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1、移液器操作技巧前言:移液結(jié)果會(huì)很容易受到使用技法的影響。為了獲得最佳結(jié)果,需要采用良好的移液技法。技巧1:一致性在按壓與釋放定位銷時(shí),需要保持一致的節(jié)奏、速度和技法。吸液速度過(guò)快會(huì)導(dǎo)致套柄與活塞噴濺、產(chǎn)生氣霧以及受到污染,甚至導(dǎo)致樣品量損耗。一致性可使準(zhǔn)確度提高達(dá)5%。技巧2:正確填充吸頭當(dāng)某一吸頭的建議(標(biāo)稱)范圍為最大吸頭容量(標(biāo)稱容量)的10%至100%時(shí),可在35%至100%這一較小以及優(yōu)化的范圍內(nèi)實(shí)現(xiàn)最高精確度。在如此小的范圍內(nèi)移液會(huì)減少對(duì)操作人員技法的要求,并可將結(jié)果準(zhǔn)確度提高約1%當(dāng)達(dá)到標(biāo)稱容量的50%時(shí)可提供最佳結(jié)果。III100%35%10%技巧3:吸液時(shí)保持垂直入水角使入水
2、角盡可能地接近垂直位置-否則垂直液柱較小,這樣將會(huì)吸入過(guò)多樣(分液時(shí),吸頭應(yīng)當(dāng)與容器壁保持較小角度,從而確保良好的排液效果。關(guān)于分液的更多技巧將在下一期電子快訊中提供)2%使用垂直位置(尤其是使用微量移液器時(shí)),可使準(zhǔn)確度提高達(dá)技巧4:一致性千分尺設(shè)置始終從同一方向設(shè)置您的千分尺。最好從高至低進(jìn)行:在將容量設(shè)置從高容量減少降至低容量時(shí),只需將表盤下調(diào)至所需容量設(shè)置。提高容量設(shè)置時(shí),轉(zhuǎn)動(dòng)選擇輪使其略微超過(guò)所需容量,然后緩慢回調(diào)至正確設(shè)置這可避免機(jī)械回沖。正確設(shè)置容量可使準(zhǔn)確度提高達(dá)0.5%。入水深度1mm2-3mm3-6mm6-10mm技巧5:吸頭入水深度正確的吸頭入水深度對(duì)于微量移液器尤為重要
3、。如果吸頭入水過(guò)深,則隨著壓力的加大,吸液量將會(huì)增多。保留在吸頭表面的液體會(huì)影響結(jié)果。如果吸頭未入水過(guò)深,則會(huì)造成空氣進(jìn)入,從而產(chǎn)生氣泡以及導(dǎo)致容量不準(zhǔn)確。正確的入水深度可使準(zhǔn)確度提高達(dá)5%。移液器容量2與10ul20與100ul200與1000ul5000ul與10ML技巧6:分液技法對(duì)于大多數(shù)應(yīng)用而言,建議在分液時(shí)將吸頭的末端貼靠容器壁。這可減少或者消除分液后殘留在吸頭上的樣品。沿側(cè)壁向上滑動(dòng)吸頭末端將移液器拆下,從而去除吸頭孔處的任何殘留液滴。此技法可使結(jié)果準(zhǔn)確度提高達(dá)1%。另一種技法是直接分液到液體表面。使用諸如RAININFinePoint吸頭之類的薄壁吸頭十分重要,這是因?yàn)檫@些吸頭
4、允許充分排液。如果直接分液至液體中,則建議進(jìn)行反向模式移液,從而防止分液后吸液。技巧7:預(yù)清洗移液前至少預(yù)清洗兩遍,從而補(bǔ)償位于吸頭內(nèi)部的液體。這還有助于中和毛細(xì)管效果以及使移液器內(nèi)部的空氣溫度等于樣品溫度。使用正在分液的相同液體進(jìn)行預(yù)清洗。使用吸頭吸液,然后將其重新分液至儲(chǔ)罐或者廢液箱預(yù)清洗可為所有等分溶液提供相同的接觸表面當(dāng)與水液一同使用時(shí),兩次預(yù)先沖洗可使準(zhǔn)確度提高達(dá)0.2%技巧8:預(yù)清洗異常處理盡管預(yù)清洗在大多數(shù)情況下可提高準(zhǔn)確性,但是當(dāng)對(duì)非常溫和或者冰冷的溶液進(jìn)行移液時(shí),它會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生不利影響。不建議進(jìn)行預(yù)清洗的例外情況為:-對(duì)非常冰冷的溶液(如:冰?。┻M(jìn)行移液-對(duì)37°C
5、或以上的溫和溶液進(jìn)行移液對(duì)溫和或者冰冷溶液進(jìn)行預(yù)清洗有可能造成高達(dá)5%的錯(cuò)誤率。技巧9:恒定室溫在恒定室溫條件下移液。移液的理想室溫為+-21.50C,此溫度同樣適用于校準(zhǔn)。防止溫度大幅度或者突然變化,這是因?yàn)橐埔浩髦械目諝鉄o(wú)法足夠快速地適應(yīng),以及樣品量可能會(huì)受到影響。在恒溫條件下移液可使準(zhǔn)確度提高達(dá)5%。NormahzBdVolume;'/;:P1000Aioqjlsoop,iqcoml技巧10:始終垂直存放移液器不要將移液器平放在抽屜內(nèi)或者工作臺(tái)上。這有可能損壞套柄末端,從而造成泄漏。止匕外,殘留液體還會(huì)流入套柄中,從而污染移液器。正確儲(chǔ)存移液器可防止不可估量的錯(cuò)誤以及保護(hù)儀器。技
6、巧11:吸頭入水時(shí)間在將樣品吸入吸頭時(shí),在樣品中的入水時(shí)間是良好移液技法中的關(guān)鍵因素。在平穩(wěn)松開定位銷按鈕之后,必須進(jìn)行短暫暫停,然后再?gòu)臉悠分腥〕?,以確保將全量樣品吸入吸頭中。如果量較大以及對(duì)于粘性物質(zhì)而言,必須在等候較長(zhǎng)時(shí)間后再取出,因?yàn)橐埔浩髦械臍馐倚枰幻腌姷臅r(shí)間才能實(shí)現(xiàn)均衡。技巧12:吸液速率移液器的吸液速率不盡相同,因此會(huì)對(duì)結(jié)果的精度與準(zhǔn)確度產(chǎn)生影響。用戶應(yīng)使用以一種平穩(wěn)并且受控的方式釋放移液器定位銷按鈕。釋放過(guò)快的定位銷可能出現(xiàn)的最常見后果是:氣霧會(huì)進(jìn)入移液器套柄中,從而損壞移液器的內(nèi)部部件。當(dāng)出現(xiàn)向上噴濺液體的情況時(shí),這種現(xiàn)象更為明顯。如果液體具有腐蝕性,則有可能損壞移液器的套柄并且會(huì)造成樣品交叉污染。技巧13:反向移液模式對(duì)于科研人員而言,使用移液器對(duì)粘性與密致液體進(jìn)行精準(zhǔn)吸液與分液一直是一道難題。對(duì)策是使用反向移液模式。進(jìn)行
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