基因工程試卷試題及答案 (1)

1、一、 名詞解釋1、 基因治療：是將目的基因放進特定載體中導(dǎo)入靶細胞或組織，通過替換或補償引起疾病的基因，或者關(guān)閉或抑制異常表達的基因來克服疾病的治療方法。2、 反義核酸：是指能與特定mRNA精確互補、特異阻斷其翻譯的RNA或DNA分子。3、 反義DNA：也稱反義寡核苷酸或反義脫氧寡核苷酸，是一種人工合成的、能與mRNA互補的、用于抑制翻譯的短小反義核酸分子。4、 同尾酶：指切割DNA可產(chǎn)生相同的黏性末端的限制酶5、 轉(zhuǎn)導(dǎo)：指以噬菌體為載體，在細菌之間轉(zhuǎn)移DNA的過程，有時也指在真核細胞之間通過逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)移和獲得細胞DNA的過程。6、 -互補：指E.coli-半乳糖苷酶的兩個無活性片段組合而成

2、為功能完整的酶的過程。7、 轉(zhuǎn)化：指將質(zhì)粒或其他外源DNA導(dǎo)入處于感受態(tài)的宿主細胞，并使其獲得新的表型的過程。8、 基因克隆：通過體外重組技術(shù)，將一段目的DNA經(jīng)切割、連接插入適當(dāng)載體，并導(dǎo)入受體細胞，擴增形成大量子代分子的過程。9、 核酶：是一類具有催化活性的RNA分子，具有核苷酸水解活性，可特異性剪切RNA分子，相當(dāng)于RNA酶。10、位點偏愛：某些限制酶對同一底物中的有些位點表現(xiàn)出偏愛性切割，即對不同位置的同一識別序列表現(xiàn)出不同的切割效率，這種現(xiàn)象稱作為位點偏愛。二、選擇1.在( B )誘導(dǎo)下，目的蛋白與lacZ就會以融合蛋白的形式表達出來。 A. dNTP B.IPTA C. DMSO

3、D.SDS2.（ A ）可使表達蛋白避免被細胞內(nèi)蛋白降解，或使表達的蛋白正確折疊，從而達到維護目的蛋白的目的。 A.分泌表達載體 B.GST融合表達載體 C. 組氨酸標(biāo)簽表達載體 D.內(nèi)含肽表達載體3.DNA的瓊脂糖凝膠電泳方向為（ B ） A. 正極向負極 B. 負極向正極 C濃度高向濃度低. D. 濃度低向濃度高4.影響脈沖場凝膠電泳電泳分辨率的最關(guān)鍵因素是（D ） A.電場強度 B. 緩沖液濃度 C. 溫度 D.脈沖時間5.控制潛在RNA酶活性最重要的是（C）A.使用RNA酶抑制劑 B.實驗用具 C.細致謹(jǐn)慎的操作 D.溫度控制6.酵母基因表達系統(tǒng)的宿主不具有以下哪一條件(B )A.安全

4、無毒 B.載體DNA轉(zhuǎn)化頻率低 C. 發(fā)酵周期短 D.蛋白質(zhì)分泌能力好7. 釀酒酵母的附加體形表達載體有（D）的缺點A.蛋白分泌能力差 B.無終止子 C.不能獨立復(fù)制 D.無選擇壓力時不穩(wěn)定8.（C）不能用大腸桿菌表達系統(tǒng)來生產(chǎn)。A.胰島素 B. 干擾素 C.EPO D.賽若金9.中國學(xué)者從人臍血白細胞中獲得的（B）基因已用于我國第一個基因工程干擾素的生產(chǎn)。A.胰島素 B. 干擾素-1b C.EPO D.CHO10.下列哪項不屬于反義核酸藥物(D )A.反義DNA B. 核酶 C.肽核酸 D.siRNA答案：BABDC BDCBD11.I型限制與修飾系統(tǒng)的酶分子是（B）A.內(nèi)切酶與甲基化酶分子

5、在一起 B.三亞基雙功能酶 C .二亞基雙功能酶 D.四亞基雙功能酶12.限制性內(nèi)切酶的命名遵循的一定原則（D）A種名 B. 菌株號 C . 屬名 D.種名，菌株號或生物型13.大腸桿菌DNA聚合酶I 型5 3外切核酸酶活性的反應(yīng)底物是（C）A.單鏈DNA及引物 B.5突出的雙鏈DNA C.雙鏈DNA或DNA:RNA雜交體 D.帶3OH的雙鏈DNA或單鏈DNA14提高酶連接效率的方法（C）A.加大酶量20倍 B.降低溫度 C.加大平頭末端的底物濃度 D.降低平頭末端的底物濃度15.堿性磷酸酶CIAP指（D）A.細菌和蝦的細菌堿性磷酸酶 B.蝦堿性磷酸酶 C.細菌堿性磷酸酶 D.牛小腸堿性磷酸酶

6、16.為了突出3末端可采用的方法（A）AT4DNAPOL切平，然后平頭連接 B.Klenow補平，然后平頭連接 CS1核酸酶切平，然后平頭連接 D.Klenow補平，或S1核酸酶切平17.能使Xgal變藍的條件是（C）A.有片段 B. 受體片段 C.同時具有片段和受體片段 D.同時具有片段和受體片段18.當(dāng)基因組DNA長度為野生型入噬菌體基因組多少時，不會明顯影響存活能力（C）A.7890 B.6078 C.78105 D.105以上19質(zhì)粒PSC101帶有何種抗性基因（B）A.卡那霉素抗性基因 B.四環(huán)素抗性基因 C.青霉素抗性基因 D.鏈霉素抗性基因20.宿主為rec+，可在噬菌體溶源性細

7、菌中鑒別重組合非重組入噬菌體的條件為（C）A.red game 基因存在 B.red game 基因缺失，無chi位點 C.red game 基因缺失或替換，且有chi位點 D.red game基因存在且無chi位點三、判斷1.酶切反應(yīng)的反應(yīng)溫度大多數(shù)為37 對2.T4DNA連接酶只連接雙鏈DNA分子，不需要ATP。 錯3.同一質(zhì)粒盡管分子量不同，不同的構(gòu)型電泳遷移率不同，其中ocDNA最快，scDNA最慢。 錯4酵母DNA的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法操作簡便，容易掌握，但轉(zhuǎn)化率不穩(wěn)定，成本較高。 錯5.同尾酶的黏性末端互相結(jié)合后形成的新位點，一般不能再被原來的酶識別。對6.在藍白斑篩選中，只有同時存在片

8、段和受體片段才能使Xgal變藍。對7.基因組大小分左臂，中段，右臂三部分。 對8.cI基因的表達抑制噬菌體進入溶源狀態(tài)。 錯9.chi位點是一段與重組事件相關(guān)聯(lián)的10bpDNA序列，它激活以rec為媒介的交換反應(yīng)。錯10.RNA的瓊脂糖凝膠電泳實驗中，RNA分析是在變性的條件下進行的，常用的變性劑為乙醛。錯四、簡答一 簡述載體應(yīng)具備的特征 P391在宿主細胞內(nèi)必須能夠自主復(fù)制（具備復(fù)制原點）；2必須具備合適的酶切位點，供外源DNA片段插入，同時不影響其復(fù)制；3有一定的選擇標(biāo)記，用于篩選；4最好有較高的拷貝數(shù)，便于載體的制備。二 簡述構(gòu)建質(zhì)粒載體的基本策略和構(gòu)建過程 P43（一）基本策略1能在受

9、體細胞內(nèi)有效的復(fù)制；2必須含有允許外源DNA片段克隆的位點，切盡可能的多；3含有供選擇克隆子的標(biāo)記基因；4載體DNA分子盡可能小。（二） 構(gòu)建過程1選擇合適的出發(fā)質(zhì)粒（親本質(zhì)粒）；2正確獲得構(gòu)建質(zhì)?？寺≥d體的元件；3選擇合適的選擇標(biāo)記基因；4在能達到預(yù)期目的的前提下，過程力求簡單。三 大腸桿菌表達載體的表達形式和優(yōu)缺點P871包涵體蛋白，沒有生物學(xué)活性、易于分離純化、不會被細胞內(nèi)蛋白的降解作用、不會傷害宿主細胞；2融合蛋白，穩(wěn)定性大大增加、較高效率、易于分離純化、一般受體蛋白位于N端外源蛋白位于表面；3分泌型外源蛋白，更易于分離純化、需在N端加入信號肽序列、減少外源蛋白在細胞內(nèi)被蛋白酶降解的概

10、率。四 簡述能夠發(fā)展成基因表達系統(tǒng)的宿主應(yīng)具備的條件 P2791安全無毒，不致??；2遺傳背景清楚，容易進行遺傳操作；3構(gòu)建的載體DNA容易進入，轉(zhuǎn)化頻率較高；4發(fā)酵周期短，培養(yǎng)條件簡單，容易進行高密度發(fā)酵；5蛋白質(zhì)分泌能力良好；6有類似高等真核生物的蛋白質(zhì)翻譯后的修飾功能。五 酵母基因工程的優(yōu)點（至少5點）P2751酵母是真核生物，大多具有較高的安全性，如釀酒酵母可作為單細胞蛋白直接添加于飼料中;2酵母繁殖速度快，能夠向細菌一樣在廉價的培養(yǎng)基上高密度培養(yǎng)，因此能大規(guī)模生產(chǎn)，具有降低基因工程產(chǎn)品成本的潛力；3將原核生物中已知的分子和基因操作技術(shù)與真核生物中復(fù)雜的轉(zhuǎn)譯后修飾能力相結(jié)合，能方便的用于外源基因的操作；4作為真核生物，提供了翻譯后加工和分泌的環(huán)境，使得產(chǎn)物與天然蛋白一樣或類似；5不會形成不溶性的重組蛋白包涵體易于進行分離提純。五、論述裂解提取法大腸桿菌質(zhì)粒DNA的過程和幾種純化質(zhì)粒的方法 P101過程：1用溶液將細胞懸浮50mmol/L的葡萄糖具有維持滲透壓的作用，懸浮后的大腸桿菌不會快速沉積到管底；2加入2倍于溶液體積的溶液，該溶液含有NaOH /SDS，能夠使細胞迅速破裂溶解，使懸浮液變成完全完全澄清的液體。PH12.0到12.5染色體DNA和蛋白質(zhì)變性，溶液中形成的大型復(fù)合