化學(xué)發(fā)光原理優(yōu)秀課件

1、2345FITCFITC標(biāo)記的抗體與酶標(biāo)抗體均和待測(cè)抗原不同表位標(biāo)記的抗體與酶標(biāo)抗體均和待測(cè)抗原不同表位結(jié)合，形成結(jié)合，形成“三明治三明治”復(fù)合結(jié)構(gòu)。通過(guò)磁固相上的復(fù)合結(jié)構(gòu)。通過(guò)磁固相上的FITCFITC抗體捕獲分離抗體捕獲分離“三明治三明治”復(fù)合物，加入發(fā)光底復(fù)合物，加入發(fā)光底物，底物在酶的作用下的被催化裂解，形成不穩(wěn)定物，底物在酶的作用下的被催化裂解，形成不穩(wěn)定的激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)激發(fā)態(tài)中間體回到基態(tài)時(shí)便發(fā)的激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)激發(fā)態(tài)中間體回到基態(tài)時(shí)便發(fā)出光子，形成發(fā)光反應(yīng)。出光子，形成發(fā)光反應(yīng)。6YYY被測(cè)抗原被測(cè)抗原+FITCFITC標(biāo)記標(biāo)記抗體抗體Y Y酶標(biāo)抗體酶標(biāo)抗體Y磁微粒磁微?？贵w抗

2、體YYYYYY7間接法適用于檢測(cè)對(duì)象是自身抗體的情況間接法適用于檢測(cè)對(duì)象是自身抗體的情況,比如比如人甲狀腺球蛋白抗體（人甲狀腺球蛋白抗體（TGAB）和甲狀腺過(guò)氧化）和甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體（物酶抗體（TPOAB）。）。由于抗體是由于抗體是IgG，引入酶標(biāo)二抗捕獲，引入酶標(biāo)二抗捕獲IgG。為了。為了消除樣品中其它消除樣品中其它IgG對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。先用磁對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。先用磁珠將待測(cè)樣品中待測(cè)物分離，通過(guò)洗滌后消除珠將待測(cè)樣品中待測(cè)物分離，通過(guò)洗滌后消除影響，再用標(biāo)記的二抗對(duì)待測(cè)物進(jìn)行結(jié)合完成影響，再用標(biāo)記的二抗對(duì)待測(cè)物進(jìn)行結(jié)合完成化學(xué)發(fā)光。化學(xué)發(fā)光。8PYY待測(cè)血清待測(cè)血清YYPYYYYYY

3、YYPYYPYYYYPYYY待測(cè)抗體待測(cè)抗體Y抗抗FITC抗體抗體PFITC標(biāo)記抗原標(biāo)記抗原Y酶標(biāo)抗體酶標(biāo)抗體磁珠磁珠9待測(cè)抗原屬于小分子，沒(méi)有足夠的抗原決定簇。用已知量待測(cè)抗原屬于小分子，沒(méi)有足夠的抗原決定簇。用已知量的標(biāo)記抗原，對(duì)比競(jìng)爭(zhēng)酶標(biāo)抗體。的標(biāo)記抗原，對(duì)比競(jìng)爭(zhēng)酶標(biāo)抗體。若待測(cè)物濃度高若待測(cè)物濃度高, ,與衍生物抗原競(jìng)爭(zhēng)，定量酶標(biāo)抗體與待與衍生物抗原競(jìng)爭(zhēng)，定量酶標(biāo)抗體與待測(cè)物結(jié)合量則多，反應(yīng)發(fā)光信號(hào)值低；若待測(cè)物濃度低，測(cè)物結(jié)合量則多，反應(yīng)發(fā)光信號(hào)值低；若待測(cè)物濃度低，與衍生物抗原競(jìng)爭(zhēng)，定量酶標(biāo)抗體與待測(cè)物結(jié)合量則少，與衍生物抗原競(jìng)爭(zhēng)，定量酶標(biāo)抗體與待測(cè)物結(jié)合量則少，反應(yīng)發(fā)光信號(hào)值高。反應(yīng)發(fā)光信號(hào)值高。10Y待測(cè)樣品待測(cè)樣品YYYYY待測(cè)抗原待測(cè)抗原FITC標(biāo)記標(biāo)記的抗原衍的抗原衍生物生物Y酶標(biāo)抗體酶標(biāo)抗體YYY待測(cè)樣品和衍生物跟抗待測(cè)樣品和衍生物跟抗體的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合體的競(jìng)爭(zhēng)