開題報(bào)告正式

1、葫蘆素葫蘆素B B通過抑制通過抑制NF-KBNF-KB信號通路信號通路誘導(dǎo)誘導(dǎo)RamosRamos細(xì)胞外源性凋亡細(xì)胞外源性凋亡 ( CucurbitacinB induces Ramos cell exogenous apoptosis through inhibiting NF-KB signal pathway ) 姓名：丁秀麗導(dǎo)師：吳雄志 單位：天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院主要內(nèi)容研究背景研究背景1研究思路研究思路2研究內(nèi)容研究內(nèi)容3研究流程研究流程4創(chuàng)新性與可行性創(chuàng)新性與可行性5研究背景 葫蘆素是從葫蘆科植物中提取的一類四環(huán)三萜類化合物，其強(qiáng)大的抗腫瘤作用尤其令人矚目，有望成為一種新的有效

2、的抗腫瘤藥物。Jian Chao Chen et al., Cucurbitacins and cucurbitane glycosides: structures and biological activities,Nat.Prod.Rep ,2005,2005,386 396 葫蘆素發(fā)現(xiàn)于1960s，因具有廣泛的抗腫瘤活性而備受關(guān)注，但由于其較窄的治療指數(shù)和非特異的毒副作用，其研究在隨后的幾十年里被停滯。 隨后，基于美國NCI60抗腫瘤篩選平臺的建立，葫蘆素又重新吸引了研究者的目光。它的抗腫瘤活性幾乎可以與紫杉類，長春新堿和鬼臼素類等植物來源的抗腫瘤藥物相睥睨，是一種極具前景的新型抗腫瘤藥

3、。Dhong Hyun Lee et al., Cucurbitacin: Ancient Compound SheddingNew Light on Cancer Treatment,TheScientificWorldJOURNAL (2010) 10, 413418葫蘆素的抗腫瘤活性葫蘆素B乳腺癌乳腺癌肺癌肺癌白血病，淋巴瘤白血病，淋巴瘤。結(jié)直腸癌結(jié)直腸癌前列腺癌前列腺癌喉癌喉癌腦膠質(zhì)瘤腦膠質(zhì)瘤骨肉瘤骨肉瘤相關(guān)機(jī)制相關(guān)機(jī)制Xiuping Chen et al., Biological activities and potential molecular targets of cucurb

4、itacins: a focus on cancer,Anti-Cancer Drugs 2012, 23:777787研究思路研究思路 研究證實(shí)CuB能夠通過調(diào)節(jié)STAT3, NF-KB信號通路及其下游信號分子Bcl-2,Bcl-xl, Bax, mcl-l等誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生內(nèi)源性凋亡。但有關(guān)CuB對淋巴瘤細(xì)胞外源性凋亡通路影響的研究尚未見報(bào)道。葫蘆素葫蘆素B 本研究通過觀察CuB作用后人淋巴瘤Ramos細(xì)胞形態(tài)、增殖、凋亡、周期、外源性凋亡相關(guān)分子的變化情況，探討其對 Ramos細(xì)胞外源性凋亡的影響及其可能的作用機(jī)制。理論依據(jù)1我們研究發(fā)現(xiàn)葫蘆素B對Burkitt淋巴瘤Ramos細(xì)胞有明顯的凋

5、亡誘導(dǎo)作用。2通過初步實(shí)驗(yàn)證實(shí)其能上調(diào)NF-KB的抑制蛋白IkBa的蛋白表達(dá)。3我們又通過western blot實(shí)驗(yàn)檢測，發(fā)現(xiàn)其主要影響外源性凋亡蛋白caspase8 。通過查閱文獻(xiàn)caspase8c-FLIPNF-KB葫蘆素能夠抑制泛素蛋白酶體系統(tǒng)對IkBa的降解，從而抑制NF-KB信號通路。NF-KB又恰好能上調(diào)外源性凋亡調(diào)控分子c-FLIP的表達(dá)。c-FLIP是目前發(fā)現(xiàn)的唯一在DISC水平參與調(diào)節(jié)受體調(diào)亡通路的分子，它能抑制caspase8 的激活，從而抑制外源性凋亡。 由此將由此將NF-KB與外源性凋亡聯(lián)系起來與外源性凋亡聯(lián)系起來Ning Ding et al., Apoptosis

6、 Induction Through Proteasome Inhibitory Activity of Cucurbitacin D in Human T-Cell Leukemia,Cancer2011;117:273546Wang Q et al. PKC delta-mediated regulation of FLIP expression in human colon cancer cells. Int J Cancer, 2006Jan 15;118(2):326-34. Ma H M, Zhou K Y, Progress in Biochemistry and Biophys

7、ics, 2006, 33(10): 932939信號通路如下：-a研究內(nèi)容細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn) 動物實(shí)驗(yàn)動物實(shí)驗(yàn) 1.CuB對對Ramos的的增殖抑制作用增殖抑制作用 。 2.CuB對對Ramos的的凋亡誘導(dǎo)作用凋亡誘導(dǎo)作用 。 3.CuB對對Ramos的的細(xì)胞周期阻滯作用細(xì)胞周期阻滯作用。 Text裸鼠移植移植瘤裸鼠移植移植瘤 免疫組化免疫組化 4.CuB對對IkBa，p- IkBa的蛋白表達(dá)的影的蛋白表達(dá)的影響。響。5.CuB對對c-FLIP蛋白蛋白表達(dá)的影響。表達(dá)的影響。6.CuB對對caspase8凋亡酶活性的影響。凋亡酶活性的影響。7. CuB對對P65

8、mRNA片段片段,c-flip的轉(zhuǎn)錄水的轉(zhuǎn)錄水平影響。平影響。研究流程Western檢測IkBa,NF-KB,c-FLIP 蛋白表達(dá) RT-PCR檢測p65C-flip,mRNA轉(zhuǎn)錄 Western檢測caspas 8 蛋白含量變化Hochest染色檢測細(xì)胞凋亡 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡CuB通過抑制通過抑制NF-KB信號通路信號通路誘導(dǎo)誘導(dǎo)Ramos細(xì)胞外源性凋亡細(xì)胞外源性凋亡細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn) 臺盼藍(lán)染色測增殖 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期動物實(shí)驗(yàn)裸鼠淋巴瘤移植瘤模型建立免疫組化檢測NF-KB,C-FLIP水平創(chuàng)新性從從NF-KBNF-KB信號通路闡明了信號通路闡明了CuBCuB誘導(dǎo)凋亡誘導(dǎo)凋亡是通過外源性凋亡通路，與是通過外源性凋亡通路，與c-FLIPc-FLIP下下調(diào)有關(guān)