江南大學(xué)微生物研究生復(fù)試內(nèi)容

1、2005微生物實(shí)驗(yàn)操作復(fù)試1有哪些方法可以提高顯微鏡的分辨率？答：顯微鏡的分辨率ResoIving power丨是指顯微鏡將樣品上相互接近的兩點(diǎn)清晰分辨出來(lái)的能力。其用鏡 頭所能分辨出的兩點(diǎn)間的最小距離表示，距離越小，分辨能力越好。可用公式表示：12 NA物鏡的數(shù)值口徑Numberical aperture，簡(jiǎn)寫(xiě)為N.A：表示從聚光鏡發(fā)出的錐形光柱照射在觀察標(biāo)本上， 能被物鏡所聚集的量。可用公式表示：N .An sinn標(biāo)本和物鏡之間介質(zhì)的折射率0由光源投射到透鏡上的光線和光軸之間的最大夾角可見(jiàn)物鏡的分辨率是由物鏡的NA值與照明光源的波長(zhǎng)兩個(gè)因素決定。NA值越大，照明光線波長(zhǎng)越短， 那么D值越

2、小，分辨率就越高。要提高分辨率，即減小 D值，可采取以下措施：1降低波長(zhǎng)入值，使用短波長(zhǎng)光源。2增大介質(zhì)n值以提高NA值NA= nsinu/2。3增大孔徑角0值以提高NA值。4增加明暗反差。2革蘭氏染色的步驟？哪幾步最為關(guān)鍵？ 答：11、細(xì)菌的活化：將細(xì)菌接種營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面，培養(yǎng)16-24h。2、制片：取菌種培養(yǎng)物常規(guī)涂片、枯燥、固定。3、 初染：于制片上滴加結(jié)晶紫染液，染色1min后，用水洗去剩余染料。4、 媒染：用碘液沖去殘水，并用碘液覆蓋約1min，水洗。5、 脫色：用濾紙吸去玻片上的殘水，將玻片傾斜，在白色背景下，直接用95%乙醇從載玻片上端沖洗脫色， 直到流下的酒精無(wú)明顯紫色時(shí)，立即水

3、洗。6、 復(fù)染：滴加番紅液，染色 2min，水洗7、用濾紙吸干，油鏡鏡檢。2脫色是革蘭氏染色中最為關(guān)鍵的步驟，其中乙醇的濃度，用量及涂片厚度都會(huì)影響脫色速度，最終影 響觀察效果。如果脫色過(guò)度，有可能會(huì)使革蘭氏陽(yáng)性菌呈假陰性；如果脫色不夠，有可能使革蘭氏陰性菌呈假陽(yáng) 性3涂片染色前為什么要先進(jìn)行固定？固定時(shí)應(yīng)注意什么問(wèn)題？ 答：1殺死微生物，固定細(xì)胞結(jié)構(gòu)。2保證菌體能更牢的粘附在載玻片上，防止標(biāo)本被水沖洗掉。3改變?nèi)玖蠈?duì)細(xì)胞的通透性，因?yàn)樗赖脑|(zhì)比活的原生質(zhì)易于染色。注意問(wèn)題：溫度以載玻片接觸手背，手背不覺(jué)得燙為宜，防止出現(xiàn)變形細(xì)胞；注意在通過(guò)火焰時(shí)，涂有細(xì)菌 的一面向上。4同一酵母菌培養(yǎng)液用

4、血球計(jì)數(shù)板和平板菌落計(jì)數(shù)法同時(shí)計(jì)數(shù)，所得結(jié)果是否一樣？為什么？進(jìn)一步比擬兩種計(jì) 數(shù)法的優(yōu)缺點(diǎn)？答：所得結(jié)果不一樣。血球計(jì)數(shù)板記得的菌體數(shù)是活菌體和死菌體的總和，而平板菌落計(jì)數(shù)法記得的是活菌體的 量。血球計(jì)數(shù)板優(yōu)點(diǎn)是直觀、快速，方便，但該法計(jì)數(shù)的是樣品中的總菌落數(shù)，無(wú)法計(jì)數(shù)活菌數(shù)。平板菌落計(jì)數(shù)法的 優(yōu)點(diǎn)是能粗出樣品中的活菌數(shù)，缺點(diǎn)是手續(xù)較繁，而且測(cè)定值常受各種因素的影響。5如何測(cè)定水中的大腸菌群數(shù)？測(cè)定水中大腸菌群數(shù)有什么實(shí)際意義？答：大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌。檢測(cè)大腸菌群的方法有稀釋培養(yǎng)法和膜濾法兩種，其中稀釋培養(yǎng)法是標(biāo)準(zhǔn)分析方法，包括處發(fā)酵試

5、驗(yàn)、平板別離和復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)三 局部。具體方法為采樣、處發(fā)酵試驗(yàn)在指示性培養(yǎng)基上別離培養(yǎng)，革蘭氏染色及鏡檢，復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)， 結(jié)果。檢測(cè)意義：水中的病原菌多數(shù)來(lái)源于病人和病畜的糞便，由于病原菌的數(shù)量少，檢測(cè)過(guò)程復(fù)雜，因此，直接 測(cè)它們的存在非常困難。由于大腸桿菌在糞便中數(shù)量大，在體外存活時(shí)間與腸道致病菌相近，而且檢測(cè)方法比擬 簡(jiǎn)便，因此采用測(cè)定大腸菌群或大腸桿菌的數(shù)量來(lái)作為水被糞便污染的標(biāo)志。如果水中大腸菌群菌數(shù)超過(guò)一定數(shù)量，那么說(shuō)明此水已被糞便污染，肯能還有病原菌。6 高壓蒸汽滅菌的根本原理以及步驟 答：高壓蒸汽滅菌是將物品放在密閉的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，在一定壓力下保持 15-30 分鐘進(jìn)行滅菌。將待

6、滅菌的 物品放在一個(gè)密閉的加壓鍋內(nèi)，通過(guò)加熱，是滅菌鍋內(nèi)夾套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸汽，待水蒸氣急劇的將鍋內(nèi)冷空 氣從排氣閥中排盡，然后關(guān)閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時(shí)由于蒸汽不能溢出，而增加了滅菌鍋內(nèi)壓力，從而使沸點(diǎn) 增高，獲得高于 100°C 的溫度，導(dǎo)致菌體蛋白凝固變性而到達(dá)滅菌的目的。具體步驟：加水裝料加蓋排氣升壓保壓降壓無(wú)菌檢查7 如何制備大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞？ 答：感受態(tài)細(xì)胞就是細(xì)菌最容易實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化的狀態(tài)。感受態(tài)細(xì)胞可以通過(guò)理化因素誘導(dǎo)產(chǎn)生，其中制備大腸桿菌感 受態(tài)最常用的方法是 CaCI2法。將細(xì)胞置于 0C的CaCI2低滲溶液中，細(xì)菌細(xì)胞會(huì)膨脹成球形，細(xì)胞膜的通透性 會(huì)發(fā)生改變。此外

7、還可以應(yīng)用 PEG 法和電擊法，其中電擊法可以實(shí)現(xiàn)大腸桿菌較高效率的轉(zhuǎn)化。步驟：1挑取大腸桿菌新鮮菌落于LB液體培養(yǎng)基中，37 C振蕩培養(yǎng)過(guò)夜。2、 取0.2ml培養(yǎng)液于含50mlLB培養(yǎng)液的三角瓶中，37 C震蕩培養(yǎng)至 0D值為，于冰水中迅速冷卻。3、 菌液置預(yù)冷的離心管中冰浴15min ,于4C, 4000r/min離心5min ,棄去上清液， 參加預(yù)冷 MgCI2-CaCI2 溶液20ml，于冰水中放置 15min。4、 于4C, 4000r/min離心5min，棄去上清液，用預(yù)冷 CaCI2溶液2ml懸浮菌體。于冰水中放置 15min , 分裝至離心管中，每管 200uI 。8 簡(jiǎn)述移

8、液管和培養(yǎng)皿的包扎考前須知答： 1 、培養(yǎng)皿：包扎前洗凈烘干，包扎時(shí)每 10 套迭在一起，用牛皮紙包扎后再用繩子捆扎，防止分散開(kāi)。2、移液管：包扎前洗凈烘干，在孔吸的一端塞入少許脫脂棉，防止菌體誤吸入口中及口中的微生物吸入管而進(jìn) 入培養(yǎng)物造成污染，塞入棉花量要適宜，不宜露在管口外面；包扎時(shí)，卷紙成45 °卷起，并包扎好，以防散開(kāi)。9 NTG誘變的機(jī)理以及誘變的步驟。簡(jiǎn)述每一步操作的理由答：NTG為烷化劑的一種，其存在多個(gè)活性烷基，可以烷化磷酸基、嘌呤、嘧啶等而與DNA發(fā)生作用。 其中鳥(niǎo)嘌呤 N7 是最容易起反響的位點(diǎn)。烷化后的鳥(niǎo)嘌呤易于離子化，由原來(lái)的酮式變?yōu)椴环€(wěn)定的烯醇 式，從而與

9、胸腺嘧啶配對(duì)而不與胞嘧啶配對(duì)，造成 GC-AT 轉(zhuǎn)換。此外， NTG 還可以引起染色體小范圍 切除、移碼突變及 GC 對(duì)的缺失等突變。另外據(jù)認(rèn)為 NTG 的作用是伴隨著重氮甲烷的生成及在酸性條 件下生成亞硝酸，直接作用于細(xì)胞內(nèi)的 DNA 復(fù)制系統(tǒng)，從而誘發(fā)了變異。步驟以黑曲霉為例： 1、單孢子懸液制備：取斜面，參加 6mI， 0.1moI/L ， pH6.0 的磷酸緩沖液，用 接種環(huán)刮下孢子，振蕩試管并過(guò)濾，制得單孢子懸液，使孢子良好分散，為誘變做準(zhǔn)備。2、NTG 溶液制備：精確稱(chēng)取 2mgNTG ，參加 2mI， 0.1moI/L ， pH6.0 的磷酸緩沖液， ,與暗處震蕩溶 解，防止 N

10、TG 分解。3、誘變處理：吸取 NTG液1ml，參加到1ml抱子懸液中，30 C震蕩30min，稀釋1000倍停止作用， 然后以10-2和10-4兩個(gè)稀釋度別離培養(yǎng)，30 C, 3d后計(jì)數(shù)。4、 死亡率計(jì)算：將未處理的抱子液 1ml參加1ml磷酸緩沖液中，同上逐級(jí)稀釋別離，30 C培養(yǎng)3d， 根據(jù)前后處理活抱子數(shù)計(jì)算死亡率。5 ：篩選目標(biāo)菌株。10微生物紫外線誘變后應(yīng)如何培養(yǎng)？為什么？答： UV 誘變后應(yīng)在紅光下進(jìn)行后續(xù)操作，并放置在黑暗條件下培養(yǎng)。原因：微生物經(jīng) UV 誘變后，如果立即暴露在可見(jiàn)光下，出現(xiàn)明顯降低死亡率的現(xiàn)象即光復(fù)活作用。微 生物經(jīng)紫外照射后， DNA 分子中會(huì)產(chǎn)生嘧啶二聚體

11、，造成局部 DNA 分子無(wú)法配對(duì)， 引起微生物死亡或 突變。 為這種二聚體會(huì)在黑暗下被光解酶結(jié)合， 這種復(fù)合物在可見(jiàn)光下被激活， 使二聚體重新分解成單 體，從而降低了微生物的死亡率或突變率。2006 微生物實(shí)驗(yàn)操作復(fù)試5 如何測(cè)量釀酒酵母的大?。?答：釀酒酵母?jìng)€(gè)體較小，需要在顯微鏡下借助于特殊的測(cè)量工具測(cè)微尺來(lái)測(cè)定其大小。測(cè)微尺包括鏡臺(tái) 測(cè)微尺和接目測(cè)微尺。鏡臺(tái)測(cè)微尺是一張中央局部刻有精確等分線的載玻片，專(zhuān)門(mén)用于校定接目鏡測(cè)微尺每小格 的相對(duì)長(zhǎng)度。接目測(cè)微尺是一塊可以放入接目鏡的圓形小玻片，其中央有精確的等分刻度，有等分為 50 小格和 100 小格的兩種。由于接目測(cè)微尺所測(cè)量的是經(jīng)顯微鏡放大

12、后的細(xì)胞物象，因此，在不同的顯微鏡或不同的目鏡和物鏡組合放 大倍數(shù)不同，接目鏡測(cè)微尺每一小格所代表的實(shí)際長(zhǎng)度也不一樣。所以，在用接目測(cè)微尺測(cè)量微生物大小之前， 必須先用鏡臺(tái)測(cè)微尺校定接目鏡測(cè)微尺，以確定該顯微鏡在特定放大倍數(shù)的目鏡和物鏡下，接目鏡測(cè)微尺每一小 格所代表的實(shí)際長(zhǎng)度，然后根據(jù)微生物細(xì)胞相當(dāng)于的接目鏡測(cè)微尺格數(shù)，計(jì)算出微生物細(xì)胞的實(shí)際大小。操作步驟1. 裝接目測(cè)微尺： 取下顯微鏡的目鏡， 換上專(zhuān)用目鏡。 如果沒(méi)有專(zhuān)用的目鏡， 那么取下顯微鏡的目鏡， 旋下透鏡， 將接目鏡測(cè)微尺刻度朝 下 放在接目鏡的隔板上，再旋上目鏡透鏡，將裝有測(cè)微尺的目鏡裝回鏡筒。2. 接目測(cè)微尺的標(biāo)定：1) 放鏡

13、臺(tái)測(cè)微尺：將鏡臺(tái)測(cè)微尺刻度面朝 上 固定在顯微鏡的載物臺(tái)上，注意不可放反。2) 標(biāo)定：將低倍鏡轉(zhuǎn)入光路，鏡臺(tái)測(cè)微尺有刻度的局部移至視野中央，調(diào)節(jié)焦距，當(dāng)清晰地看到鏡臺(tái)測(cè)微 尺的刻度后，轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡使接目測(cè)微尺與鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度相平行。利用移動(dòng)鈕移動(dòng)鏡臺(tái)測(cè)微尺，使兩尺 在某一區(qū)域內(nèi)兩線完全重合，然后分別數(shù)出兩重合線之間鏡臺(tái)測(cè)微尺和接目測(cè)微尺所占的格數(shù)。 使接 目測(cè)微尺的一條刻度線與鏡臺(tái)測(cè)微尺的一條刻度線相重合，再尋另一重合線，分別數(shù)出其間鏡臺(tái)測(cè)微尺 和接目測(cè)微尺所占的格數(shù)3) 用同樣的方法，在高倍鏡下對(duì)接目測(cè)微尺進(jìn)行標(biāo)定。 觀察時(shí)光線不宜過(guò)強(qiáng)，否那么難以找到鏡臺(tái)測(cè)微尺 的刻度，換高倍鏡標(biāo)定時(shí)，務(wù)必十

14、分細(xì)心，防止接物鏡壓壞鏡臺(tái)測(cè)微尺和損壞鏡頭4) 計(jì)算：鏡臺(tái)測(cè)微尺每格長(zhǎng)10 ym,根據(jù)以下公式即可分別計(jì)算出在不同放大倍數(shù)下，接目測(cè)微尺每格所代表的長(zhǎng)度。接目測(cè)微尺每格長(zhǎng)度 ym =10n/mn：兩重合線間鏡臺(tái)測(cè)微尺格數(shù)m：兩重合線間接目測(cè)微尺格數(shù)3. 微生物細(xì)胞大小的測(cè)量 接目測(cè)微尺標(biāo)定完畢后,取下鏡臺(tái)測(cè)微尺,換上微生物標(biāo)本片,將其固定在載物臺(tái)上,先用低倍鏡找到 標(biāo)本片圖象,然后根據(jù)不同的微生物對(duì)象分別轉(zhuǎn)換到高倍鏡下,用接目測(cè)微尺測(cè)量微生物細(xì)胞的直徑或?qū)捄?長(zhǎng)所占的格數(shù),再依據(jù)所標(biāo)定的高倍鏡每一格的實(shí)際長(zhǎng)度計(jì)算細(xì)胞的實(shí)際大小。通常測(cè)定對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期菌體來(lái)代表該菌的大小,為了盡量減小實(shí)驗(yàn)誤差,應(yīng)在

15、同一標(biāo)本片上測(cè)量1020個(gè)細(xì)胞,取其平均值作為該菌的大小。維護(hù)：測(cè)量完畢,換上原有顯微鏡目鏡或取出接目測(cè)微尺,目鏡放回鏡筒,用擦鏡紙將測(cè)微尺擦拭干凈后放回盒內(nèi)保存,并按照顯微鏡的使用和維護(hù)方法擦拭物鏡。6 有哪些生理生化反響能夠用于鑒別大腸桿菌和產(chǎn)氣桿菌？ 答：有吲哚試驗(yàn)、檸檬酸試驗(yàn)、等。吲哚實(shí)驗(yàn) :有些細(xì)菌含有色氨酸酶, 能分解蛋白胨中的色氨酸產(chǎn)生吲哚。 吲哚與對(duì)二甲基氨基苯甲醛結(jié)合, 就 會(huì)形成紅色的玫瑰吲哚。大腸桿菌吲哚反響陽(yáng)性,產(chǎn)氣桿菌陰性。甲基紅試驗(yàn)。某些細(xì)菌在糖代謝過(guò)程中,將培養(yǎng)基中糖先分解成丙酮酸,丙酮酸再分解成甲酸、乙酸、乳酸 等,因而使培養(yǎng)基變酸,用甲基紅指示劑紅色黃色 ,可

16、使培養(yǎng)基由原來(lái)的桔黃色變?yōu)榧t色,即甲基紅 陽(yáng)性反響。大腸桿菌為陽(yáng)性反響,產(chǎn)氣桿菌為陰性反響。V.P試驗(yàn)：某些細(xì)菌可利用葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸進(jìn)行縮合，脫羧變成乙酰甲基甲醇，此物在堿性條件下能被空氣中的氧氣氧化成二乙酰。二乙酰與蛋白胨中的精氨酸的胍基作用，生成紅色化合物，即V.P反響陽(yáng)性，沒(méi)有紅色化合物產(chǎn)生那么為陰性。產(chǎn)氣桿菌V.P反響陽(yáng)性，大腸桿菌 V.P反響陰性。檸檬酸鹽試驗(yàn)：有些細(xì)菌能利用檸檬酸鈉作為碳源,例如產(chǎn)氣桿菌；而另一些細(xì)菌不能利用檸檬酸鈉,例如大腸桿菌。細(xì)菌在分解檸檬酸鹽后，產(chǎn)生堿性化合物，使培養(yǎng)基pH升高，在有1%溴麝香草酚藍(lán)指示劑的情況下，培養(yǎng)基由綠色變?yōu)樯钏{(lán)色。溴麝香草酚

17、藍(lán)的指示范圍為：p H小于6.0時(shí)呈黃色，p H在時(shí)為綠色，pH大于7.6時(shí)呈藍(lán)色。9 簡(jiǎn)述移液管使用方法和考前須知1 、 使用前：使用移液管,首先要看一下移液管標(biāo)記、準(zhǔn)確度等級(jí)、刻度標(biāo)線位置等。使用移液管前,應(yīng)先用鉻 酸洗液或蒸餾水潤(rùn)洗，以除去管內(nèi)壁的油污。然后用自來(lái)水沖洗殘 留的洗液，再用蒸餾水洗凈。洗凈后的移液 管內(nèi)壁應(yīng)不掛水珠。移取溶液前，應(yīng)先用濾紙將移液管末端內(nèi)外的水吸干，然后用欲移取的溶液涮洗管壁 2 至 3 次，以確 保所移取溶液的濃度不變。2、吸液：用右手的拇指和中指捏住移液管的上端，將管的下口插入欲吸取的溶液中，插入不要太淺或太深，一 般為1020mm處，太淺會(huì)產(chǎn)生吸空，把溶

18、液吸到洗耳球內(nèi)弄臟溶液，太深又會(huì)在管外沾附溶液過(guò)多。左手拿洗耳球，先把球中空氣壓出，再將球的尖嘴接在移液管上口，慢慢松開(kāi)壓扁的洗耳球使溶液吸入管內(nèi)，先吸入該管容量的 1/3 左右，用右手的食指按住管口，取出，橫持，并轉(zhuǎn)動(dòng)管子使溶液接觸到刻度以上部位，以置換內(nèi) 壁的水分，然后將溶液從管的下口放出并棄去，如此用反復(fù)洗 3 次后，即可吸取溶液至刻度以上，立即用右手的食指按住管口。3、調(diào)節(jié)液面：將移液管向上提升離開(kāi)液面，管的末端仍靠在盛溶液器皿的內(nèi)壁上，管身保持直立，略為放松食指有時(shí)可微微轉(zhuǎn)動(dòng)吸管使管內(nèi)溶液慢慢從下口流出，直至溶液的彎月面底部與標(biāo)線相切為止，立即用食指壓緊管口。將尖端的液滴靠壁去掉，移

19、出移液管，插入承接溶液的器皿中。4、 放出溶液：承接溶液的器皿如是錐形瓶，應(yīng)使錐形瓶?jī)A斜30°，移液管直立，管下端緊靠錐形瓶?jī)?nèi)壁，稍松開(kāi)食指，讓溶液沿瓶壁慢慢流下，全部溶液流完后需等15s后再拿出移液管，以便使附著在管壁的局部溶液得以流出。如果移液管未標(biāo)明“吹字，那么殘留在管尖末端內(nèi)的溶液不可吹出，因?yàn)橐埔汗芩鶚?biāo)定的量出容積中并未包括這局部殘留溶液 。I 移液管 吸量管 不應(yīng)在烘箱中烘干。2移液管 吸量管 不能移取太熱或太冷的溶液。 3同一實(shí)驗(yàn)中應(yīng)盡可能使用同一支移液管。4移液管在使用完畢后，應(yīng)立即用自來(lái)水及蒸餾水沖洗干凈，置于移液管架上。 5移液管和容量瓶常配合使用，因此在使用前常

20、作兩者的相對(duì)體積校準(zhǔn)。6在使用吸量管時(shí)，為了減少測(cè)量誤差，每次都應(yīng)從最上面刻度0 刻度處為起始點(diǎn)，往下放出所需體積的溶液，而不是需要多少體積就吸取多少體積。7、檢查移液管的管口和尖嘴有無(wú)破損 ,假設(shè)有破損那么不能使用。8 如果移液管上標(biāo)有“吹字，那么最后殘留在管內(nèi)的液滴必須吹出。9 如果移液管是從不能確認(rèn)潔凈的移液管架上所?。徊荒艽_認(rèn)潔凈的移液管，應(yīng)清洗移液管。 10使用完移液管，清洗移液管內(nèi)外壁，再放回潔凈的移液管架。II 清洗、移液過(guò)程中溶液不要滴到桌面、地面。1 0如何制作斜面培養(yǎng)基 ,簡(jiǎn)述具體步驟并說(shuō)明考前須知 答：具體步驟： 1 .玻璃器皿洗滌并包扎滅菌。2. 固體培養(yǎng)基的配置： 先

21、將配好的液體培養(yǎng)基加熱煮沸，再將稱(chēng)好的瓊脂 1.5%-2.0%參加， 并使用玻璃棒攪拌，以免糊底燒焦。加熱使瓊脂融化，最后補(bǔ)足因蒸發(fā)而失去的水分。3. 分裝培養(yǎng)基：去玻璃漏斗，裝鐵架臺(tái)上，漏斗下連橡皮管，再連玻璃管。倒入培養(yǎng)基并使其流入試管內(nèi)，裝入 量為管高的 1/5。注意不要使培養(yǎng)基沾污管口，造成污染。4. 制作棉塞：選用大小、厚薄適中的棉花，塞入試管口，應(yīng)緊貼管壁，不留縫隙，以棉塞2/3 在管內(nèi)為宜。塞好棉塞后，將試管捆成一捆，外面包上一層牛皮紙。標(biāo)記培養(yǎng)基名稱(chēng)及配置日期。4. 培養(yǎng)基滅菌：分裝好的培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。5. 制作斜面：滅菌后的培養(yǎng)基趁熱置于木棒或玻棒上，使成適當(dāng)斜度，凝

22、固后即成斜面，斜面長(zhǎng)度不超試管長(zhǎng)度1/2 為宜。2007 微生物實(shí)驗(yàn)操作復(fù)試1 哪些方法可以提高視野中光的強(qiáng)弱？ 答：顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)中有反光鏡、激光器、光源等。 1 反光鏡：裝在鏡座上面，可向任意方向轉(zhuǎn)動(dòng)，它有平、凹兩面，其作用是將光源光線反射到聚光器上， 再經(jīng)通光孔照明標(biāo)本， 凹面鏡聚光作用強(qiáng)， 適于光線較弱的時(shí)候使用， 平面鏡聚光作用弱， 適于光線較強(qiáng)時(shí)使用。 2聚光鏡：位于載物臺(tái)的下方，由兩個(gè)或幾個(gè)透鏡組成，其作用是將由光源來(lái)的光線聚成一個(gè)錐形光柱。通 過(guò)調(diào)節(jié)聚光鏡調(diào)旋鈕，可以調(diào)節(jié)光的強(qiáng)弱；聚光器還附有虹彩光圈，調(diào)節(jié)錐形光柱的角度和大小，從而控制進(jìn)入 物鏡的光的量，從而調(diào)節(jié)光的強(qiáng)弱。

23、3光源：日光和燈光均可作為光源。通過(guò)使用不同的光源改變視野中光的強(qiáng)弱。2用美藍(lán)染色法對(duì)酵母細(xì)胞進(jìn)行死活鑒別時(shí)為什么要控制染液的濃度和染色時(shí)間？答：美藍(lán)是一種無(wú)毒性的染料，它的氧化型呈藍(lán)色，復(fù)原型無(wú)色。用美藍(lán)對(duì)酵母的活細(xì)胞進(jìn)行染色時(shí)，由于 細(xì)胞的新陳代謝作用，細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的復(fù)原性，能使美藍(lán)由藍(lán)色的氧化型變成為無(wú)色的復(fù)原型。因此，具有復(fù) 原性的酵母活細(xì)胞是無(wú)色的，而死細(xì)胞或代謝作用微弱的老齡細(xì)胞那么呈藍(lán)色或淡藍(lán)色，借此即可對(duì)酵母菌的死細(xì) 胞和活細(xì)胞進(jìn)行區(qū)分。參加美藍(lán)濃度高了或染色時(shí)間太長(zhǎng)了，代謝不太活潑的活細(xì)胞也會(huì)被染色，從而使視察到 的死細(xì)胞較多，活細(xì)胞較少；反之，那么代謝微弱的細(xì)胞也能復(fù)原美

24、藍(lán)，不被染色，從而使觀察到的死細(xì)胞較少， 活細(xì)胞較多。2022微生物實(shí)驗(yàn)操作復(fù)試2022微生物實(shí)驗(yàn)操作復(fù)試2高壓蒸汽滅菌為什么比干熱滅菌要求溫度低、時(shí)間短？ 答：濕熱滅菌比敢惹滅菌效果好，主要原因有在濕熱滅菌中菌體吸收水分，蛋白質(zhì)容易凝固變性，蛋白質(zhì)隨著含水量的增加，所需凝固溫度降低；濕熱滅菌中蒸汽的穿透力比枯燥空氣大；蒸汽在被滅菌物體外表凝結(jié)，釋放 出大量的汽化潛熱，能迅速提高滅菌物體外表的溫度，從而增加滅菌效力。因此，高壓蒸汽滅菌為什么比干熱滅 菌要求溫度低、時(shí)間短。3革蘭氏染色液成分以及各種成分的作用 答：革蘭氏染色液成分：結(jié)晶紫染液，碘液，95%乙醇，番紅液作用：結(jié)晶紫染液：使細(xì)胞被染

25、成藍(lán)紫色。碘液：作為媒染劑，能與結(jié)晶紫結(jié)合形成復(fù)合物，從而增強(qiáng)了染料與細(xì)菌的結(jié)合力。95%乙醇：乙醇可以使細(xì)胞壁脫水，類(lèi)脂溶解，從而增加了細(xì)胞壁的通透性，結(jié)晶紫-碘的復(fù)合物容易被洗出。番紅：使細(xì)胞被染成紅色。 4如何測(cè)量大腸桿菌大小？9為使平板菌落計(jì)數(shù)準(zhǔn)確，需要掌握哪幾個(gè)步驟？1無(wú)菌操作2稀釋良好，不會(huì)太濃或太稀。3平板涂布均勻，菌落生長(zhǎng)時(shí)間控制好，不會(huì)長(zhǎng)的太大不便區(qū)分，也不至于太小影響計(jì)數(shù)。10配制培養(yǎng)基的根本步驟和考前須知1、玻璃器皿的洗滌并包扎滅菌。2、 配制液體培養(yǎng)基：稱(chēng)量、溶解、定容、調(diào)pH、過(guò)濾。3、固體培養(yǎng)基的配制。4培養(yǎng)基的分裝：根據(jù)不同需要，將配好的培養(yǎng)基分裝入試管或三角瓶?jī)?nèi)

26、。5、棉塞的制作和試管、三角瓶的包扎。6、培養(yǎng)基的滅菌。7培養(yǎng)基的滅菌檢查。2022微生物實(shí)驗(yàn)操作復(fù)試.顯微鏡的放大倍數(shù)：物像大小對(duì)物體大小的比例。顯微鏡的放大倍數(shù)等于目鏡的放大倍數(shù)和物鏡放大倍數(shù)的乘積。放大倍數(shù)指的 物體的寬度和長(zhǎng)度的放大倍數(shù)，而不是面積和體積的放大倍數(shù)。3 鏡頭長(zhǎng)度與放大倍數(shù)的關(guān)系：目鏡的長(zhǎng)度與放大倍數(shù)成反比，物鏡的長(zhǎng)度與放大倍數(shù)成正比。4 物像移動(dòng)與裝片移動(dòng)的關(guān)系：由于顯微鏡下成的像是倒立的像，所以，物像移動(dòng)的方向與載玻片移動(dòng)的方向是相反的。5 .放大倍數(shù)的變化與視野進(jìn)而細(xì)胞數(shù)量變化的關(guān)系。第一種情況：一行細(xì)胞數(shù)量的變化，可根據(jù)放大倍數(shù)與視野成反比的規(guī)律計(jì)算。第二種情況：

27、圓形視野范圍內(nèi)細(xì)胞數(shù)量的變化，可根據(jù)看到的實(shí)物范圍與放大倍數(shù)的平方成反比的規(guī)律計(jì)算。對(duì)于一株未知菌株進(jìn)行革蘭氏染色時(shí)，怎樣確定你的染色技術(shù)正確，結(jié)果可靠革蘭氏染色的成功和實(shí)驗(yàn)時(shí)的環(huán)境條件有很大關(guān)系，同樣的實(shí)驗(yàn)參數(shù)，比方染色時(shí)間、水洗時(shí)間、復(fù)染時(shí)間 等在不同的環(huán)境下染色的效果是不同的。那么對(duì)未知菌進(jìn)行染色法鑒定其革蘭氏陰性/陽(yáng)性時(shí)，必須同時(shí)在同一個(gè)載玻片上做上陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。陽(yáng)性一般選擇枯草芽孢桿菌，陰性一般選擇大腸桿菌，因?yàn)楸葦M常見(jiàn)如果實(shí)際染色結(jié)果和理論結(jié)果相符那么得出的染色結(jié)果就應(yīng)該是比擬可靠的了。酵母菌的假菌絲是怎樣形成的？它與真菌絲有何區(qū)別？假菌絲：酵母菌進(jìn)行出芽生殖時(shí)，子母細(xì)胞不立

28、即別離而以狹小的面積相連，那么稱(chēng)這種藕節(jié)狀的細(xì)胞串為假 菌絲。假菌絲沒(méi)有橫隔。各細(xì)胞間僅以狹小的面積相連，呈藕節(jié)狀，在分隔處縊縮。假菌絲與真菌絲明顯不同處在于其兩細(xì)胞間有一細(xì)腰，而不象真正菌絲橫隔處兩細(xì)胞寬度一致。使用油鏡時(shí)，應(yīng)該特別注意哪些問(wèn)題？1、采用油鏡除需要在標(biāo)本與鏡頭之間滴加香柏油。2、注意油鏡焦距極短，切勿使鏡頭觸及載玻片而受損。3、使用油鏡觀察時(shí)，需采用強(qiáng)光觀察。4、鏡檢完畢，需用擦鏡紙擦拭鏡頭香柏油，再蘸取二甲苯清潔鏡頭并擦拭。對(duì)同一微生物制片，用油鏡觀察比用低倍鏡觀察有何優(yōu)缺點(diǎn)？對(duì)同一微生物制片， 油鏡分辨率更高，是目標(biāo)物觀察的更清楚； 但在操作方面，油鏡觀察相對(duì)低倍鏡較繁瑣

29、， 對(duì)較大的微生物菌體，油鏡無(wú)法觀察其全貌。為什么革蘭氏染色所用細(xì)菌的菌齡一般不能超過(guò)24小時(shí)一般微生物，應(yīng)選用培養(yǎng) 16-24小時(shí)為宜，因?yàn)榧僭O(shè)菌齡太老，由于菌體死亡或自溶常使革蘭氏染色陽(yáng)性菌 轉(zhuǎn)為陰性反響，使得顯微鏡下出現(xiàn)假陰性現(xiàn)像。血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的誤差主要來(lái)自哪些方面？應(yīng)如何盡量減少誤差，力求準(zhǔn)確？血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的誤差主要有系統(tǒng)誤差和偶然誤差。其中由于操作人員，器材處理、使用不當(dāng)，稀釋不準(zhǔn) 確等因素所造成的誤差屬偶然誤差；而由于儀器計(jì)數(shù)板、蓋片、吸管等不夠準(zhǔn)確與精密帶來(lái)的誤差稱(chēng)系統(tǒng)誤 差。具體有：1、所用器材均應(yīng)清潔枯燥，計(jì)數(shù)板、血蓋片、微量吸管及刻度吸管的規(guī)格應(yīng)符合要求；2、菌懸液

30、稀釋度不適，菌液混合不均勻，造成計(jì)數(shù)困難。3、由于操作不當(dāng)，計(jì)數(shù)室產(chǎn)生氣泡，造成計(jì)數(shù)不準(zhǔn)。4、操作人員計(jì)數(shù)過(guò)程中，由于細(xì)胞識(shí)別不準(zhǔn)，計(jì)數(shù)方法錯(cuò)誤等，造成計(jì)數(shù)不準(zhǔn)。能否用血球計(jì)數(shù)板在油鏡下對(duì)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)不行。由于血球計(jì)數(shù)板較厚，用油鏡觀察時(shí)，計(jì)數(shù)板下部的細(xì)菌不易看清。其次，用油鏡觀察時(shí)需要采用強(qiáng) 光，強(qiáng)光下有可能看不清計(jì)數(shù)格的邊界線以及菌體細(xì)胞。為什么微生物實(shí)驗(yàn)室所用的移液管口或滴管口的上端均需塞入一小段棉花，再用報(bào)紙包，經(jīng)高壓蒸汽滅菌后才能使用？為什么微生物實(shí)驗(yàn)室所用的三角瓶口或試管口都要塞上棉塞才能使用？棉塞的作用有二：其一是防止雜菌污染，其二是保持瓶?jī)?nèi)氧氣流通。配制培養(yǎng)基時(shí)為什么要調(diào)節(jié)pH

31、?從整體來(lái)看，各大類(lèi)微生物都有其生長(zhǎng)適宜的pH范圍，如細(xì)菌為7.0-8.0,放線菌為7.5-8.5,酵母菌為，霉菌為等，因此，依照不同微生物的培養(yǎng)目的，需要對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行pH調(diào)節(jié)。但是培養(yǎng)物的代謝作用又會(huì)改變培養(yǎng)基的pH，所以在配置培養(yǎng)基時(shí)，不僅培養(yǎng)基的起始 pH值應(yīng)符合微生物的要求，而且要考慮采用何種緩沖作用保持其pH值。例如，一般在培養(yǎng)產(chǎn)酸的微生物時(shí)可在培養(yǎng)基中參加適量的CaC03,以中和不斷產(chǎn)生的酸。為什么融化后培養(yǎng)基要冷卻到45 C左右方可倒平板，過(guò)冷或過(guò)熱行不行？為什么？1、融化后的培養(yǎng)基溫度較高，不經(jīng)冷卻就倒入冷的平板中，那么會(huì)產(chǎn)生水汽和水滴附著外表壁上，甚至融液 的濺出，影響涂布效

32、果。2、培養(yǎng)基溫度過(guò)高，在傾倒培養(yǎng)液時(shí)燙手，同樣影響實(shí)驗(yàn)的順利操作。3、溫度過(guò)低瓊脂會(huì)凝固，倒出來(lái)的板子不平，形成果凍樣塊狀，如果形成氣泡不容易排除，形成氣洞。V.P反響中參加NaOH溶液的作用是什么V.P實(shí)驗(yàn)中，丙酮酸縮合、脫羧生成的3-羥基丁酮，需要在堿性條件下才能被空氣氧化成二乙酰。NaOH為反響的順利進(jìn)行提供堿性環(huán)境。為什么在誘變前要把菌懸液打散使菌種分散，與培養(yǎng)液充分混合，有利于菌種復(fù)蘇生長(zhǎng)，進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期；另外也使菌液均質(zhì)，有利于紫外 光的均勻分布處理。試述紫外線誘變的考前須知1、注意誘變過(guò)程中，在紅光下進(jìn)行照射和后續(xù)操作，并放置在黑暗條件下培養(yǎng)。2、為了使細(xì)胞均勻接受照射，培養(yǎng)皿

33、應(yīng)在無(wú)蓋條件下直接照射，同時(shí)用電磁攪拌棒或者其他方法均勻旋轉(zhuǎn)并攪動(dòng)懸液3、紫外光對(duì)生物細(xì)胞有較強(qiáng)的殺傷作用，亦是物理致癌因子之一，使用時(shí)應(yīng)注意防護(hù)，操作盡量控制在防護(hù)罩內(nèi)。簡(jiǎn)述誘變后后培養(yǎng)的目的及考前須知后培養(yǎng)是指誘變處理后，立即將處理過(guò)的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到營(yíng)養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，使突變基因穩(wěn)定、純和并表達(dá)。1、遺傳物質(zhì)經(jīng)誘變處理后發(fā)生改變，必需經(jīng)過(guò)DNA的復(fù)制才能穩(wěn)定成突變基因，而突變基因那么要經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)的合成才能表達(dá)，呈現(xiàn)突變型表型。后培養(yǎng)所用培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)豐富，有利于突變微生物基因轉(zhuǎn)錄和蛋 白質(zhì)合成。2、后培養(yǎng)可以消除表型延遲。經(jīng)過(guò)后培養(yǎng)及之后的別離篩選，有利于找出突變型個(gè)體?？记绊氈汉?/p>

34、培養(yǎng)需要黑暗條件下進(jìn)行，防止紫外誘變后微生物光復(fù)活。2、后培養(yǎng)的培養(yǎng)基必需營(yíng)養(yǎng)豐富，需含有足量的氨基酸和嘌呤嘧啶堿基等。參加溶液H后為什么不能劇烈震蕩參加溶液H和溶液川后，應(yīng)緩慢上下顛倒離心管數(shù)次，切忌在旋渦振蕩器上劇烈振蕩，否那么，染色體DNA會(huì)斷裂成小片段，不形成沉淀，而溶解在溶液中，與質(zhì)粒DNA混合在一起，不利于質(zhì)粒 DNA提純。因此，操作時(shí)一定要緩慢柔和，采用上下顛倒的方法，既要使試劑與染色體DNA充分作用，又不破壞染色體的結(jié)構(gòu)。質(zhì)粒DNA在瓊脂凝膠電泳時(shí)，泳動(dòng)速度的影響因素有哪些1、核酸的性質(zhì)核酸的電荷量，分子大小，分子的空間構(gòu)象等決定了不同的核酸分子具有不同的遷移率。對(duì)于線狀雙鏈D

35、NA分子，在凝膠電泳中，分子量的常用對(duì)數(shù)與泳動(dòng)率成反比關(guān)系，一般雙鏈 DNA根本上不存在影響遷移率的復(fù)雜構(gòu)象，但分子的空間構(gòu)象也影響泳動(dòng)速率，如分子量相同的質(zhì)粒 DNA遷移速率那么是：閉環(huán)型 線性 單鏈開(kāi)環(huán)型。對(duì)于單鏈RNA或DNA，其在凝膠電泳中的遷移率受堿基組織和序列的影響，同等大小的核酸可能由于空間 構(gòu)象不同而使遷移率不同，故可利用變性凝膠電泳別離純化單鏈核酸。2、凝膠孔徑的大小：瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠PAG是核酸凝膠電泳常使用的支持材料，通過(guò)兩種支持介質(zhì)的濃度變化調(diào)整所 形成凝膠的分子篩網(wǎng)孔大小，能別離不同分子量的核酸片段，瓊脂糖凝膠的孔徑大，分辨率低，但別離范圍廣， 約100bp50

36、kb的DNA ; PAG的孔徑小，別離小片段 5500bpDNA效果較好，甚至可以分辨相差 1bp的DNA 片段。凝膠孔徑的大小是影響核酸在凝膠電泳中遷移率的最根本因素，它決定了能被別離的片段的大小。3、電場(chǎng)強(qiáng)度和電場(chǎng)方向：低電壓時(shí)，線狀DNA片段的電泳遷移率與所加的電壓成正比，通常凝膠電泳的電場(chǎng)強(qiáng)度不超過(guò)5V/cm凝膠。隨電場(chǎng)強(qiáng)度增加，高分子量的DNA片段的遷移率將以不同的幅度增加，使凝膠的有效別離范圍縮小。對(duì)于大分子量真核基因組 DNA片段的電泳常采用 0.51.0V/cm電泳過(guò)夜，以取得較好的分辨力和整齊的帶型。如果電場(chǎng)呈周期性變化，各種分子量的DNA片段為適應(yīng)新的電場(chǎng)變化所需的時(shí)間將不同，分子量越大，那么所需的時(shí)間越多。因此可以通過(guò)脈沖電場(chǎng)凝膠電泳別離極大片段的DNA。4、電泳環(huán)境緩沖液的組成和離子強(qiáng)度直接影響遷移率。Tris