障，可增加細(xì)胞膜的通透性，有利于氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的傳遞和吸收，也有利于胞內(nèi)物質(zhì)的分泌，可顯著提高產(chǎn)率。由于有載體的保護(hù)作用，具有較好的操作穩(wěn)定性和保存穩(wěn)定性，可反復(fù)使用和連續(xù)使用較長(zhǎng)的時(shí)間，利于連續(xù)化生產(chǎn)。在冰箱保存較長(zhǎng)時(shí)間后仍能保持其生產(chǎn)能力。易于和發(fā)酵產(chǎn)物分開，有利于產(chǎn)物的分離純化，提高產(chǎn)品質(zhì)量。發(fā)酵的培養(yǎng)基中需要添加滲透壓穩(wěn)定劑，以保持原生質(zhì)體的穩(wěn)定性。這些滲透壓穩(wěn)定劑在發(fā)酵結(jié)束后，可用層析或膜分離技術(shù)等方法與產(chǎn)物分離。Section 5固定化酶反應(yīng)器不得用于

12、商業(yè)用途僅供個(gè)人參考陽(yáng)S3懂怦式反肘II示圖酶反應(yīng)器：以酶作為催化劑進(jìn)行反應(yīng)所需的裝置。根據(jù)酶催化劑類型的不同，分為游離酶反應(yīng)器和 固定化酶反應(yīng)器。固定化酶反應(yīng)器：攪拌罐型反應(yīng)器、填充床式反應(yīng)器、 流化床式反應(yīng)器、膜型反應(yīng)器底裨溶液有口田生E埴元庫(kù)式反應(yīng)典示意圖1 .攪拌罐型反應(yīng)器分類：包括分批攪拌罐式反應(yīng)器（BSTR和連續(xù)流攪拌罐式反應(yīng)器（CSTR。連續(xù)流攪拌罐式反應(yīng)器在運(yùn)轉(zhuǎn)過程中，底物以恒定的流速流入反應(yīng)器，與此同時(shí)，反應(yīng)液則以同樣的流速流出反應(yīng)器。反應(yīng)桶內(nèi)裝有攪拌器，使反應(yīng)組分與固定化酶顆?；旌暇?，出口處有過濾膜，可使不斷補(bǔ)充新鮮底物與反應(yīng)液流量維持動(dòng)態(tài)平衡。優(yōu)缺點(diǎn)：結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，溫 度和

13、pH容易控制，造價(jià)較低，傳質(zhì)阻力很小，反應(yīng)能迅速達(dá)到穩(wěn)態(tài), 主要應(yīng)用在飲料和食品工業(yè)中。其缺點(diǎn)是操作麻煩，在反復(fù)回收過程中固定化酶容易損失。2 .填充床式反應(yīng)器用6-7悔化球式反應(yīng)然填充床式反應(yīng)器（packed column reactor , PCR）!把顆粒狀或片 狀固定化酶填充于填充床內(nèi)，底物按一定方向以恒定速度通過反應(yīng)床。 它是一種單位體積催化劑負(fù)荷量多、效率高的反應(yīng)器。當(dāng)前工業(yè)上多 數(shù)采用此類反應(yīng)器。填充床式反應(yīng)器可使用高濃度的催化劑，反應(yīng)產(chǎn) 生的產(chǎn)物和抑制劑可從反應(yīng)器中不斷地流出。3 .流化床式反應(yīng)器流化床式反應(yīng)器（fluidized bed reactor , FBR磔一種裝有較

14、小 顆粒的垂直塔式反應(yīng)器（形狀可為柱形、錐形等）。底物以一定速度由 下向上流過，使固定化酶顆粒在浮動(dòng)狀態(tài)下進(jìn)行反應(yīng)。流體的混合程 度可認(rèn)為是介于CST書口 PFR之間。它具有下列優(yōu)點(diǎn)：具有良好的傳 質(zhì)及傳熱的性能，pH、溫度控制及氣體的供給比較容易；不易堵塞，可適用于處理黏度高 的液體；能處理粉末狀底物；即使應(yīng)用細(xì)粒子的催化劑，壓力降也不會(huì)很高。但其也有 如下缺點(diǎn)：需保持一定的流速，運(yùn)轉(zhuǎn)成本高，難于放大；由于顆粒酶處于流動(dòng)狀態(tài)，因 此易導(dǎo)致粒子的機(jī)械破損；由于流化床的空隙體積大，所以酶的濃度不高；由于底物的 高速流動(dòng)使酶沖出，從而降低了轉(zhuǎn)化率。使底物進(jìn)行循環(huán)是避免催化劑沖出、使底物完全轉(zhuǎn) 化成

15、產(chǎn)物的常用方法。也可以使用幾個(gè)流化床組成的反應(yīng)器組或使用錐形流化床反應(yīng)器。4 .膜型反應(yīng)器由膜狀或板狀固定化酶或固定化微生物組裝的反應(yīng)器均稱為膜型反應(yīng)器（membranereactor , MR固定化酶膜型反應(yīng)器是以膜作為固定化酶的載體，酶通過吸附、交聯(lián)、 包埋、化學(xué)鍵合等方式被“束縛”在膜上，在進(jìn)行酶促反應(yīng)的同時(shí)，利用膜的選擇性透 過作用，在有外推力（壓差、電位差等）的情況下，實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品的分離、濃縮和酶的回收再 利用。可以說酶膜反應(yīng)器集催化反應(yīng)、產(chǎn)物分級(jí)、分離與濃縮以及催化劑回收于一體。第四節(jié)固定化技術(shù)的應(yīng)用(一)固定化酶的應(yīng)用固定化酶的優(yōu)點(diǎn)： 酶的穩(wěn)定性增加，減少溫度、 pH值、有機(jī)溶劑和其

16、他外界因素 對(duì)酶的活力的影響，可以較長(zhǎng)期地保持較高的酶活力。固定化酶可反復(fù)使用或連續(xù)使用較長(zhǎng)時(shí)間，提高酶的利用價(jià)值，降低生產(chǎn)成本。固定化酶易于和反應(yīng)產(chǎn)物分開，有利于產(chǎn)物的分離純化，從而提高產(chǎn)品質(zhì)量。故此，固定化酶已廣泛地應(yīng)用于食品、輕工、醫(yī)藥、化工、分析、環(huán)保、能源和科學(xué) 研究等領(lǐng)域。1、固定化酶在工業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用：(1)氨基?；福?世界上第一種工業(yè)化生產(chǎn)的固定化酶。用結(jié)合法獲得固定化氨基?；?后，可以將L-乙酰氨基酸水解生成 L-氨基酸，生產(chǎn)成本可節(jié)省 40%。(2)葡萄糖異構(gòu)酶： 世界上生產(chǎn)規(guī)模最大的一種固定化酶。用結(jié)合法或交聯(lián)法獲得固定化 葡萄糖異構(gòu)酶后，可以催化葡萄糖異構(gòu)化生成果糖

17、，用于連續(xù)生產(chǎn)果葡糖漿。(3)青霉素?；福?在醫(yī)藥工業(yè)上廣泛應(yīng)用。用結(jié)合法獲得固定化青霉素酰化酶，可以催 化青霉素水解生成 6-氨基青霉烷酸(6-APA)。(4)天冬氨酸酶：采用包埋法制成固定化天冬氨酸酶，可將延胡索酸轉(zhuǎn)化生產(chǎn) L-天冬氨酸。(5)延胡索酸酶：采用包埋法制成固定化延胡索酸酶，可從延胡索酸制造L-蘋果酸。(6)乳糖酶：采用結(jié)合法制成固定化乳糖酶，可用于水解乳中存在的乳糖，生成半乳糖和 葡萄糖，用于制造低乳糖奶?；碗娹疽鈭DO報(bào)電極(陽(yáng)槌)I _ -I近軸口赧),.割股索四氣匕爆端膜(7)天冬氨酸脫竣酶：采用包埋法制成固定化天冬氨酸脫竣酶， 可催化L-天冬氨酸生成L-丙氨酸。2

18、.固定化酶在酶?jìng)鞲衅鞣矫娴膽?yīng)用研究得最多、應(yīng)用最廣泛的是酶電極，如葡萄糖氧化酶電 極：用聚丙烯酰胺凝膠包埋法將葡萄糖氧化酶固定化，制成厚 度為2050的酶膜，再與氧電極及使氧容易通過的聚四氟乙烯等高分子薄膜密切結(jié)合，組成葡萄糖氧化酶電極。使用時(shí)， 把酶電極進(jìn)入樣品溶液中，樣品液中的葡萄糖擴(kuò)散到酶膜中， 酶催化葡萄糖與氧反應(yīng)，生成葡萄糖酸，使氧被消耗，再由氧 電極測(cè)定氧濃度的變化，即可知道樣品中葡萄糖的濃度。 酶電極用于樣品組分的分析檢測(cè)，有快速、方便，靈敏、精確 的特點(diǎn)。二、固定化微生物細(xì)胞的應(yīng)用固定化微生物細(xì)胞的應(yīng)用范圍很廣，歸納起來主要用在兩個(gè)方面：一是利用固定化微生物細(xì)胞發(fā)酵生產(chǎn)各種胞外

19、產(chǎn)物；二是利用固定化微生物細(xì)胞與各種電極結(jié)合制成微生物電極。1 .利用固定化微生物生產(chǎn)各種產(chǎn)物：其中主要有下面幾類物質(zhì)。(1)酒精酒類：固定化酵母等微生物可用于生產(chǎn)酒精、啤酒、葡萄酒、米酒等。(2)氨基酸：固定化氨基酸生產(chǎn)菌可用于生產(chǎn)谷氨酸、賴氨酸、精氨酸、瓜氨酸等氨基酸。(3)有機(jī)酸：固定化黑曲霉等微生物可生產(chǎn)蘋果酸、檸檬酸、葡萄糖酸、乳酸、醋酸等有機(jī)酸。(4)酶和輔酶：固定化微生物可用于生產(chǎn)“-淀粉酶、糖化酶、蛋白酶、果膠酶、纖維素酶、不得用于商業(yè)用途僅供個(gè)人參考溶菌酶等胞外酶，及輔酶 A、ATP等輔酶。（5）抗生素：固定化微生物可用于生產(chǎn)青霉素、四環(huán)素、頭抱霉素、氨芳青霉素等抗生素。（6

20、）用于有機(jī)溶劑、維生素、化工產(chǎn)品等的生產(chǎn)，管體轉(zhuǎn)化、廢水處理等。2 .固定化微生物細(xì)胞制造微生物傳感器微生物傳感器：由固定化微生物細(xì)胞與各種能量轉(zhuǎn)換器（電極、燃料電池、場(chǎng)效應(yīng)管等 ）密切結(jié)合而成的傳感裝置，可分為呼吸活性測(cè)定型和電極活性測(cè)定型兩種。微生物傳感器應(yīng)用范圍：用于測(cè)定可發(fā)酵性糖、葡萄糖、甲酸、乙酸、甲醇、乙醇、頭抱霉素、谷氨酸、氨、硝酸鹽、生化需氧量（BOD）、細(xì)胞數(shù)量等。三、固定化動(dòng)物細(xì)胞的應(yīng)用1、生產(chǎn)疫苗：小兒麻痹癥疫苗、風(fēng)疹疫苗、狂犬病疫苗、麻疹疫苗、肝炎疫苗、口蹄疫疫苗等；2、生產(chǎn)激素：生長(zhǎng)激素、干擾素、胰島素、前列腺素、催乳激素、白細(xì)胞介素、促性腺激 素等；3、生產(chǎn)血纖維溶

21、酶原激活劑、膠原酶等酶類；4、生產(chǎn)抗菌肽等多肽藥物；5、生產(chǎn)皮膚、心臟等各種組織器官。四、固定化植物細(xì)胞的應(yīng)用1、制造人工種子。將一定數(shù)量的植物細(xì)胞懸浮在含有適宜營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的一定濃度的海藻酸鈉溶液中，用注射器或滴管滴入到一定濃度的鈣離子溶液中，形成海藻酸鈣凝膠，植物細(xì)胞包埋固定化在多孔凝膠中，制備得到人工種子。在一定條件下，每一個(gè)細(xì)胞都可以長(zhǎng)成一棵完 整的植株，因此可以獲得大量具有相同遺傳特性的植株，這對(duì)種子的保存具有重要意義，并可以節(jié)約種子的用量。2、生產(chǎn)各種色素、香精、藥物、酶等次級(jí)代謝物。一般僅適用于可分泌到胞外的產(chǎn)物的生產(chǎn)。五、固定化原生質(zhì)體的應(yīng)用固定化原生質(zhì)體的優(yōu)點(diǎn)：1）保持細(xì)胞原有的新陳代謝特性，可以照常產(chǎn)生原來在細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的各種代謝產(chǎn)物；2）去除細(xì)胞壁這一擴(kuò)散屏障，有利于胞內(nèi)產(chǎn)物不斷分泌到胞外，可以不經(jīng)過細(xì)胞破碎和提取工藝而在發(fā)酵液中獲得所需的發(fā)酵產(chǎn)物。固定