生化實驗報告4

1、生物化學實驗報告 纖維素酶活力的測定 還原糖的測定-3,5-二硝基水楊酸法 劉欣怡 201100140057 2011級生物基地班 周一下午 同組者：劉藝 2013年4月8號 周一下午一、實驗目的1、學會并掌握用3、5二硝基水楊酸法測定酶活力方法。2、鞏固使用分光光度計。3、掌握還原糖和總糖測定的基本原理。4、學習比色法測定還原糖的操作方法。二、實驗器材1、試劑：（1）3、5二銷基水楊酸顯色液：稱取10克3、5-二銷基水楊酸，溶入蒸餾水中，加入20克分析純氫氧化鈉，200克酒石酸鉀鈉，加水500毫升，升溫溶解后，加入重蒸酚2克，無水亞硫酸鈉0.5克。加熱攪拌，待全溶后冷卻，定容至1000毫升。

2、存于棕色瓶中，放置一周后使用。（2）纖維素酶：0.05g酶溶解定容至50ml，取1ml再定容至100ml待測（用PH4.5乙酸-乙酸鈉緩沖液配制）。即20g/ml。（3）05%羧甲基纖維素鈉水溶液（CMC）：用0.1mol/LPH4.5醋酸-醋酸鈉緩沖溶液配置，溶解后成膠狀液，靜置過夜。使用前搖勻。（4）標準葡萄糖溶液：稱取干燥至恒重的葡萄糖100毫克，溶解后定容至100毫升，此溶液含葡萄糖1.00毫克/毫升。（5）西瓜汁：使用新鮮的西瓜現(xiàn)場榨得西瓜汁，并且過濾以備用。（6）蒸餾水2、器材：722型分光光度計、水浴鍋、電爐、多個比色管、移液槍、燒杯、不同型號的移液管、多個試管、槍頭、試管架、多

3、個膠頭滴管、洗耳球、溫度計、試管夾、量筒等。三、實驗原理1、纖維素酶：纖維素酶是一種多組分酶，包括C1酶、CX酶和-葡萄糖苷酶三種主要組分。其中C1酶的作用是將天然纖維素水解成無定形纖維素，CX酶的作用是將無定形纖維素繼續(xù)水解成纖維寡糖，-葡萄糖苷酶的作用是將纖維寡糖水解成葡萄糖。纖維素酶水解纖維素產生的纖維二糖、葡萄糖等還原糖能將堿性條件下的3,5-二硝基水楊酸（DNS）還原，生成棕紅色的氨基化合物，在550nm波長處有最大光吸收，在一定范圍內還原糖的量與反應液的顏色強度呈比例關系，利用比色法測定其還原糖生成的量就可測定纖維素酶的活力。產生纖維素酶的菌種容易退化，導致產酶能力降低。纖維素酶在

4、食品行業(yè)和環(huán)境行業(yè)均有廣泛應用。在進行酒精發(fā)酵時，纖維素酶的添加可以增加原料的利用率，并對酒質有所提升。由于纖維素酶難以提純，實際應用時一般還含有半纖維素酶和其他相關的酶，如淀粉酶（amylase）、蛋白酶（Protease）等纖維素酶種類繁多，來源很廣。不同來源的纖維素酶其結構和功能相差很大。由于真菌纖維素酶產量高、活性大，故在畜牧業(yè)和飼料工業(yè)中應用的纖維素酶主要是真菌纖維素酶。常見的畜禽飼料如谷物、豆類、麥類及加工副產品等都含有大量的纖維素。除了反芻動物借助瘤胃微生物可以利用一部分外，其它動物如豬、雞等單胃動物則不能利用纖維素。近年來，國內外利用真菌纖維素酶成為提高畜禽生產性能和飼料利用率

5、的重要措施之一。2、酶活力：酶活力（enzyme activity）也稱為酶活性，是指酶催化一定化學反應的能力。酶活力的大小可用在一定條件下，酶催化某一化學反應的速度來表示，酶催化反應速度愈大，酶活力愈高，反之活力愈低。測定酶活力實際就是測定酶促反應的速度。酶促反應速度可用單位時間內、單位體積中底物的減少量或產物的增加量來表示。在一般的酶促反應體系中，底物往往是過量的，測定初速度時，底物減少量占總量的極少部分，不易準確檢測，而產物則是從無到有，只要測定方法靈敏，就可準確測定。因此一般以測定產物的增量來表示酶促反應速度較為合適。3、本實驗中酶活力定義：1g酶每分鐘水解生成1微克葡萄糖的量定義為一

6、個活力單位。由此定義我們可以計算本實驗中的纖維素酶活力。4、還原糖：能夠還原斐林(H.von Fehling)試劑或托倫斯(B.Tollens)試劑的糖稱為還原糖，所有的單糖（除二羥丙酮），不論醛糖、酮糖都是還原糖。大部分雙糖也是還原糖，蔗糖例外。斐林試劑是含Cu2 絡合物的溶液，被還原后得到磚紅色Cu2O的沉淀。托倫斯試劑被還原后能生成單質銀，在試管壁上可看到“銀鏡”。 分子結構中含有還原性基團（如游離醛基或游離羰基）的糖，叫還原糖。如葡萄糖。果糖含有游離的醛基，所以果糖也屬于還原糖。一般情況下，單糖的還原能力主要來自它的醛基，如葡萄糖，而多糖則大多因為半縮醛羥基的存在。還原后，自

7、己會變成糖酸。如葡萄糖就會變成葡萄糖酸。 如該糖是一酮糖，酮基就會斷裂，分解成兩個較小的分子，如果糖。除蔗糖外，所有單糖及雙糖在本尼迪克特試驗中呈陽性反應，所以所有單糖及雙糖都具有還原性。但有時果糖可能會算作非還原糖處理。還原糖在堿性條件下加熱被氧化成糖酸及其它產物，3,5-二硝基水楊酸則被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定范圍內，還原糖的量與棕紅色物質顏色的深淺成正比關系，利用分光光度計，在540 nm波長下測定光密度值，查對標準曲線并計算，便可求出樣品中還原糖和總糖的含量。由于多糖水解為單糖時，每斷裂一個糖苷鍵需加入一分子水，所以在計算多糖含量時應乘以0.9。還原糖的

8、測定是糖定量測定的基本方法。還原糖是指含有自由醛基或酮基的糖類，單糖都是還原糖，雙糖和多糖不一定是還原糖，如乳糖和麥芽糖是還原糖，蔗糖和淀粉是非還原糖。利用糖的溶解度不同，可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來，對沒有還原性的雙糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有還原性的單糖進行測定，再分別求出樣品中還原糖和總糖的含量（還原糖以葡萄糖含量計）。黃色    桔紅色四、實驗內容 使用3,5-二硝基水楊酸法，并且借助分光光度計，繪制標準曲線來測定纖維素酶的活力以及西瓜汁中還原糖的含量。五、實驗步驟（一）纖維素酶活力的測定標注：0.1g纖維素酶溶解定容至50mL.取1mL再定容

9、至100mL，即10g/ml的纖維素酶液待測。（用PH4.5乙酸-乙酸鈉緩沖液配制，、此實驗已配好）1、空白管的制備：用移液管取1mL酶液置于干凈的比色管中，貼上標簽“空白”，緊接著沸水浴5分鐘，取出冷卻，然后用移液管加3mL0.5%CMC。2、樣品管的制備：取干凈的3支比色管，標上1、2、3，分別加入3mL0.5%CMC以及1mL酶液。3、集體操作：將配置好的樣品管與空白管同時置于50°C 水浴鍋水浴30分鐘。取出后，立刻沸水浴10分鐘。取出后冷卻，然后再分別用移液管加入3mL 3,5-二硝基水楊酸顯色液，然后再沸水浴10分鐘，取出冷卻后再定容至25mL（比色管上的25ml刻度），

10、撕取一小塊保鮮膜封在比色管口并且用橡皮筋扎緊，然后倒轉比色管混勻溶液。打開分光光度計開關預熱15min，然后將樣品管和空白管都在550nm下測量其OD值，并且記錄數(shù)據(jù)。為了讓測得的OD值在標準曲線的范圍內而不需要繪制延長線，所以在第一次測量之后，又將各個樣品溶液稀釋了2倍，即將各個比色管中的溶液減少到比色管上的刻度12.5ml處，然后再定容到最大的25ml刻度線處，再進行測量，記錄所有數(shù)據(jù)。最終計算在得到標準曲線之后。（二）西瓜汁中還原糖的測定1、標準曲線比色管的制備： 取6支干凈的比色管，分別標上1、2、3、4、5、6，依次（按照從1號到6號的順序）用移液管向各個比色管中加入0、0.2、0.

11、4、0.6、0.8、1ml標準葡萄糖溶液。然后再按照相同的順序依次在各個比色管中用移液管加入1、0.8、0.6、0.4、0.2、0ml的蒸餾水。2、樣品比色管的制備：用移液管吸取2ml的壓榨并過濾好的西瓜汁，用100ml容量瓶定容至100ml刻度線。混勻后，用移液管分別吸取0.5ml稀釋好的西瓜汁至三個干凈的比色管中，三個比色管編號依次為7、8、9，然后再分別用移液管移取0.5ml蒸餾水至3個標記好的樣品比色管中。3、集體操作：將配置好的6支標準曲線比色管以及3支樣品比色管放入同一個大燒杯中，用移液管一次向各個比色管中加入3ml配置好的顯色液，然后將所有的比色管沸水浴10min。取出后冷卻。然

12、后加蒸餾水值比色管上的25ml刻度線。撕取一小塊保鮮膜封好比色管口，并且用橡皮筋扎好保鮮膜，然后用中指堵住比色管口并來回倒轉比色管以混勻溶液。打開分光光度計預熱15min，然后用1號管作為空白管，依次測定各個比色管中溶液的OD值，該過程中，1號比色管的溶液倒入小杯中后，放入分光光度計的第一處就不用再取出。記錄數(shù)據(jù)。4、計算：繪制標準曲線，根據(jù)標準曲線來計算西瓜汁中還原糖的含量。同時，將上面測得的纖維素酶活力的OD值帶入標準曲線，計算得纖維素酶的活力。N×OD值對應的葡萄糖量纖維素酶活力單位=30×1N酶液的稀釋倍數(shù)30糖化所用時間（min）1反應酶液毫升數(shù)標注：對于本次實驗

13、中的全部冷卻操作，均是將比色管從沸水中取出后，現(xiàn)在空氣中冷卻一會，待比色管的溫度手可以承受后再用流水沖洗比色管外壁來冷卻，千萬注意不好讓水流入比色管中！六、實驗結果1、纖維素酶活力測定實驗結果： 表I、纖維素酶活力的測定編號空白樣品一樣品二樣品三酶液/mL1(失活)111CMC/mL333350恒溫30min，取出后立即沸水浴10min顯色液/mL3333沸水浴中煮沸顯色10min,冷卻,加蒸餾水至25mLA（550nm）0.0000.7790.7780.794 4個比色管中的溶液稀釋2倍A(550nm)0.000 0.404 0.4030.3982、西瓜汁中還原糖的測定實驗結果： 表II、還

14、原糖的測定管號試劑標準曲線樣品123456789標準葡萄糖溶液/ml00.20.40.60.81.0稀釋的西瓜汁/ml0.50.50.5水/ml1.00.80.60.40.200.50.50.5顯色劑/ml分別加入3ml顯色劑，然后沸水浴10min，取出后冷卻，然后加水定容至25ml，混勻A（550nm）0.0000.1180.2750.4190.5490.6730.2750.2780.2733、標準曲線：4、纖維素酶活力的計算： 注意，本次實驗中的酶液，老師配制成了20g/ml。（1）本次實驗一共做了三組平行實驗以及一組空白實驗，一共得到了3個OD值，因為此次酶是新產品，所以一開始實驗的稀釋

15、倍數(shù)不是很合適，得到的OD值超出了標準曲線的范圍，因為超出部分不知是否依舊是正比關系，所以又將三組樣品稀釋了2倍后再測，得到的OD值符合要求，取平均值為： （0.404+0.403+0.398）/3=0.402（2）如上圖，擬合的標準曲線的方程式為y=0.686x-0.004,則將OD值為0.402即y=0.402帶入該方程式中，得到： x=0.592 即OD值對應的葡萄糖含量為0.592mg/ml，即592ug/ml。（3）回顧整個實驗操作可以得出，一開始只加入了1ml的酶液，即20g，而酶活力的定義是針對1g酶，所以相當于酶液稀釋了5*104倍；在實驗中，第一次測得的OD值比較大，超出了標

16、準曲線的范圍，所以又將每一個樣品溶液稀釋了2倍，再進行測量，此時測得的OD值符合要求。所以： N=105 因為本次實驗中所使用的酶液是20 ug/ml，再根據(jù)本次實驗中酶活力的定義（1g酶每分鐘水解生成1微克葡萄糖的量定義為一個活力單位）可以得： 纖維素酶活力單位（592*105）/（30*1）=1.97*106 U/g 該結果根據(jù)的酶活力的定義是老師寫在黑板上的。（根據(jù)實驗講義上的酶活力的定義，即1mg酶每分鐘水解生成1微克葡萄糖的量定義為一個活力單位，此時纖維素酶活力單位=1.97*103U/mg）5、西瓜汁中還原糖的計算：（1）本次實驗中一共做了三個樣品比色管，得到了三個OD值，取平均得

17、： （0.275+0.278+0.273）/3=0.275（2）如上圖，擬合的標準曲線的方程式為y=0.686x-0.004,則將OD值為0.275即y=0.275帶入該方程式中，得到： x=0.400（3）回顧整個實驗操作，西瓜汁首先是2ml稀釋定容至100ml，即稀釋了50倍，然后吸取0.5ml于比色管中，又加入了0.5ml蒸餾水，之后的操作與標準曲線相同?？傊还蚕♂屃?0*2=100倍。由此可得： （0.400*100）/1000=0.0400g/ml即西瓜汁中還原糖的含量為0.0400g/ml。七、實驗分析1、本次實驗結果分析：(1)纖維素酶活力的計算：對于本次實驗，除了實驗操作中

18、移液量的準確性、空白實驗的制作以及平行實驗的制作這些需要注意的地方外，在最后計算時，要根據(jù)本次實驗中酶活力的定義來分析計算。本次實驗中，對于酶液的稀釋倍數(shù)N的判斷很關鍵，因為本次實驗定義1g酶每分鐘水解生成1微克葡萄糖的量定義為一個活力單位，而操作中，加入了1ml酶，含有20g，即相當與1g酶稀釋了5*104倍，之后在測量OD值時，又將各個樣品溶液稀釋了2倍，所以一共稀釋了105倍。對于思考時的干擾因素將1ml的酶液加入到比色管后，最后測量OD之前，定容到比色管的刻度線25ml，并不是將酶液稀釋了25倍。因為標準曲線指定時，每支比色管中均加入了由蒸餾水和標準葡萄糖溶液混合的不同濃度的葡萄糖溶液

19、1ml，之后在測量OD之前也是定容到了25ml，計算時，根據(jù)樣品溶液的OD值在標準曲線上尋找相對應的葡萄糖含量，此時是1ml纖維素酶液及1ml葡萄糖溶液之間的對應關系，所以無需考慮定容到25ml的影響。除此之外，其他的數(shù)據(jù)較易分析，即1ml酶液、30min反應時間以及對應的以g/ml為單位的葡萄糖含量，然后直接帶入公式計算即可。對于本次實驗結果，三組平行實驗的結果平行性還不錯，其中的兩個樣品的OD值相差0.001，剩下的一個稍微偏離的多一些，但是這三個OD值的差別均在小數(shù)的千分位上，所以結果還是理想的。（2）西瓜汁中還原糖的測定：本次實驗是使用的葡萄糖標準曲線，以葡萄糖來表征西瓜汁中所有的還原

20、糖。對于計算西瓜汁中還原糖的含量，算法以及思考方式同之前一些用到分光光度計的實驗蛋白質的含量測定、RNA的含量測定等是一樣的。對于本次實驗結果，測得的西瓜汁稀釋樣品的OD值，三組平行實驗的結果平行性非常好，幾乎沒有差別，分析成功的原因有：嚴格用移液管的有刻度部分仔細認真移取試劑；認真仔細定容，嚴格按照凹液面的最低處和刻度線平齊來實施；分光光度計提前預熱，且預熱時間合適；定容后，用保鮮膜封好比色管口，并用橡皮筋扎好關口，然后認真倒轉混合比色管中加入的試劑，溶液混合均勻；測量OD值時，嚴格用待測溶液潤洗比色杯3次；2、纖維素酶實驗誤差分析：在該實驗中，有以下方面可能導致誤差：（1）比色管中溶液定容

21、到25ml后未充分混勻，導致上層溶液濃度偏低，進而影響OD值測量；（2）測OD值時，使用比色杯潤洗次數(shù)不足，影響測定；（3）空白管在沸水浴時未完全失活，會導致調零基準不準確，影響實驗結果；（4）樣品管和空白管放入沸水浴的操作沒有保證時間相同，會直接導致實驗誤差；（5）定容時應使液體先完全冷卻，否則宜出現(xiàn)誤差；（6）用移液管移取液體，管口最后的一滴易產生移液量的誤差；（7）分光光度計預熱時間短，儀器還不穩(wěn)定就開始測量；（8）各個比色管中顯色劑加入的量并不全是精確地3ml；（9）50水浴時間不足30min，或者超過30min；3、還原糖實驗誤差分析：在該實驗中，有以下方面可能導致誤差：（1）各個比

22、色管中顯色劑加入的量并不全是精確的3ml；（2）比色管中溶液定容到25ml后未充分混勻，導致上層溶液濃度偏低，進而影響OD值測量；（3）測OD值時，使用比色杯潤洗次數(shù)不足，影響測定；（4）定容時應使液體先完全冷卻，否則宜出現(xiàn)誤差；（5）用移液管移取液體，管口最后的一滴易產生移液量的誤差；（6）分光光度計預熱時間短，儀器還不穩(wěn)定就開始測量；4、回顧整個實驗操作過程，為了又好又快地進行實驗，可以加快實驗速度的操作有：（1）使用較大一些的移液管，吸一次試劑后，加入到多個比色管中，注意要使用有刻度的部分；（2）纖維素酶活力測定實驗的比色管和還原糖含量測定實驗的比色管同時進行配制，兩人合作完成；（3）使

23、用熱水進行加熱可以更快的得到沸水??；（4）使用分光光度計時，向比色杯中倒溶液，從濃度小的開始，濃度一次增大，這樣不需要用蒸餾水沖洗比色杯，可以直接用待測的溶液潤洗；（5）測OD值時，空白溶液的比色杯放入第一位后便不用再取出，一直用來標定即可。八、實驗注意事項1、注意是用移液管取液，并且使用有刻度的部分，不要使用移液槍，不準確。2、注意清洗比色管后，盡量將水甩干凈。3、沸水浴后，取出冷卻，一定要先在空氣中冷卻，待溫度降下些后再流水冷卻。否則也冷易爆。4、用流水冷卻比色管時，千萬不要讓水進入比色管5、分光光度計要提前打開開關預熱，這樣更準確。6、在測定時，調零用1號管液一定在相應的各管液測定完成后

24、，方可從比色杯中棄掉。7、用移液管加各試劑時，不能混用。8、在測定時為使各樣品和空白管處理一致，應同時加入試劑，同時放入水浴中，同時取出水浴，以使反應得進行程度一致。9、在測溶液的OD值之前，應將溶液搖勻，搖勻的方法是用保鮮膜蒙住試管口，然后來回震蕩試管。10、標準曲線制作與樣品測定應同時進行顯色，并使用同一空白調零點比色。11、若比色液顏色過深，其吸光度可能超出標準曲線濃度范圍，可將樣液適當稀釋后再顯色測定12、注意在實驗前先將比色管貼好標簽，尤其是空白管，以免在實驗中比色管混淆。13、實驗中由于比色管中溶液量過多，若用旋窩攪拌器混勻，可能使溶液濺出，可使用保鮮膜，將其覆蓋在比色管口，上下?lián)u

25、動比色管，進行混勻。14、分光光度計使用前應進行預熱30min，使其發(fā)光穩(wěn)定，且在無樣品放置時，應使試樣室蓋打開，此時光門自動關閉，以保護光電管。15、使用比色管時要將其擦拭干凈，應用吸水紙吸去比色管表面溶液，用擦鏡紙擦拭，以避免對比色管光滑一面造成磨損。16、測量時，不可以其磨砂面正對光源。17、在標準曲線制作時，應從低濃度到高濃度以此測量，因為低濃度的殘留液對高濃度待測液的測定不會有太大影響，所以可不用潤洗比色管，但若有高濃度到低濃測定，則需要對比色管進行潤洗，以消除誤差，因為高濃度殘留液會對低濃度的溶液濃度造成很大影。18、用分光光度計測量OD值時，對于用來標定的空白溶液，倒入小杯后放在

26、第一個孔洞中。19、因為一次只能測量4種溶液，所以第一位上的空白溶液不要拿出，每測量一次就標定一次。20、注意本次實驗，酶液是10g/ml，標準葡萄糖溶液是1mg/ml。21、計算時，注意回顧實驗操作，看看一共稀釋了多少倍。22、計算纖維素酶活力時，注意本次實驗中有關酶活力的定義。23、測量結束后，將數(shù)據(jù)拿給老師看。24、實驗結束后，將儀器歸位，并且玻璃儀器洗干凈。九、實驗思考題1、兩個空白管是否有需要設立？曲線是否需要過原點？酶失活空白管設立的作用？ 答：兩個空白管都需要設立。酶失活空白管設立作用是排除酶和纖維素和與顯色劑反應產生的影響。常規(guī)的100沸水浴滅酶活并不徹底,殘留酶活形成的空白值

27、會導致測定結果產生較大的負偏差。建立了一種簡便可靠的空白實驗方法:以底物空白與酶液空白的算術和作為總空白值處理,其酶活測定偏差小于2%。并指出應在規(guī)范的測試條件下測定酶活,其測定結果才具有可比性,因此曲線需要過原點。2、影響纖維素酶產量和活力的因素很多，例如？答：除菌種外，還有培養(yǎng)溫度、pH、水分、基質、培養(yǎng)時間等。這些因素不是孤立的，而是相互聯(lián)系的。3、和測定還原糖相比，3,5-二硝基水楊酸比色法是如何對總糖進行測定的? 答：植物中的總糖包括單糖、寡糖和多糖，單糖是還原糖，可直接測定。而沒有還原性的寡糖和多糖，需用高濃度的酸在加熱的條件下水解成有還原性的單糖，還原糖在堿性條件下加熱被氧化成糖

28、酸及其它產物，3,5-二硝基水楊酸則被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定范圍內，還原糖的量與棕紅色物質顏色的深淺成一定比例關系，利用分光光度計，在540nm波長下測定光密度值，查對標準曲線并計算，可求出樣品中還原糖和總糖的含量。由于多糖水解為單糖時，每斷裂一個糖苷鍵需要加入一分子水，所以在計算多糖含量時應乘以0.9。4、什么叫標準曲線？答：標準曲線是指通過測定一系列已知組分的標準物質的某理化性質，而得到的性質的數(shù)值曲線。標準曲線是標準物質的物理/化學屬性跟儀器響應之間的函數(shù)關系。建立標準曲線的目的是推導待測物質的理化屬性。在分析化學實驗中，常用標準曲線法進行定量分析，通常情況下的標

29、準工作曲線是一條直線。與校正曲線不同，它是以標準溶液及介質組成的標準系列，標繪出來的曲線。校正曲線的標準系列的伴生組分必須與試樣相匹配，以便測量結果的準確。只有標準曲線與校正曲線相重合的條件下，才可以用標準曲線來代替校正曲線。5、如何正確繪制和使用標準曲線?答：標準曲線應在坐標紙上繪制，橫坐標軸距坐標紙底邊1.52cm，標示出刻度和葡萄糖的毫克數(shù)；縱坐標軸距坐標紙左邊1.52cm，標示刻度和光密度值；曲線為過原點的直線，測定點均勻分布在直線的兩側；標準曲線只能在測試條件完全相同的情況下，用于確定樣品中的物質含量。對于重復的測定，應取吸光度的平均值查標準曲線；測定數(shù)據(jù)不應記在標準曲線上。6、簡述

30、一些葡萄糖含量的測定方法及原理？答：（1）如果糖樣中沒有別的帶醛基的有機物，可以用DNS法測還原糖；（2）如果糖樣中有別的帶醛基的有機物，可以考慮采用高效液相色譜法（HPLC）；（3）其它也有一些方法，比如一樓的碘量法等等。但是，有不足，一是不精確，二是試劑有毒或者購買困難。十、實驗小結 通過本次實驗，我學習并掌握了3,5-二硝基水楊酸法測定纖維素酶活力以及還原糖含量的原理以及操作，我了解了相關纖維素酶、還原糖以及3,5-二硝基水楊酸的基本知識，我鞏固了分光光度計的使用以及操作和標準曲線的繪制，我還學習了有關酶活力的概念?？傊?，通過這次實驗，我收獲了很多，從操作以及知識全方面得到了提升。 但是

31、，通過這次實驗，我也認識到了自己的一點不足，在這次做實驗的過程中，因為比色管數(shù)量較多，而且是兩個實驗原理類似的實驗合并到一起上課，所以自己操作時一開始有一點混亂，比色管寫標簽也沒及時到位，一開始有點手忙腳亂，但是后來就好了。由這次實驗，我明白，以后實驗開始前，不要急于下手開始做，要先快速想一想這個實驗流程，小組內兩個人大致分一下工再開始進行實驗，有條不紊才能做得又好又快。十一、參考文獻生物化學實驗（第四版） 陳鈞輝、李俊、張冬梅、張?zhí)?、朱婉華編；科學出版社出版。十二、附錄1、纖維素酶的分類：（1）葡聚糖內切酶：能在纖維素酶分子內部任意斷裂-1，4糖苷鍵。 （2）葡聚糖外切酶或纖維二糖酶：能從纖維分子的非還原端依次裂解1，4糖苷鍵釋放出纖維二糖分子。（3）葡萄糖苷酶：能將纖維二糖及其他低分子