012012級(jí)碩士高級(jí)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)概述ppt課件

1、選用教材選用教材免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)課要求免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)課要求 不許遲到、早退、缺課。不許遲到、早退、缺課。 不允許擅自換教室。不允許擅自換教室。 穿白大衣。穿白大衣。 愛(ài)護(hù)實(shí)驗(yàn)器材使用后用水沖洗，然后放愛(ài)護(hù)實(shí)驗(yàn)器材使用后用水沖洗，然后放入指定地點(diǎn)），損壞者按價(jià)賠償。入指定地點(diǎn)），損壞者按價(jià)賠償。 課后認(rèn)真打掃教室衛(wèi)生擦地面和桌面）。課后認(rèn)真打掃教室衛(wèi)生擦地面和桌面）。 關(guān)掉手機(jī)或設(shè)置為振動(dòng)狀態(tài)。關(guān)掉手機(jī)或設(shè)置為振動(dòng)狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)操作內(nèi)容安排實(shí)驗(yàn)操作內(nèi)容安排 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn) 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ELISAELISA） 免疫印跡試驗(yàn)免疫印跡試驗(yàn)(Western blo

2、t)(Western blot) 巨噬細(xì)胞吞噬功能測(cè)定巨噬細(xì)胞吞噬功能測(cè)定 自講安排自講安排自講評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)自講評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)考核方式考核方式考核要求考核要求課當(dāng)堂寫(xiě)。）課當(dāng)堂寫(xiě)。）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的原則實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的原則實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的基本思路實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的基本思路實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的基本思路實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的基本思路免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)概述免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)概述 小調(diào)查-對(duì)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的了解 目前你知道的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)有哪些？目前你知道的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)有哪些？ 這些免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的原理是什么？這些免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的原理是什么？ 這些技術(shù)有什么應(yīng)用？這些技術(shù)有什么應(yīng)用？免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)概述免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)概述現(xiàn)代免疫現(xiàn)代免疫學(xué)技術(shù)學(xué)技術(shù)免

3、疫學(xué)技術(shù)的范疇免疫學(xué)技術(shù)的范疇1 1、對(duì)具有免疫活性物質(zhì)的定性、定量測(cè)定、對(duì)具有免疫活性物質(zhì)的定性、定量測(cè)定2 2、對(duì)免疫系統(tǒng)的組成成分的數(shù)量、狀態(tài)的測(cè)定、對(duì)免疫系統(tǒng)的組成成分的數(shù)量、狀態(tài)的測(cè)定免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的評(píng)價(jià)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的評(píng)價(jià)一、評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)一、評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)SpecificitySpecificity特異）特異）SensitivitySensitivity敏感）敏感）SimplicitySimplicity簡(jiǎn)便）簡(jiǎn)便）SafetySafety平安）平安）SavingSaving節(jié)約）節(jié)約）二、特異性與敏感性的關(guān)系二、特異性與敏感性的關(guān)系特異性高、敏感性低特異性高、敏感性低敏感性高、特異性低敏感

4、性高、特異性低免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)概述免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)概述 抗原抗體反應(yīng)抗原抗體反應(yīng) 淋巴細(xì)胞的檢測(cè)技術(shù)淋巴細(xì)胞的檢測(cè)技術(shù) 細(xì)胞因子的檢測(cè)技術(shù)細(xì)胞因子的檢測(cè)技術(shù) 免疫學(xué)常用的分子生物學(xué)技術(shù)免疫學(xué)常用的分子生物學(xué)技術(shù) 多克隆抗體多克隆抗體 單克隆抗體單克隆抗體 基因工程抗體基因工程抗體 前兩者常用于實(shí)驗(yàn)研究，而后前兩者常用于實(shí)驗(yàn)研究，而后者用于臨床治療研究。者用于臨床治療研究?？贵w的應(yīng)用抗體的應(yīng)用 多克隆抗體是通過(guò)免疫動(dòng)物血清分離獲得多克隆抗體是通過(guò)免疫動(dòng)物血清分離獲得 優(yōu)點(diǎn)：制備方法比較簡(jiǎn)單，價(jià)格低廉，制備所需時(shí)優(yōu)點(diǎn)：制備方法比較簡(jiǎn)單，價(jià)格低廉，制備所需時(shí)間短等間短等 在確定新基因編碼蛋白研究方面，仍

5、然是在確定新基因編碼蛋白研究方面，仍然是首選抗體類(lèi)型。但由于多克隆抗體含有針對(duì)多個(gè)抗首選抗體類(lèi)型。但由于多克隆抗體含有針對(duì)多個(gè)抗原表位的抗體成分，也可能包括抗原變性后暴露的原表位的抗體成分，也可能包括抗原變性后暴露的新抗原表位，因此，多克隆抗體在檢測(cè)變性抗原新抗原表位，因此，多克隆抗體在檢測(cè)變性抗原如采用如采用Western BlotWestern Blot檢測(cè)蛋白時(shí)，其效果比單克檢測(cè)蛋白時(shí)，其效果比單克隆抗體更敏感。隆抗體更敏感。多克隆抗體多克隆抗體n缺陷：缺陷：n純度差純度差n易發(fā)生交叉反應(yīng)易發(fā)生交叉反應(yīng)n來(lái)源有限來(lái)源有限n所產(chǎn)生的抗體因動(dòng)物個(gè)體差異滴度不同所產(chǎn)生的抗體因動(dòng)物個(gè)體差異滴度不

6、同n不易標(biāo)準(zhǔn)化不易標(biāo)準(zhǔn)化n 因免疫動(dòng)物血清中含有非常復(fù)雜的多種因免疫動(dòng)物血清中含有非常復(fù)雜的多種蛋白質(zhì)成分，所以在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室分析、檢測(cè)之前，蛋白質(zhì)成分，所以在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室分析、檢測(cè)之前，必須將其有效的抗體成分分離、純化。必須將其有效的抗體成分分離、純化。單克隆抗體單克隆抗體(mAb)(mAb)是通過(guò)是通過(guò)B B細(xì)胞雜交瘤獲得細(xì)胞雜交瘤獲得與多克隆抗體相比，單克隆抗體主要具有以下三個(gè)與多克隆抗體相比，單克隆抗體主要具有以下三個(gè)顯著特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)）：顯著特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)）： 高度均質(zhì)性高度均質(zhì)性高度特異性高度特異性來(lái)源穩(wěn)定來(lái)源穩(wěn)定缺乏：缺乏：制備方法比較復(fù)雜，價(jià)格昂貴，制備所需時(shí)間較長(zhǎng)制備方法比較復(fù)雜，價(jià)格昂貴，

7、制備所需時(shí)間較長(zhǎng)。 mAbmAb是由起始于一個(gè)是由起始于一個(gè)B B淋巴細(xì)胞的單克隆細(xì)淋巴細(xì)胞的單克隆細(xì)胞系所分泌的，因此是一種每個(gè)抗體分子胞系所分泌的，因此是一種每個(gè)抗體分子的結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)( (包括氨基酸排列順序和空間構(gòu)型包括氨基酸排列順序和空間構(gòu)型) )都相同的均質(zhì)性抗體。都相同的均質(zhì)性抗體。 mAbmAb只專(zhuān)一的識(shí)別抗原分子上單個(gè)抗原位點(diǎn)，因此只專(zhuān)一的識(shí)別抗原分子上單個(gè)抗原位點(diǎn)，因此容易獲得特異性抗體，較少產(chǎn)生交叉反應(yīng)。容易獲得特異性抗體，較少產(chǎn)生交叉反應(yīng)。 可大量生產(chǎn)，當(dāng)?shù)玫椒€(wěn)定分泌可大量生產(chǎn)，當(dāng)?shù)玫椒€(wěn)定分泌mAbmAb的雜交瘤細(xì)胞系的雜交瘤細(xì)胞系后，可置液氮中長(zhǎng)期保存，需要時(shí)取出復(fù)蘇，既

8、后，可置液氮中長(zhǎng)期保存，需要時(shí)取出復(fù)蘇，既可在體外培養(yǎng)中收獲可在體外培養(yǎng)中收獲mAbmAb，也可將雜交瘤細(xì)胞接種，也可將雜交瘤細(xì)胞接種入同系小鼠腹腔內(nèi)，然后從荷瘤小鼠的腹水中收入同系小鼠腹腔內(nèi)，然后從荷瘤小鼠的腹水中收獲大量獲大量mAbmAb。u根據(jù)實(shí)驗(yàn)的目的不同，其分離、純化的純度要求根據(jù)實(shí)驗(yàn)的目的不同，其分離、純化的純度要求也不同。也不同。u作為作為ELISAELISA檢測(cè)時(shí)的抗體，部分情況下飽和硫酸胺檢測(cè)時(shí)的抗體，部分情況下飽和硫酸胺純化即可；純化即可；u最常使用的抗體是經(jīng)過(guò)最常使用的抗體是經(jīng)過(guò)A A蛋白蛋白(Protein A)(Protein A)親和層親和層析獲得的析獲得的IgGI

9、gG型抗體；型抗體；u免疫放射測(cè)定的標(biāo)記用抗體必須達(dá)到雙級(jí)純才可免疫放射測(cè)定的標(biāo)記用抗體必須達(dá)到雙級(jí)純才可應(yīng)用應(yīng)用( (親和層析純親和層析純+SDS+SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳純聚丙烯酰胺凝膠電泳純) )。u單克隆抗體在制備過(guò)程中經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的篩選，因此應(yīng)單克隆抗體在制備過(guò)程中經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的篩選，因此應(yīng)根據(jù)不同的應(yīng)用目的選擇不同單克隆抗體亞類(lèi)，如根據(jù)不同的應(yīng)用目的選擇不同單克隆抗體亞類(lèi)，如標(biāo)明供標(biāo)明供ELISAELISA檢測(cè)用的單克隆抗體，可能不適合檢測(cè)用的單克隆抗體，可能不適合Western BlotWestern Blot檢測(cè)。檢測(cè)。u作為初學(xué)者尤其應(yīng)該注意各類(lèi)單克隆抗體標(biāo)明的應(yīng)作為初學(xué)者尤其應(yīng)該注意各類(lèi)單克隆抗體標(biāo)明的應(yīng)用范圍，而多克隆抗體一般情況下均有較寬的適用用范圍，而多克隆抗體一般情況下均有較寬的適用范圍。范圍。AgAg 沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng) 凝集反應(yīng)凝集反應(yīng) 免疫標(biāo)記技術(shù)免疫標(biāo)記技術(shù)抗原抗體反應(yīng)抗原抗體反應(yīng) 淋巴細(xì)胞的檢測(cè)技術(shù)淋巴細(xì)胞的檢測(cè)技術(shù) 淋巴細(xì)胞的分離淋巴