有機溶劑殘留量測定2015

1、藥物中有機溶劑殘留量的測定殘留溶劑（Residual Solvent） 定義：藥物中的殘留溶劑系指在原料藥或輔料的生產過程中，以及在制劑制備過程中使用或產生的，但在工藝過程中未能完全去除的有機溶劑。（Organic Volatile Impurities） 研究的性質：雜質研究的范疇 國內外主要相關指導原則和文件 ICH Q3c 雜質：殘留溶劑的指導原則 FDA：Guidence for Industry:Q3c Impurities:Residual Solvents EMEA:Position Paper on Specification fro Class 1 and Class 2 R

2、esidual Solvents in Active Substances 化學藥物有機溶劑殘留量研究技術指導原則 國內研究現(xiàn)狀：越來越重視，但仍存在很多不規(guī)范之處 原因 ：時間短、經驗少、對本質認識不夠，對國際新研究結果跟蹤不及時，對已有指導原則內涵領會不深刻 本講目標：通過分析和總結，明確一些問題，使研究更科學、更規(guī)范。各國藥典中殘留溶劑測定收載情況 USP35版 Chemical Tests / Residual Solvents 185 EP7.0版 2.4.24. Identification and control of residual solvents ChP2010年版附錄

3、P 殘留溶劑測定法 以上藥典方法是殘留溶劑研究的重要參考依據(jù)ICH 指導原則 人用藥品注冊技術要求國際協(xié)調會議( International Conference of Harmonizition ICH ) ICH 將藥品生產及純化過程中常用的69 種有機溶劑按照對人體和環(huán)境的危害程度分為4 類。殘留溶劑分類 第1 類溶劑:指已知可以致癌并被強烈懷疑對人和環(huán)境有害的溶劑, 其殘留量必須控制在規(guī)定的范圍內; 第2 類溶劑:指無基因毒性但有動物致癌性的溶劑; 第3 類溶劑:指對人體低毒的溶劑。在無需論證的情況下, 殘留溶劑的量不高于0.5% 是可接受的, 但高于此值則須證明其合理性; 第4 類:

4、尚無足夠毒理學資料的溶劑。有機溶劑的分類類別毒性PDE（mg/天）第一類溶劑人體致癌物、疑為人體致癌物或環(huán)境危害物0.1以下(1,1,1)三氯乙烷除外第二類溶劑有非遺傳致癌毒性或其他不可逆毒性、或其他嚴重的可逆毒性0.5-50第三類溶劑對人體低毒50第四類溶劑沒有足夠毒性資料限度的制定 殘留量表示方法：濃度限度 計算公式： 濃度限度（%）PDE/(1000劑量) 100% 其中：PDE：mg/天 劑量：一般為10g/天質量標準的制訂和修訂 PDE、濃度限度的比較 PDE值：絕對值，控制精確，但可能忽略多種溶劑的綜合影響。 濃度限度：以PDE為基礎，并采用比較大的每天給藥量計算，給出了一個比較大

5、的安全系數(shù)。 目前情況下，采用濃度限度比較簡便，而且只要日攝入總量不超過10g，就無需進一步計算。藥物中有機溶劑的引入 研究對象：原料藥/輔料、制劑 原料藥/輔料：合成過程中引入 包括： 作為合成原料或反應溶劑引入 作為反應副產物引入 由其他合成原料或其他溶劑帶入 制劑 各種成份（原料藥、輔料）帶入 制劑制備過程中引入制劑制備過程中引入（緩、控釋微丸包衣過程使用有機溶劑；難溶性藥物固體分散 ）他克莫司溶于無水乙醇和二氯甲烷中分散。藥物中有機溶劑的引入 研究集中在：原料藥的第一種情況 影響因素： 有機溶劑在合成過程中使用的步驟 后續(xù)溶劑的影響 中間體的影響 其他（如副反應等）有機溶劑的使用和殘留

6、與合成工藝密不可分，是評價合成工藝優(yōu)劣，篩選、確定合成工藝的重要因素之一。藥物中有機溶劑的引入 第一類溶劑原則：考慮其毒性，建議盡量避免使用。當合成路線涉及此類溶劑時合成化學發(fā)展水平判斷使用是否合理合理不合理嚴格控制殘留量替代研究臨床研究前臨床研究期間產品上市后確定何種溶劑需進行研究的原則 意義和目的 保障臨床用藥安全，控制產品質量 與其他方面研究工作密不可分 進一步驗證工藝控制的合理性 為確定合理可行的質量標準提供數(shù)據(jù)支持 思考的出發(fā)點 有機溶劑的毒性 產品的合成工藝確定何種溶劑需進行研究的原則 EMEA 第一類溶劑：不宜使用。一旦作為起始原料、溶劑，或者反應副產物，或者由其他溶劑帶入時，殘

7、留量需符合ICH相關規(guī)定。 殘留量控制方法：隨引入情況不同而不同 直接控制終端產品 控制中間體 控制引入第一類溶劑的物質確定何種溶劑需進行研究的原則 EMEA 第二類溶劑：可直接對終產品進行控制，可對中間體進行控制，結果需符合ICH相關規(guī)定 當6批試生產規(guī)?；蛘?批生產規(guī)模的中間體檢測結果顯示殘留量低于ICH規(guī)定限度的十分之一時，可不對終產品進行控制。確定何種溶劑需進行研究的原則 研究原則： 考慮到各類有機溶劑有毒性和在終產品中殘留的可能性，建議： 第一類溶劑：無論任何步驟使用，均需進行檢測 第二類溶劑：無論任何步驟使用，均需進行檢測 第三類溶劑：建議可僅對用于終產品精制的此類溶劑進行研究。確

8、定何種溶劑需進行研究的原則 研究原則： 第四類溶劑若結構與毒性大的溶劑非常接近，建議盡量不使用注意中間體的處理，盡量除盡根據(jù)結構和理化性質，參考其他的有機溶劑的檢測方法進行檢測和控制注意檢測圖譜中未知峰的情況，盡量進行歸屬，若無法歸屬，可以控制揮發(fā)性雜質總量。若國家標準中未控制殘留溶劑，建議根據(jù)起始原料的制備工藝，對可能存在的殘留溶劑一并在終產品中進行控制。如果采用尚未批準的原料藥、化工中間體等作為起始原料，建議根據(jù)起始原料的制備工藝，對可能存在的殘留溶劑一并在終產品中進行控制。9質量標準建立附錄中無限度規(guī)定和未收載的有機溶劑:如在藥物的制備過程中使用到了這類溶劑，建議藥物研發(fā)者盡量檢索有關的

9、毒性等研究資料，關注其對臨床用藥安全性和藥物質量的影響。表表1 1 藥品中常見的殘留溶劑及限藥品中常見的殘留溶劑及限度度 第一類溶劑（應該避免使用）第一類溶劑（應該避免使用） 溶劑名稱 英文名 限度（ppm) 苯 Benzene 2 四氯化碳Carbon tetrachloride4 1，2二氯乙烷1,2-Dicloroethane 5 1，1-二氯乙烯1,1-Dichloroethene 8 1，1，1三氯乙烷 1,1,1-Trichloroethane 1500 第二類溶劑（應該限制使用）第二類溶劑（應該限制使用） 溶劑名稱英文名濃度限度（ppm) 乙腈Acetonitrile410 氯苯

10、Chlorobenzene360 氯仿Chloroform60 環(huán)己烷Cyclohexane 3880 1，2二氯乙烯1,2-Dichloroethene1870 二氯甲烷Dichloromethane600 1，2二甲氧基乙烷1,2-Dimethoxyethane 100 第二類溶劑（應該限制使用）第二類溶劑（應該限制使用）N,N-二甲氧基乙酰胺N,N-Dimethylacetamide 1090N,N-二甲氧基甲酰胺N,N-Dimethylformamide 880 1，4二氧六環(huán)1,4-Dioxane 380 2乙氧基乙醇2-Ethoxyethanol160 乙二醇Ethylenegly

11、col62 甲酰胺Formamide220 正己烷Hexane290 甲醇Methanol3000 2甲氧基乙醇2-Methoxyethanol50 甲基丁基酮Methylbutyl ketone50 甲基環(huán)己烷Methylcyclohexane 1180 第二類溶劑（應該限制使用）第二類溶劑（應該限制使用） N-甲基吡咯烷酮N-Methylpyrrolidone4840 硝基甲烷Nitromethane50 吡啶Pyridine200 四氫噻砜Sulfolane160 四氫化萘Tetralin100 四氫呋喃Tetrahydrofuran720 甲苯Toluene890 1，1，2三氯乙烯1

12、,1,2-Trichloroethene80 二甲苯Xylene2170 通常含有60間二甲苯，14對二甲苯，9鄰二甲苯和17乙苯第三類溶劑（第三類溶劑（GMP或其它質控要或其它質控要求限制使用）求限制使用）溶劑名稱英文名濃度限度（ppm)乙酸 Acetic acid5000丙酮 Acetone 5000甲氧基苯Anisole 5000正丁醇1-Butanol5000仲丁醇2-Butanol5000乙酸丁酯Butyl acetate5000叔丁基甲基醚 tert-Butylmethyl ether5000異丙基苯Cumene5000二甲亞砜Dimethyl sulfoxide5000乙醇 Et

13、hanol 5000乙酸乙酯Ethyl acetate5000乙醚 Ethyl ether5000甲酸乙酯Ethyl formate 5000第三類溶劑（第三類溶劑（GMP或其它質控或其它質控要求限制使用）要求限制使用）甲酸 Formic acid5000正庚烷Heptane 5000乙酸異丁酯Isobutyl acetate5000乙酸異丙酯Isopropyl acetate5000乙酸甲酯Methyl acetate50003甲基1丁醇3-Methyl-1-butanol5000丁酮 Methylethyl ketone5000甲基異丁基酮 Methylidobutyl ketone500

14、0異丁醇2-Methyl-1-propanol5000正戊烷Pentane 5000正戊醇1-Pentanol5000正丙醇1-Propanol5000異丙醇2-Propanol5000乙酸丙酯Propyl acetate5000第四類溶劑（尚無足夠毒理學資第四類溶劑（尚無足夠毒理學資料）料）溶劑名稱英文名1，1二乙氧基丙烷 1，1Diethoxypropane1，1二甲氧基甲烷 1,1-Dimethoxymethane2，2二甲氧基丙烷 2,2-Dimethoxypropane異辛烷Isooctane異丙醚Isopropyl ether甲基異丙基酮Methylisopropyl ketone

15、甲基四氫呋喃Methyltetrahydrofuran石油醚Petroleum ether三氯乙酸Trichloroacetic acid三氟乙酸Trifluoroacetic acid 殘留溶劑測定方法 干燥失重：專屬性差 GC法(普通)：首選方法 頂空進樣法 直接進樣法 HPLC法：例如測定吡啶 離子色譜法：測定N-甲基吡咯烷酮 氣質聯(lián)用有機溶劑殘留量測定方法分類 1.直接進樣法適用范圍：適用范圍：沸點高溶劑或受熱不易分解樣品。優(yōu)點：優(yōu)點：簡便、無需專用設備，絕對進樣量大。缺點：缺點：污染進樣口及柱子，溶劑峰響應大，樣品分解產物或溶劑雜質峰可能影響測定，對溶劑的純度要求高。 2.頂空進樣法

16、（Headspace Analysis) 2.1 靜態(tài)頂空技術 2.2 動態(tài)頂空技術（吹掃捕集法）適用范圍：沸點低溶劑或樣品本身對測定有影響。優(yōu)點：在較低溫度下進行，避免組分分解；減少溶解 樣品的溶劑量和樣品本身對色譜系統(tǒng)的干擾和污染，增加色譜柱的壽命。缺點：需要特定的頂空進樣裝置，成本較高，對沸點較高的溶劑檢測靈敏度不夠，一般多應用于沸點100以下的溶劑。頂空進樣法的原理 頂空分析是通過樣品基質上方的氣體成分來測定這些組分在原樣品中的含量。這是一種間接的分析方法，其基本理論是在一定條件下氣相和凝聚相（液相或固相）之間存在著分配平衡。所以氣相的組成能反映凝聚相的組成。 當樣品的蒸氣壓相當?shù)蜁r，

17、色譜峰面積(Ai)與揮發(fā)性組分（i）的蒸氣壓（Pi)成正比 Ai=CiPi Ci與物質種類及檢測器有關的特定常數(shù)。 對于理想混合體系，依據(jù)拉烏爾定律： Pi=iP0iXi P0i為純組分（i）的蒸氣壓，Xi為組分（i）的摩爾分數(shù),i組分的活度系數(shù)。 服從拉烏爾定律的混合體系，其峰面積與濃度成線性關系。但在高濃度區(qū)域內分壓的變化與濃度變化不成線性關系，有時甚至與濃度無關。如果不注意這一點，頂空分析會得到錯誤的結果。 因此分析中定量校正尤為重要。在很多情況下，樣品溶液若能充分稀釋，則能使其接近理想體系，服從拉烏爾定律。 頂空進樣法的特點 、樣品不需要前處理，它只取氣相部分進行分析，大大減少了樣品基

18、質對分析的干擾。 、進樣量大，靈敏度高，可用于痕量有機揮發(fā)性物質的測定。 、對于易揮發(fā)或易分解和無法直接進樣分析的液體或固體樣品而言，更有它的實用價值。除分析中草藥中揮發(fā)性成分外，還常用于固體藥物、包裝材料、藥物的殘留溶劑分析 頂空分析可以看成是一種氣相萃取方法，即用氣體作“溶劑”來萃取樣品中的揮發(fā)性成分，因而頂空分析就是一種理想的樣品凈化方法。 傳統(tǒng)的液液萃取及SPE都是將樣品溶解在液體中，不可避免地會有一些共萃取物干擾分析。靜態(tài)頂空分析裝置 手動進樣裝置 采用手動進樣時，所需設備簡單，只要有一個控溫精確的恒溫槽和頂空瓶。 將裝有樣品的頂空瓶置于恒溫槽中，在一定的溫度下達到平衡后，就可用注射

19、器從容器中抽取頂空氣體，注入GC進行分析。手動進樣的的兩個缺點 1.壓力控制難以實現(xiàn)。 2.溫度的控制，注射器的溫度低時，某些沸點高的樣品組分很容易冷凝。 由于上述原因，手動進樣的準確度差，分析重現(xiàn)性難以保證。 在只作定性分析時，手動進樣不失為一種經濟的方法，要作精確的定量分析最好用自動頂空進樣裝置。自動頂空進樣裝置自動頂空進樣裝置頂空進樣器工作原理頂空進樣器工作原理影響頂空分析的因素 1.樣品的性質 頂空氣體中單個組分的含量既與其本身的揮發(fā)性有關，又與樣品基質有關。特別是那些在樣品基質中溶解度大（分配系數(shù)大）的組分，“基質效應”更為明顯。 標準溶液必須有與原樣品相同或相似的基質，否則，定量誤

20、差將會很大。一些消除或減少基質效應的方法一些消除或減少基質效應的方法 （1）利用鹽析作用 在水溶液中加入無機鹽（如硫酸鈉）來改變揮發(fā)性組分的分配系數(shù)。但當鹽濃度小于5%時幾乎沒有作用，故常用高濃度的鹽，甚至用飽和濃度。鹽析作用對極性組分的影響大于非極性組分的影響。此外，在水溶液中加入鹽之后，溶液體積會變化，定量線性范圍可能變窄。一些消除或減少基質效應的方法一些消除或減少基質效應的方法 （2）在有機溶液中加入水，當然，水要與有機溶劑相溶。這可以減少有機物在有機溶劑中的溶解度，增大其在頂空氣體的含量。分析靈敏度可增加幾倍數(shù)百倍。 （3）調節(jié)溶液的pH 對于堿和酸，通過控制pH可使其解離度改變，或使

21、其待測物的揮發(fā)性變的更大，從而有利于分析。 （4）樣品應溶解在合適的溶劑中，一般可用水、DMF、DMSO或其混合溶劑作溶媒。 2.樣品體積 頂空瓶中的樣品體積對分析結果影響很大，因為它直接決定相比。 Cg=Co/(K+ ) 其中=Vg/VL ，K=CL/Cg 對于一個給定的氣液平衡系統(tǒng)，K和Co為常數(shù)， 與頂空氣體中的濃度成正比。 樣品體積VL增大， 減少，Cg增大，靈敏度增加。但對于具體的 樣品體系，還要看K 的大小。當K 時，樣品體積的改變對分析靈敏度影響小。當K時，影響就很大。 頂空分析是只從樣品瓶中取樣一次，每份樣品體積是否重現(xiàn)影響分析結果。 待測組分的分配系數(shù)越?。ㄔ谀巯嘀腥芙舛仍?/p>

22、大），樣品體積波動所造成的結果誤差越大；反之越小。 3.平衡溫度 樣品的平衡溫度與蒸氣壓直接相關，它影響分配系數(shù)。 溫度越高，蒸氣壓越高，頂空氣體的濃度越高，分析靈敏度越高。待測組分的沸點越低，對溫度越敏感。因此，頂空分析特別適合于分析樣品中的低沸點成分。溫度對頂空分析靈敏度的影響溫度對頂空分析靈敏度的影響水中溶解性越好,平衡溫度越敏感。 4.平衡時間 平衡時間取決于組分分子從樣品基質到氣相的擴散速度。擴散速度越快，所需時間越短。擴散系數(shù)與分子大小、介質黏度及溫度有關。溫度越高，黏度越低，擴散系數(shù)越大。所以，提高溫度可以縮短平衡時間。與樣品瓶有關的因素 1.樣品瓶 要求體積準確，能承受一定的壓

23、力，密封性能好，對樣品無吸附。 樣品瓶的體積有520ml多種，具體選用那種，要根據(jù)儀器及樣品情況而定。 頂空瓶若要反復使用，可用洗液浸泡，然后用蒸餾水沖洗，最后置烘箱中烘干。2.密封墊 密封墊的材料主要有三種：硅橡膠、丁基橡膠、氟橡膠。 硅橡膠墊耐高溫、丁基橡膠墊價格低、氟橡膠墊惰性好。 為防止密封墊對樣品組分的吸附，現(xiàn)在多用內襯聚四氟乙烯或鋁的密封墊。 選用時要看分析條件（溫度）和樣品具體情況而定。常規(guī)分析可用價格低的 丁基橡膠墊 ，痕量分析則最好選用有內襯的硅橡墊膠。頂空分析方法開發(fā)的步驟 1 .確定如何處理樣品。如待測組分揮發(fā)性太低，則可用直接進樣測定?？紤]用何種溶劑溶解。 2. 根據(jù)待

24、測組分確定分析條件-色譜柱、檢測器、及操作條件。通過標準樣品進樣分析來優(yōu)化分離條件。 3. 確定平衡時間和平衡溫度。 4. 樣品的分析，主要考察靈敏度是否滿足要求。通過改變分流比、頂空取樣條件（改變進樣時間或定量管）來控制信號的大小。改變平衡溫度、相比、消除基質效應以提高分析靈敏度。 5.對測定方法進行方法學驗證線性、回收率、精密度、最低檢測量聚苯乙烯（PS）中單體苯乙烯的測定2-甲氧基乙醇作內標（2）醫(yī)療設備中環(huán)氧乙烷（EO）的測定 環(huán)氧乙烷（EO）用于醫(yī)療設備的消毒，它是一種已知的致癌物質。有關法規(guī)要求用頂空法測定經消毒的醫(yī)療設備中EO的含量?？捎脴藴始尤敕y定聚苯乙烯（PVC）和高密度聚

25、乙烯（HDPE）制成的醫(yī)療設備經消毒后殘留的EO。頂空分析條件：HP7694自動頂空進樣器，平衡溫度：100，平衡時間：60min，輸送管和連接管溫度：105，瓶壓：10psi，加壓時間0.5min，定量管體積1ml，沖樣時間0.15min，進樣時間：2.3min。多點標準加入法兩種方法的原理方法A和B是正交處理方法。在兩種方法中都有共流出現(xiàn)象，但是方法A中的共流出峰在方法B中得到了解決，反之亦然。最終通過方法C進行定量分析。USP殘留量測定介紹USP:方法A頂空進樣器操作條件操作參數(shù)123平衡溫度（）8010580平衡時間（min)604545轉移管溫度（） 80-90105-11580-9

26、0加壓時間（s）606060進樣體積（ml）111水溶性物質方法A的制備方法A系統(tǒng)適用性方法A- 1類溶劑方法A- 二類溶劑，混合液A方法A- 二類溶劑，混合液B方法A- 3類溶劑方法B方法B方法B：系統(tǒng)適用性方法B1類方法B-2類方法B-2類方法B-3類溶劑方法C方法C與方法A相同再加上：標準溶液:在方法A和B中已定性的峰用USP溶劑標準品來稀釋增敏溶液供試品與標準品的混合液方法C:系統(tǒng)適用性1類標準溶液信噪比S/N: 1,1,1 三氯乙烷51類系統(tǒng)適用性溶液信噪比S/N: 所有的峰32類Mixture A Standard Solution分離度: 乙腈與二氯甲烷1.0如果用方法B的話，按

27、照它的系統(tǒng)適用性要求。計算每個殘留溶劑的量ppm=5(C/W)ru/(rst-ru)C=濃度,ppm,標準溶液的相關美國對照品濃度W=質量,g,為供試品貯備液中供試品的重量r=供試品溶液的殘留溶劑的峰響應rst=加入標準溶液供試品溶液的殘留溶劑的峰響應方法C:計算供試液制備水溶性樣品 供試品儲備溶液：取250mg供試品，置25ml量瓶中，用水并稀釋至刻度。 供試品溶液：取上述儲備液5ml，置頂空瓶中，加水1ml，加塞，加蓋。供試液制備非水溶性樣品供試品溶液儲備液:轉移500mg的待測物質,精確稱取,至一個10ml量瓶,用二甲基甲酰胺稀釋至刻度，混勻。供試品溶液:轉移供試品儲備液1.0ml至一合

28、適的頂空進樣瓶中，包含有5.0ml的水，加塞，壓蓋，混勻。標記溶液:轉移1.0ml供試品儲備液到一合適的頂空進樣瓶中，再加入1ml的標準儲備液和4.0ml的水，加塞，壓蓋，混勻(制備在方法A和方法B中已經定性的各峰的增敏溶液)可選的方法USP-NF總要求: 也可選用別的在準確度、靈敏度、精密度、選擇性或適用性方面有一定優(yōu)勢的方法，以滿足自動化或減少數(shù)據(jù)處理或其它特殊的要求。這種方法應該得到驗證當出現(xiàn)不同或爭議時，只有按藥典方法獲得的結果為決定性結果USP-NF:General Chapter USP 固定相組成推薦G1二甲基聚硅氧烷油DB-1G2二甲基聚硅氧烷膠DB-1G350% 苯基-50%

29、甲基聚硅氧烷HP-50+G53-氰丙基聚硅氧烷DB-23G6三氟丙基甲基聚硅氧烷DB-210G750%氰丙基聚硅氧烷-50苯甲基硅氧烷DB-225G14聚乙二醇（平均分子量950-1050）WaxG15聚乙二醇（平均分子量3000-3700）WaxG16聚乙二醇（平均分子量15000）WaxUSP固定相（26種）USP 固定相組成推薦G1925%苯基-25氰丙基甲基硅氧烷DB-225G20聚乙二醇（分子量380-420）WaxG25聚乙二醇TPA(20M對苯二甲酸)FFAPG275苯基-95%甲基聚硅氧烷DB-5G2825苯基-75%甲基聚硅氧烷DB-35G3220苯甲基-80%二甲基聚硅氧烷

30、DB-35G35聚乙二醇硝基對苯二甲酸酯雙環(huán)氧化物FFAPG361%乙烯基-5苯甲基聚硅氧烷DB-5G38G1固定相，加拖尾抑制劑DB-1USP固定相USP 固定相組成推薦G361%乙烯基-5苯甲基聚硅氧烷DB-5G38G1固定相，加拖尾抑制劑DB-1G39聚乙二醇（平均分子量1500）WaxG41苯甲基二甲基聚硅氧烷(10苯取代)DB-5G4235苯基-65二甲基乙烯基硅烷DB-35G436氰丙基苯-94二甲基聚硅氧烷1301 624G45二乙烯基苯-乙二醇-二丙烯酸酯PLOT UG4614氰丙基苯基-86甲基聚硅氧烷DB-1701USP固定相歐洲藥典有關殘留溶劑的內容溶劑分類同ICH測定方

31、法為頂空進樣法，分A、B兩個系統(tǒng)。下列溶劑不宜用頂空法測定：1.甲酰胺（formamide）2.2-乙氧基乙醇（2-methylethanol)3.四氫噻砜（sulfolane)4.2-甲氧基乙醇（2-methoxyethanol)5.乙二醇（ethylene glycol)6.N-甲基吡咯啉（N-methylpyrrolidone)歐洲藥典殘留量測定樣品制備根據(jù)樣品的溶解性選擇合適的溶劑1.水溶性樣品用水作溶劑，非水溶性樣品用二甲基甲酰胺作溶劑。2.測定二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺時用1、3-dimethyl-2-dimethyl-2-imidazolidinone(DMI)作溶劑。供試液制備

32、供試液制備： 取0.2g樣品，用上述溶劑溶解，稀釋至20ml。測定溶液測定溶液: 取供試液5.0ml，加1.0ml空白溶劑。對照溶液的制備 對照儲備液：取待測溶劑，溶于適量二甲亞砜中，加水稀釋至100ml，取適量用水稀釋至一定濃度。 測試用對照溶液：取樣品溶液5.0ml，置頂空瓶中，加1.0ml對照儲備液，加蓋，密封。歐洲藥典殘留量測定色譜條件A 色譜柱：30m0.32（0.53）mm1.8（3.0）m 6%氰丙基苯-94二甲基聚硅氧烷（HP-624） 載氣：N2 或He 線速度:35cm/s 分流比：5：1 進樣口溫度：140 檢測器溫度：250 柱溫：40（20min），20 /min升溫

33、至240 ，維持20min。 系統(tǒng)要求：乙腈與二氯甲烷的分離度1.0，信噪比：5, RSD1.0，信噪比：5，RSD15%結果判斷 測定溶液色譜峰面積小于對照溶液峰面積的50，結果符合規(guī)定。 如需定量測定，可采用標準加入法測定。中國藥典2010年版附錄殘留量測定方法 藥物中常見的殘留溶劑及限度見附表1，除另有規(guī)定外，第一、第二、第三類溶劑的殘留量應符合表中的規(guī)定；對其他溶劑，應根據(jù)生產工藝的特點，制定相應的限度，使其符合產品規(guī)范、GMP或其他基本的質量要求。色譜柱 毛細管柱 除另有規(guī)定外，極性相近的同類色譜柱之間可以互代使用。（1）非極性色譜柱 固定液為100的二甲基聚硅氧烷的毛細管柱。 （2

34、）極性色譜柱 固定液為聚乙二醇（PEG-20M）的毛細管柱。 （3）中極性色譜柱 固定液為（35%）二苯基-（65%）甲基聚硅氧烷，（50%）二苯基-（50%）二甲基聚硅氧烷， （35%）二苯基-（65%）二甲基聚硅氧烷，（14%）氰丙基苯基-（86%）二甲基聚硅氧烷，（6%）氰丙基苯基-（94%）二甲基聚硅氧烷的毛細管柱。 （4）弱極性色譜柱 固定液為（5%）苯基-（95%）甲基聚硅氧烷，（5%）二苯基-（95%）二甲基聚硅氧烷共聚物的毛細管柱。 2填充柱 以直徑為0.250.18mm的乙二烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球或其他適宜的填料作為固定相。系統(tǒng)適用性試驗（1）用待測物的色譜峰計算，

35、毛細管色譜柱的理論板數(shù)均應大于5000；填充柱法的理論板數(shù)應大于1000。（2）色譜圖中，待測物色譜峰與其相鄰的色譜峰的分離度應大于1.5； （3）以內標法測定時，對照品溶液連續(xù)進樣5次，所得待測物與內標物峰面積之比的相對標準偏差（RSD）應不大于5；若以外標法測定，所得待測物峰面積的相對標準偏差（RSD）應不大于10。 供試品溶液的制備 1頂空進樣 除另有規(guī)定外，精密稱取供試品0.11g；通常以水為溶劑；對于非水溶性藥物，可采用N，N二甲基甲酰胺、二甲基亞砜或其他適宜溶劑；根據(jù)供試品和待測溶劑的溶解度，選擇適宜的溶劑且應不干擾待測溶劑的測定。根據(jù)品種正文中殘留溶劑的限度規(guī)定配制供試品溶液，濃

36、度滿足系統(tǒng)定量測定的需要。 2溶液直接進樣 精密稱取供試品適量，用水或合適的有機溶劑使溶解；根據(jù)品種正文中殘留溶劑的限度規(guī)定配制供試品溶液，其濃度滿足系統(tǒng)定量測定的需要。對照品溶液的制備 精密稱取各品種項下規(guī)定檢查的有機溶劑適量，采用與制備供試品溶液相同的方法和溶劑制備對照品溶液。若為限度實驗，根據(jù)殘留溶劑的限度規(guī)定確定對照品溶液的濃度；若為定量測定，為保證定量結果的準確性，應根據(jù)供試品中殘留溶劑的實際殘留量確定對照品溶液的濃度；通常對照品溶液的色譜峰面積與供試品溶液中對應的殘留溶劑的色譜峰面積以不超過2倍為宜。必要時，應重新調整供試品溶液和對照品溶液的濃度。測定法 第一法 毛細管柱頂空進樣等

37、溫法 當需要檢查的有機溶劑數(shù)量不多，并極性差異較小時，可采用此法。 色譜條件 柱溫一般為40100；常以氮氣為載氣，流速為每分鐘1.02.0ml；頂空瓶加熱溫度為7085，頂空瓶加熱時間3060分鐘；進樣口溫度為200；如采用FID檢測器，溫度為250。 測定法 取對照品溶液和供試品溶液，分別連續(xù)進樣不少于2次，測定待測峰的峰面積。 第二法 毛細管柱頂空進樣系統(tǒng)程序升溫法 當需要檢查的有機溶劑數(shù)量較多并極性差異較大時，可采用此法。色譜條件 如為非極性色譜系統(tǒng)，柱溫一般先在30維持7分鐘，再以8/min的速度升至120，維持15分鐘；如為極性色譜系統(tǒng)，柱溫一般先在60維持6分鐘；再以8/min的

38、升溫速率升至100，維持20 分鐘；以氮氣為載氣，流速為2.0ml/min；頂空瓶溫度7085，頂空時間3060分鐘；進樣口溫度為200；如采用FID檢測器，溫度為250。 具體到單個藥品的殘留溶劑檢查時，可根據(jù)該品種項下的殘留溶劑組成調整程序升溫速率。 測定法 取對照品溶液和供試品溶液，分別連續(xù)進樣不少于2次，測定待測峰的峰面積。 第三法 溶液直接進樣法 可采用填充柱，亦可采用適宜極性的毛細管柱。 測定法 取對照品溶液和供試品溶液，分別連續(xù)進樣不少于3次，每次2l，測定待測峰的峰面積。 計算法 （1）限度實驗：以內標法測定時，計算單位重量樣品中的色譜峰面積與內標峰面積之比；供試品溶液所得的峰

39、面積比的平均值不得大于由對照品溶液所得的峰面積比的平均值。以外標法測定時，供試品溶液所得的單位重量中樣品待測物峰的平均面積不得大于由標準溶液所得的待測物峰的平均峰面積。 （2）定量測定：按內標法或外標法計算各殘留溶劑的量。頂空進樣法測定應注意問題 A應根據(jù)供試品中殘留溶劑的沸點選擇頂空溫度。對沸點較高的殘留溶劑，通常選擇較高的頂空溫度；但此時應兼顧供試品的熱分解特性，盡量避免供試品產生的揮發(fā)性熱分解產物對測定的干擾。 B頂空時間一般為3045分鐘，以保證供試品溶液的氣-液兩相有足夠的時間達到平衡。頂空時間通常不宜過長，如超過60分鐘，可能引起頂空瓶的氣密性變差，導致定量準確性的降低。 C對照品

40、溶液與供試品溶液必須使用相同的頂空條件。 定量方法的驗證 當采用頂空色譜系統(tǒng)測定時，供試品與對照品處于不完全相同的基質中，故應考慮氣液平衡過程中的基質效應。由于標準加入法可以消除供試品溶液基質與對照品溶液基質不同所致的基質效應的影響，故通常采用標準加入法驗證定量方法的準確性。當標準加入法與其他定量方法的結果不一致時，應以標準加入法的結果為準。干擾峰的排除 供試品中的未知雜質或其揮發(fā)性熱降解物易對殘留溶劑的測定產生干擾。干擾作用包括在測定的色譜系統(tǒng)中未知雜質或其揮發(fā)性熱降解物與待測物的保留值相同（共出峰）；或熱降解產物與待測物的結構相同（如甲氧基熱裂解產生甲醇）。 當測定的有機溶劑殘留量超出限度

41、，但未能確定供試品中是否有未知雜質或其揮發(fā)性熱降解物對測定有干擾作用時，應通過試驗排除干擾作用的存在。對第一類干擾作用，通常采用在另一種極性相反的色譜柱系統(tǒng)中對相同樣品再進行測定，比較不同色譜系統(tǒng)中測定結果的方法。如二者結果一致，則可以排除測定中有共出峰的干擾；如二者結果不一致，則表明測定中有共出峰的干擾。對第二類干擾作用，通常要通過測定已知不含該溶劑的對照樣品來加以判斷。含氮堿性化合物的測定 普通氣相色譜的不銹鋼管路、進樣器的襯管等對有機胺等含氮堿性化合物具有較強的吸附作用，致使其檢出靈敏度降低。當采用頂空進行系統(tǒng)測定此類化合物時，應采用惰性的硅鋼材料或鎳鋼材料管路；或采用溶液直接進樣法測定

42、。供試品溶液應不呈酸性，以免待測物與酸反應后不易氣化。 通常采用弱極性的色譜柱或經堿處理過的色譜柱分析含氮堿性化合物，如果采用胺分析專用柱進行分析，效果更好。 對不宜采用氣相色譜法測定含氮堿性化合物，如N-甲基吡咯烷酮等可采用其他方法如離子色譜法等測定。 檢測器的選擇 對含鹵素元素的殘留溶劑如氯仿等，采用ECD檢測器，易得到高的靈敏度。 由于不同的實驗室在測定同一藥品時可能采用了不同的實驗方法，當測定結果處于合格不合格邊緣時，以采用內標及標準加入法為準。 甲酰胺、2-甲氧基乙醇、2-乙氧基乙醇、乙二醇、N-甲基吡咯烷酮等不宜用頂空進樣方式測定。 原料藥中有機溶劑殘留量測定 以下簡單介紹在新藥質

43、量標準研究中開發(fā)的一些測定實例。 辛伐他汀原料殘留溶劑的檢測對照溶液和供試品溶液的制備 內標溶液的制備：精密量取丁酮適量，加80%DMSO溶液稀釋制成1ml含80g的溶液。 對照品溶液的制備：取上述溶劑適量，用內標溶液稀釋制成每1ml中含甲醇79g、乙醇79g、丙酮79g、乙醚36g、二氯甲烷40g、正己烷13g、四氫呋喃44g、苯0.35g、環(huán)己烷38g、甲苯17g的溶液作為對照溶液。 供試品溶液的制備：取樣品約0.5g，精密稱定，置頂空瓶中，精密加內標溶液5ml，加蓋封密，即得。頂空進樣器條件 頂空爐溫：80，熱平衡時間：30分鐘，充樣時間：0.2分鐘，進樣時間：1分鐘。辛伐他汀原料殘留溶

44、劑的檢測1.甲醇2.乙醇3.丙酮4.乙醚5.二氯甲烷6.正己烷7.四氫呋喃8.苯9.環(huán)己烷10.甲苯混合對照溶液四川某公司（Y-01-050801）四川某公司（Y01-051101）浙江某公司（050302）樣品名：替米沙坦 色譜柱：HP-624 柱溫：50 分流比：1：1 溶劑：稀硫酸 平衡溫度：80min02468101214pA-10010203040506070 FID1 A, (C:HPCHEM1DATAYTMSTTMST0020.D) 4.507 - Methanol 5.725 - Ethanol 7.629 - Dichloromathane 12.926 - Chlorofo

45、rmmin02468101214pA010203040 FID1 A, (C:HPCHEM1DATAYTMSTTMST0035.D) 4.506 - Methanol 12.911 - Chloroform替米沙坦樣品測定色譜圖min01234567pA-10010203040506070 FID1 A, (C:HPCHEM1DATAY-STFDSTFD0015.D) 4.447 - Acetone 5.482 - Methanol 6.057 - Isopropanol 6.194 - Dichloromethane抗愛滋病新藥司他夫定（色譜柱：HP-INNOWAX 柱溫：45）司他夫定樣品

46、測定色譜圖注意：樣品分解產物對測定的影響min01234567pA-10010203040506070 FID1 A, (C:HPCHEM1DATAY-STFDSTFD0013.D) 4.275 6.061 - Isopropanol 6.200 - Dichloromethanemin01234567pA020406080100 FID1 A, (C:HPCHEM1DATAZMQPTZMQPT012.D) 3.073 - Methanol 3.296 - Ethanol 3.648 - Acetone 3.932 - Dichloromethane 4.841 - Ethyl Acetane

47、 5.709 - n-Butanol樣品名：佐米曲普坦 色譜柱：HP-50柱溫：50（10min），15/min至180 （5min）溶劑：50%DMF 平衡溫度：95min01234567pA020406080100 FID1 A, (C:HPCHEM1DATAZMQPTZMQPT017.D) 3.656 - Acetone 4.850 - Ethyl Acetane佐米曲普坦樣品測定色譜圖min02468101214pA-5-2.502.557.51012.51517.5 FID2 B, (L-AZSQAZSQ0015.D) 4.280 5.056 10.418鹽酸阿扎司瓊溶劑殘留量測定：

48、對照溶液 依次為氯仿、二氯乙烷、甲苯min02468101214pA-5-2.502.557.51012.51517.5 FID2 B, (L-AZSQAZSQ0017.D) 2.345 2.704 4.287鹽酸阿扎司瓊樣品溶液：RT4.287min為氯仿殘留溶劑研究基本內容1、確定被測殘留溶劑2、確定殘留溶劑類別3、限度確立4、確定測定方法5、選擇色譜柱和檢測器6、制備供試品和對照品溶液7、測定條件的優(yōu)化8、方法學驗證9、質量標準建立10、其他1確定被測殘留溶劑一般原則(1) 工藝中使用二類以上和重結晶用溶劑，及根據(jù)工藝特點要求其它溶劑進行殘留量研究。(2)建議對合成最后三步使用的三類溶劑

49、也進行研究。建議原則仔細分析，別落下(1)申報資料合成工藝中用到所有有機溶劑(2)液態(tài)催化劑等(3)趨勢:胺類和羧酸類2確定殘留溶劑類別鹽酸克林霉素棕櫚酸酯舉例 使用溶劑(種):乙醇、丙酮(精制)、二氯甲烷、三氯甲烷、吡啶與DMF。 分類:測定方法確認：考慮DMF沸點較高，吡啶頂空條件下檢測靈敏度較低，故上述兩種溶劑采用直接進測定，其余溶劑采用頂空進樣測定。標準制定：按照ICH規(guī)定將二類有機溶劑二氯甲烷、三氯甲烷、吡啶與DMF訂入質量標準中，限度參照ICH規(guī)定。同時將精制溶劑丙酮列入質量標準中，限度為不得過0.1%。4確定定量方法選擇定量方法外標法內標法標準加入法:利用加入該組分前后色譜峰響應

50、信號的變化而計算被測組分含量的方法操作:測定供試品,測定供試品對照品使用:邊緣產品以標準加入法結果為準;頂空方式基質效應。5選擇色譜柱和檢測器色譜柱分類填充柱和毛細管柱毛細管柱WCOT或PLOT極性大?。ò垂潭ㄒ簶O性分類）按內徑分液膜厚度12456891 01 1 & 1 271245691 0 1 17 & 81 2填充柱填充柱大口徑毛細管柱大口徑毛細管柱常用毛細管柱常用毛細管柱5% OV101on 80/100 Chromosorb30m 0.53mm 0.88m30m 0.32mm 0.25m不同色譜柱類型分離效果的比較5選擇色譜柱和檢測器填充柱和毛細管柱填充柱 柱效低，

51、分離復雜樣品的能力差。 以直徑為0.250.18mm的乙二烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球或其他適宜的填料作為固定相。毛細管柱：柱效高，靈敏度高，分離好。5選擇色譜柱和檢測器選擇合適色譜柱樣品與待測溶劑按照相似相溶原理選擇色譜非極性柱:各組分按沸點順序流出色譜柱，沸點低者先出。若試樣中有極性組分，相同沸點的極性組分先出峰。中等極性柱:各組分基本仍按沸點順序流出色譜柱，沸點低者先出。但沸點相同極性與非極性組分，極性組分后出峰。5選擇色譜柱和檢測器毛細管柱按液膜厚度分類薄膜比厚膜洗脫組分快，峰分離好、溫度低，適用高沸點、組分密集或熱敏化合物。大口徑柱保持分離度和保留時間，都只有厚膜。0.10.2m

52、 薄膜和0.250.5m 標準膜適用高沸點化合物。1.01.5m厚膜:測定適合流出溫度100200。35m 超厚膜：分析氣體、溶劑和可吹掃出來的物質。5選擇色譜柱和檢測器選擇合適色譜柱極性柱:各組分按極性順序流出色譜柱，極性低者先出。注意:混合物中組分性質差別，如分離極性與非極性混合物，一般選用極性柱。分離沸點差異較大的混合物，一般選用非極性柱。5選擇色譜柱和檢測器選擇合適色譜柱根據(jù)經驗順序選擇ChP2005中 100的二甲基聚硅氧烷和聚乙二醇EP DB-624和Innowax儀器商手冊。如：Agilent產品目錄提供DB-1、DB-624和DB-Wax的出峰順序。檢測器 樣品類型 靈敏度范圍

53、氣體流量 (mL/min.)載氣+尾吹氣 氫氣 空氣FID碳氫化合物 10-100pg20-6030-40 200- 500TCD15-30 n.a n.a.除載氣外的 5-100ng其它所有物質ECD 有機鹵化物 0.05-1pg30-60n.a.n.a.氯化溶劑 50 ppt-1ppm&農藥殘留NPD 有機氮化合物&0.1-10 pg20-401-570-100有機磷化合物5選擇色譜柱和檢測器檢測器的選擇6制備供試品和對照品溶液溶劑選擇要求能同時溶解供試品和待檢殘留溶劑；當樣品在溶解介質中未完全溶解時，結果通常偏低且精密度差。溶劑自身及其雜質不干擾待檢殘留溶劑的測定；DMS

54、O、DMF和待檢殘留溶劑保持相對穩(wěn)定；避免使用污染性大、毒性大的溶劑。水是首選溶劑，特別是頂空進樣系統(tǒng)。6制備供試品和對照品溶液溶劑的選擇水溶性藥物：水非水溶性藥物：不揮發(fā)的酸、堿液；DMF或DMSO等，不可使用鹽酸液和氨水。可以單獨使用，也可以混合使用頂空進樣可選擇在8090加熱能溶解樣品的溶劑。6制備供試品和對照品溶液樣品的制備不可研磨樣品，必須原態(tài)取樣；不可超聲、不能加熱溶解樣品（直接進樣法）；樣品置頂空瓶中壓蓋后可以超聲、加熱；測定酯類溶劑時不能采用酸或堿溶液，以免發(fā)生水解 。6制備供試品和對照品溶液樣品的制備測定含氮的堿性溶劑時，供試品溶液應不呈酸性，以免被測物與酸反應不易汽化；測定

55、含羧基的酸性溶劑時，供試品溶液應不呈堿性，以免被測物與堿反應不易汽化。 如：測定氟伐他汀鈉(pH8.010.0)中乙酸殘留量，不出峰，需對其甲酯化后測定。6制備供試品和對照品溶液對照品溶液的制備對照品溶液：必須與供試品溶液相同溶劑。苯、甲苯、三氯甲烷等水溶性不好的溶劑，可先用少量DMF等溶解待查溶劑，再用水稀釋。2010版新增：采用與制備供試品溶液相同的溶劑制備對照品溶液。如用水作溶劑，應先將待測有機溶劑溶解在50二甲亞砜或N,N-二甲基甲酰胺溶液中，再用水逐步稀釋。6制備供試品和對照品溶液供試品和對照品溶液濃度確定根據(jù)殘留溶劑的限度規(guī)定配制供試品溶液，濃度應能滿足系統(tǒng)定量測定的需要一般供試品

56、取樣量為0.11g限度試驗：對照品溶液的濃度可按殘留溶劑規(guī)定的限度配置；定量測定：按實際殘留量配置，濃度相差最好不超過2倍為宜。必要時應重新調整 。6制備供試品和對照品溶液頂空進樣基質效應頂空氣體中單個組分的含量既與其本身的揮發(fā)性有關，又與樣品基質有關。特別是那些在樣品基質中溶解度大（分配系數(shù)大）的組分，基質效應更為明顯。標準溶液必須有與原樣品相同或相似的基質，否則可能導致定量誤差將會很大。標準加入法可以有效地排除基質效應的影響；當標準加入法結果與內標法結果系統(tǒng)偏差約10%時，可以認為方法存在明顯的基質效應。6制備供試品和對照品溶液鹽酸克林霉素棕櫚酸酯舉例 直接進樣(吡啶與DMF):樣品在甲醇

57、和乙醇中溶解性均較好，考慮在極性柱中甲醇出峰較快，干擾較少，故采用甲醇為溶解樣品的溶劑。 頂空進樣:樣品在水中溶解性較好，故首選。同時考慮三氯甲烷在水中溶解性較差，最后采用5%DMF水溶液作為頂空測定溶解樣品溶劑。7測定條件的優(yōu)化頂空條件優(yōu)化柱溫優(yōu)化進樣口溫度優(yōu)化進樣襯管氣路優(yōu)化7測定條件的優(yōu)化頂空條件優(yōu)化平衡溫度對沸點較高殘留溶劑，必須較高的頂空溫度，兼顧供試品熱分解，避免產生揮發(fā)性熱分解產物干擾。溶劑的沸點，一般應比溶解用溶劑沸點低10以上。在靈敏度能滿足的條件下，盡量采用較低的平衡溫度。7測定條件的優(yōu)化頂空條件優(yōu)化常用平衡溫度水：頂空溫度不宜超過85EP/USP規(guī)定為80頂空溫度為100

58、(柱溫低于頂空溫度)，大量的水被蒸發(fā),隨著水蒸汽的凝結，水中溶解度大溶劑靈敏度明顯下降(如:乙腈)DMSO/DMF：頂空溫度不宜超過115EP/USP規(guī)定為105。7測定條件的優(yōu)化頂空進樣提高靈敏度方法鹽析作用(基質效應)在水溶液中 加入無機鹽（如無水硫酸鈉）來改變揮發(fā)性組分的分配系數(shù)。但當鹽濃度小于5%時幾乎沒有作用，故常用高濃度(甚至飽和)。鹽析作用對極性組分的影響大于非極性組分的影響。在水溶液中加入鹽之后，溶液體積會變化，定量線性范圍可能變窄。7測定條件的優(yōu)化頂空進樣提高靈敏度方法有機溶液中加入水：水要與有機溶劑相溶，減少有機物在有機溶劑中的溶解度，增大其在頂空氣體的含量。氯仿在DMF頂

59、空法中由于二者結合能力強，致使其檢測靈敏度降低，當加入等量的水后，檢測靈敏度顯著增加。即使加水后樣品重新析出，不影響氯仿從樣品中轉移至溶劑中的轉移率（必須經回收考察）。7測定條件的優(yōu)化頂空進樣提高靈敏度方法調節(jié)溶液的pH：對于堿和酸，通過控制pH可使其解離度改變，或使其待測物的揮發(fā)性變的更大，從而有利于分析。內徑 流量(ml/min)線速度(cm/sec)1/4“ 50-60 2.6-3.21/8“ 20-30 4.2-6.3毛細管柱0.53(大孔徑)0.32mm(粗徑)3-5 22-381-3 20-410.20mm(細徑) 0.5-1 21-320.10mm(快速) 0.2-0.542-1067測定條件的優(yōu)化氣路優(yōu)化可使用下列推薦值來確定不同類型柱的最佳流量填充柱8方法學驗證總則：首先明確將其歸為定量檢查或限度檢查驗證內容系統(tǒng)適用性專屬性準確度（回收率）線性靈敏度（檢測限、定量限 ）耐用性8方法學驗證系統(tǒng)適用性柱效填充柱法的理論板數(shù)應大于1000。毛細管色譜柱的理論板數(shù)應大于5000。重復性內標法：對照品溶液連續(xù)進樣5次，所得被測物與內標物峰面積之比RSD5%。外標法：所得被測物峰面積RSD10%。8方法學驗證專屬性對各種殘留溶劑定位和進行混合溶劑的分離度試驗。考察溶解溶劑、可