DNA的粗提取與鑒定

1、.DNA的粗提取與鑒定一實驗目的 1.初步掌握DNA粗提取和鑒定的方法。 2.觀察提取出來的DNA物質二 、實驗原理1.血細胞在蒸餾水中會浸透吸水過度而導致細胞膜和細胞核膜的破裂。利用此特性可得到含有DNA的溶液。2.DNA在氯化鈉溶液中的溶解度，是隨著氯化鈉的濃度的變化而改變的。DNA在物質的量濃度為0.14 molL的氯化鈉溶液中的溶解度最低，利用這一原理，可以使溶解在氯化鈉溶液中的DNA析出3.DNA不溶于酒精溶液，但細胞中的某些物質那么可以溶于酒精。利用這一原理，可以進一步提取出含雜質較少的DNA。4.DNA遇二苯胺沸水浴會變成藍色，因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。三、

2、方法與過程1.制雞血細胞液活雞鮮血經別離或沉淀獲得0.1g/mL檸檬酸鈉100mL活雞鮮血180mL             500mL燒杯中，玻棒攪拌，離心、別離或靜置沉淀。2.提取DNA.提取血細胞核物質：取血細胞5-10mL20mL蒸餾水，用玻棒沿一個方向快速攪拌紗布過濾：濾液中含DNA和其他核物質，如蛋白質。原理：血細胞的細胞膜、核摸吸水脹破，玻璃棒快速攪拌，機械加速血細胞破裂。.溶解核內的DNA      

3、  濾液2mol/L的NaCl溶液40mL，玻棒沿一個方向輕緩攪拌。.析出含DNA的粘稠物在上述溶液中緩緩參加蒸餾水，并沿一個方向輕輕攪拌，出現絲狀物；當絲狀物不在增加時，停頓加水此時NaCl溶液的濃度相當于0.14mol/L。 .濾取含DNA的粘稠物用多層紗布過濾，含DNA的粘稠物留在紗布上。 . DNA粘稠物的再溶解20mL2mol/L的NaCl溶液步驟含DNA的粘稠物           在20mL燒杯中輕緩攪拌3min，使盡可能多的DNA溶解在NaCl溶液。 .過濾含有DNA的

4、NaCl溶液：用放有兩層紗布的漏斗過濾步驟所得的溶液，濾液中含有DNA。.提取含有雜質較少的DNA：       步驟所得的濾液體積分數為95%的冷卻酒精50mL，用玻棒沿一個方向輕緩攪拌，溶液中析出出現乳白色絲狀物，用玻棒將絲狀物卷起，并用濾紙汲取上面的水分3.DNA的鑒定參加二苯胺試劑4mL，用玻棒攪拌使DNA溶解，沸水浴5min，觀察溶液是否出現淺藍色。四、實驗小結1.共有“三次過濾，兩次析出，七次攪拌2.參加“兩次蒸餾水，三次NaCl溶液，一次酒精五、實驗原理拓展介紹。1.DNA的釋放DNA主要在雞血細胞的細胞核內，正常情況下

5、不會釋放出來，蒸餾水對于雞血細胞是一種低滲液，水分可以大量進入血細胞，使之脹破，同時加上玻璃棒快速攪拌的機械作用，加速血細胞的細胞膜和核膜的破裂。但釋放出來的大量DNA與RNA、蛋白質結合在一起，即釋放的不是純潔的DNA，常稱為DNA核蛋白。2.DNA與蛋白質別離。在高濃度2mol/L的氯化鈉溶液中，核蛋白易溶解，析出DNA并溶解在高濃度的氯化鈉3DNA的析出與獲取。因為DNA在低濃度 0.14mol/L 的氯化鈉溶液中溶解度小，而蛋白質的在其中的溶解度大。所以在向含DNA的高濃度的氯化鈉溶液中參加大量蒸餾水稀釋氯化鈉溶液，從而使DNA溶解度下降，蛋白質溶解度增高。4.DNA的再溶解。用高濃度

6、2mol/L的氯化鈉溶液再溶解DNA粘稠物。5.DNA的沉淀和濃縮。對于除去了蛋白質的DNA的氯化鈉溶液，必須再進一步沉淀和濃縮，常用酒精沉淀法。即往含有Na的DNA溶液，參加體積分數為95%的冷卻酒精，混勻后可以使DNA沉淀、濃縮，形成含雜質較少的DNA絲狀物，懸浮于溶液中。假設絲狀物較少，可將混合液再放入冰箱中冷卻幾分鐘即可。濃縮后的DNA絲狀物可以用玻棒玻棒有吸附DNA的作用緩緩旋轉的方法卷起。6.DNA的鑒定DNA二苯胺    100°C沸水浴       藍色物鑒定時藍色的深淺與溶液中

7、DNA的含量多少有關。六、常見問題分析? 1.從雞血細胞核中提取的物質是DNA嗎？ 在雞血細胞中參加蒸餾水，并且攪拌，利用浸透作用原理使雞血細胞破裂，攪拌進一步促進了雞血細胞的破裂，于是釋放出其中的DNA，當然也有少量的RNA，還的蛋白質。因此，釋放出的物質是DNA、RNA和蛋白質的混合物，不僅僅只有DNA。 2.怎樣進步血細胞因低滲而破裂的效率？ 血細胞的細胞膜對低滲溶液有一定的抵抗才能，這稱為浸透脆性。一般而言，血細胞與蒸餾水相混合而使血細胞處于極度的低滲環(huán)境之中，細胞因大量失水而致最終破裂并釋放出胞內物包括細胞核。為促進細胞在低滲條件下破裂，可以輔以快速而有力的攪拌，使之受機械震蕩而更易

8、破裂。 3.怎樣才能把血細胞釋放的DNA濾入搜集的濾液中？ 這一步較難處理，在過濾過程中常常發(fā)生因粘稠的果胨樣物質堵塞過濾紗布的網眼而使后續(xù)的過濾難以完成，很多DNA沒能濾入濾液中，這是造成失敗的主要原因之一。 解決的方法有：過濾時待過濾溶液倒入漏斗的速度應緩慢，以免沉積于溶液中層的膠狀物一下就把紗布堵住，使過濾不能完成； 一旦出現大量膠狀物使過濾不能進展下去，切忌用力擠壓而使膠狀物也濾入濾液之中，可以把膠狀物重新用適量的2mol NaCl溶液進展攪拌，使其中的DNA得到溶解，然后再進展過濾。 4.實驗中看到的絲狀物的粗細是不是DNA分子的直徑呢？ 不是。因為DNA分子直徑只有2nm。絲狀物是多個DNA分子聚在一起形成的。 5.盛放雞血細胞液的容器,最好是塑料容器。雞血細胞破碎以后釋放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,由于細胞內DNA的含量本來就比較少,再被玻璃容器吸附去一部分,提取到的DNA就會更少。因此,實驗過程中最好使用塑料的燒杯和試管,這樣可以減少提取過程中DNA的損失。同理，玻璃棒有吸附DNA的作用，可通過緩緩旋轉玻璃棒的方法卷起濃縮后的DNA絲狀物。 6.利用DNA在濃度較低的