霉菌和酵母菌檢驗(yàn)

1、動(dòng)物檢疫檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫(kù)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)霉菌和酵母菌檢驗(yàn) 知識(shí)目標(biāo)：知識(shí)目標(biāo)： 理解霉菌和酵母菌檢驗(yàn)的意義。理解霉菌和酵母菌檢驗(yàn)的意義。 掌握霉菌和酵母菌測(cè)定與菌落總數(shù)測(cè)定的不同之處。掌握霉菌和酵母菌測(cè)定與菌落總數(shù)測(cè)定的不同之處。 掌握霉菌和酵母菌檢驗(yàn)方法。掌握霉菌和酵母菌檢驗(yàn)方法。 能力目標(biāo)：能力目標(biāo)： 會(huì)進(jìn)行霉菌和酵母菌檢驗(yàn)用培養(yǎng)基制備。會(huì)進(jìn)行霉菌和酵母菌檢驗(yàn)用培養(yǎng)基制備。 會(huì)進(jìn)行霉菌和酵母菌檢驗(yàn)并正確報(bào)告結(jié)果。會(huì)進(jìn)行霉菌和酵母菌檢驗(yàn)并正確報(bào)告結(jié)果。 動(dòng)物檢疫檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫(kù)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)霉菌和酵母菌檢驗(yàn) 霉菌和酵母在自然界分布很廣，種類繁多，與人類的日常霉菌和酵母在自然界分

2、布很廣，種類繁多，與人類的日常生活關(guān)系十分密切，是人類應(yīng)用最早的一類微生物，如釀生活關(guān)系十分密切，是人類應(yīng)用最早的一類微生物，如釀酒、面包發(fā)酵、制曲、做醬或醬油等，還可用來(lái)生產(chǎn)酶制酒、面包發(fā)酵、制曲、做醬或醬油等，還可用來(lái)生產(chǎn)酶制劑、有機(jī)酸、抗生素、維生素、酵母片及多種氨基酸。但劑、有機(jī)酸、抗生素、維生素、酵母片及多種氨基酸。但是也有些霉菌常造成糧食、水果、蔬菜及副產(chǎn)品腐敗變質(zhì)是也有些霉菌常造成糧食、水果、蔬菜及副產(chǎn)品腐敗變質(zhì)，少數(shù)霉菌能產(chǎn)生毒素引起食物中毒，許多霉菌還是動(dòng)植，少數(shù)霉菌能產(chǎn)生毒素引起食物中毒，許多霉菌還是動(dòng)植物的致病菌，酵母菌中的一些種類，也是發(fā)酵工業(yè)的有害物的致病菌，酵母菌中

3、的一些種類，也是發(fā)酵工業(yè)的有害菌。所以有些食品在進(jìn)行微生物學(xué)檢驗(yàn)時(shí)也要考慮霉菌和菌。所以有些食品在進(jìn)行微生物學(xué)檢驗(yàn)時(shí)也要考慮霉菌和酵母的存在。酵母的存在。 動(dòng)物檢疫檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫(kù)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)霉菌和酵母菌檢驗(yàn) 食品中污染霉菌和酵母的多少，以食品中污染霉菌和酵母的多少，以1g1g（或（或mLmL）食品中）食品中霉菌和酵母菌菌落個(gè)數(shù)來(lái)表示。霉菌和酵母菌菌落個(gè)數(shù)來(lái)表示。 檢驗(yàn)按檢驗(yàn)按食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)（GB4789.15-2010GB4789.15-2010）方法進(jìn)行。）方法進(jìn)行。動(dòng)物檢疫檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫(kù)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)

4、主要內(nèi)容主要內(nèi)容n 目的要求目的要求n 儀器及材料儀器及材料n 檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)方法n 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)動(dòng)物檢疫檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫(kù)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)一、目的要求一、目的要求n 了解霉菌和酵母在食品檢驗(yàn)中的意義了解霉菌和酵母在食品檢驗(yàn)中的意義n 掌握檢驗(yàn)的程序和步驟掌握檢驗(yàn)的程序和步驟n 會(huì)報(bào)告結(jié)果會(huì)報(bào)告結(jié)果動(dòng)物檢疫檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫(kù)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)二、儀器與材料二、儀器與材料n 培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：馬鈴薯馬鈴薯- -葡萄糖葡萄糖- -瓊脂培養(yǎng)基、孟加拉紅培養(yǎng)基。瓊脂培養(yǎng)基、孟加拉紅培養(yǎng)基。n 設(shè)備和材料：設(shè)備和材料：無(wú)菌工作臺(tái)、無(wú)菌工作臺(tái)、酒精燈酒精燈、稀釋液稀釋

5、液、滅菌吸管滅菌吸管、試試管架管架、恒溫、恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌器、無(wú)菌錐形瓶、均質(zhì)器、高壓蒸汽滅菌器、無(wú)菌錐形瓶、均質(zhì)器、振蕩器、天平、電爐、振蕩器、天平、電爐、顯微鏡、電子天平、無(wú)菌平皿顯微鏡、電子天平、無(wú)菌平皿等。等。動(dòng)物檢疫檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫(kù)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)三、檢驗(yàn)方法三、檢驗(yàn)方法培養(yǎng)菌落計(jì)數(shù)結(jié)果報(bào)告樣品的稀釋動(dòng)物檢疫檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫(kù)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)動(dòng)物檢疫檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫(kù)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)1.1.樣品的稀釋樣品的稀釋 固體和半固體樣品：稱取固體和半固體樣品：稱取 25g 25g 樣品至盛有樣品至盛有 225mL 2

6、25mL 滅菌蒸滅菌蒸餾水的錐形瓶中，充分振搖，即為餾水的錐形瓶中，充分振搖，即為 1:10 1:10 稀釋液?；蚍湃胂♂屢??；蚍湃胧⒂惺⒂?225mL 225mL 無(wú)菌蒸餾水的均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍無(wú)菌蒸餾水的均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打打2min2min，制成，制成 1:10 1:10 的樣品勻液。的樣品勻液。 液體樣品：以無(wú)菌吸管吸取液體樣品：以無(wú)菌吸管吸取 25mL 25mL 樣品至盛有樣品至盛有 225mL 225mL 無(wú)無(wú)菌蒸餾水的錐形瓶（可在瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠菌蒸餾水的錐形瓶（可在瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠）中，充分混勻，制成）中，充分混勻，制成 1:10 1:1

7、0 的樣品勻液。的樣品勻液。動(dòng)物檢疫檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫(kù)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)霉菌和酵母菌檢驗(yàn) 取取 1mL 1:10 1mL 1:10 稀釋液注入含有稀釋液注入含有 9mL 9mL 無(wú)菌水的試管中，另?yè)Q無(wú)菌水的試管中，另?yè)Q一支一支 1mL 1mL 無(wú)菌吸管反復(fù)吹吸，此液為無(wú)菌吸管反復(fù)吹吸，此液為 1:100 1:100 稀釋液。稀釋液。 按按 3 3上述操作程序，制備上述操作程序，制備 10 10 倍系列稀釋樣品勻液。每遞倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用增稀釋一次，換用 1 1 次次 1mL 1mL 無(wú)菌吸管。無(wú)菌吸管。 動(dòng)物檢疫檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫(kù)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)霉菌和酵母菌檢驗(yàn) 根

8、據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，選擇根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，選擇 2 2 個(gè)個(gè)3 3 個(gè)適宜稀釋度個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），的樣品勻液（液體樣品可包括原液）， 在進(jìn)行在進(jìn)行 10 10 倍遞增倍遞增稀釋的同時(shí)，每個(gè)稀釋度分別吸取稀釋的同時(shí)，每個(gè)稀釋度分別吸取 1mL 1mL 樣品勻液于樣品勻液于 2 2 個(gè)個(gè)無(wú)菌平皿內(nèi)。同時(shí)分別取無(wú)菌平皿內(nèi)。同時(shí)分別取 1mL 1mL 樣品稀釋液加入樣品稀釋液加入 2 2 個(gè)無(wú)菌個(gè)無(wú)菌平皿作空白對(duì)照。平皿作空白對(duì)照。 動(dòng)物檢疫檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫(kù)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)霉菌和酵母菌檢驗(yàn) 及時(shí)將及時(shí)將 15mL15mL20mL 20mL 冷卻至冷卻至 4

9、646的馬鈴薯的馬鈴薯- -葡萄糖葡萄糖- -瓊脂或瓊脂或孟加拉紅培養(yǎng)基（可放置于孟加拉紅培養(yǎng)基（可放置于464611恒溫水浴箱中保溫）恒溫水浴箱中保溫）傾注平皿，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。傾注平皿，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。 動(dòng)物檢疫檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫(kù)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)2.2.培養(yǎng)培養(yǎng) 待瓊脂凝固后，將平板倒置，待瓊脂凝固后，將平板倒置，282811培養(yǎng)培養(yǎng) 5d5d，觀察并記錄。，觀察并記錄。 動(dòng)物檢疫檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫(kù)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)霉菌和酵母菌檢驗(yàn) 肉眼觀察，必要時(shí)可用放大鏡，記錄各稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的肉眼觀察，必要時(shí)可用放大鏡，記錄各稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的霉菌和酵母數(shù)。以菌落

10、形成單位（霉菌和酵母數(shù)。以菌落形成單位（colony forming unitscolony forming units，CFUCFU）表示。）表示。 選取菌落數(shù)在選取菌落數(shù)在 10 CFU10 CFU150 CFU 150 CFU 的平板，根據(jù)菌落形態(tài)的平板，根據(jù)菌落形態(tài)分別計(jì)數(shù)霉菌和酵母數(shù)。霉菌蔓延生長(zhǎng)覆蓋整個(gè)平板的可分別計(jì)數(shù)霉菌和酵母數(shù)。霉菌蔓延生長(zhǎng)覆蓋整個(gè)平板的可記錄為多不可計(jì)。菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。記錄為多不可計(jì)。菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。 3.3.菌落計(jì)數(shù)菌落計(jì)數(shù)動(dòng)物檢疫檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫(kù)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)動(dòng)物檢疫檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫(kù)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)

11、霉菌和酵母菌檢驗(yàn)動(dòng)物檢疫檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫(kù)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)計(jì)算。數(shù)計(jì)算。 （1 1）若所有平板上菌落數(shù)均大于）若所有平板上菌落數(shù)均大于 150 CFU150 CFU，則對(duì)稀釋度最高，則對(duì)稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，其他平板可記錄為多不可計(jì)，結(jié)果按平均的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，其他平板可記錄為多不可計(jì)，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。 （2 2）若所有平板上菌落數(shù)均小于）若所有平板上菌落數(shù)均小于 10 CFU10 CFU，則應(yīng)按稀釋度最，則應(yīng)按稀釋度

12、最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。 （3 3）若所有稀釋度平板均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則以小于）若所有稀釋度平板均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則以小于1 1乘以最低乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算；如為原液，則以小于稀釋倍數(shù)計(jì)算；如為原液，則以小于1 1計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)。 4.4.結(jié)果與報(bào)告結(jié)果與報(bào)告動(dòng)物檢疫檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫(kù)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)報(bào)告報(bào)告 （1 1）菌落數(shù)在）菌落數(shù)在 100 100 以內(nèi)時(shí)，按以內(nèi)時(shí)，按“四舍五入四舍五入”原則修約，采用原則修約，采用兩位有效數(shù)字報(bào)告。兩位有效數(shù)字報(bào)告。 （2 2）菌落數(shù)大于或等于）菌落數(shù)大于或等于100100時(shí)，前時(shí)，前3 3位數(shù)字采用位

13、數(shù)字采用“四舍五入四舍五入”原原則修約后，取前則修約后，取前2 2位數(shù)字，后面用位數(shù)字，后面用0 0代替位數(shù)來(lái)表示結(jié)果；也代替位數(shù)來(lái)表示結(jié)果；也可用可用1010的指數(shù)形式來(lái)表示，此時(shí)也按的指數(shù)形式來(lái)表示，此時(shí)也按“四舍五入四舍五入”原則修約原則修約，采用兩位有效數(shù)字。，采用兩位有效數(shù)字。 （3 3）稱重取樣以）稱重取樣以 CFU/g CFU/g 為單位報(bào)告，體積取樣以為單位報(bào)告，體積取樣以 CFU/CFU/mLmL 為為單位報(bào)告，報(bào)告或分別報(bào)告霉菌和單位報(bào)告，報(bào)告或分別報(bào)告霉菌和/ /或酵母數(shù)?；蚪湍笖?shù)。 4.4.結(jié)果與報(bào)告結(jié)果與報(bào)告動(dòng)物檢疫檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫(kù)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)霉菌和酵母菌檢

14、驗(yàn)酵母菌在馬鈴薯葡萄糖瓊脂上典型特征乳白色菌落，有突起。霉菌和酵母菌在孟加拉紅瓊脂上菌落特征動(dòng)物檢疫檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫(kù)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)霉菌在孟加拉紅培養(yǎng)基上特征為灰色菌落，有黑色孢子酵母菌在孟加拉紅培養(yǎng)基上典型特征動(dòng)物檢疫檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫(kù)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)霉菌和酵母菌檢驗(yàn)細(xì)菌菌落計(jì)數(shù)與霉菌及酵母菌落計(jì)數(shù)的區(qū)別細(xì)菌菌落計(jì)數(shù)與霉菌及酵母菌落計(jì)數(shù)的區(qū)別 項(xiàng)目項(xiàng)目不同點(diǎn)不同點(diǎn)細(xì)菌菌落計(jì)數(shù)霉菌及酵母菌菌落計(jì)數(shù)稀釋液稀釋液滅菌磷酸鹽緩沖液或生理鹽水滅菌蒸餾水培養(yǎng)基培養(yǎng)基平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂、孟加拉紅培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度培養(yǎng)溫度361281培養(yǎng)時(shí)間培養(yǎng)時(shí)間24h48h5d 平板計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)30300CFU10150CFU菌落形態(tài)菌落形態(tài)小