多肽切割簡介

1、The Peptide Quality Standard多肽切割簡介 The Peptide Quality Standard切割流程圖切割流程圖準(zhǔn)備工作準(zhǔn)備工作切割液的選擇切割液的選擇切割液的配制切割液的配制儀器設(shè)備的調(diào)試儀器設(shè)備的調(diào)試加入切割液并于搖床震蕩加入切割液并于搖床震蕩抽濾并收集濾液抽濾并收集濾液沉淀、離心、洗滌沉淀、離心、洗滌得粗品肽抽干送得粗品肽抽干送QCThe Peptide Quality Standard切割前準(zhǔn)備工作切割前準(zhǔn)備工作n文件和樹脂一一對應(yīng)檢查n樹脂稱重n切割液配制n切割液低溫儲存:(-20) E液不得超過一周 F液不得超過一個月The Peptide Qua

2、lity Standard切割液的選擇切割液的選擇n根據(jù)肽的序列上氨基酸的不同，選用不同根據(jù)肽的序列上氨基酸的不同，選用不同的切割液，除去肽鏈上氨基酸的保護(hù)基團(tuán)。的切割液，除去肽鏈上氨基酸的保護(hù)基團(tuán)。含有含有Trp，Met或或Cys(Trt)YESNOE液液F液液The Peptide Quality Standard切割液的配比切割液的配比nE E液：液：TFA:TFA:茴香硫醚茴香硫醚: :苯酚苯酚:EDT:EDT:水水 =87.5:5:2.5:2.5:2.5 =87.5:5:2.5:2.5:2.5nF F液：液：TFA:TIS:TFA:TIS:水水=95:2.5:2.5=95:2.5:2

3、.5* *注：注：苯酚的體積是指在熔點(diǎn)下熔融的體積，其他苯酚的體積是指在熔點(diǎn)下熔融的體積，其他液體為常溫下的體積。液體為常溫下的體積。還原切割液：還原切割液：10ml的的E液加液加100-200mg的的NH4I,0.5ml的的DMS,搖勻，靜置，用上清液！搖勻，靜置，用上清液！The Peptide Quality Standard切割液用量切割液用量n一般按一般按10-15ml/g 10-15ml/g 樹脂加入切割液。樹脂加入切割液。n如如0.2mmol0.2mmol的合成量，樹脂的取代度為的合成量，樹脂的取代度為0.50.5左右，這樣合成前空白樹脂重為左右，這樣合成前空白樹脂重為0.40.

4、4克，克，加上合成后由肽鏈引起的增重加上合成后由肽鏈引起的增重(15(15肽肽) )，樹，樹脂大約脂大約0.7g0.7g，因此，需要加入大約，因此，需要加入大約8ml8ml切切割液。割液。The Peptide Quality Standard切割時間切割時間n切割時間：是指向樹脂中加入切割液開始，到用切割時間：是指向樹脂中加入切割液開始，到用乙醚沉淀濾液為止這段時間。乙醚沉淀濾液為止這段時間。 大部分大部分linkerlinker用用TFATFA處理處理2.5h2.5h已經(jīng)足夠，但是要完全去除一些側(cè)鏈已經(jīng)足夠，但是要完全去除一些側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)則須要延長一些時間。保護(hù)基團(tuán)則須要延長一些時間。n切

5、割時間對肽鏈的影響：切割時間太長，肽鏈容切割時間對肽鏈的影響：切割時間太長，肽鏈容易斷裂，粗品中的產(chǎn)品含量就少；切割時間太短，易斷裂，粗品中的產(chǎn)品含量就少；切割時間太短，樹脂上的肽鏈沒能完全切下來，或者肽鏈上氨基樹脂上的肽鏈沒能完全切下來，或者肽鏈上氨基酸側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)不能完全除去。對于酸側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)不能完全除去。對于3030個以上的個以上的肽來說，適當(dāng)延長時間。對于切割不完全的樹脂肽來說，適當(dāng)延長時間。對于切割不完全的樹脂和粗品肽可依據(jù)已得粗品的質(zhì)量、色譜和質(zhì)譜，和粗品肽可依據(jù)已得粗品的質(zhì)量、色譜和質(zhì)譜，考慮重切?？紤]重切。 The Peptide Quality Standard減壓過濾減壓

6、過濾n用切割液將附著在切割管上的樹脂洗下來，用切割液將附著在切割管上的樹脂洗下來，收集濾液。收集濾液。*注意：標(biāo)簽號碼對應(yīng)。包括樹脂切割管、切注意：標(biāo)簽號碼對應(yīng)。包括樹脂切割管、切割液收集管和砂心漏斗上的標(biāo)簽號碼一一割液收集管和砂心漏斗上的標(biāo)簽號碼一一對應(yīng)。對應(yīng)。The Peptide Quality Standard沉淀、離心、洗滌沉淀、離心、洗滌n根據(jù)大多數(shù)肽在非溶劑中不溶的特性及溫根據(jù)大多數(shù)肽在非溶劑中不溶的特性及溫度越低，溶解度越低的性質(zhì)，我們用冷乙度越低，溶解度越低的性質(zhì)，我們用冷乙醚來沉淀溶解在切割液中的多肽。醚來沉淀溶解在切割液中的多肽。n操作時應(yīng)注意：操作時應(yīng)注意：n1 1）、

7、看收集管中濾液的量。一般少于）、看收集管中濾液的量。一般少于15ml15ml的，的， 用一個離心管離心即可；多于用一個離心管離心即可；多于15ml15ml的要用兩個離的要用兩個離心管，以洗滌完全。心管，以洗滌完全。The Peptide Quality Standard 2 2）、邊倒邊用乙醚沖，使在乙醚中析出的肽盡量分散。如出現(xiàn)結(jié)塊、）、邊倒邊用乙醚沖，使在乙醚中析出的肽盡量分散。如出現(xiàn)結(jié)塊、抱團(tuán)等現(xiàn)象，應(yīng)用干凈的玻璃棒將其打散。抱團(tuán)等現(xiàn)象，應(yīng)用干凈的玻璃棒將其打散。 如用玻璃棒還不能將其打散或粘在玻璃棒上，則需將其用如用玻璃棒還不能將其打散或粘在玻璃棒上，則需將其用TFATFA溶解后再溶解

8、后再用乙醚沉淀。用乙醚沉淀。 3 3）、離心時，離心機(jī)的轉(zhuǎn)速為）、離心時，離心機(jī)的轉(zhuǎn)速為3500Rad/Min3500Rad/Min， 離心時間為離心時間為2min2min，確，確保肽能完全沉淀下來。保肽能完全沉淀下來。 4) 4) 如序列為短肽或者序列中疏水性氨基酸較多如序列為短肽或者序列中疏水性氨基酸較多, ,用乙醚沉淀時需加入用乙醚沉淀時需加入一定量的石油醚一定量的石油醚, ,再離心。如還不能沉淀下來，則需將上清液旋蒸。再離心。如還不能沉淀下來，則需將上清液旋蒸。The Peptide Quality Standard得粗品肽抽干送得粗品肽抽干送QCn將離心好的粗品肽于真空干燥器中，抽真將離心好的粗品肽于真空干燥器中，抽真空空12小時以上，送小時以上，送QC檢測并復(fù)核稱量粗品檢測并復(fù)核稱量粗品重量。重量。The Peptide Quality Standard安全防護(hù)安全防護(hù)n在切割操作中一