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文檔簡介
1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專題1 基因工程1基因工程又叫做 或 。就是按照人們的愿望,把一種生物的某種基因提取出來,加以 ,然后放到另一種生物的細(xì)胞里, 改造生物的 。2基因工程是在 上進(jìn)行的設(shè)計(jì)施工,基本工具是:基因的剪刀(分子手術(shù)刀) ;基因的針線(分子縫合針) ;基因的 (分子運(yùn)輸車) 。3限制酶(又稱 ):主要從 中分離純化出來;能夠識別雙鏈DNA分子的某種 ,并且使每一條鏈中 的兩個核苷酸之間的 斷開,因此具有 。DNA分子經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端有 和 兩種形式。例如,EcoR限制酶識別的序列是 ,在 之間切割;Sma限制酶識別的序列是 ,在 之間切割。4DNA連接酶的作用
2、是將 拼接(即形成 ,注意不是黏合或形成氫鍵)成新的DNA分子(注意DNA聚合酶只能在有 的條件下將 加到DNA片段的 ,形成磷酸二酯鍵);E·coli DNA連接酶來源于 ,只能將雙鏈DNA片段 之間連接起來;而T4 DNA連接酶能縫合 ,但連接平末端的之間的效率 。5. 最常用的載體是 ,它是一種 、結(jié)構(gòu)簡單、獨(dú)立于細(xì)菌 之外,并 的很小的 。6真正被用作載體的質(zhì)粒都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進(jìn)行過 的,其上有一個至多個 ,供外源DNA片段(基因)插入其中;還有特殊的 ,供 。7重組質(zhì)粒進(jìn)入受體細(xì)胞后,在細(xì)胞中進(jìn)行自我復(fù)制(具有 ),或 上,隨染色體DNA進(jìn)行同步復(fù)制;在基因工程中使用
3、的載體除質(zhì)粒外,還 、 等。8基因工程的基本操作流程: 。9目的基因主要是指 ,也可以是一些 ;目的基因可以從自然界中已有的物種中分離出來( ,建立 從中獲取或通過 獲取,一般只適合于 ,真核基因因?yàn)楹?不適合該類方法),也可以用人工的方法合成( ,通過mRNA反轉(zhuǎn)錄得到cDNA,然后建立 從中獲取或通過 獲?。蝗绻虮容^小且核苷酸序列已知,也可以通過 用化學(xué)方法直接人工合成)。10基因組文庫的構(gòu)建:將某種生物體內(nèi)的DNA 提取出來,選用適當(dāng)?shù)?,將DNA切成一定范圍大小的DNA片段,然后,將這些DNA片段分別與 連接起來,導(dǎo)入 中儲存,每個受體細(xì)菌都含有了一段不同的DNA片段,而這個群體
4、包含了這種生物的 。11cDNA文庫的構(gòu)建:用某種生物發(fā)育的 通過 產(chǎn)生 (互補(bǔ)DNA)片段,與 連接后儲存在一個受體菌群中。12cDNA文庫屬于 。與基因組文庫比較:cDNA文庫較小, ,僅含有某種生物的 , ;而基因組文庫較大, ,含有某種生物的 ,僅 。13PCR是 的縮寫,它是一項(xiàng)利用 的原理在生物 的核酸合成技術(shù)。反應(yīng)中需要加入的物質(zhì)有 、 、 ( 的DNA聚合酶)、 (dATP、dTTP、dGTP、dCTP)等;基本過程是:加熱至9095使 冷卻至5560使 加熱至7075使 ,如此反復(fù)進(jìn)行,目的基因以 (2n)形式擴(kuò)增。14 是基因工程的核心,其目的是 ,并且可以 ,同時,使目的
5、基因能夠 。15基因表達(dá)載體的組成: 、 、 、 、 。啟動子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的 ,位于基因的 ,是 的部位,能驅(qū)動基因 ;終止子也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的 ,位于基因的 ,其作用是使 下來;標(biāo)記基因的作用是為了 ,從而將含有目的基因的細(xì)胞 出來,最常用的標(biāo)記基因是 。16將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞最常用的方法是 ,另外還有 和 等。17農(nóng)桿菌是一種生活在土壤中的 ,能在自然條件下感染 ,而對大多數(shù)沒有 感染能力。當(dāng)植物體受到損傷,傷口處的細(xì)胞會分泌大量的 ,吸引農(nóng)桿菌移向這些細(xì)胞,這時農(nóng)桿菌中的 上的 (可轉(zhuǎn)移的DNA)可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞,并且 到受體細(xì)胞 上。18農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法是將目的基因插入到 上,通
6、過農(nóng)桿菌的 作用,使目的基因進(jìn)入植物細(xì)胞并插入到植物細(xì)胞中 上,使目的基因的遺傳特性得以 ;基因槍法是利用壓縮氣體產(chǎn)生的動力,將包裹在金屬顆粒表面的 打入受體細(xì)胞中,使目的基因與其整合并表達(dá)的方法,是 常用的一種基因轉(zhuǎn)化方法;花粉管通道法是在植物受粉后, ,剪去 ,然后滴加 ,使目的基因借助 進(jìn)入受體細(xì)胞。19將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞最常用的方法是 ,基本的操作程序是:提純含有目的基因的表達(dá)載體從雌性動物體內(nèi)取出卵(體內(nèi)受精或體外受精均可以)采用顯微注射儀進(jìn)行 早期胚胎培養(yǎng)胚胎移植(哺乳動物)。20原核生物通常作為受體細(xì)胞的原因是 、 、 等,其中以 應(yīng)用最為廣泛。21將目的基因?qū)氪竽c桿菌(細(xì)
7、菌)最常用的方法是 :先用 處理細(xì)胞,使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài),即處于 ,再將 溶于緩沖液中與 混合。22目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后,是否可以 其遺傳特性,需要通過 :(1)首先要檢測轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上 ,檢測方法是采用 ,即在 上用 等作標(biāo)記,以此作為 ,使探針與待檢基因組DNA雜交,如果顯示出 ,則表明目的基因已插入染色體DNA中;(2)其次要檢測目的基因 ,檢測方法也是采用 ,同樣用 作 ,但是與 雜交;(3)最后要檢測目的基因 ,檢測方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取 ,用相應(yīng)的 進(jìn)行 ,若 出現(xiàn),則表明目的基因已形成蛋白質(zhì)產(chǎn)品;(4)有時還要進(jìn)行 的鑒定,如需要做
8、抗蟲或抗病的 ,又如需要將基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品的功能進(jìn)行 。23用于轉(zhuǎn)基因植物的抗蟲基因有 、 、 、 等。Bt毒蛋白基因是從 中分離出來的,Bt毒蛋白被害蟲的消化酶降解后會成為 ,但對哺乳動物無毒害作用。24用于轉(zhuǎn)基因植物的抗病基因有 (抗病毒)、 (抗病毒)、 (抗真菌)、 (抗真菌)等。25用于轉(zhuǎn)基因植物的抗逆基因有 (抗鹽堿和抗干旱)、 (抗寒)、抗除草劑基因等。26 (乳房生物反應(yīng)器)技術(shù):將 與 等調(diào)控組件 ,通過 等方法,導(dǎo)入哺乳動物的 中,然后,將受精卵送入母體內(nèi),使其生長發(fā)育成轉(zhuǎn)基因動物。27 治療遺傳病的最有效的手段,它通過把 導(dǎo)入病人體內(nèi),使該基因的表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮功能,從
9、而達(dá)到治療疾病的目的。用于基因治療的基因有三類: 、 和 。28 是指以 作為基礎(chǔ),通過 或 ,對現(xiàn)有 進(jìn)行改造,或制造一種新的 ,以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求。(基因工程在原則上只能生產(chǎn)自然界 蛋白質(zhì))29蛋白質(zhì)工程的基本途徑: 。(天然蛋白質(zhì)合成的過程: ) 30蛋白質(zhì)工程成功難度很大,主要是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)發(fā)揮功能必須依賴于正確的 ,而目前科學(xué)家對大多數(shù)蛋白質(zhì)的 的了解還很不夠。專題4 生物技術(shù)的安全性和倫理問題31對于轉(zhuǎn)基因生物,公眾在 安全、 安全和 安全方面產(chǎn)生了爭論。 安全主要是指公眾擔(dān)心轉(zhuǎn)基因生物會產(chǎn)生出 蛋白或 蛋白; 安全是擔(dān)心轉(zhuǎn)基因生物可能會影響到 ; 安全是指轉(zhuǎn)基因生物可能對
10、環(huán)境造成 或 。32擔(dān)憂轉(zhuǎn)基因生物安全性的原因:對 、 以及 等了解有限;轉(zhuǎn)移的基因雖然功能已知,但不少是 的基因;外源基因插入宿主基因組的部位往往是 。33轉(zhuǎn)基因生物或其產(chǎn)品的研究應(yīng)遵循的道德:把重組DNA的轉(zhuǎn)移限制在遺傳上具有 的生物上;對用大腸桿菌作為轉(zhuǎn)基因受體的菌株,限定必須使用 的菌株;避免產(chǎn)生對人體 蛋白質(zhì);一旦發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因生物出現(xiàn)了安全性問題,馬上 。34從胚胎中取出干細(xì)胞用于醫(yī)學(xué)研究和治療,叫做 ;將胚胎移植到受體代孕產(chǎn)生后代個體則叫做 。中國政府的態(tài)度是 ,不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人的實(shí)驗(yàn),但不反對 。35試管嬰兒技術(shù)的目的是 ;設(shè)計(jì)試管嬰兒技術(shù)在植入前要對
11、胚胎進(jìn)行 。36生物武器的種類包括 、 、 ,以及經(jīng)過 的致病菌、病毒等,如炭疽桿菌、天花病毒、肉毒桿菌(肉毒桿菌毒素分子可以阻滯神經(jīng)末稍釋放 從而引起肌肉麻痹)等。專題5 生態(tài)工程37生態(tài)工程是人類應(yīng)用 、 等學(xué)科的基本原理和方法,通過系統(tǒng)設(shè)計(jì)和調(diào)控技術(shù)組裝,對 的生態(tài)環(huán)境進(jìn)行修復(fù)、重建,對造成 和 的傳統(tǒng)生產(chǎn)方式進(jìn)行改善,并提高生態(tài)系統(tǒng)的生產(chǎn)力,追求 、 、 效益的統(tǒng)一。38生態(tài)工程所遵循的基本原理: (如無廢棄物農(nóng)業(yè))、 (物種繁多而復(fù)雜的生態(tài)系統(tǒng)具有較高的 )、 (即需要考慮 )、 (自然生態(tài)系統(tǒng)是通過 、 之間的 而形成的一個不可分割的有機(jī)整體)、 (系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)決定功能原理:如把很多
12、 通過優(yōu)化組合,有機(jī)地整合在一起,成為一個新的高效生態(tài)系統(tǒng);系統(tǒng)整體性原理:系統(tǒng)各組分之間要有 ,以實(shí)現(xiàn) 的效果)。專題5 細(xì)胞工程39細(xì)胞工程是通過在 水平或 水平上的操作,按照人的意愿來改變細(xì)胞內(nèi)的 或獲得 的一門綜合科學(xué)技術(shù)。40細(xì)胞的全能性是指其具有 的潛能。通常,生物體的每個細(xì)胞都具有全能性,因?yàn)樗拿總€細(xì)胞都具有這種生物的 。在生物的生長發(fā)育過程中,細(xì)胞并不表現(xiàn)出全能性,這是因?yàn)?。41細(xì)胞表達(dá)全能性的首要條件是 ;全能性表達(dá)的難易程度: 生殖細(xì)胞 ;植物細(xì)胞 動物細(xì)胞。42植物組織培養(yǎng)技術(shù):在 和人工控制條件下,將 (外植體),培養(yǎng)在 上,給予適宜的培養(yǎng)條件( 等),誘導(dǎo)其 (已
13、經(jīng)分化的細(xì)胞 而轉(zhuǎn)變成 的過程)產(chǎn)生 (具有分生能力的薄壁細(xì)胞,細(xì)胞形狀 、排列 、 ),再將愈傷組織轉(zhuǎn)接到 培養(yǎng)基上,誘導(dǎo)其 成 或 (轉(zhuǎn)接到 培養(yǎng)基上可誘導(dǎo)其生根)進(jìn)而誘導(dǎo)出 ,然后再稱移栽到 ,培養(yǎng)成正常植株。 43植物激素中生長素和細(xì)胞分裂素是啟動 、 和 的關(guān)鍵性激素。生長素用量比細(xì)胞分裂素用量:比值高時,有利于 的分化、抑制 的形成;比值低時,有利于 的分化、抑制 的形成;比值適中時,促進(jìn) 的形成。44胡蘿卜的組織培養(yǎng):外植體必須 (方法是先用 處理30s后用 沖洗,再用 處理30min后用 沖洗);實(shí)驗(yàn)中要強(qiáng)調(diào)所用器械的 和實(shí)驗(yàn)人員的 ,因?yàn)槲廴倦s菌后雜菌會 并 ;外植體最好切取
14、含有 的部分,原因是這部分細(xì)胞 。45植物體細(xì)胞雜交技術(shù):將不同種的植物 ,在一定條件下融合成 ,并把它培育成新的植物體(通過 技術(shù)獲得 )的技術(shù),其最大的突破是克服了不同種生物 的障礙。46人工誘導(dǎo)原生質(zhì)體間的融合:植物細(xì)胞在融合前必須先利用 法( 酶和 酶)去除 而獲得具有活力的 (要求置于 中,以防止皺縮或脹破);人工誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法有物理法( 、 、 等)和化學(xué)法(一般是用 ,即 作為誘導(dǎo)劑)兩種。47微型繁殖:用于快速繁殖優(yōu)良品種的 技術(shù),也叫 技術(shù)。原理是植物組織培養(yǎng)技術(shù)不僅可以保持優(yōu)良品種的 ,還可以 地實(shí)現(xiàn)種苗的大量繁殖。48作物脫毒:原理是感染病毒的植物在其 附近極少甚
15、至沒有病毒;方法是切取一定大小的 進(jìn)行植物組織培養(yǎng)。49人工種子:以 技術(shù)得到的 、不定芽、頂芽和 等為材料,經(jīng)過人工薄膜(即 ,含有養(yǎng)分、無機(jī)鹽、碳源、 、 、有益菌及 等成分)包裝得到的種子。50單倍體育種:通過 (外植體是 )獲得單倍體植株, 后 即可得到穩(wěn)定遺傳的優(yōu)良品種,極大的縮短了 。51突變體的利用:在植物組織培養(yǎng)過程中,由于培養(yǎng)細(xì)胞一直處于不斷的 狀態(tài),因此容易受到培養(yǎng)條件和外界壓力(如射線、化學(xué)物質(zhì)等)的影響而產(chǎn)生 。52細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn):用 培養(yǎng)基(不加 ),采用 的方法生產(chǎn)一些細(xì)胞產(chǎn)物。 53動物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有 、 、 、 等,其中 技術(shù)是其他動物細(xì)胞工程技
16、術(shù)的基礎(chǔ)。54動物細(xì)胞培養(yǎng)是從動物機(jī)體中取出相關(guān)的組織,將它分散成 ,然后,放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細(xì)胞 和 。55動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程:取動物組織塊( 的組織細(xì)胞較老齡動物的組織細(xì)胞更易于培養(yǎng)) 用 酶(或 酶)處理分散成單個細(xì)胞制成 轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中進(jìn)行 培養(yǎng)(結(jié)果是貼壁生長的 細(xì)胞)貼滿瓶壁的細(xì)胞用 酶(或膠原蛋白酶)處理分散成單個細(xì)胞,制成 轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中進(jìn)行 培養(yǎng)。56動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中,懸液中分散的細(xì)胞很快就 ,稱為 ;當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到 時,細(xì)胞會 ,稱為 。57傳代培養(yǎng):細(xì)胞一般傳至 代就不易傳下去了;當(dāng)傳到 代左右時,增殖會 ,部分細(xì)胞的 可能會發(fā)生變化(目前使用的或冷凍保存的細(xì)
17、胞通常為 代以內(nèi));少部分細(xì)胞由于發(fā)生了 會朝著 的方向發(fā)展,獲得 。58動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件: 、 的環(huán)境:培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具應(yīng)進(jìn)行 處理;通常還要在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一定量的 ,以防培養(yǎng)過程中的污染;應(yīng) ,以防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對細(xì)胞自身造成危害。營養(yǎng):培養(yǎng)基是含有糖、 、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等的 培養(yǎng)基(為液體培養(yǎng)基,無需要加入 ),通常還需加入 等一些天然成分。溫度和pH:哺乳動物多以 為宜,多數(shù)細(xì)胞生存的適宜pH為 。氣體環(huán)境:所需氣體主要是 ,常為 ,進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時通常采用 或 培養(yǎng);O2是 所必需的,CO2的主要作用是 。59動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用:生產(chǎn) 、 、 等生物制品
18、, , 等。60動物細(xì)胞的全能性會隨著動物 的提高而逐漸受到限制, 潛能逐漸變?nèi)酰壳斑€不能用類似 的方法獲得完整的動物個體,因此,用動物體細(xì)胞克隆的動物,實(shí)際是通過 來實(shí)現(xiàn)的。61哺乳動物核移植可以分為 核移植和 核移植,由于動物胚胎細(xì)胞 ,恢復(fù)其全能性相對容易,而動物體細(xì)胞 ,恢復(fù)其全能性十分困難,因此,動物體細(xì)胞核移植的難度明顯 胚胎細(xì)胞核移植。62體細(xì)胞核移植的過程(以克隆高產(chǎn)奶牛為例):從 (高產(chǎn)奶牛)身體的某一部位(如耳)上取 供體細(xì)胞培養(yǎng)將供體細(xì)胞注入 (采集的卵母細(xì)胞需在體外培養(yǎng)到 ,再通過顯微操作去除卵母細(xì)胞中的 )通過電激使兩細(xì)胞 ,供體核進(jìn)入受體卵母細(xì)胞構(gòu)建 胚胎將胚胎移
19、入 (代孕)母牛體內(nèi)生出與供體奶牛 基本相同的犢牛。63體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用:加速家畜 進(jìn)程,促進(jìn)良畜群繁育;保護(hù)瀕危物種;讓轉(zhuǎn)基因克隆動物作為 生產(chǎn)醫(yī)用蛋白;轉(zhuǎn)基因克隆動物細(xì)胞、組織和器官作為 移植的供體;人的核移植胚胎干細(xì)胞經(jīng)過誘導(dǎo)分化,形成相應(yīng)的組織、器官后,可用于 的移植等。64動物細(xì)胞融合也稱 ,是指兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的過程。融合后形成的具有原來兩個或多個細(xì)胞 的 細(xì)胞,稱為 。65細(xì)胞融合技術(shù)突破了 的局限,使 成為可能,是研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育的重要手段。66動物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的原理基本相同,常用的誘導(dǎo)因素有聚乙二醇(PEG)、
20、 (僅動物細(xì)胞融合具有這種方法)、電激等。67哺乳動物感染病原體(如病毒、細(xì)菌等)后,體內(nèi)會形成相應(yīng)的 (實(shí)際上是漿細(xì)胞),每一個B淋巴細(xì)胞只分泌 特異性抗體,因此要想獲得大量的單一抗體,必須克隆 ,形成 。68單克隆抗體的制備:給小鼠注射 從小鼠的 中獲取B淋巴細(xì)胞(實(shí)際上是 )用 或 誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞與小鼠的 細(xì)胞(對HAT敏感的缺陷型突變體)融合用特定的 培養(yǎng)基(HAT培養(yǎng)基)進(jìn)行篩選( 和 都會死亡,只有融合的 才能生長)獲得 細(xì)胞(既能 ,又能 )進(jìn)行 培養(yǎng)和 檢測,篩選出 的雜交瘤細(xì)胞在 做大規(guī)模培養(yǎng)(或注射到 內(nèi)增殖)從 (或 )中提取出大量的單克隆抗體( 、特異性強(qiáng))。69生物導(dǎo)
21、彈:把 的單克隆抗體跟放射性同位素、化學(xué)藥物或細(xì)胞毒素相結(jié)合,制成生物導(dǎo)彈,注入體內(nèi),借助單克隆抗體的 作用,能將藥物帶到癌細(xì)胞所在位置,在 殺死癌細(xì)胞。優(yōu)點(diǎn)是既不損傷 ,又減少了用藥劑量。附:部分標(biāo)準(zhǔn)答案1基因拼接技術(shù) DNA重組技術(shù)。修飾改造,定向地,遺傳性狀。2DNA分子水平 限制酶; DNA連接酶; 運(yùn)載體質(zhì)粒、噬菌體和動植物病毒等。3限制性核酸內(nèi)切酶 原核生物 特定核苷酸序列 特定部位 磷酸二酯鍵 專一性 黏性末端 平末端 -GAATTC- G與A -CCCGGG- C與G 4DNA片段 磷酸二酯鍵 單個核苷酸 末端 大腸桿菌 互補(bǔ)的黏性末端 兩種末端,比較低。5. 質(zhì)粒 裸露的 擬
22、核DNA 具有自我復(fù)制能力 雙鏈環(huán)狀DNA分子。6 人工改造 限制酶切割位點(diǎn) 標(biāo)記基因, 重組DNA的鑒定和選擇。7 復(fù)制原點(diǎn) 整合到染色體DNA 噬菌體的衍生物、動植物病毒。8獲取目的基因構(gòu)建基因表達(dá)載體將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞目的基因的檢測與鑒定。9編碼蛋白質(zhì)的基因 具有調(diào)控作用的因子 直接分離 基因組文庫 PCR 原核基因 內(nèi)含子 人工合成 cDNA文庫 PCR DNA合成儀 。10全部 限制酶 載體 受體菌的群體 所有基因。11某個時期的mRNA 反轉(zhuǎn)錄 cDNA 載體 12部分基因文庫 無啟動子、內(nèi)含子 部分基因,可以進(jìn)行物種間的基因交流; 有啟動子、內(nèi)含子, 全部基因 部分基因可以進(jìn)
23、行物種間的基因交流。13聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) DNA雙鏈復(fù)制 體外復(fù)制特定DNA片段 模板DNA、DNA引物、Taq酶(耐高溫 dNTP DNA解鏈 引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈 Taq聚合酶從引物起始進(jìn)行互補(bǔ)鏈的合成, 指數(shù)。14基因表達(dá)載體的構(gòu)建 使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在 遺傳給下一代 表達(dá)和發(fā)揮作用。15啟動子、目的基因、終止子、標(biāo)記基因、復(fù)制原點(diǎn) DNA片段 首端 RNA聚合酶識別和結(jié)合 轉(zhuǎn)錄出mRNA DNA片段 尾端 轉(zhuǎn)錄在所需要的地方停止 鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因 篩選 抗生素抗性基因。16農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 基因槍法 花粉管通道法 。17原核生物 雙子葉植物和裸子植物 單子葉植物 酚
24、類化合物 Ti質(zhì)粒 T-DNA 整合 染色體的DNA上18 Ti質(zhì)粒的T-DNA 轉(zhuǎn)化 染色體的DNA 穩(wěn)定維持和表達(dá) 表達(dá)載體DNA 單子葉植物 花粉形成的花粉管還未愈合前 柱頭 重組DNA 花粉管通道 。19顯微注射技術(shù) 卵 顯微注射 。20繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對較少 大腸桿菌 。21轉(zhuǎn)化法 Ca2+ 感受態(tài) 重組表達(dá)載體DNA分子 感受態(tài)細(xì)胞 。22穩(wěn)定維持和表達(dá) 檢測與鑒定:(1)是否插入了目的基因 DNA分子雜交技術(shù) 含有目的基因的DNA片段 放射性同位素 探針 雜交帶(2)是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA 核酸分子雜交技術(shù) 放射性同位素標(biāo)記的目的基因 探針 mRNA ;(3)是否翻譯成蛋白質(zhì) 蛋白質(zhì) 抗體 抗原抗體雜交 雜交帶(4)個體生物學(xué)水平 接種實(shí)驗(yàn) 活性比較。23Bt毒蛋白基因、蛋白酶抑制劑基因、淀粉酶抑制劑基因、植物凝集素基因 蘇云金芽孢桿菌有毒的多肽。24病毒外殼蛋白基因 病毒的復(fù)制酶基因 幾丁質(zhì)酶基因 抗
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