影響分離的因素與操作條件選擇

1、21:11:01第第第第第第七七七七七七章章章章章章高效液相色譜高效液相色譜高效液相色譜高效液相色譜高效液相色譜高效液相色譜分析法分析法分析法分析法分析法分析法7.4.1 影響分離的因素影響分離的因素7.4.2 分離類型的選擇分離類型的選擇7.4.3 液相色譜的應(yīng)用液相色譜的應(yīng)用7.4.4 制備制備型型液相色譜液相色譜第四節(jié)第四節(jié)第四節(jié)第四節(jié)第四節(jié)第四節(jié)影響分離的因素與操影響分離的因素與操影響分離的因素與操影響分離的因素與操影響分離的因素與操影響分離的因素與操作條件的選擇作條件的選擇作條件的選擇作條件的選擇作條件的選擇作條件的選擇High performance liquid chromato

2、graph, HPLC Factors influenced separation and choice of operation condition21:11:027.4.17.4.17.4.1 影響分離的因素影響分離的因素影響分離的因素影響分離的因素影響分離的因素影響分離的因素1. 1. 影響分離的因素與提高柱效的途徑影響分離的因素與提高柱效的途徑 液體的擴(kuò)散系數(shù)僅為氣體的萬(wàn)分之一，則在高效液相色譜中,速率方程中的分子擴(kuò)散項(xiàng)B/u較小，可忽略不計(jì)，即： H = A + C u 液體的粘度比氣體大一百倍，密度為氣體的一千倍，故降低傳質(zhì)阻力是提高柱效主要途徑。粒度較大時(shí)的LC曲線。21:11:

3、02 由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。 液相色譜中，不可能通過(guò)增加柱溫來(lái)改善傳質(zhì)。分離過(guò)程需要保持恒溫。 改變淋洗液組成、極性是改善分離的最直接的因素。粒度較大時(shí)的LC曲線。粒度較小時(shí)的LC曲線。21:11:02 2. 2. 2. 2. 2. 2.流速流速流速流速流速流速 流速是調(diào)整分離度和出峰時(shí)間的重要可選擇參數(shù)。 3.3.固定相及分離柱固定相及分離柱 氣相色譜中的固定液原則上都可以用于液相色譜，其選用原則與氣相色譜一樣。但在高效液相色譜中，分離柱的制備是一項(xiàng)技術(shù)要求非常高的工作，一般很少自行制備。21:11:027.4.2 7.4.2 7.4.2 分離類型選擇分離類型選擇分離類型選擇

4、分離類型選擇分離類型選擇分離類型選擇21:11:027.4.3 7.4.3 7.4.3 HPLCHPLCHPLC的的的的的的應(yīng)用應(yīng)用應(yīng)用應(yīng)用應(yīng)用應(yīng)用 1. 1. 環(huán)境中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量分析環(huán)境中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量分析 可對(duì)水果、蔬菜中的農(nóng)藥殘留量進(jìn)行分析。 固定相：薄殼型硅膠(37 50m) 流動(dòng)相：正己烷 流 速：1.5 mL/min 色譜柱：50cm2.5mm(內(nèi)徑) 檢測(cè)器：差示折光檢測(cè)器21:11:022. 2. 2. 2. 2. 2. 稠環(huán)芳烴的分析稠環(huán)芳烴的分析稠環(huán)芳烴的分析稠環(huán)芳烴的分析稠環(huán)芳烴的分析稠環(huán)芳烴的分析 稠環(huán)芳烴多為致癌物質(zhì)。 固定相：十八烷基硅烷化鍵合相 流動(dòng)相：20

5、%甲醇-水 100%甲醇 線性梯度淋洗，2%/min 流 速：1mL/min 柱 溫：50 C 柱 壓：70 104 Pa 檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器21:11:023. 3. 3. 3. 3. 3. 血漿分析血漿分析血漿分析血漿分析血漿分析血漿分析21:11:037.4.4 7.4.4 7.4.4 制備型液相色譜制備型液相色譜制備型液相色譜制備型液相色譜制備型液相色譜制備型液相色譜 獲得高純物質(zhì)（色譜純）的有效方法。 半制備柱（內(nèi)徑8mm，長(zhǎng)度15 30cm），一次制備量0.1mg。1.1.色譜柱的柱容量（柱負(fù)荷）色譜柱的柱容量（柱負(fù)荷） 對(duì)分析柱：不影響柱效時(shí)的最大進(jìn)樣量； 對(duì)制備柱：不影響收集物

6、純度時(shí)的最大進(jìn)樣量； 超載：進(jìn)樣量超過(guò)柱容量。柱效迅速下降，峰變寬。 超載可提高制備效率，以柱效下降一半或容量因子k降低10%為宜。21:11:032. 2. 2. 2. 2. 2. 液相制備色譜的方法液相制備色譜的方法液相制備色譜的方法液相制備色譜的方法液相制備色譜的方法液相制備色譜的方法（1）主峰可獲得良好分離；使用制備柱，超載提高效率。（2）兩主成分之間的小組分； 超載，分離切分使待分離組分成為主成分（富集）后，再次分離制備。 21:11:033. 3. 3. 3. 3. 3. 制備型液相色譜制備型液相色譜制備型液相色譜制備型液相色譜制備型液相色譜制備型液相色譜 制備型液相色譜制備型液相色譜：結(jié)構(gòu)與分析型一樣，但泵流量大、進(jìn)樣量大、采用制備柱；柱后餾分收集器。 制備柱制備柱：內(nèi)徑2050mm，柱長(zhǎng)50cm。21:11:03請(qǐng)選擇內(nèi)容請(qǐng)選擇內(nèi)容請(qǐng)選擇內(nèi)容請(qǐng)選擇內(nèi)容請(qǐng)選擇內(nèi)容請(qǐng)選擇內(nèi)容結(jié)束結(jié)束結(jié)束結(jié)束結(jié)束結(jié)束7.1 高效液相色譜的特點(diǎn)與儀器高效液相色