茶鮮葉中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法_圖文

1、茶鮮葉中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法。侯如燕，宛曉春，朱旭君（安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶與食品科技學(xué)院，教育部、農(nóng)業(yè)部茶葉生物化學(xué)與生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽合肥，）摘要擬除蟲菊酯農(nóng)藥用量少，殺蟲效果好，廣泛應(yīng)用于茶園害蟲的控制是我國出口茶葉中必檢的農(nóng)藥。為實(shí)現(xiàn)茶葉生產(chǎn)危害分析關(guān)鍵控制點(diǎn)（）體系中農(nóng)藥殘留的源頭控制，提供農(nóng)殘?jiān)搭^監(jiān)督檢驗(yàn)方法依據(jù)，避免大量使用農(nóng)藥對(duì)茶園土壤環(huán)境造成的污染，開發(fā)茶鮮葉中菊酯類農(nóng)藥的多殘留檢測(cè)方法有重要的實(shí)踐意義。本實(shí)驗(yàn)用（石油醚）：（丙酮）一混合溶劑提取，經(jīng)弗羅里硅土柱層析凈化除去干擾物質(zhì)，采用氣相色譜，微電子捕獲檢測(cè)器（“）測(cè)定茶鮮葉中主要的種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留量。方法最

2、低檢出濃度為；茶鮮葉中擬除蟲菊酯農(nóng)藥的添加濃度為、，其回收率在，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（）為，符合農(nóng)藥殘留分析要求。關(guān)鍵詞茶鮮葉，擬除蟲菊酯農(nóng)藥，多殘留分析，氣相色譜茶葉是我國的一種傳統(tǒng)出口農(nóng)產(chǎn)品，當(dāng)前存在的主要衛(wèi)生問題是農(nóng)藥殘留超標(biāo)口。國際上一些茶葉進(jìn)口國制定了嚴(yán)格的農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)于超過農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)的茶葉采取就地封存、銷毀或退回原產(chǎn)地國的政策，對(duì)我國茶葉貿(mào)易造成了很大影響。擬除蟲菊酯農(nóng)藥用量少，殺蟲效果好，在茶園廣泛應(yīng)用，也是我國出口茶葉中必檢的農(nóng)藥。為了監(jiān)督茶園用藥情況，確定合理的采摘時(shí)間，以便在源頭控制茶葉農(nóng)藥殘留問題，把茶葉安全生產(chǎn)的危害分析關(guān)鍵控制點(diǎn)（，）前移。直接測(cè)定茶鮮葉中的農(nóng)藥

3、殘留量有著現(xiàn)實(shí)意義，可以實(shí)現(xiàn)茶葉農(nóng)藥源頭控制，有效引導(dǎo)農(nóng)民合理使用農(nóng)藥，降低茶園農(nóng)藥噴施量，提高飲茶安全性，并且可以減少農(nóng)藥違規(guī)使用而對(duì)茶園土壤環(huán)境造成污染。由于鮮葉中提取物中含有比成茶更多的干擾物質(zhì)，例如簡單兒茶素等多酚類及葉綠醇等色素類，因此文獻(xiàn)報(bào)道的茶葉中菊酯類農(nóng)藥檢測(cè)方法不適用于茶鮮葉基質(zhì)檢測(cè)，因此有必要建立茶鮮葉農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法。本實(shí)驗(yàn)用有機(jī)溶劑提取，弗羅里硅土柱層析凈化，氣相色譜法檢測(cè)茶鮮葉中種主要的擬除蟲菊酯農(nóng)藥殘留量，并通過加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)證明了方法的可行性。材料與方法儀器與試劑第一作者：博士研究生，講師（宛曉春為通訊作者）國家科技部支撐計(jì)劃資助項(xiàng)目（），安徽省教育廳資助項(xiàng)目（）

4、收稿日期：，改回日期：一氣相色譜儀，配弘檢測(cè)器；型溫控多用高速組織搗碎機(jī)（江陰保利科研器械公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海申順生物科技有限公司）；箱式電阻爐（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠）。弗羅里硅土（目，美國公司，活化，水脫活），無水硫酸鈉（用前灼燒），活性碳（目，層析用，放于濃中，加熱煮沸，用蒸餾水洗至中性，烘干后，灼燒，用前烘），石油醚、正己烷、丙酮、乙醚、乙酸乙酯、鹽酸，所用試劑均為分析純，有機(jī)溶劑重蒸后使用；試驗(yàn)用水為雙蒸水。方法農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)樣品的配制聯(lián)苯菊酯（，），甲氰菊酯（，），三氟氯氰菊酯（，），氯氰菊酯（，），氰戊菊酯（，），氰戊菊酯（，）德國（）產(chǎn)品；分別準(zhǔn)確稱取上述的標(biāo)準(zhǔn)品，用正己烷溶解配成的

5、原始儲(chǔ)備液，使用時(shí)再根據(jù)不同農(nóng)藥在儀器上的靈敏度稀釋到所需濃度。樣品制備”取茶鮮葉樣品（一芽葉，采自安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶園，未施用任何農(nóng)藥），置組織搗碎機(jī)中搗碎。樣品提取與凈化提取：稱取搗碎茶鮮葉，加（石！塑生蔓竺堂蔓！塑星蔓！塑塑引油醚）：（丙酮）：，置組織搗碎機(jī)中勻漿提取，真空抽濾，分別用混合溶劑洗滌濾渣，過濾好的溶液用等體積飽和硫酸鈉溶液加入分液漏斗萃取，劇烈振搖，分出有機(jī)相，濃縮至上凈化柱。凈化：在（）×玻璃層析柱中，加入高無水硫酸鈉，再加入弗羅里硅土載體（蒸餾水脫活），上層再加入高無水硫酸鈉。加正己烷預(yù)洗層析柱，棄去淋洗液。從提取濾液中移取入柱中，用（石油醚）：（乙酸乙酯）一：淋

6、洗，濃縮至待測(cè)。色譜條件色譜柱：一，××；氣體流速：氮?dú)?；柱前壓：；尾吹氣：；溫度：柱溫：保持，再以升到至，保持；進(jìn)樣口：；檢測(cè)器：。結(jié)果與分析方法的線性實(shí)驗(yàn)分別將配制的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)母液依次稀釋成濃度為、個(gè)系列濃度，進(jìn)樣“，以峰面積值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其線性回歸方程，相關(guān)系數(shù)如表所示。表標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程及相關(guān)系數(shù)凈化條件的選擇弗羅里硅土是菊酯類農(nóng)藥固相萃取凈化常用的吸附劑，由于其吸附活性較高，通常加入左右的雙蒸水以降低其活性，減少洗脫溶劑用量，實(shí)驗(yàn)選用脫活的弗羅里硅土，嘗試用不同極性的洗脫溶劑來洗脫加標(biāo)（加標(biāo)濃度為）后的提取液，洗脫劑用量均為，用凈化后

7、的洗脫液中所含基質(zhì)重量占凈化前基質(zhì)重量的百分率，即基質(zhì)干擾的洗脫率來驗(yàn)證這些溶劑對(duì)基質(zhì)干擾的洗脫能力，用種農(nóng)藥的平均回收率來判斷洗脫劑對(duì)農(nóng)藥的洗脫能力，若洗脫劑對(duì)農(nóng)藥的洗脫效果滿足準(zhǔn)確度和精密度要求，且洗脫的干擾基質(zhì)含量最小，則該洗脫劑為！塑旦?。核軌櫟海』仕?！最佳選擇，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表。相同體積的丙酮、乙酸乙酯、乙醚、石油醚種單一溶劑相比，溶劑極性越小，洗脫基質(zhì)干擾量越小，凈化效果越好，溶劑極性越高，則干擾越嚴(yán)重，例如丙酮、乙酸乙酯、乙醚已不能準(zhǔn)確回收到農(nóng)藥。石油醚作為洗脫溶劑，干擾最小，但農(nóng)藥平均回收率低于。為了增加洗脫劑極性，提高農(nóng)藥的回收率，則采用加入少量乙酸乙酯的混合溶劑，結(jié)果表明，隨

8、加入的乙酸乙酯量增加，回收率明顯增加，但基質(zhì)干擾也同樣增加，而（石油醚）：（乙酸乙酯）：，所得色譜峰干擾最小，平均回收率在以上，因此選定其為洗脫劑。為了進(jìn)一步增加凈化效果，實(shí)驗(yàn)曾在弗羅里硅土填料中加入活性炭作為色素的吸附劑，隨活性炭加入量增加，凈化效果明顯改善，但農(nóng)藥洗脫率顯著下降，加入量過少，凈化效果未有明顯改善。因此方法未選用活性炭作為凈化材料。表不同淋洗溶劑的洗脫效果（次重復(fù)）淋洗溶劑種類基質(zhì)干擾物質(zhì)的洗脫率農(nóng)藥平均回收率”注：）一基質(zhì)干擾明顯，種農(nóng)藥平均回收率大于。為了進(jìn)一步確定洗脫劑的最佳用量，實(shí)驗(yàn)選用一定濃度的混合標(biāo)樣上柱，用（石油醚）：（乙酸乙酯）：洗脫，收集管，每管，種菊酯農(nóng)藥

9、在弗羅里硅土柱上的洗脫行為和洗脫曲線見表和圖。前洗脫液未見農(nóng)藥洗出，種菊酯的洗脫峰高點(diǎn)略有差異，聯(lián)苯菊酯洗脫容易，即取得以上的回收率，甲氰菊酯稍易，其他菊酯均需較多溶劑才能洗脫，而洗脫劑用量種農(nóng)藥均取得以上的回收率，因此，方法選擇洗脫體積。表菊酯農(nóng)藥在弗羅里硅土柱上的洗脫行為術(shù)、苣塾回糠：摟柏洗脫液體積圖六種菊酯農(nóng)藥的洗脫曲線茶鮮葉中菊酯農(nóng)藥的添加回收實(shí)驗(yàn)選用空白茶鮮葉樣品，分別按、的添加濃度進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)，每個(gè)水平重復(fù)次，進(jìn)樣，種菊酯農(nóng)藥的平均添加回收率為，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（）為，準(zhǔn)確度和精密度好，滿足茶鮮葉中菊酯農(nóng)藥殘留分析的要求，添加回收結(jié)果見表，氣相色譜圖見圖。按空白樣品加標(biāo)試驗(yàn)中農(nóng)藥峰面

10、積為基線噪音的倍信號(hào)的濃度計(jì)算方法的最小檢出濃度，結(jié)果見表。樣品加標(biāo)濃度為：聯(lián)苯菊酯、甲氰菊酯、氰戊菊酯，孓氰戊菊酯為，三氟氯氰菊酯為，氯氰菊酯為。色譜峰峰號(hào)：聯(lián)苯菊酯，甲氰菊酯，三氟氯氰菊酯，、為氯氰菊酯，氰戊菊酯，孓氰戊菊酯。洲“）趔（望皇嘲（毛耋裟。耵（）【“罨測(cè)莩咖，時(shí)間時(shí)間時(shí)日（）標(biāo)準(zhǔn)樣品氣相色譜圖，（）茶鮮葉空白樣品；（）茶鮮葉中菊酯農(nóng)藥添加回收氣相色譜圖圖六種菊酯農(nóng)藥添加回收氣相色譜圖表茶鮮葉中六種菊酯農(nóng)藥的添加回收結(jié)果農(nóng)藥名稱加標(biāo)濃童平均回收率標(biāo)準(zhǔn)偏差最小檢出濃度一聯(lián)苯菊酯甲氰菊酯三氟氯氰菊酯氯氰菊酯氰戊菊酯氰戊菊醇?jí)欀谅m查苤！塑（星蔓絲塑。一帥鯽加舯鯽舯結(jié)論本實(shí)驗(yàn)方法具有有

11、機(jī)溶劑用量適中、毒性小、試驗(yàn)成本較低等優(yōu)點(diǎn)，茶鮮葉中的菊酯農(nóng)藥的添加回收率在，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為（）。本實(shí)驗(yàn)采用窄口徑毛細(xì)管柱分離，不分流模式進(jìn)樣，取得了較好的分析質(zhì)量。尤其是采用了窄口徑毛細(xì)管柱分離技術(shù)，微池檢測(cè)器檢測(cè)，具有分離效果好，靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，方法中種農(nóng)藥的檢測(cè)限均低于，完全滿足茶鮮葉樣品農(nóng)藥殘留分析要求，可作為調(diào)查茶園菊酯農(nóng)藥使用背景，監(jiān)督茶園農(nóng)藥合理使用的一種手段。參考文獻(xiàn)岳永德、花日茂、張承祥茶葉農(nóng)藥殘留與控制北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，湯富彬，劉光明，羅逢健，等用薄層層析法檢測(cè)茶葉中甲氰菊酯和氰戊菊酯農(nóng)藥殘留中國茶葉，（）：徐倩，劉靜明，諸思燕，等茶葉有機(jī)磷及菊酯類農(nóng)藥殘留檢測(cè)中凈化處理的研究食品科學(xué)，（）：易軍，李云春，弓振斌，等茶葉中多種農(nóng)藥殘留的氣相色譜發(fā)測(cè)定廈門大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），（）：羅逢健，劉光明，陳宗懋茶葉中種農(nóng)藥殘留的多檢出分析技術(shù)口現(xiàn)代科技儀器，（）：劉忠