第16章中藥制劑和生化藥物分析簡介

1、第十六章第十六章定義：定義： 中藥制劑是根據(jù)中醫(yī)藥理論和用藥原則，將單味或多味中藥材按規(guī)定的處方和方法加工制成具有一定規(guī)格，可以直接用于防病、治病的單方或復(fù)方制劑。 中藥的成方制劑又稱為中成藥。第一節(jié)第一節(jié) 中藥制劑分析簡介中藥制劑分析簡介 注意：中藥制劑分析必須是以注意：中藥制劑分析必須是以中醫(yī)藥基礎(chǔ)理論和用藥原則為中醫(yī)藥基礎(chǔ)理論和用藥原則為指導(dǎo)運用現(xiàn)代分析理論和方法指導(dǎo)運用現(xiàn)代分析理論和方法進行的質(zhì)量分析。進行的質(zhì)量分析。二、二、中藥制劑分析的特點中藥制劑分析的特點1、有效成分的難確定性、有效成分的難確定性 中醫(yī)藥理論：整體觀念 協(xié)同作用 質(zhì)量分析：根據(jù)中醫(yī)藥理論進行綜合分析 2、化學(xué)成分

2、的多樣性與復(fù)雜性、化學(xué)成分的多樣性與復(fù)雜性（1） 每一味中藥本身就是一個混合物：人參：僅人參皂苷類成分就有幾十種 之多；還有多糖、揮發(fā)油等成分。（2）化學(xué)成分之間的相互影響： 黃連黃 芩、甘草 、金銀花配伍 小檗堿能和黃芩苷、甘草酸、綠原酸 形成難溶于水的復(fù)合物而沉淀析出3、中藥制劑原料藥材質(zhì)量的差別、中藥制劑原料藥材質(zhì)量的差別 （1）原料藥材的品種、規(guī)格、產(chǎn)地、藥用部位、采收季節(jié)、加工方法的影響 GAP 中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范 麻黃麻黃 東北東北西北（西北（-）麻黃堿含量）麻黃堿含量 （+）麻黃堿含量）麻黃堿含量丹參酮丹參酮 ： 11、12月份含量最高月份含量最高薄荷腦

3、薄荷腦 ： 秋季葉變黃時含量最高秋季葉變黃時含量最高葛葛 根根 ：野葛：野葛 不得小于不得小于2.4% 粉葛粉葛 不得少于不得少于0.3% 葛根素含量差異很大葛根素含量差異很大不同部位人參皂苷的含量不同部位人參皂苷的含量 重量比重量比(%) 總皂苷含量總皂苷含量(%) 周皮周皮 6.9 2.60韌皮韌皮 46.6 3.04木質(zhì)部木質(zhì)部 46.5 0.31（2）炮制方法的影響草烏： 酯型生物堿的含量與炮制條件 有 關(guān)延胡索：醋制，醋的濃度對總生物堿的 溶出率有較大影響4、評價中藥制劑質(zhì)量，應(yīng)以中醫(yī)藥、評價中藥制劑質(zhì)量，應(yīng)以中醫(yī)藥 理論為指導(dǎo)原則理論為指導(dǎo)原則中藥制劑的組方有君、臣、佐、使 之分；

4、質(zhì)量分析（1）著重分析君藥、臣藥； 貴重藥、劇毒藥。例：黃連上清丸：黃連是主藥 安宮牛黃丸：黃連是輔藥 （2）中醫(yī)臨床功能主治與現(xiàn) 代 藥理學(xué)相結(jié)合進行分析例：山楂：健胃消食制劑中測有機酸含量 活血止痛治療心血管疾病測黃酮類成分丸、散、片、錠、合、酒、酊、丸、散、片、錠、合、酒、酊、膏、露、茶、栓、顆粒、糖漿等膏、露、茶、栓、顆粒、糖漿等5. 中藥制劑工藝及輔料的特殊性中藥制劑工藝及輔料的特殊性（1）劑型繁多，制備工藝各異）劑型繁多，制備工藝各異有效成分與濃縮干燥方法的關(guān)系有效成分與濃縮干燥方法的關(guān)系(%) 常壓常壓 減壓減壓 逆浸透逆浸透 成分成分 濃縮濃縮 濃縮濃縮 噴霧噴霧 大黃酸葡萄糖

5、苷大黃酸葡萄糖苷 41.1 51.6 96.8 小檗堿小檗堿 34.5 37.5 94.5 黃連堿黃連堿 6.3 12.0 93.7 黃岑苷黃岑苷 77.4 77.6 98.5三黃瀉心湯干浸膏三黃瀉心湯干浸膏 針對不同的劑型，采用相應(yīng)的針對不同的劑型，采用相應(yīng)的方法進行分離純化后測定方法進行分離純化后測定（2）輔料種類多，干擾大）輔料種類多，干擾大蠟丸蠟丸 蜂蠟蜂蠟蜜丸蜜丸 蜂蜜蜂蜜糊劑糊劑 糯米粉、黃米粉糯米粉、黃米粉曲劑曲劑 發(fā)酵發(fā)酵膠劑膠劑 豆油、黃酒、冰糖豆油、黃酒、冰糖6、中藥制劑雜質(zhì)來源的多途徑性7、中藥制劑有效成分的非單一性中藥制劑的分類中藥制劑的分類二、二、中國藥典（中國藥典（

6、2000年版）一部（二十六種）年版）一部（二十六種）丸劑丸劑 膠劑膠劑 膏藥膏藥 顆粒劑顆粒劑 滴眼劑滴眼劑散劑散劑 合劑合劑 露劑露劑 糖漿劑糖漿劑 軟膏劑軟膏劑片劑片劑 酒劑酒劑 茶劑茶劑 滴丸劑滴丸劑 注射劑注射劑錠劑錠劑 酊劑酊劑 搽劑搽劑 膠囊劑膠囊劑 滴鼻劑滴鼻劑栓劑栓劑 巴布膏劑巴布膏劑 橡膠膏劑橡膠膏劑 氣霧劑噴霧劑氣霧劑噴霧劑 煎膏劑（膏滋）煎膏劑（膏滋）流浸膏劑與浸膏劑流浸膏劑與浸膏劑（一）（一）液體制劑液體制劑用藥材提取物制備的液體制劑用藥材提取物制備的液體制劑合劑、糖漿劑、酒劑、茶劑、酊劑合劑、糖漿劑、酒劑、茶劑、酊劑 滴鼻劑、滴眼劑、露劑、搽劑等滴鼻劑、滴眼劑、露劑、

7、搽劑等（無植物組織與細(xì)胞，故無顯微鑒別）（無植物組織與細(xì)胞，故無顯微鑒別）1、 合劑與口服液合劑與口服液（單劑量合劑也可稱為（單劑量合劑也可稱為“口服液口服液”）pH 裝量裝量相對密度相對密度微生物限度微生物限度一般檢查項目一般檢查項目合劑系指藥材用水或其他溶劑，合劑系指藥材用水或其他溶劑，采用適宜方法提取，經(jīng)濃縮制成的采用適宜方法提取，經(jīng)濃縮制成的內(nèi)服液體制劑內(nèi)服液體制劑2、 酒劑與酊劑酒劑與酊劑酒劑酒劑酊劑酊劑含乙醇量（含乙醇量（GC）甲醇量檢查（甲醇量檢查（GC）總固體總固體裝量裝量微生物限度微生物限度一般檢查項目一般檢查項目藥材用蒸餾酒提取制成的澄清液藥材用蒸餾酒提取制成的澄清液體制劑

8、體制劑藥物用規(guī)定濃度的乙醇提取或溶藥物用規(guī)定濃度的乙醇提取或溶解而制成的澄清液體制劑解而制成的澄清液體制劑（二）（二）半固體制劑半固體制劑軟膏軟膏裝量裝量微生物限度微生物限度檢查項目檢查項目常用基質(zhì)常用基質(zhì) 油脂性、水溶性油脂性、水溶性 乳劑型（乳膏劑）乳劑型（乳膏劑）藥物、藥材細(xì)粉、藥材提取藥物、藥材細(xì)粉、藥材提取物與適量基質(zhì)混合制成的半物與適量基質(zhì)混合制成的半固體外用制劑固體外用制劑 藥材提取液的濃縮液藥材提取液的濃縮液（三）（三）半流體制劑半流體制劑煎膏劑煎膏劑(膏滋膏滋)流浸膏劑與浸膏劑（半流體或固體）流浸膏劑與浸膏劑（半流體或固體）（無植物組織與細(xì)胞，故無顯微鑒別）（無植物組織與細(xì)胞

9、，故無顯微鑒別）藥材用水煎煮、去渣濃縮后，加煉藥材用水煎煮、去渣濃縮后，加煉蜜或糖制成的半流體制劑蜜或糖制成的半流體制劑1、 煎膏劑煎膏劑(膏滋膏滋) 相對密度相對密度不溶物不溶物 裝量裝量微生物限度微生物限度檢查項目檢查項目應(yīng)無焦臭、異味，無糖結(jié)晶析出應(yīng)無焦臭、異味，無糖結(jié)晶析出2、流浸膏劑與浸膏劑（半流浸膏劑與浸膏劑（半/固）固）藥材用適宜的溶劑提取，蒸去部分藥材用適宜的溶劑提取，蒸去部分或全部溶劑，調(diào)整濃度至規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)或全部溶劑，調(diào)整濃度至規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)而制成的制劑而制成的制劑裝量裝量微生物限度微生物限度檢查項目檢查項目1ml流流 浸膏浸膏 1g 原藥材原藥材1g 浸膏浸膏 2 5g 原藥材原藥

10、材生產(chǎn)提取溶劑大多為水或稀醇生產(chǎn)提取溶劑大多為水或稀醇檢測時一般需經(jīng)有機提取后分析檢測時一般需經(jīng)有機提取后分析（1）有效成分明確且有適當(dāng)方法有效成分明確且有適當(dāng)方法 ，測定，測定 有效成分的含量有效成分的含量 （2）有效成分不明或無定量方法的，可有效成分不明或無定量方法的，可 測一定溶劑的浸出物含量測一定溶劑的浸出物含量 （3）對于流浸膏，有的測總固體量以控對于流浸膏，有的測總固體量以控 制其質(zhì)量制其質(zhì)量（四）（四）固體制劑固體制劑 藥材提取物、藥材粉末加賦藥材提取物、藥材粉末加賦形劑、制備而成形劑、制備而成丸劑、膠劑、顆粒劑、散劑、片劑、丸劑、膠劑、顆粒劑、散劑、片劑、膠囊劑、錠劑、膠劑、茶

11、劑、栓劑膠囊劑、錠劑、膠劑、茶劑、栓劑（有植物組織與細(xì)胞，可做顯微鑒別）（有植物組織與細(xì)胞，可做顯微鑒別）三、三、 中藥制劑分析的一般程序及方法中藥制劑分析的一般程序及方法取樣取樣鑒別鑒別含量測定含量測定檢查檢查提取提取純化純化（一）取樣（一）取樣 原則：均勻合理 方法：（1）抽取樣品法：樣品量大 （2）圓椎四分法：樣品量小供試品溶液的制備供試品溶液的制備（二）（二）1、提取方法、提取方法（1）萃取法）萃取法 利用溶質(zhì)在兩種互不相溶的溶利用溶質(zhì)在兩種互不相溶的溶劑中溶解度的不同，使物質(zhì)從一種劑中溶解度的不同，使物質(zhì)從一種溶劑轉(zhuǎn)移到另一種溶劑中，將測定溶劑轉(zhuǎn)移到另一種溶劑中，將測定組分提取出來的

12、方法組分提取出來的方法正丁醇正丁醇 用于皂苷類用于皂苷類醋酸乙酯醋酸乙酯 用于黃酮類用于黃酮類氯仿氯仿 用于生物堿類用于生物堿類乙醚、石油醚乙醚、石油醚 用于揮發(fā)油用于揮發(fā)油1）萃取溶劑的選擇）萃取溶劑的選擇2）水相）水相pH的選擇的選擇酸性成分酸性成分 比其比其pKa低低12個個pH單位單位堿性成分堿性成分 比其比其pKa高高12個個pH單位單位（3）儀器和提取次數(shù)）儀器和提取次數(shù)（4）酒劑和酊劑）酒劑和酊劑先揮去乙醇先揮去乙醇（5）防止和消除乳化）防止和消除乳化分液漏斗分液漏斗鑒別鑒別1次次含量測定含量測定 3 4次次（2、 ） 冷浸法冷浸法 樣品置溶劑里，室溫下浸泡一樣品置溶劑里，室溫下

13、浸泡一段時間的提取方法段時間的提取方法適宜易溶出的組分適宜易溶出的組分適宜遇熱不穩(wěn)定的藥物適宜遇熱不穩(wěn)定的藥物 費時費時（8 24小時）小時）特點特點適用范圍適用范圍適宜植物性粉末適宜植物性粉末不宜動物性粉末不宜動物性粉末親脂性親脂性 親水性親水性石油醚石油醚 苯苯 氯仿氯仿 乙醚乙醚 乙酸乙酯乙酸乙酯 丙酮丙酮 乙醇乙醇 甲醇甲醇 水水（3） 回流提取法回流提取法 樣品置有機溶劑中加熱回流的樣品置有機溶劑中加熱回流的提取方法提取方法加快溶出速度，省時加快溶出速度，省時適宜受熱穩(wěn)定的藥物適宜受熱穩(wěn)定的藥物適宜較難溶出的組分適宜較難溶出的組分特點特點儀器儀器普通回流裝置普通回流裝置通過更換溶劑，

14、使提取更完全通過更換溶劑，使提取更完全（4）、）、連續(xù)回流提取法連續(xù)回流提取法 樣品置有機溶劑中加熱，蒸發(fā)樣品置有機溶劑中加熱，蒸發(fā)的溶劑經(jīng)冷凝流回樣品管的提取方的溶劑經(jīng)冷凝流回樣品管的提取方法法節(jié)省溶劑，提高提取效率節(jié)省溶劑，提高提取效率適宜受熱穩(wěn)定的藥物適宜受熱穩(wěn)定的藥物費時費時特點特點儀器儀器索氏提取器索氏提取器（5）、）、水蒸氣蒸餾法水蒸氣蒸餾法 適用于具揮發(fā)性的可隨水蒸氣適用于具揮發(fā)性的可隨水蒸氣蒸出的組分的測定蒸出的組分的測定麻黃堿、檳榔堿、丹皮酚、揮發(fā)油麻黃堿、檳榔堿、丹皮酚、揮發(fā)油（6）、）、超聲提取法超聲提取法 超聲波振蕩器（超聲波清洗器）超聲波振蕩器（超聲波清洗器） 簡便簡

15、便 省時省時 提取率高提取率高 利用超聲波的助溶作用進行提取利用超聲波的助溶作用進行提取原理原理 超聲波在液體中以疏密相間的形式超聲波在液體中以疏密相間的形式向物體輻射，出現(xiàn)向物體輻射，出現(xiàn)“空化空化”現(xiàn)象（氣泡現(xiàn)象（氣泡的的形成、產(chǎn)生及破裂現(xiàn)象），形成超過形成、產(chǎn)生及破裂現(xiàn)象），形成超過1000個大氣壓的沖擊力個大氣壓的沖擊力（7）、）、超臨界流體萃取超臨界流體萃取（SFE法）法）當(dāng)壓力和溫度超過氣體的臨當(dāng)壓力和溫度超過氣體的臨界點時所形成的單一相態(tài)界點時所形成的單一相態(tài)超臨界流體超臨界流體 是一種處于超臨界點之上的流體，是一種處于超臨界點之上的流體，是介于氣體與液體之間的一種物相，兼是介于

16、氣體與液體之間的一種物相，兼有氣體與液體的一些特性有氣體與液體的一些特性氣體氣體超臨界流體超臨界流體氣體氣體T 壓力壓力T 壓力壓力 超臨界流體萃取與化學(xué)法萃取相比有超臨界流體萃取與化學(xué)法萃取相比有以下突出的優(yōu)點：以下突出的優(yōu)點： 1） 它具有與液體相似的密度，因而它具有與液體相似的密度，因而具有與液體相似的較強的溶解能力；具有與液體相似的較強的溶解能力； 2）溶質(zhì)在流體中的擴散系數(shù)與氣體）溶質(zhì)在流體中的擴散系數(shù)與氣體相似，具有傳質(zhì)快，提取時間短的優(yōu)相似，具有傳質(zhì)快，提取時間短的優(yōu)點；點； 3）超臨界流體的表面張力為零，）超臨界流體的表面張力為零，易滲透到樣品中，帶走測定組分；易滲透到樣品中，

17、帶走測定組分；4）超臨界流體在通常狀態(tài)下為氣）超臨界流體在通常狀態(tài)下為氣體，萃取后溶劑可立即變成氣體體，萃取后溶劑可立即變成氣體而逸出，易達(dá)到濃集的目的；而逸出，易達(dá)到濃集的目的；5） CO2是一種不活潑的氣體是一種不活潑的氣體, 萃取過萃取過程不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)程不發(fā)生化學(xué)反應(yīng),且屬于不燃性氣體且屬于不燃性氣體,無味、無臭、無毒，故安全性好；無味、無臭、無毒，故安全性好；6） CO2價格便宜，純度高，容易取價格便宜，純度高，容易取得，且在生產(chǎn)過程中循環(huán)使用，從而得，且在生產(chǎn)過程中循環(huán)使用，從而降低成本；降低成本；7） 該技術(shù)易與其他儀器聯(lián)用實現(xiàn)自該技術(shù)易與其他儀器聯(lián)用實現(xiàn)自動化動化2、純化方法純

18、化方法（1）、）、 萃取法萃取法 利用藥物與雜質(zhì)溶解性能利用藥物與雜質(zhì)溶解性能的不同進行分離的不同進行分離例例棄去棄去水層水層含生物堿樣品含生物堿樣品 H生物堿鹽生物堿鹽 游游離離生生物物堿堿氯氯仿仿氨水氨水H2O（2）柱色譜法柱色譜法（1）保留測定組分在柱上，洗去雜）保留測定組分在柱上，洗去雜 質(zhì)，再用適當(dāng)溶劑洗下組分質(zhì)，再用適當(dāng)溶劑洗下組分（2）保留雜質(zhì)于柱上）保留雜質(zhì)于柱上常用固定相常用固定相硅膠硅膠氧化鋁氧化鋁大孔吸附樹脂大孔吸附樹脂鑒別試驗鑒別試驗（三）、（三）、首選有效成分首選有效成分黃連黃連 小檗堿（抗菌消炎）小檗堿（抗菌消炎） 麻黃麻黃 麻黃堿（支氣管哮喘）麻黃堿（支氣管哮喘）

19、烏頭烏頭 烏頭堿（毒性）烏頭堿（毒性）洋地黃洋地黃 強心苷（強心）強心苷（強心）延胡索延胡索 延胡索乙素（鎮(zhèn)痛）延胡索乙素（鎮(zhèn)痛）1、顯微鑒別顯微鑒別（含生藥粉制劑）（含生藥粉制劑）丸劑、片劑、膠囊劑、散劑丸劑、片劑、膠囊劑、散劑快速，簡便，覆蓋面大快速，簡便，覆蓋面大 選擇原則選擇原則（1）應(yīng)選有專屬性的特征進行鑒別）應(yīng)選有專屬性的特征進行鑒別（2）多來源的藥材應(yīng)選擇共有的特征進行）多來源的藥材應(yīng)選擇共有的特征進行 鑒別鑒別1、水牛角濃縮粉、水牛角濃縮粉2、麝香、麝香3、珍珠、珍珠4、朱砂、朱砂5、雄黃、雄黃6、黃連、黃連7、梔子、梔子8、郁金、郁金9、黃芩、黃芩安宮牛黃丸安宮牛黃丸2、化學(xué)

20、鑒別化學(xué)鑒別 抗干擾能力差抗干擾能力差顯色、顯色、熒光、熒光 試試劑劑組組分分例例 二妙丸中蒼術(shù)的鑒別二妙丸中蒼術(shù)的鑒別褪色褪色醚層醚層樣品樣品乙醚乙醚 4KMnO蒼術(shù)酮蒼術(shù)酮蒼術(shù)炔蒼術(shù)炔3、色譜鑒別色譜鑒別TLC法法應(yīng)用最多應(yīng)用最多 （Rf、顏色、熒光）、顏色、熒光）GC法法 適用于含揮發(fā)性成分適用于含揮發(fā)性成分 的藥物的藥物 HPLC法法常與含量測定同時進常與含量測定同時進 行行（1）陰、陽對照法）陰、陽對照法陽性對照陽性對照 將要鑒別的藥材按制劑將要鑒別的藥材按制劑 工藝處理，再按鑒別方工藝處理，再按鑒別方 法提取的溶液法提取的溶液陰性對照陰性對照 把制劑中要鑒別的藥材把制劑中要鑒別的藥

21、材 除去，用剩下的各味藥除去，用剩下的各味藥 按制劑工藝處理，再按按制劑工藝處理，再按 鑒別方法提取的溶液鑒別方法提取的溶液 OO O O O O O O O O O 陰陰 樣樣 陽陽 對對 品品 對對例例大補陰丸大補陰丸 黃柏的黃柏的TLC法鑒別法鑒別 樣樣品品對照對照藥材藥材小小檗檗堿堿O O OO O 例例（2）對招品對照法）對招品對照法（3）對照藥材對照法）對照藥材對照法薄層板的選擇薄層板的選擇 硅膠硅膠G板（可加板（可加0.3% 0.5% CMC-Na） 多用多用 氧化鋁板氧化鋁板 常用于生物堿類藥物常用于生物堿類藥物 聚酰胺板聚酰胺板 常用于黃酮類及酚類常用于黃酮類及酚類 藥物藥物

22、 纖維素板纖維素板 常用于氨基酸類藥物常用于氨基酸類藥物 （1）定義：）定義： 中藥材或中藥制劑經(jīng)適當(dāng)處中藥材或中藥制劑經(jīng)適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段，得理后，采用一定的分析手段，得到的能夠標(biāo)定該中藥材或中藥制到的能夠標(biāo)定該中藥材或中藥制劑特性的共有峰的圖譜劑特性的共有峰的圖譜4、中藥鑒別新技術(shù)中藥指、中藥鑒別新技術(shù)中藥指 紋圖譜紋圖譜（2）. 色譜指紋圖譜的基本屬性色譜指紋圖譜的基本屬性（3）. 指紋圖譜的應(yīng)用指紋圖譜的應(yīng)用雅蓮云蓮味蓮味蓮雅蓮雅蓮云蓮云蓮IIIIII訶訶 子子小訶子小訶子大訶子大訶子絨毛訶子絨毛訶子人參須根人參須根人參主根人參主根不同產(chǎn)地高良姜的氣相指紋圖譜不同產(chǎn)地高良姜

23、的氣相指紋圖譜指紋圖譜研究過程中的注意事項：指紋圖譜研究過程中的注意事項：1、在藥效學(xué)指導(dǎo)下進行研究，保證指、在藥效學(xué)指導(dǎo)下進行研究，保證指紋圖譜反映的化學(xué)成分包括中藥材紋圖譜反映的化學(xué)成分包括中藥材中有效部位所含的絕大部分成分或中有效部位所含的絕大部分成分或有效成分的全部。有效成分的全部。2、樣品的預(yù)處理過程及測定方法應(yīng)簡、樣品的預(yù)處理過程及測定方法應(yīng)簡便、經(jīng)濟、易行，且專屬性、準(zhǔn)確便、經(jīng)濟、易行，且專屬性、準(zhǔn)確度與重現(xiàn)性好。度與重現(xiàn)性好。雜質(zhì)檢查雜質(zhì)檢查（四）、（四）、水分水分總灰分和酸不溶性灰分總灰分和酸不溶性灰分重金屬重金屬砷鹽砷鹽殘留農(nóng)藥殘留農(nóng)藥 主要項目主要項目雜質(zhì)來源及檢查意義雜

24、質(zhì)來源及檢查意義水分水分 結(jié)塊、霉變或有效成分水解結(jié)塊、霉變或有效成分水解灰分灰分 控制藥物本身及泥土、沙石控制藥物本身及泥土、沙石 等無機雜質(zhì)等無機雜質(zhì)砷鹽砷鹽 劇毒，常由除草劑、殺蟲劑劇毒，常由除草劑、殺蟲劑 或化肥引入或化肥引入重金屬重金屬 環(huán)境污染和使用農(nóng)藥引入環(huán)境污染和使用農(nóng)藥引入 殘留農(nóng)藥殘留農(nóng)藥 有毒有毒烘干法烘干法（不含或少含揮發(fā)性成分）（不含或少含揮發(fā)性成分）甲苯法甲苯法 （含揮發(fā)性成分）（含揮發(fā)性成分）減壓干燥法減壓干燥法（含揮發(fā)性成分貴重藥）（含揮發(fā)性成分貴重藥） GC法法1、水分測定法水分測定法酸不溶性灰分的測定酸不溶性灰分的測定 灰化灰化恒重恒重炭化炭化供試品供試品已

25、恒重坩堝已恒重坩堝600500 炭化炭化灰化灰化過濾過濾總灰分總灰分已恒重坩堝已恒重坩堝HCld總灰分的測定總灰分的測定2、總灰分和酸不溶性灰分的測定總灰分和酸不溶性灰分的測定WHO規(guī)定植物藥規(guī)定植物藥鉛鉛10ppm鎘鎘0.3ppm干法破壞干法破壞濕法破壞濕法破壞硫代乙酰胺法硫代乙酰胺法3、重金屬的測定重金屬的測定干法破壞（干法破壞（ChP）濕法破壞（濕法破壞（USP）灰灰化化炭炭化化供供試試品品低低溫溫 6005003HNO蒸蒸干干蒸蒸干干第第一一法法 HClOH2(調(diào)到中性調(diào)到中性) 第第一一法法消消化化供供試試品品凱凱氏氏燒燒瓶瓶O法法古蔡氏法古蔡氏法供試品供試品有機破壞有機破壞DDCA

26、g 堿融法破壞堿融法破壞濕法破壞濕法破壞堿融法堿融法 灰化灰化炭化炭化供試品供試品6005002OHCaH+ 34AsO4、砷鹽的測定砷鹽的測定5、 殘留農(nóng)藥的測定殘留農(nóng)藥的測定1、 總氯量的測定總氯量的測定2、 總磷量的測定總磷量的測定3、GC法法 中國藥典中藥制劑含量測定所占比例中國藥典中藥制劑含量測定所占比例 版本版本 % 1977 1.48 1985 5.31 1990 8.73 1995 12.81 2000 62.09 （HPLC 36% TLCS 24% GC 3%)含量測定含量測定（五）（五）測定項目的選定原則測定項目的選定原則1 首選君藥及貴重藥、劇毒藥建立首選君藥及貴重藥、

27、劇毒藥建立 含量測定方法含量測定方法2 其次考慮臣藥及其他味藥其次考慮臣藥及其他味藥3 有效成分明確的，可選有效成分有效成分明確的，可選有效成分4 成分類別清楚的，可測某一類總成分類別清楚的，可測某一類總 成分的含量成分的含量5 檢測成分應(yīng)歸屬某單一藥味檢測成分應(yīng)歸屬某單一藥味6 檢測成分應(yīng)與中醫(yī)用藥的功能主檢測成分應(yīng)與中醫(yī)用藥的功能主 治相近治相近7 確無法含量測定的，可測定浸出確無法含量測定的，可測定浸出 物含量物含量化學(xué)分析法化學(xué)分析法色譜法色譜法常用定量方法常用定量方法 分光光度法分光光度法1、化學(xué)分析法化學(xué)分析法重量分析法重量分析法 容量分析法容量分析法特點特點 A、準(zhǔn)確度、精密度高

28、、準(zhǔn)確度、精密度高 B、抗干擾能力差、抗干擾能力差昆昆明明山山海海棠棠片片 HCl殘渣殘渣濾液濾液樣品樣品乙醇乙醇 OHNH23乙醚乙醚恒重恒重稱重稱重 例例2、分光光度法分光光度法UV法法 比色法比色法特點特點 A、靈敏度高、靈敏度高 B、簡便、快速、簡便、快速 C、精密度稍低、精密度稍低 D、干擾多、干擾多 蘆丁蘆丁nm,max359299266259 黃芩苷黃芩苷nm,max314271240 小檗堿小檗堿 nm,max360350345 丹皮酚丹皮酚nmmax274 3、TLCS法法 測定薄層板上斑點對單色光的吸測定薄層板上斑點對單色光的吸收或反射的強度而進行定量的方法收或反射的強度而

29、進行定量的方法特點特點 A、分離效果好、分離效果好 B、適用于無法用、適用于無法用UV、HPLC 法測定的組分法測定的組分 C、準(zhǔn)確度、精密度低于、準(zhǔn)確度、精密度低于HPLC2000年版中國藥典（年版中國藥典（2000年版）年版）薄層掃描法品種薄層掃描法品種 品種數(shù)量品種數(shù)量 TLCS數(shù)量數(shù)量 占總數(shù)占總數(shù)%534（藥材）（藥材） 20 3.74458（成藥）（成藥） 32 6.99978（總數(shù)）（總數(shù)） 52 10.73（1）、）、 選擇測定條件選擇測定條件1）薄層色譜條件）薄層色譜條件分離好分離好 不拖尾不拖尾2）檢測方法）檢測方法吸收測定法吸收測定法熒光測定法熒光測定法反射法反射法透射法

30、透射法3）掃描方式）掃描方式 單波長單波長雙波長雙波長線性掃描法線性掃描法鋸齒掃描法鋸齒掃描法外標(biāo)法外標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法4）散射參數(shù)）散射參數(shù)SX薄層板的散射使薄層板的散射使ECLA Kubelka-Munk方程方程 jSiKSdxdi iSjKSdxdj （1）薄層板）薄層板 均勻、平整均勻、平整（2） 注意事項注意事項（2）點樣量）點樣量 準(zhǔn)確準(zhǔn)確（4）顯色劑）顯色劑 均勻、適當(dāng)均勻、適當(dāng)（5）保護斑點）保護斑點 用相同大小潔凈玻璃用相同大小潔凈玻璃蓋住薄層板，并用透明膠紙封住邊緣，蓋住薄層板，并用透明膠紙封住邊緣，以起固定和隔絕空氣作用以起固定和隔絕空氣作用（3）斑點）斑點 應(yīng)完全分離，不

31、拖尾應(yīng)完全分離，不拖尾 樣樣 樣樣 對對 對對 樣樣 樣樣 對對 對對 樣樣 樣樣 對對 對對 低低 高高 低低 高高 低低 高高 外標(biāo)法（兩點校正法）外標(biāo)法（兩點校正法）4、HPLC法法RP - HPLC色譜柱色譜柱 ODS流動相流動相 甲醇甲醇 - 水水PIC 反離子反離子 氫氧化四丁基銨氫氧化四丁基銨色譜柱色譜柱 ODSRP - PIC 反離子反離子 烷基磺酸鹽烷基磺酸鹽 無機陰離子無機陰離子外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法離子對色譜法（離子對色譜法（PIC） 極性流動相中加入離子對試劑，極性流動相中加入離子對試劑，與被分析離子生成中性離子對，從而與被分析離子生成中性離子對，從而增加在非極性

32、固定相中的溶解度，使增加在非極性固定相中的溶解度，使分配系數(shù)增大分配系數(shù)增大2000年版中國藥典（年版中國藥典（2000年版）年版）HPLC法品種法品種 品種數(shù)量品種數(shù)量 HPLC數(shù)量數(shù)量 占總數(shù)占總數(shù)%534（藥材）（藥材） 54 10.11458（成藥）（成藥） 48 10.48978（總數(shù)）（總數(shù)） 102 20.59中藥制劑分析的進展 （一）新方法的研究進展 1、計算藥物分光光度法 2、模式識別法 （二）新技術(shù)的研究進展 1、多維色譜及連用技術(shù) 2、藥理、生物測定技術(shù) （三）微量元素分析的研究進展應(yīng)用實例應(yīng)用實例- -小青龍合劑小青龍合劑 處方處方 麻黃麻黃125g 125g 桂枝桂枝

33、125g 125g 白芍白芍125g 125g 干姜干姜125 125 五味子五味子125g125g 細(xì)辛細(xì)辛62g 62g 甘草甘草( (蜜炙蜜炙) ) 法半夏法半夏188g188gNOTESNOTES：合劑是在傳統(tǒng)湯劑基礎(chǔ)上改進后的一種新劑型：合劑是在傳統(tǒng)湯劑基礎(chǔ)上改進后的一種新劑型生物堿生物堿桂皮醛桂皮醛芍藥甙芍藥甙揮發(fā)油揮發(fā)油三萜皂甙三萜皂甙應(yīng)用實例應(yīng)用實例- -小青龍合劑小青龍合劑 制法制法 以上八味，細(xì)辛、桂枝提取揮以上八味，細(xì)辛、桂枝提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集，藥渣與發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集，藥渣與白芍、麻黃、五味子、甘草加水煎煮至味白芍、麻黃、五味子、甘草加水煎煮至

34、味盡，合并煎液，濾過，濾液和蒸餾后的水盡，合并煎液，濾過，濾液和蒸餾后的水溶液合并，濃縮至約溶液合并，濃縮至約1000ml1000ml。法半夏、甘。法半夏、甘姜照流浸膏劑項下滲漉法，用姜照流浸膏劑項下滲漉法，用70%70%乙醇作溶乙醇作溶劑，浸漬劑，浸漬2424小時后進行滲漉，漉液濃縮，小時后進行滲漉，漉液濃縮，與上述藥液合并，靜置，濾過，濾液濃縮與上述藥液合并，靜置，濾過，濾液濃縮至至1000ml1000ml，加入苯甲酸鈉，加入苯甲酸鈉3g3g與細(xì)辛、桂枝與細(xì)辛、桂枝揮發(fā)油，攪勻，即得。揮發(fā)油，攪勻，即得。 性狀性狀 本品為棕黑色的液體；氣微本品為棕黑色的液體；氣微香，味甜、微辛。香，味甜、

35、微辛。 功能與主治功能與主治 解表化飲，止咳平喘。解表化飲，止咳平喘。用于風(fēng)寒水飲，惡寒發(fā)熱，無汗，用于風(fēng)寒水飲，惡寒發(fā)熱，無汗，喘咳痰稀。喘咳痰稀。 用法與用量用法與用量 口服，一次口服，一次10-20ml10-20ml，一日一日3 3次，用時搖勻。次，用時搖勻。方藥分析：方藥分析：君君 麻黃麻黃發(fā)汗為君發(fā)汗為君臣臣 桂枝桂枝解表為臣解表為臣佐佐 甘草甘草恐發(fā)汗太過恐發(fā)汗太過, , 佐以甘草緩佐以甘草緩 之之使使 白芍、干姜、細(xì)辛、法半夏、五白芍、干姜、細(xì)辛、法半夏、五 味子味子幾藥合力共為使。幾藥合力共為使?？赏獍l(fā)汗，內(nèi)行水，散表里之邪?？赏獍l(fā)汗，內(nèi)行水，散表里之邪。漢代張仲景漢代張仲景傷

36、寒論傷寒論小青龍湯小青龍湯近代由重慶桐君閣中藥廠該湯劑為合近代由重慶桐君閣中藥廠該湯劑為合劑劑本方治療傷寒表不解，心下有水氣，本方治療傷寒表不解，心下有水氣，干嘔，發(fā)熱而咳。近代也用于慢性干嘔，發(fā)熱而咳。近代也用于慢性支氣管炎，支氣管哮喘、肺氣腫，支氣管炎，支氣管哮喘、肺氣腫，均見咳、喘、痰白清稀者。均見咳、喘、痰白清稀者。供試品溶液與陰性對照液的制備：供試品溶液與陰性對照液的制備： 取合劑取合劑10 ml10 ml，石油醚分，石油醚分3 3次萃取，次萃取，合并石油醚萃取液合并石油醚萃取液 油層油層 ，濃縮至，濃縮至1ml1ml，為供試品溶液為供試品溶液A A； 水層水層 用用NaNa2 2C

37、OCO3 3調(diào)調(diào)PH11-12PH11-12，用氯仿萃取，用氯仿萃取，合并氯仿萃取液，回收氯仿至干，殘渣合并氯仿萃取液，回收氯仿至干，殘渣用用1ml1ml甲醇溶解，為供試品溶液甲醇溶解，為供試品溶液B B；NOTESNOTES：如上法同步進行如上法同步進行。1. 1. 桂皮醛的鑒別桂皮醛的鑒別 取供試品液取供試品液A A、陰性對照液、桂、陰性對照液、桂皮醛對照液（皮醛對照液（1ug/ml1ug/ml）1 15ul5ul，點于，點于同一硅膠同一硅膠G G板上，環(huán)己烷板上，環(huán)己烷- -乙酸乙酯乙酸乙酯（1717：3 3）展開，晾干，噴）展開，晾干，噴2 2，4 4二二硝基苯肼乙醇硝基苯肼乙醇T.S

38、T.S，供試品，供試品A A與對照與對照品在相應(yīng)位置上顯相同的橙色斑點，品在相應(yīng)位置上顯相同的橙色斑點，而陰性對照液無此斑點。而陰性對照液無此斑點。2. 2. 細(xì)辛揮發(fā)油的鑒別細(xì)辛揮發(fā)油的鑒別 取供試品液取供試品液A A、陰性對照液、細(xì)、陰性對照液、細(xì)辛揮發(fā)油對照液（辛揮發(fā)油對照液（1 1：1010乙醚液）乙醚液）5ul5ul，點于同一硅膠，點于同一硅膠G G板上，環(huán)己烷板上，環(huán)己烷展開，晾干，噴展開，晾干，噴10%10%香草醛濃硫酸香草醛濃硫酸T.ST.S，加熱至顯色，供試品，加熱至顯色，供試品A A與對照與對照品在相應(yīng)位置上顯相同的粉紅色斑品在相應(yīng)位置上顯相同的粉紅色斑點，而陰性對照液無此

39、斑點。點，而陰性對照液無此斑點。3. 麻黃堿的鑒別麻黃堿的鑒別 取供試品液取供試品液B，陰性對照液，麻黃，陰性對照液，麻黃堿對照品液（堿對照品液（1mg/ml）各）各5ul，點于，點于同一硅膠同一硅膠G，氯仿，氯仿-甲醇甲醇-濃氨水濃氨水（20：5：0.5）展開，晾干，噴茚三）展開，晾干，噴茚三酮酮T.S，加熱至斑點顯色，供試品，加熱至斑點顯色，供試品B與對照品在相應(yīng)位置上顯相同的藍(lán)紫與對照品在相應(yīng)位置上顯相同的藍(lán)紫色斑點，而陰性對照液無此斑點。色斑點，而陰性對照液無此斑點。 取合劑取合劑5ml，上聚酰胺柱，上聚酰胺柱，DW洗脫，洗脫液水浴濃縮至干，用洗脫，洗脫液水浴濃縮至干，用1ml甲醇溶解

40、，為供試品溶液甲醇溶解，為供試品溶液C； 聚酰胺柱再用聚酰胺柱再用95%乙醇洗脫，乙醇洗脫，棄取洗脫液，用棄取洗脫液，用3M氨乙醇液洗脫，氨乙醇液洗脫，收集洗脫液水浴蒸干，收集洗脫液水浴蒸干， 1ml甲醇溶甲醇溶解，為供試品溶液解，為供試品溶液D。4. 芍藥甙的鑒別芍藥甙的鑒別 取供試品液取供試品液C、陰性對照液、芍、陰性對照液、芍藥甙對照液（藥甙對照液（1mg/ml）10ul，點于同，點于同一硅膠一硅膠G板上，氯仿板上，氯仿-乙酸乙酯乙酸乙酯-甲醇甲醇-冰醋酸冰醋酸-甲酸（甲酸（8：1：2：0.04）展開，）展開，晾干，噴晾干，噴10%硫酸乙醇液，加熱至顯硫酸乙醇液，加熱至顯色，供試品色，供

41、試品C與對照品在相應(yīng)位置上與對照品在相應(yīng)位置上顯相同的紫色斑點，而陰性對照液無顯相同的紫色斑點，而陰性對照液無此斑點。此斑點。 5. 甘草酸的鑒別甘草酸的鑒別 取供試品液取供試品液D、陰性對照液、甘、陰性對照液、甘草酸銨對照液（草酸銨對照液（2mg/ml）2ul，點于，點于同一硅膠同一硅膠G板上，乙酸乙酯板上，乙酸乙酯-甲酸甲酸-冰醋冰醋酸酸-蒸餾水（蒸餾水（30：2：2：4）展開，晾）展開，晾干，噴干，噴10%硫酸乙醇液，加熱至顯色，硫酸乙醇液，加熱至顯色，UV燈燈365nm觀察，供試品觀察，供試品D與對照品與對照品在相應(yīng)位置上顯相同的紫色斑點，而在相應(yīng)位置上顯相同的紫色斑點，而陰性對照液無

42、此斑點。陰性對照液無此斑點。含量測定含量測定HPLC法測定芍藥甙的含量法測定芍藥甙的含量 儀器與色譜條件儀器與色譜條件 BECKMAN 332型高效液相色譜儀型高效液相色譜儀 163型可變波長紫外檢測儀，型可變波長紫外檢測儀，220nm 427型記錄及數(shù)據(jù)處理儀型記錄及數(shù)據(jù)處理儀 色譜柱為色譜柱為YWGC18 流動相乙腈流動相乙腈-水（水（15：85） 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 精密稱取芍藥甙精密稱取芍藥甙5.08mg，溶于水至溶于水至50ml量瓶中，定容，分別吸取量瓶中，定容，分別吸取0.50、1.00、1.50、2.00ml于于10ml量瓶中定量瓶中定容。容。 回收率測定回收率測定 精密吸

43、取除去白芍制成的合劑精密吸取除去白芍制成的合劑（即陰性對照液即陰性對照液）0.3ml與適量芍藥甙對照與適量芍藥甙對照品液，通過品液，通過0.5g聚酰胺柱，用水洗脫至聚酰胺柱，用水洗脫至50ml量瓶中至刻度，依前述條件測定，平量瓶中至刻度，依前述條件測定，平均回收率為均回收率為99.42%，RSD為為0.23%（n=3）。）。樣品測定樣品測定 取自制小青龍合劑搖勻，用濾取自制小青龍合劑搖勻，用濾紙過濾，精密吸取紙過濾，精密吸取0.3ml0.3ml濾液通過濾液通過聚酰胺柱，以不同回收率測定條聚酰胺柱，以不同回收率測定條件進行測定。件進行測定。 分析實例分析實例萬氏牛黃清心丸萬氏牛黃清心丸 處方處方

44、 牛黃牛黃10g 10g 朱砂朱砂60g 60g 黃連黃連200200g g 黃芩黃芩120g 120g 梔子梔子120g 120g 郁金郁金8080g g分析實例分析實例萬氏牛黃清心丸萬氏牛黃清心丸 制法制法 以上六味，除牛黃外，朱砂水以上六味，除牛黃外，朱砂水飛或粉碎成極細(xì)粉；其余黃連等四飛或粉碎成極細(xì)粉；其余黃連等四味粉碎成細(xì)粉；將牛黃研細(xì)，與上味粉碎成細(xì)粉；將牛黃研細(xì)，與上述粉末配研，過篩，混勻。每述粉末配研，過篩，混勻。每100g100g粉末加煉蜜粉末加煉蜜100-200g100-200g制成大蜜丸，制成大蜜丸，即得。即得。古方為糊丸，亦有水丸古方為糊丸，亦有水丸 性狀性狀 本品為紅

45、棕色至棕褐色的大本品為紅棕色至棕褐色的大蜜丸；氣特異，味甜、微澀、苦。蜜丸；氣特異，味甜、微澀、苦。 功能主治功能主治 清熱解毒，鎮(zhèn)驚安神。清熱解毒，鎮(zhèn)驚安神。用于熱邪內(nèi)閉，煩躁不安，神昏譫用于熱邪內(nèi)閉，煩躁不安，神昏譫語，小兒高熱驚厥。語，小兒高熱驚厥。 方藥分析方藥分析 牛黃牛黃清熱解毒藥，主含膽酸類成分。清熱解毒藥，主含膽酸類成分。黃連黃連清熱燥濕藥，主要為小檗堿。清熱燥濕藥，主要為小檗堿。黃芩黃芩清熱燥濕藥，主要為黃酮類。清熱燥濕藥，主要為黃酮類。梔子梔子清熱瀉火藥，主含梔子甙。清熱瀉火藥，主含梔子甙。朱砂朱砂安神藥，主含硫化汞（安神藥，主含硫化汞（HgSHgS）。）。郁金郁金活血去瘀

46、藥，主含揮發(fā)油。活血去瘀藥，主含揮發(fā)油。 鑒別鑒別q 顯微鑒別顯微鑒別郁金郁金糊化淀粉團塊幾乎無色。糊化淀粉團塊幾乎無色。梔子梔子種皮石細(xì)胞。種皮石細(xì)胞。黃芩黃芩纖維淡黃色，梭形，厚壁，孔溝細(xì)。纖維淡黃色，梭形，厚壁，孔溝細(xì)。黃連黃連纖維鮮黃色，壁稍厚，紋孔明顯。纖維鮮黃色，壁稍厚，紋孔明顯。朱砂朱砂不規(guī)則塊狀物或顆粒狀物，暗紅棕色、不規(guī)則塊狀物或顆粒狀物，暗紅棕色、鮮紅色或棕黃色。鮮紅色或棕黃色。郁金郁金糊化淀粉團糊化淀粉團塊塊梔子梔子種皮石細(xì)胞種皮石細(xì)胞黃芩黃芩纖維纖維黃連黃連纖維纖維朱砂朱砂不規(guī)則塊狀不規(guī)則塊狀物或顆粒狀物，暗物或顆粒狀物，暗紅棕色、鮮紅色或紅棕色、鮮紅色或棕黃色棕黃色q

47、 化學(xué)鑒別化學(xué)鑒別1. 朱砂的鑒別朱砂的鑒別 取本品取本品3g，加水適量，研勻，反復(fù)洗去，加水適量，研勻，反復(fù)洗去懸浮物，可得少量朱紅色沉淀，取出，加懸浮物，可得少量朱紅色沉淀，取出，加入鹽酸入鹽酸1ml及銅片少量，加熱煮沸，銅片及銅片少量，加熱煮沸，銅片由黃色變?yōu)殂y白色。由黃色變?yōu)殂y白色。 HgS+2HCl+CuCuCl2+Hg+H2S NOTES：在酸性條件下，朱砂與銅片發(fā)：在酸性條件下，朱砂與銅片發(fā)生置換反應(yīng)析出金屬汞，在銅片表面形成生置換反應(yīng)析出金屬汞，在銅片表面形成銀白色汞齊。銀白色汞齊。2. 2. 人工牛黃的鑒別人工牛黃的鑒別 取本品，剪碎，加硅藻土取本品，剪碎，加硅藻土0.6g0

48、.6g，研勻，加氯仿研勻，加氯仿10ml10ml、冰醋酸、冰醋酸0.5ml0.5ml，加熱回流加熱回流30min,30min,放冷，濾過，濾液放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇蒸干，殘渣加乙醇2ml2ml使溶解，濾過，使溶解，濾過，濾液作為供試品溶液。濾液作為供試品溶液。 膽酸和豬去氧膽酸加乙醇制成膽酸和豬去氧膽酸加乙醇制成1ml1ml含含1mg1mg的混合溶液，作為對照品的混合溶液，作為對照品溶液。溶液。TLC法法 CMC-Na，硅膠，硅膠G展開劑展開劑 醋酸乙酯醋酸乙酯-正己烷正己烷-醋酸醋酸-甲醇甲醇 （32:6:1:1）顯色劑顯色劑 10%磷鉬酸乙醇液，磷鉬酸乙醇液， 1100C,10m

49、in人工牛黃人工牛黃供試品供試品牛黃空白牛黃空白豬去氧膽酸豬去氧膽酸膽膽酸酸3. 黃芩的鑒別黃芩的鑒別 供試品溶液的制備：取本品供試品溶液的制備：取本品3g，剪碎，加硅藻土剪碎，加硅藻土0.5g，研勻，加甲，研勻，加甲醇醇20ml，加熱回流，加熱回流1hr,放冷，濾過，放冷，濾過，濾液作為供試品溶液。濾液作為供試品溶液。 對照品溶液的制備：黃芩甙對對照品溶液的制備：黃芩甙對照品加甲醇制成每照品加甲醇制成每1ml含含1mg的溶液，的溶液，作為對照品溶液。作為對照品溶液。TLC法法 CMC-Na，硅膠，硅膠G （4%醋酸鈉）醋酸鈉）展開劑展開劑 醋酸乙酯醋酸乙酯-丁酮丁酮-甲酸甲酸-水水 （5:3

50、:1:1）顯色劑顯色劑 2%三氯化鐵乙醇液三氯化鐵乙醇液使斑點更為集中使斑點更為集中-OH與與Fe+3絡(luò)合絡(luò)合黃芩甙供試品黃芩空白4. 梔子的鑒別梔子的鑒別 供試品溶液的制備：取本品供試品溶液的制備：取本品3g，加乙，加乙醚醚15ml，研磨，棄去乙醚。殘渣揮干乙醚，研磨，棄去乙醚。殘渣揮干乙醚，加醋酸加醋酸乙酯乙酯30ml，加熱回流，加熱回流1hr,放冷，濾過，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇濾液蒸干，殘渣加甲醇3ml溶解，濾過，溶解，濾過，濾濾液作為供試品溶液。液作為供試品溶液。 對照品溶液的制備：梔子甙對照品加對照品溶液的制備：梔子甙對照品加甲醇制成每甲醇制成每1ml含含1mg的溶液，作為

51、對照品的溶液，作為對照品溶液。溶液。TLC法法 CMC-Na，硅膠，硅膠G展開劑展開劑 醋酸乙酯醋酸乙酯-丙酮丙酮-甲酸甲酸-水水 （10 : 7 : 2 : 0.5）顯色劑顯色劑 10%硫酸乙醇硫酸乙醇 1050C, 10min梔子甙供試品梔子空白5. 黃連的鑒別黃連的鑒別 供試品溶液的制備：取含量供試品溶液的制備：取含量測定項下剩余的鹽酸測定項下剩余的鹽酸-甲醇提取液甲醇提取液4ml，水浴蒸干，殘渣加甲醇，水浴蒸干，殘渣加甲醇溶解，溶解，使成使成1ml作為作為供試品溶液。供試品溶液。 對照藥材溶液對照藥材溶液的制備：黃連對的制備：黃連對照藥材照藥材50mg，加甲醇，加甲醇10ml，回流加，

52、回流加熱熱15min ,濾過，濾液蒸干，殘渣加濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇甲醇1ml使溶解，作為對照藥材溶液。使溶解，作為對照藥材溶液。 對照品溶液的制備對照品溶液的制備：再取鹽酸：再取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇小檗堿對照品，加甲醇制成每制成每1ml含含 0.5mg的溶液，作為對照品溶液。的溶液，作為對照品溶液。TLC法法 硅膠硅膠G CMC-Na展開劑展開劑 苯苯-醋酸乙酯醋酸乙酯-甲醇甲醇-異丙醇異丙醇-濃氨濃氨試液（試液（12:6:3:3:1）顯色劑顯色劑 UV（365nm）鹽酸小檗堿黃連黃連公式品供試品供試品黃連空白黃連空白含量測定含量測定 1. 朱砂朱砂 取本品約取本品約5g，剪碎，精密

53、稱定，置，剪碎，精密稱定，置250ml凱氏燒瓶中，加硫酸凱氏燒瓶中，加硫酸30ml與硝酸鉀與硝酸鉀8g，加熱俟溶液至近無色，放冷，轉(zhuǎn)入加熱俟溶液至近無色，放冷，轉(zhuǎn)入250ml錐錐形瓶中，用水形瓶中，用水50ml分次洗滌燒瓶，洗液并分次洗滌燒瓶，洗液并人溶液中，滴加人溶液中，滴加1%高錳酸鉀溶液至顯粉紅高錳酸鉀溶液至顯粉紅色，兩分鐘內(nèi)不消失，再滴色，兩分鐘內(nèi)不消失，再滴加加2%硫酸亞鐵硫酸亞鐵溶液至紅色消失后，加硫酸鐵銨指示液溶液至紅色消失后，加硫酸鐵銨指示液2ml，用硫氰酸銨滴定液滴定，即得。用硫氰酸銨滴定液滴定，即得。每每1ml的的硫硫氰酸銨滴定液相當(dāng)于氰酸銨滴定液相當(dāng)于11.63mg的硫化

54、汞的硫化汞。 硫酸與硝酸鉀硫酸與硝酸鉀分解試樣及有機破壞分解試樣及有機破壞高錳酸鉀溶液高錳酸鉀溶液除去試樣分解時產(chǎn)生的亞硫除去試樣分解時產(chǎn)生的亞硫酸酸粉紅色兩分鐘內(nèi)不消失粉紅色兩分鐘內(nèi)不消失亞硫酸可將亞硫酸可將Hg2+ 還原還原Hg+使含量變低，觀察兩分鐘完全除使含量變低，觀察兩分鐘完全除去亞硫酸去亞硫酸硫酸亞鐵溶液硫酸亞鐵溶液除去過量的高錳酸鉀除去過量的高錳酸鉀滴定反應(yīng)滴定反應(yīng) Hg2+ +2CNS- Hg(CNS)2顯色反應(yīng)顯色反應(yīng) CNS-(過量過量)+Fe3+ Fe(CNS)2+(紅紅色色)2.黃連黃連 取本品約取本品約4g，剪碎，精密稱定，剪碎，精密稱定，置索氏提取器，鹽酸置索氏提取

55、器，鹽酸-甲醇（甲醇（1:100）適）適量，量，加熱回流提取至提取液無色，提取加熱回流提取至提取液無色，提取液移至液移至50ml量瓶中，用鹽酸量瓶中，用鹽酸-甲醇適量甲醇適量稀釋至刻度，搖勻，照柱色譜法，精密稀釋至刻度，搖勻，照柱色譜法，精密量取量取5ml，上，上AL2O3柱柱,25ml洗脫，收集洗脫，收集洗液置洗液置50ml量瓶中，乙醇稀釋至刻度，量瓶中，乙醇稀釋至刻度，精密吸取精密吸取2ml置置50ml量瓶中，加量瓶中，加0.05mol/L硫酸溶液稀釋至刻度，搖勻。硫酸溶液稀釋至刻度，搖勻。UV345nm測定測定A。 為為728,本品含總本品含總生物堿按鹽酸小檗堿計不得少于生物堿按鹽酸小檗

56、堿計不得少于1.7%。%11cmE%11cmE黃連黃連 方中臣藥之首方中臣藥之首 用量最大用量最大有效成分清楚有效成分清楚 黃連有效成分為小檗堿，尚含黃連有效成分為小檗堿，尚含其它少量生物堿，如黃連堿、甲基其它少量生物堿，如黃連堿、甲基黃連堿、藥根堿、巴馬亭等，均為黃連堿、藥根堿、巴馬亭等，均為原小檗堿型生物堿。原小檗堿型生物堿。 硫酸溶液硫酸溶液 在酸性條件下，在酸性條件下，N原子呈共軛體系的季銨狀態(tài)，在原子呈共軛體系的季銨狀態(tài)，在345nm處有最大吸收。其它五味藥處有最大吸收。其它五味藥的空白提取液在該波長處略有吸收，的空白提取液在該波長處略有吸收，約相當(dāng)于約相當(dāng)于0.3%小檗堿，因此測定

57、結(jié)小檗堿，因此測定結(jié)果偏高。果偏高。 本品為蜜丸制劑，其黃連生物堿溶本品為蜜丸制劑，其黃連生物堿溶出速率較藥材相對緩慢，回流至提出速率較藥材相對緩慢，回流至提取液無色后應(yīng)放置一段時間。取液無色后應(yīng)放置一段時間。 第二節(jié) 生化藥物分析簡介 一、定義一、定義 生化藥物 指運用生物化學(xué)的理論、方法和技術(shù)，從動物、植物及微生物等生物體中提取分離的天然活性物質(zhì)，以及這些物質(zhì)及其衍生物的化學(xué)合成、半合成和現(xiàn)代生物技術(shù)制得的產(chǎn)品。一、生化藥物分析的特點 （一）分子量的不確定性（一）分子量的不確定性 生化藥物除氨基酸、核苷酸、輔酶及甾體激素等屬化學(xué)結(jié)構(gòu)明確的小分子化合物外，大部分為大分子的物質(zhì)（如蛋白質(zhì)、多肽

58、、核酸、多糖類等），其分子量一般幾千至幾十萬。對大分子的生化藥物而言，即使組分相同，往往由于分子量不同而產(chǎn)生不同的生理活性。甚至 化學(xué)結(jié)構(gòu)也不確定，因此要進行純度測定及分子量測定。 （二）分析項目的特殊性（二）分析項目的特殊性 1、分析方法：生物檢定法檢定活性 2、安全性檢查：熱源檢查、異常毒性試驗等 3、效價測定：酶類藥物 （三）分析方法多樣性（三）分析方法多樣性 理化測定法、生化測定法、生物檢定法二、生化藥物的分析方法二、生化藥物的分析方法 （一）鑒別（一）鑒別 、化學(xué)反應(yīng)法、化學(xué)反應(yīng)法 利用藥物與某試劑在一定條件下反應(yīng)，生成有顏色的產(chǎn)物或沉淀進行鑒別。 例如，溶菌酶的鑒別采用呈色法：溶菌

59、酶分子中的四個肽鍵上的氮原子能與銅離子（Cu2）絡(luò)合，生成有顏色的絡(luò)合物，肽鍵越多，產(chǎn)生的顏色越深。 胃蛋白酶的鑒別采用沉淀法：胃蛋白酶是具有高效、專一催化活性的特殊蛋白質(zhì)，易受酸、堿、重金屬或有機溶劑等的作用，破壞蛋白質(zhì)肽鏈的空間結(jié)構(gòu)，引起蛋白質(zhì)變性，生成不溶性的沉淀。 、紫外分光光度法、紫外分光光度法 三磷酸腺苷二鈉的分子中具有共軛系統(tǒng)，能吸收紫外光。本品的0.01molL鹽酸水溶液（20gml），在（2571）nm的波長處有最大吸收。A250nmA260nm的值應(yīng)為0.170.27。 、酶法、酶法 尿激酶是專屬性較強的蛋白水解酶，根據(jù)尿激酶能激活牛纖維蛋白溶酶原，而具有相同作用的鏈激酶不

60、能激活牛纖維蛋白溶酶原而加以區(qū)別，并用直接觀察溶解纖維蛋白作用的氣泡上升法作為判斷指標(biāo)。 4、電泳法、電泳法例：肝素的鑒別采用糖凝膠電泳法：肝素是由D-硫酸氨基葡萄糖和葡萄糖醛酸分子間組成的酸性粘多糖，其水溶液帶強負(fù)電荷，于瓊脂凝膠板上，在電場作用下，向正極方向移動，與肝素國家標(biāo)準(zhǔn)品對照，其移動位置應(yīng)相應(yīng)， 5、生物法、生物法 利用生物體進行試驗來鑒別藥物 （二）雜質(zhì)檢查（二）雜質(zhì)檢查 生化藥物分子較大，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，有時成分并生化藥物分子較大，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，有時成分并非單一，純化工藝較難，因此，生化藥物的非單一，純化工藝較難，因此，生化藥物的雜質(zhì)檢查就顯得非常重要。雜質(zhì)檢查就顯得非常重要。 1、一般