課題2　月季的花藥培養(yǎng) (2)

1、課題課題2：月季的花藥培養(yǎng)月季的花藥培養(yǎng) 一、課題目標(biāo)一、課題目標(biāo) 說出被子植物花粉發(fā)育的過程及花藥培養(yǎng)說出被子植物花粉發(fā)育的過程及花藥培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑，說出影響花藥產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑，說出影響花藥培養(yǎng)的因素，學(xué)習(xí)花藥培養(yǎng)的基本技術(shù)，培養(yǎng)的因素，學(xué)習(xí)花藥培養(yǎng)的基本技術(shù)，嘗試用月季或其他植物的花藥進行培養(yǎng)。嘗試用月季或其他植物的花藥進行培養(yǎng)。 二、課題重點與難點二、課題重點與難點 課題重點：選取適宜的培養(yǎng)材料和培養(yǎng)基。課題重點：選取適宜的培養(yǎng)材料和培養(yǎng)基。 課題難點：選取適宜的培養(yǎng)材料和培養(yǎng)基。課題難點：選取適宜的培養(yǎng)材料和培養(yǎng)基。 （一）被子植物的花粉發(fā)育（一）被子植物的花粉發(fā)育

2、 被子植物的花的結(jié)構(gòu)是怎樣的？被子植物的花的結(jié)構(gòu)是怎樣的？ 觀察下圖，和減數(shù)分裂比較，你能指出對應(yīng)觀察下圖，和減數(shù)分裂比較，你能指出對應(yīng)的時期嗎？又有何特點？的時期嗎？又有何特點？雌蕊雌蕊：花絲花絲花藥：囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉?；ㄋ帲耗覡罱Y(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉粒花粉花粉是小孢子母細胞經(jīng)過減數(shù)分裂而形成是小孢子母細胞經(jīng)過減數(shù)分裂而形成的，因此，花粉是單倍體的生殖細胞。的，因此，花粉是單倍體的生殖細胞?；ǚ鄣陌l(fā)育要經(jīng)歷：花粉的發(fā)育要經(jīng)歷：四分體時期四分體時期、單核期單核期、雙核期雙核期注意注意：二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管細胞核和生殖細胞二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管細胞核和生殖細胞

3、核。（精子在花粉管中形成）核。（精子在花粉管中形成）三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖細胞進行一次三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖細胞進行一次有絲分裂，形成兩個精子，這樣的花粉在成熟時，含有一個營養(yǎng)有絲分裂，形成兩個精子，這樣的花粉在成熟時，含有一個營養(yǎng)核和兩個精子。核和兩個精子。兩個精子和一個營養(yǎng)核的基因型相同。兩個精子和一個營養(yǎng)核的基因型相同。1花粉母細胞花粉母細胞4個小孢子個小孢子減分減分有分有分4個花粉管細胞核個花粉管細胞核4個生殖細胞核個生殖細胞核有分有分8個精子個精子又稱人造種子、合成種子或無性種子，又稱人造種子、合成種子或無性種子，就是將組織培養(yǎng)所產(chǎn)生的就是將組

4、織培養(yǎng)所產(chǎn)生的體細胞胚、不體細胞胚、不定芽、頂芽、腋芽或小鱗莖等繁殖體定芽、頂芽、腋芽或小鱗莖等繁殖體，包裹在能提供營養(yǎng)的膠囊（包裹在能提供營養(yǎng)的膠囊（人造胚乳人造胚乳）里，再在外面包上一層具有保護功能和里，再在外面包上一層具有保護功能和防止機械損傷的外膜（防止機械損傷的外膜（人造種皮人造種皮），造），造成一種類似種子的結(jié)構(gòu)，能在一定的條成一種類似種子的結(jié)構(gòu)，能在一定的條件下萌發(fā)生長，形成完整植株。件下萌發(fā)生長，形成完整植株。 （二）產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑（二）產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑 有哪兩種途徑？原因是什么？有哪兩種途徑？原因是什么？花藥中花藥中的花粉的花粉花藥中花藥中的花粉的花粉胚狀體胚狀

5、體愈傷組織愈傷組織叢芽叢芽叢芽叢芽生根生根移栽移栽花藥培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑花藥培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑 （三）影響花藥培養(yǎng)的因素（三）影響花藥培養(yǎng)的因素 1、材料的選擇、材料的選擇 不同植物不同植物 同一植物的不同生理狀況同一植物的不同生理狀況（花期早期初花期）（花期早期初花期） 合適的花粉發(fā)育期合適的花粉發(fā)育期（單核居中期與靠邊期之間）（單核居中期與靠邊期之間） 此外，植株生長條件、材料低溫預(yù)處理、接此外，植株生長條件、材料低溫預(yù)處理、接種密度等種密度等 2、培養(yǎng)基的組成、培養(yǎng)基的組成材料的選擇：材料的選擇： 花期早期時的花藥比后期的更容易產(chǎn)生花花期早期時的花藥比后期的更容易產(chǎn)生花粉

6、植株。一般，月季的花藥培養(yǎng)時間選在五月粉植株。一般，月季的花藥培養(yǎng)時間選在五月初到五月中旬，即月季的初花期。初到五月中旬，即月季的初花期。 選擇合適的花粉發(fā)育時期也是提高誘導(dǎo)成選擇合適的花粉發(fā)育時期也是提高誘導(dǎo)成功率的重要因素。一般來說，在單核期，細胞功率的重要因素。一般來說，在單核期，細胞核由中央移向細胞一側(cè)的時期，花藥培養(yǎng)成功核由中央移向細胞一側(cè)的時期，花藥培養(yǎng)成功率最高。率最高。 為了挑選到單核期的花藥，通常選擇完全為了挑選到單核期的花藥，通常選擇完全未開放的花蕾。未開放的花蕾。 為什么花瓣松動會給材料為什么花瓣松動會給材料的消毒帶來困難？的消毒帶來困難？ 答：花瓣松動后，微生物答：花瓣

7、松動后，微生物就可能侵入到花藥，給材就可能侵入到花藥，給材料的消毒帶來困難。料的消毒帶來困難。 （一）材料的選?。ㄒ唬┎牧系倪x取 染色鏡檢染色鏡檢 （二）材料的消毒（二）材料的消毒 酒精、氯化汞、次氯酸鈣酒精、氯化汞、次氯酸鈣 （三）接種和培養(yǎng)（三）接種和培養(yǎng)結(jié)果分析與評價結(jié)果分析與評價 選擇花藥時，一般通過鏡檢來確定其選擇花藥時，一般通過鏡檢來確定其中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期。中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期。 最常用的方法有最常用的方法有醋酸洋紅法醋酸洋紅法。但是，。但是，某些植物的花粉細胞核不易著色，需采用某些植物的花粉細胞核不易著色，需采用焙花青焙花青-鉻礬法鉻礬法，這種方法能將花粉細胞

8、核，這種方法能將花粉細胞核染成染成藍黑色藍黑色。1、花蕾用、花蕾用V/V為為70%的酒精的酒精浸泡浸泡30秒秒2、無菌水清洗、無菌水清洗3、無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分、無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分4、放入、放入質(zhì)量分數(shù)為質(zhì)量分數(shù)為0.1%的氯化汞的氯化汞溶液中溶液中24分鐘（也可分鐘（也可質(zhì)量分數(shù)為質(zhì)量分數(shù)為1%的次氯酸的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液鈣溶液或飽和漂白粉溶液）5、無菌水沖洗、無菌水沖洗35次次 用于培養(yǎng)花藥，實際上多數(shù)未熟，由用于培養(yǎng)花藥，實際上多數(shù)未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或穎片保護，于它的外面有花萼、花瓣或穎片保護，通常處于無菌狀態(tài)，所以只要將整個花通常處于無菌狀態(tài)，所

9、以只要將整個花蕾或幼穗消毒即可。蕾或幼穗消毒即可。 滅菌后花蕾，要在無菌條件下除去萼片和花滅菌后花蕾，要在無菌條件下除去萼片和花瓣，并立即將花藥接種到培養(yǎng)基上。在剝離花藥瓣，并立即將花藥接種到培養(yǎng)基上。在剝離花藥時，要盡量不損傷花藥（否則接種后，容易從受時，要盡量不損傷花藥（否則接種后，容易從受傷部位產(chǎn)生二倍體的愈傷組織），同時還要徹底傷部位產(chǎn)生二倍體的愈傷組織），同時還要徹底去除花絲，因為與花絲相連的花藥不利于愈傷組去除花絲，因為與花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。織或胚狀體的形成。 通常每瓶接種花藥通常每瓶接種花藥7-10個，溫度控制在個，溫度控制在25左右，不需要光照。幼小植株

10、形成后才需要光照。左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。 一般經(jīng)過一般經(jīng)過20-30天培養(yǎng)后，會發(fā)現(xiàn)花藥開裂，長天培養(yǎng)后，會發(fā)現(xiàn)花藥開裂，長出愈傷組織或釋放出胚狀體。將愈傷組織及時轉(zhuǎn)出愈傷組織或釋放出胚狀體。將愈傷組織及時轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進一步分化出再生植株。移到分化培養(yǎng)基上，以便進一步分化出再生植株。 如果花藥開裂釋放出胚狀體，則一個如果花藥開裂釋放出胚狀體，則一個花藥內(nèi)就會產(chǎn)生大量幼小植株，必須在花花藥內(nèi)就會產(chǎn)生大量幼小植株，必須在花藥開裂后盡快將幼小植株分開，分別移植藥開裂后盡快將幼小植株分開，分別移植到新的培養(yǎng)基上，否則這些植株將很難分到新的培養(yǎng)基上，否則這些植株將很難分

11、開。開。 在花藥培養(yǎng)中，特別是通過愈傷組織在花藥培養(yǎng)中，特別是通過愈傷組織形成的花粉植株，常常會出現(xiàn)染色體倍性形成的花粉植株，常常會出現(xiàn)染色體倍性的變化。（主要原因是的變化。（主要原因是營養(yǎng)核和生殖核融營養(yǎng)核和生殖核融合合造成的。）造成的。）植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的異同點植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的異同點項目項目相同點相同點不同點不同點植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)技術(shù)技術(shù)離體的植物組織經(jīng)離體的植物組織經(jīng)脫分化形成愈傷組脫分化形成愈傷組織，再分化成叢芽，織，再分化成叢芽，誘導(dǎo)出根，然后進誘導(dǎo)出根，然后進行移栽。行移栽。外植體為體細胞，外植體為體細胞，染色體數(shù)無需加染色體數(shù)無需加倍。倍?；?/p>

12、藥培養(yǎng)技術(shù)花藥培養(yǎng)技術(shù)取材為花藥，培養(yǎng)取材為花藥，培養(yǎng)的為單倍體幼苗，的為單倍體幼苗，植株弱小，高度不植株弱小，高度不育，必須用秋水仙育，必須用秋水仙素處理，使染色體素處理，使染色體加倍，恢復(fù)正常植加倍，恢復(fù)正常植株的染色體數(shù)，而株的染色體數(shù)，而且為純種。且為純種。 三、課題背景分析三、課題背景分析 課題背景介紹了花藥培養(yǎng)的歷史以及花藥培養(yǎng)課題背景介紹了花藥培養(yǎng)的歷史以及花藥培養(yǎng)在育種工作上的意義。有條件的話可以在育種工作上的意義。有條件的話可以 嘗試某嘗試某種植物的花藥培養(yǎng)。種植物的花藥培養(yǎng)。 被子植物的花粉發(fā)育被子植物的花粉發(fā)育 知識要點：知識要點：1.花粉是單倍體生殖細胞；花粉是單倍體生

13、殖細胞；2.花粉花粉的發(fā)育要經(jīng)歷不同的時期。的發(fā)育要經(jīng)歷不同的時期。 產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑 知識要點：知識要點：花藥培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑。花藥培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑。 影響花藥培養(yǎng)的因素影響花藥培養(yǎng)的因素 知識要點：知識要點：選取適宜的材料和培養(yǎng)基組成是花選取適宜的材料和培養(yǎng)基組成是花粉植株誘導(dǎo)成功的關(guān)鍵。粉植株誘導(dǎo)成功的關(guān)鍵。 練習(xí)練習(xí)1. 答：答：F2代紫色甜玉米的基因型組成可能為代紫色甜玉米的基因型組成可能為Aasusu或或AAsusu。如果運用常規(guī)育種方法，。如果運用常規(guī)育種方法，將將F2代中的紫色甜玉米與白色甜玉米代中的紫色甜玉米與白色甜玉米（aasusu）進行測交，可以選擇出基因型為）進行測交，可以選擇出基因型為AAsusu純種紫色甜玉米。但這種方法比較純種紫色甜玉米。但這種方法比較繁瑣