Agilent+1260+HPLC+工作原理及色譜柱的使用和保養(yǎng)20140222綜述綜述

1、Agilent 1260 HPLC 工作原理工作原理及色譜柱的使用和保養(yǎng)及色譜柱的使用和保養(yǎng) 2013.5.31Agilent 1260 HPLC 工作原理及簡(jiǎn)單操作工作原理及簡(jiǎn)單操作 培訓(xùn)目的： 1.了解HPLC各模塊的原理； 2. 掌握HPLC各模塊日常維護(hù)的要點(diǎn)； 3. 掌握開(kāi)機(jī)，關(guān)機(jī)。Agilent 1260 HPLC 工作原理及簡(jiǎn)單操作工作原理及簡(jiǎn)單操作 內(nèi)容： 一、 HPLC各模塊的原理及維護(hù)； 二、開(kāi)機(jī)/關(guān)機(jī)操作； 一一 、 HPLC各模塊工作原理及維護(hù)各模塊工作原理及維護(hù) HPLC： 高效液相色譜儀（High Performances Liquid Chromatography

2、）。 由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾個(gè)部分組成。 工作原理：工作時(shí)儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)樣品進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱（固定相）內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過(guò)程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過(guò)檢測(cè)器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)。關(guān)于溶劑關(guān)于溶劑HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)所有溶劑應(yīng)為HPLC級(jí)，水應(yīng)為二次超純水；所有溶劑應(yīng)經(jīng)過(guò)過(guò)濾。過(guò)濾水應(yīng)使用水相濾膜，過(guò)濾有機(jī)相應(yīng)使用有機(jī)相濾膜，不能混用。每一次

3、濾膜只能用一次，不能重復(fù)使用；如果沒(méi)有在線(xiàn)脫氣機(jī)，所有溶劑應(yīng)經(jīng)過(guò)超聲脫氣；水易滋生藻類(lèi)，避免直接照射，過(guò)濾水最好使用不要超過(guò)兩天；如果條件允許可向溶劑中加入0.001-0.0001M的疊氮化鈉；注意溶劑的相容性，避免使用不相容的溶劑；避免使用強(qiáng)酸、強(qiáng)堿或有機(jī)氯等腐蝕性溶劑；在溶劑瓶中的溶劑過(guò)濾頭可能會(huì)堵塞，必要時(shí)小心拿下用強(qiáng)酸（35%硝酸）浸泡時(shí)，用水沖洗，但不要使用超聲處理。關(guān)于在線(xiàn)真空脫氣機(jī)關(guān)于在線(xiàn)真空脫氣機(jī)在線(xiàn)真空脫氣機(jī)的管路容量為12ml，壓力范圍為110Torr-190Torr。為保證脫氣機(jī)的良好使用性能，在下述情況下需要用注射器抽洗脫氣機(jī)管路，每個(gè)通道使用不低于30ml的異丙醇。1

4、，新的脫氣機(jī)或新的管路；2，更換了溶劑，尤其是緩沖鹽與有機(jī)相之間、兩個(gè)不相容流動(dòng)相之間的互換時(shí)；3，輸液泵關(guān)閉了一段時(shí)間，或使用揮發(fā)性溶劑混合物。HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)關(guān)于泵：（四元泵）關(guān)于泵：（四元泵）HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)關(guān)于泵（泵頭組件）關(guān)于泵（泵頭組件）出口球閥BOV清洗閥Purge Valve柱塞桿Piston主動(dòng)輸入閥AVHPLC各模塊的工作原理及維護(hù)活塞外框架Seal Wash組件泵頭密封墊泵腔更換過(guò)濾白頭更換過(guò)濾白頭在清洗閥中的過(guò)濾白頭需要更換，在清洗狀態(tài)下，設(shè)置流量為5ml/min，此時(shí)系統(tǒng)壓力如果超過(guò)10bar，則需更換過(guò)濾白頭。更換步驟：1，關(guān)閉泵電源；2

5、，用扳手去掉通往進(jìn)樣器上的毛細(xì)管，拔掉廢液管；3，用專(zhuān)用扳手小心把清洗閥卸下來(lái)；4，輕輕去掉聚四氟乙烯密封墊和金密封墊，將過(guò)濾白頭拿出；5，更換新的過(guò)濾白頭，裝上聚四氟乙烯密封墊和金密封墊；6，裝上清洗閥；7，連接管路。過(guò)濾白頭聚四氟乙烯密封墊金密封墊清洗閥PurgeValveHPLC各模塊的工作原理及維護(hù)更換過(guò)濾白頭更換過(guò)濾白頭1，去掉毛細(xì)管，廢液管2，卸掉清洗閥3，更換過(guò)濾白頭4，更換白頭，裝好清洗閥HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)泵的注意事項(xiàng)泵的注意事項(xiàng)1，溶劑的過(guò)濾、脫氣；2，避免使用腐蝕性溶劑；3，在滿(mǎn)足分析的前提下，盡可能使用較低的流速較低的系統(tǒng)壓力。4，更換過(guò)濾白頭；5，考慮溶劑的

6、相容性；6，盡可能使用新鮮的水；7，使用0.01M以上濃度的緩沖溶液要選配柱塞清洗組件，清洗液不能干涸。8，使用正相溶劑比如環(huán)己烷時(shí)，建議使用聚乙烯密封墊，部件號(hào)為0905-1420，在0200Bar下使用聚乙烯密封墊比標(biāo)準(zhǔn)密封墊更耐磨損。四元泵： 四元泵多通道比例閥MCGV使用時(shí)注意，緩沖溶液要放在D通道，以避免鹽顆粒析出。建議A通道：水；B、C通道：有機(jī)溶劑；D通道：緩沖溶液。HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)樣品準(zhǔn)備樣品完全溶解在流動(dòng)相中樣品沒(méi)有完全溶解過(guò)濾樣品，確保樣品中不含固體顆粒用流動(dòng)相或比流動(dòng)相弱的溶劑溶解樣品進(jìn)樣量盡量小關(guān)于進(jìn)樣器HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)關(guān)于進(jìn)樣器準(zhǔn)備位置準(zhǔn)備

7、位置調(diào)用樣品瓶調(diào)用樣品瓶吸樣品吸樣品進(jìn)樣和運(yùn)行位置進(jìn)樣和運(yùn)行位置標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)樣過(guò)程標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)樣過(guò)程 .HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)自動(dòng)進(jìn)樣器自動(dòng)進(jìn)樣器樣品要干凈、經(jīng)過(guò)過(guò)濾。樣品要干凈、經(jīng)過(guò)過(guò)濾。l洗針：把樣品殘留降低到最洗針：把樣品殘留降低到最小限度，可降低進(jìn)樣的記憶小限度，可降低進(jìn)樣的記憶效應(yīng)，洗針瓶最好不要加瓶效應(yīng)，洗針瓶最好不要加瓶墊。墊。l多次吸液多次吸液用于進(jìn)樣量大于用于進(jìn)樣量大于100100l lHPLC各模塊的工作原理及維護(hù)關(guān)于恒溫柱箱關(guān)于恒溫柱箱控制范圍：最高80C，低溫低于室溫10C。預(yù)熱塊體積左面為3ul，右面為6ul，除非有特殊要求，左右溫度應(yīng)保持一致。一定要關(guān)閉前面板。HPLC

8、各模塊的工作原理及維護(hù)檢測(cè)器檢測(cè)器DADDAD (Diode Array Detector)二極管陣列檢測(cè)器，是以光電二極管陣列作為檢測(cè)元件的UV-VIS檢測(cè)器.DAD的光源氘燈有一定的半衰期，一般為1000小時(shí)左右，所以在沒(méi)有樣品分析任務(wù)時(shí)要關(guān)閉氘燈，以延長(zhǎng)氘燈的使用壽命,但是也不要頻繁的開(kāi)關(guān),這樣也會(huì)影響壽命。同時(shí)，打開(kāi)燈需要預(yù)熱10min 左右，燈使用時(shí)間越長(zhǎng)，預(yù)熱的時(shí)間也要越長(zhǎng)。流通池污染后，會(huì)造成靈敏度下降、噪聲加大，應(yīng)避免臟的樣品進(jìn)入流通池。定期使用異丙醇沖洗系統(tǒng)對(duì)保持流通池性能有一定好處。HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)檢測(cè)器檢測(cè)器DADHPLC各模塊的工作原理及維護(hù)檢測(cè)器檢測(cè)器F

9、LDHPLC各模塊的工作原理及維護(hù)FLD(Fluorescence Detector) 熒光檢測(cè)器：是利用某些溶質(zhì)在受到紫外光激發(fā)后，能發(fā)射可見(jiàn)光（熒光）的性質(zhì)來(lái)檢測(cè)的。FLD是一款具有高度靈敏度和高度選擇性的檢測(cè)器。其激發(fā)光源是氙燈，此燈不需要預(yù)熱。其流通池和DAD的一樣，也要定期用異丙醇沖洗，以保證性能。檢測(cè)器檢測(cè)器RID示差檢測(cè)器HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)開(kāi)機(jī)操作：1，打開(kāi)計(jì)算機(jī)。2，自上而下打開(kāi)LC各模塊的電源，等待儀器自檢完畢，1-2min。3，雙擊桌面上“Instrument 1 Online”圖標(biāo)，進(jìn)入化學(xué)工作站,在工作站打開(kāi)各工作模塊。4，打開(kāi)Seal Wash清洗液開(kāi)關(guān)，

10、清洗各管路(510min)。5, 擰上清洗閥，將流量慢慢設(shè)為所需流速，平衡30min即可以進(jìn)樣樣。關(guān)機(jī)操作：1，如果使用了緩沖溶液流動(dòng)相應(yīng)先用水（510%甲醇）沖洗系統(tǒng)30min。2，用純有機(jī)相沖洗系統(tǒng)30min。3，在工作站上關(guān)閉各個(gè)模塊。4，退出工作站，關(guān)閉計(jì)算機(jī)。5，自下而上關(guān)閉LC各個(gè)模塊的電源。二、二、 開(kāi)機(jī)開(kāi)機(jī)/關(guān)機(jī)操作關(guān)機(jī)操作指示燈狀態(tài)指示燈狀態(tài)每個(gè)部件接通電源后LED燈顯示綠色關(guān)機(jī) power off準(zhǔn)備進(jìn)樣 power on沒(méi)準(zhǔn)備好Not Ready運(yùn)行Run故障Error駐留ResidentBlink儀器LED狀態(tài)顯示電源開(kāi)關(guān)顯示黑Black黑Black黃Yellow綠Gr

11、een紅Red黃閃爍Yellow blinking6種LED儀器狀態(tài)：開(kāi)機(jī)/關(guān)機(jī)操作逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)打開(kāi)清洗閥，清洗閥打開(kāi)時(shí)，液體從廢液管中流出，為清洗狀態(tài)。更換溶劑后，打開(kāi)清洗閥，設(shè)置流量5ml/min，沖洗5-10 min.順時(shí)針旋緊清洗閥為關(guān)閉狀態(tài),此時(shí)流動(dòng)相由毛細(xì)管流向進(jìn)樣器.逆時(shí)針打開(kāi)清洗閥順時(shí)針關(guān)閉清洗閥毛細(xì)管出口,流向進(jìn)樣器廢液管,清洗閥打開(kāi)時(shí)溶劑由此流向廢液瓶.開(kāi)機(jī)/關(guān)機(jī)操作清洗閥清洗閥Purge Valve每次用過(guò)儀器后必須做每次用過(guò)儀器后必須做! !整臺(tái)液相色譜儀的維護(hù)整臺(tái)液相色譜儀的維護(hù)1. 在使用過(guò)含鹽緩沖液后必須清水沖洗泵15分鐘，此時(shí) 必須打開(kāi)排放閥，不能使廢液進(jìn)入色譜柱

12、。2. 關(guān)上排放閥，用90%+10%的水、甲醇溶液沖洗整個(gè)系 統(tǒng)，時(shí)間為1520分鐘，流量1ml/min。本步驟主要是沖 洗干凈系統(tǒng)內(nèi)其他含鹽的部位。3. 用純的強(qiáng)溶劑沖洗整個(gè)系統(tǒng)，時(shí)間為1小時(shí)，流量為 1ml/min。本步驟主要是保護(hù)色譜柱。4. 如果未使用緩沖液，上面1、2兩步驟可免去，直接用 純的強(qiáng)溶劑沖洗整個(gè)系統(tǒng)，時(shí)間為1小時(shí)，流量為1ml/min。5.如果較長(zhǎng)時(shí)間不使用色譜儀，所有管道先用純水沖洗，再用甲醇沖洗，讓所用管路都保存在甲醇中，防止長(zhǎng)菌。開(kāi)/關(guān)機(jī)操作色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的使用和保養(yǎng)內(nèi)容： 一、 正確使用色譜柱； 二、色譜柱的日常清洗和存放。色譜柱的選擇色譜柱的選擇 非極

13、性或極性較小的樣品可用一般的非極性或極性較小的樣品可用一般的C18C18柱柱 酸堿性的化合物建議選用填料經(jīng)封尾鈍化酸堿性的化合物建議選用填料經(jīng)封尾鈍化過(guò)的過(guò)的C18C18柱，柱，PHPH范圍范圍2-92-9（1212） 糖類(lèi)，氨基酸，有機(jī)酸，多環(huán)芳烴，糖類(lèi)，氨基酸，有機(jī)酸，多環(huán)芳烴，GPCGPC有有專(zhuān)用柱專(zhuān)用柱 超快速柱子超快速柱子- -填料粒度填料粒度 2 2m m色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的使用和保養(yǎng)鍵合相色譜柱鍵合相色譜柱以硅膠為基質(zhì)，通過(guò)化學(xué)鍵合方式把碳十八、碳八、胺基等基團(tuán)聯(lián)在基質(zhì)上作為固定相。這種固定相要占所有柱填料的60-70%優(yōu)點(diǎn) 固定相穩(wěn)定，不易流失 應(yīng)用廣泛，可使用多種溶劑

14、消除硅羥基的不良影響缺點(diǎn) pH值不能小于2或大于8 同樣填料，各種牌號(hào)色譜柱不盡相同色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的使用和保養(yǎng)反相反相HPLC柱（柱（C18）的性能）的性能常規(guī)C18填料的穩(wěn)定性 硅膠基質(zhì)填料 pH范圍：2-8 pH值大于7時(shí)鍵合相粉碎或溶解 pH值小于2時(shí)鍵合相的化學(xué)鍵斷裂 經(jīng)常用緩沖液 固定相降解填料新的鍵合技術(shù) - PH范圍 2-12 - 穩(wěn)定性好，使用壽命長(zhǎng)1 2 3 4 5 6 7 8 9 pH硅膠的溶解曲線(xiàn)色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的使用和保養(yǎng)良好的色譜實(shí)驗(yàn)習(xí)慣良好的色譜實(shí)驗(yàn)習(xí)慣 拿到一根新色譜柱時(shí)，先測(cè)柱效 保留在新色譜柱上測(cè)得的色譜圖，并記錄條件 給新色譜柱建立一個(gè)檔案

15、 定期檢測(cè)柱效色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的申購(gòu)色譜柱的申購(gòu)色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的領(lǐng)用及歸還色譜柱的領(lǐng)用及歸還 分析室所有色譜柱按照類(lèi)型進(jìn)行編號(hào)登記造冊(cè)，建立色譜柱檔案，注明采購(gòu)時(shí)間及使用項(xiàng)目名稱(chēng)。 領(lǐng)用新的色譜柱時(shí)由使用人按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行沖洗，按要求測(cè)柱效，并做好記錄。 分析室所有色譜柱統(tǒng)一放置，取出及歸還色譜柱時(shí)要做好登記。 試驗(yàn)結(jié)束后，使用人要正確沖洗色譜柱，同時(shí)記錄好與試驗(yàn)、色譜柱相關(guān)的信息；不影響自己及其他人的再次使用 如發(fā)現(xiàn)色譜柱壓力高、峰型差等異常問(wèn)題，使用人要及時(shí)沖洗并按照說(shuō)明書(shū)檢測(cè)柱效，遇柱效差或分離差的色譜柱附上柱效檢測(cè)報(bào)告，報(bào)室主任，同意

16、后報(bào)廢，統(tǒng)一放置。色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的使用及操作色譜柱的使用及操作 流動(dòng)相的轉(zhuǎn)換 特別是GPC柱 流速(壓力)的變化幅度 溫度的變化幅度 專(zhuān)用色譜柱 樣品及溶劑的要求記記住住拿拿到到一一根根從從未未用用過(guò)過(guò)的的色色譜譜柱柱時(shí)時(shí) 一一定定要要先先看看其其使使用用說(shuō)說(shuō)明明！色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的保養(yǎng)（一）色譜柱的保養(yǎng)（一） 樣品方面 除去微粒及雜質(zhì) 了解樣品在流動(dòng)相中的溶解度 如樣品的溶劑不是流動(dòng)相，一定要用流動(dòng)相試溶解度，防止其在流動(dòng)相中析出 了解樣品與色譜柱的基質(zhì)/填料是否相互作用色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的使用和保養(yǎng)為什么溶劑和樣品要過(guò)濾為什么溶劑

17、和樣品要過(guò)濾?溶劑和樣品過(guò)濾非常重要，它會(huì)對(duì)色譜柱、儀器起到保護(hù)作用，消除溶劑和樣品過(guò)濾非常重要，它會(huì)對(duì)色譜柱、儀器起到保護(hù)作用，消除由于污染對(duì)分析結(jié)果的影響。由于污染對(duì)分析結(jié)果的影響。色譜柱：由于填料顆粒很細(xì)，色譜柱內(nèi)腔很小，溶劑和樣品中的細(xì)小色譜柱：由于填料顆粒很細(xì)，色譜柱內(nèi)腔很小，溶劑和樣品中的細(xì)小顆粒會(huì)使色譜柱和毛細(xì)管容易堵塞。顆粒會(huì)使色譜柱和毛細(xì)管容易堵塞。儀器：儀器：溶劑和樣品中的細(xì)小顆粒會(huì)增加進(jìn)樣閥的堵塞和磨損，同時(shí)也溶劑和樣品中的細(xì)小顆粒會(huì)增加進(jìn)樣閥的堵塞和磨損，同時(shí)也會(huì)增加泵頭內(nèi)的藍(lán)寶石活塞桿和活塞的磨損。會(huì)增加泵頭內(nèi)的藍(lán)寶石活塞桿和活塞的磨損。樣品過(guò)濾頭的類(lèi)型：樣品過(guò)濾頭的

18、類(lèi)型：30mm 內(nèi)徑：適用于大進(jìn)樣量的過(guò)濾，由內(nèi)徑：適用于大進(jìn)樣量的過(guò)濾，由0.22m 和和0.45m 兩種規(guī)格兩種規(guī)格,材料有纖維素材料有纖維素,醋酸纖維醋酸纖維,聚四氟乙烯。處理樣品體積少于聚四氟乙烯。處理樣品體積少于50l。13mm 內(nèi)徑：適用于范圍廣的過(guò)濾，由內(nèi)徑：適用于范圍廣的過(guò)濾，由0.22m 和和0.45m 兩種規(guī)格兩種規(guī)格,材材料為纖維素。料為纖維素。3mm 內(nèi)徑：適用于小進(jìn)樣量的過(guò)濾，由內(nèi)徑：適用于小進(jìn)樣量的過(guò)濾，由0.22m 和和0.45m 兩種規(guī)格。兩種規(guī)格。處理樣品體積為處理樣品體積為7l。色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的保養(yǎng)（二）色譜柱的保養(yǎng)（二） 流動(dòng)相

19、方面 除去微粒 純度的要求 超純水，梯度實(shí)驗(yàn)時(shí)水中有機(jī)雜質(zhì)含量要低（建議走空白檢驗(yàn)） 緩沖液的pH值，在填料的允許范圍內(nèi) 緩沖液（鹽）的濃度 溶劑：色譜純，并與填料相匹配 溶劑中的雜質(zhì)含量 注意溶劑的相容性，避免使用不相容的溶劑 流動(dòng)相對(duì)樣品的溶解度 有機(jī)溶劑或水的比例色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的使用和保養(yǎng)溶劑過(guò)濾溶劑過(guò)濾- -除去微粒除去微粒 不干凈的溶劑或在溶劑瓶中長(zhǎng)菌的溶劑會(huì)阻塞溶劑過(guò)濾器以及色譜柱。 遵從下列建議可以提高性能，延長(zhǎng)溶劑過(guò)濾器和色譜柱的壽命：p使用無(wú)菌溶劑瓶避免溶劑長(zhǎng)菌。p用濾膜過(guò)濾溶劑去除微生物。p每天更換或過(guò)濾溶劑。p避免溶劑瓶直接日照。p向溶劑中加入0.0001-0.

20、001M的疊氮化鈉。色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的使用和保養(yǎng)溶劑準(zhǔn)備：過(guò)濾溶劑準(zhǔn)備：過(guò)濾色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的使用和保養(yǎng)選擇合適的濾膜選擇合適的濾膜 聚四氟乙烯濾膜：適用于所有溶劑，酸和鹽，并無(wú)任何可溶物。 醋酸纖維濾膜：適用于水基溶劑，不適用于有機(jī)溶劑，推薦用于蛋白質(zhì)和其相關(guān)的樣品。 尼龍66濾膜：適用于絕大多數(shù)有機(jī)溶劑和水溶液，可用于強(qiáng)酸、70%乙醇、二氯甲烷、不適用于DMF二甲基甲酰胺 再生纖維素濾膜：具有蛋白質(zhì)吸收低，同樣適用于水溶性樣品和有機(jī)溶劑。 注意：1）每張濾膜只能用一次。 2）水相和有機(jī)相不要搞混。色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的使用和保養(yǎng)溶劑的相溶性溶劑的相溶性色譜柱的使用和保養(yǎng)

21、色譜柱的使用和保養(yǎng)溶劑信息溶劑信息 避免使用下列對(duì)不銹鋼有腐蝕性的溶劑：p 鹵化物堿金屬溶液和相應(yīng)的酸溶液。p 高濃度的無(wú)機(jī)酸例如：硝酸和硫酸。p 能夠形成鹵素自由基或酸的氯化試劑及其混合物。p 含有過(guò)氧化物的色譜級(jí)醚必須用氧化鋁干燥劑。p 在有機(jī)溶劑中的有機(jī)酸溶液。p 含有強(qiáng)絡(luò)合劑的溶液。p 四氯化碳和異丙醇或THF混合液。色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的使用和保養(yǎng)溶劑截止波長(zhǎng)溶劑截止波長(zhǎng)色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的使用和保養(yǎng)溶劑準(zhǔn)備：脫氣溶劑準(zhǔn)備：脫氣色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的使用和保養(yǎng)流動(dòng)相使用前為什么要脫氣？流動(dòng)相使用前為什么要脫氣？ 流動(dòng)相使用前必須進(jìn)行脫氣處理流動(dòng)相使用前必須進(jìn)行脫氣處理

22、，以除去，以除去其中溶解的氣體（如其中溶解的氣體（如O2），以防止在洗脫），以防止在洗脫過(guò)程中當(dāng)流動(dòng)相由色譜柱流至檢測(cè)器時(shí)，過(guò)程中當(dāng)流動(dòng)相由色譜柱流至檢測(cè)器時(shí)，因壓力降低而產(chǎn)生氣泡。氣泡會(huì)增加基線(xiàn)因壓力降低而產(chǎn)生氣泡。氣泡會(huì)增加基線(xiàn)的噪音，造成靈敏度下降，甚至無(wú)法分析的噪音，造成靈敏度下降，甚至無(wú)法分析。溶解的氧氣還會(huì)導(dǎo)致樣品中某些組份被。溶解的氧氣還會(huì)導(dǎo)致樣品中某些組份被氧化，柱中固定相發(fā)生降解而改變柱的分氧化，柱中固定相發(fā)生降解而改變柱的分離性能。若用離性能。若用FLD，可能會(huì)造成熒光猝滅，可能會(huì)造成熒光猝滅。色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的使用和保養(yǎng)典型的流速典型的流速色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱

23、的使用和保養(yǎng)色譜柱保護(hù)色譜柱保護(hù)色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱常見(jiàn)毛病色譜柱常見(jiàn)毛病 柱壓過(guò)高 多少才算高? 不同色譜柱有差異 不同系統(tǒng)有差異 不同溶劑有差異 柱效低 重復(fù)性差 不出峰，回收率低色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的使用和保養(yǎng)柱壓過(guò)高柱壓過(guò)高 為什么柱壓會(huì)過(guò)高 微粒堵塞 樣品 流動(dòng)相 密封墊 柱床膨脹 不可逆吸附 細(xì)菌生長(zhǎng)色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的使用和保養(yǎng)柱效低柱效低 為什么柱效低 色譜柱被污染 過(guò)濾片部分堵塞 樣品、流動(dòng)相或密封墊的細(xì)小顆粒造成的堵塞 色譜柱內(nèi)的死體積 流動(dòng)相pH值及組成不合適造成固定相流失 流速急劇變化造成固定相物理?yè)p壞 機(jī)械震動(dòng)造成固定相產(chǎn)生裂縫 柱床收

24、縮或干枯色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的使用和保養(yǎng)重復(fù)性差、回收率低重復(fù)性差、回收率低 實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性差 色譜柱被污染 流動(dòng)相pH值及組成不合適造成鍵合相流失 樣品溶劑不同或樣品本身不穩(wěn)定 回收率低，不出峰 “不可逆”吸附 固定相過(guò)強(qiáng)或流動(dòng)相過(guò)弱 非特異性吸附色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的使用和保養(yǎng)色譜柱的日常清洗色譜柱的日常清洗對(duì)所做的樣品要有充分的了解用對(duì)該樣品洗脫能力最強(qiáng)的流動(dòng)相清洗（如反相C18柱用100%甲醇或乙腈）硅膠柱的一般方法先用甲醇洗去極性雜質(zhì)，再用干燥的二氯甲烷、正庚烷100200ml依次活化鍵合相柱(烷基)的一般方法20倍柱體積的：甲醇-氯仿-甲醇-水依次沖洗 柱子尺寸 柱子體積 沖洗體積 150 x4.6mm 2.5ml 50ml 200 x4.6mm 3.3ml 65ml 250 x4.6mm 4.2ml 80ml*再有雜質(zhì)嚴(yán)格清洗： 20倍柱體積的水-相同體積的0.05mol/L硫酸，最后用流動(dòng)相