藥理學實驗方案

1、一、實驗動物的選擇及捉拿固定正確掌握動物捉拿固定的方法，可以防止動物過度掙扎或受損傷而影響實驗觀察效果，并可避免實驗者被咬傷，從而保證實驗順利進行。下面介紹藥理學實驗課中常用的幾種動物的捉拿固定方法。1小鼠小鼠性情溫順，一般不會主動咬人，但抓取時動作也要輕緩。抓取時先將小鼠放在粗糙物（如鼠籠）上面，用右手提起鼠尾，將小鼠輕輕向后拉，這樣可使小鼠前肢抓住粗糙面不動，用左手拇指和食指捏住鼠頭皮膚和雙耳，其余三指和掌心夾住其背部皮膚及尾部，這樣小鼠便可被完全固定在左手中（圖1）,此時右手可作注射或其它實驗操作，也可將小鼠固定在特制的固定器中。圖2大鼠的捉拿方圖1小鼠的捉拿方法2、大鼠捉拿固定的方法基

2、本上與小鼠相同。由于大鼠比小鼠牙尖性猛，不易用襲擊的方式抓取，捉拿時較難一些，為防大鼠在驚恐或激怒時咬傷手指，實驗者應帶上棉手套或帆布手套，先用右手將鼠尾提起，放在粗糙物上，向后輕拉鼠尾，使其不動，再用左手拇、食指捏住頭頸部皮膚，其余三指和手掌固定鼠體，使其頭、頸、腹呈一直線（圖2）,這時右手可作注射，若需進行手術，則應對大鼠進行麻醉后固定于手術臺如需尾靜脈取血或注射，上?？蓪⒋笫蠓湃牍潭ê袃?nèi)或用小黑布袋裝大鼠，使其只露尾巴。3、0豚鼠豚鼠膽小易驚，性情溫和，不咬人，抓取幼小豚鼠時，只需用雙手捧起來，對體型較大或懷孕的豚鼠，先用手掌迅速扣住鼠背，抓住其肩胛上方，以拇指和食指環(huán)握頸部，另一只手托

3、住其臀部（圖3）。圖3豚鼠的捉拿方法4、家兔家兔比較馴服，一般不會咬人，但腳爪較尖，應避免抓傷。抓取時輕輕將免提起,另一手托其臀部，使其軀干的重量大部分集中在該手上，然后按實驗需要將兔固定成各種姿勢（圖4）。注意抓兔時不要單提兩耳，因為兔耳不能承受全身重量，易造成疼痛而引起掙扎，因此單提兔耳，捉拿四肢，提抓腰部和背部都是不正確的抓法。圖4家兔的捉拿與固定佟15蟾蛛的捉拿與固定5、青蛙和蟾蛛用左手握住動物，以食指和中指夾住一側(cè)前肢，大拇指壓住另一前肢，用右手協(xié)助，將兩后肢拉直，左手無名指和小指將其壓住固定（圖勿擠5）o注意在抓取蟾蛛時，切壓其兩側(cè)耳部突起的毒腺，以免毒液噴出射入眼中。二、實驗動物

4、的編號在動物實驗時，常常需要編號分組，將動物做上不同的標記加以區(qū)別。標記的方法很多，常用的編號標記方法有染色法、掛牌法和烙印法。家兔等較大動物可用特制的號碼牌固定于耳上，而小動物則常用染色法。染色法是藥理學實驗課中最常使用的方法，通常用化學試劑涂染動物背部或四肢一定部位的皮毛，代表一定的編號，常用染色的化學試劑有：圖6大鼠、小鼠標記法黃色：3%巧贈味酸溶液咖啡色：20%硝酸銀溶液紅色：0.5%中性紅或品紅溶液黑色：煤焦油的酒精溶液（1） 1-10號標記法：編號的原則是先左后右，從前到后，如將動物背部的肩、腰、臀部按左、中、右分為九個區(qū)，從左到右標記1-9號，第10號不作標記（圖6）。（2） 1

5、0100號標記法：在上述編號的同一部位，用各種不同顏色的化學試劑擦上斑點，就可代表相應的十位數(shù)，例如涂上黃色的苦味酸代表110號，涂上紅色的中性紅代表1120號，涂上咖啡色的硝酸銀代表2130號，以此類推。三、實驗動物的給藥方法1、小鼠1.1 灌胃法以左手捉住小鼠，使其腹部朝上，右手持灌胃器（以12mL注射器上連接細玻璃灌胃管或把注射針頭磨鈍稍加彎曲制成的灌胃針，灌胃管長約45cm,直徑約1mm頭）操作時，先從小鼠口角將灌胃管插入口腔內(nèi)，然后用灌胃管向后上方壓迫小鼠頭部，使口腔與食道呈一直線，再將灌胃管沿著上顆壁輕輕推入食道（圖7）,當推進約23cm時可稍感有阻力，表明灌胃管前部已到達膈肌，此

6、時即可推進注射器進行灌胃，若注射器推注困難，應抽出重插，若誤入氣管給藥，可使小鼠立即死亡，注藥后輕輕拔出灌胃管，一次灌藥量為0.1-0.3mL/10g體重。1.2 皮下注射法通常選擇背部皮下注射，操作時輕輕拉起背部皮膚，將注射針刺入皮下，把針尖向左右擺動，易擺動說明針尖確已刺入皮下，然后注射藥液，拔針時，以手捏住圖7小鼠灌胃法針刺部位，防止藥液外漏（圖8）,注射藥量為0.10.3mL/10g。圖8小鼠皮下注射法1.3 肌肉注射法小鼠因肌肉較少，很少采用肌肉注射，若有需要可注射于股部肌肉，多選后腿上部外側(cè)，一處注射量不超過OmL1.4 腹腔注射法以左手固定小鼠，腹部向上，注射部位應是腹部的左、右

7、下外側(cè)1/4的部3-5mm接著使位，因為此處無重要器官。用右手將注射器針頭刺入皮下，沿皮下向前推進針頭與皮膚呈45度角刺入腹肌，繼續(xù)向前推進，通過腹肌進入腹腔后感覺抵抗力消失，此時可注入藥液，一次注射量為0.10.2mL/10g體重（圖9）。圖9小鼠腹腔注射法圖10小鼠尾靜脈注射法1.5 靜脈注射法一般采用尾靜脈注射，事先將小鼠置于固定的筒內(nèi)或鐵絲罩內(nèi)，或扣于燒杯內(nèi)，使尾巴露出，尾巴于4550。（:的溫水中浸泡半分鐘或用75%勺酒精棉球擦拭，使血管充血，選擇尾巴左右兩側(cè)靜脈注射，如針頭確已在血管內(nèi)，推注藥液應無阻力,注射時若出現(xiàn)隆起白色皮丘，阻力增大，說明未注入血管，應拔出針頭重新向尾根部移動

8、注射。注射完畢后，把尾巴向注射部位內(nèi)側(cè)折曲而止血。需反復靜脈注射時，應盡可能從尾端開始，按次序向尾根部移動注射。一次注射量為0050.1mL/10g體重（圖10）。2、大鼠2.1 灌胃法用左手以捉拿固定法握住大鼠抓住后肢和尾巴），灌胃方法與小鼠相類似，6-8cm,直徑1.2mm,尖端為球狀的金屬灌胃管）2.2 皮下注射法（若兩人合作時，助手以左手捉住大鼠用右手僅采用安裝在5.10mL注射器上的金屬灌胃管（長 o 一次灌藥量為1-2mL/100g體重。注射部位可選擇背部或大腿外側(cè)，操作時輕輕拉起注射部位皮膚，將注射針刺入注射部位皮下，一次注射藥量為1mL/100g體重。2.3 肌肉注射與腹腔注射

9、法同小鼠。2.4 靜脈注射法清醒大鼠可采用尾靜脈注射，方法同小鼠，麻醉大鼠可從舌下靜脈給藥，也可將大鼠腹股溝切開，從股靜脈注射藥物。3、豚鼠3.1 灌胃法用左手拇指和食指固定豚鼠兩前肢，其余手指握住鼠身（兩人操作時，助手以左手從動物的背部把后腿伸開，并把腰部和后腿一起固定，用左手的拇指和食指捏住兩前肢固定），灌胃管與灌胃方法同大鼠。亦可采用插管灌胃法，用木或竹制開口器，把導尿管或塑料管通過開口器中央的小孔插入胃內(nèi)，回注射器針栓，無空氣抽回時即可注入藥液。3.2 皮下注射法注射部位多選擇大腿內(nèi)側(cè)、背部、肩部等皮下脂肪少的部位。通常在大腿內(nèi)側(cè)注射，一般需兩人合作，一人固定豚鼠，一人握住側(cè)后肢，將注

10、射器針頭與皮膚呈45。角方向刺入皮下，確定針頭在皮下后注射，注射完畢后以指壓刺入部位片刻，以防藥液外漏。3.3 肌肉注射與腹腔注射法同小鼠。3.4 靜脈注射法注射部位可選擇前肢皮下頭靜脈、后肢小隱靜脈、耳殼靜脈、或雄鼠的陰莖靜脈，偶爾亦可用心臟穿刺給藥。一般用前肢皮下頭靜脈穿刺較用后肢小隱靜脈成功率高，而后肢小隱靜脈下部比較固定，比起明顯可見但不固定的上部穿刺成功率要高。也可在脛前部將皮膚切開一小口，暴露出脛前靜脈后注射，一次注射量不超過2mb4、兔4.1 灌胃法給家兔灌胃需要兩人合作，助手就坐，將家兔的軀體夾于兩腿之間，左手緊握雙耳固定頭部，右手抓住雙前肢固定前身。術者將木或竹制的開口器橫放

11、在家兔的上下頜之間，固定于舌頭之上，然后把合適的導尿管經(jīng)開口器中小孔，沿上顆壁慢慢插入食道約15-18cm,此時可將導尿管外口端置于一杯清水中，若無氣泡逸出，說明確已插入食道，這時可用注射器注入藥液，然后用少許清水沖洗導尿管，灌胃完畢，應先捏閉導尿管外口，拔出導尿管，再取出開口器（圖11）。圖11家兔灌胃法4.2 皮下、肌肉、腹腔注射法基本方法與鼠類相同，選用的針頭可以大一些。給藥的最大容量分別為:0.5mL、1.0mLfD5.0mL/kgo4.3 靜脈注射法注射部位一般采取耳緣靜脈（兔耳外緣的血管為靜脈，中央的血管為動脈（圖12）?？捎镁凭耷蛲坎炼窟吘夓o脈部位的皮膚，或用電燈泡烘烤兔耳使

12、血管擴張，以左手食指放在耳下將兔耳墊起，并以拇指按住耳緣部分，右手持注射器，針頭經(jīng)皮下，沿皮下向前推進少許再刺入血管，注射時若無阻力或無發(fā)生局部皮膚發(fā)白隆起現(xiàn)象，說明針頭在血管內(nèi)即可注射藥液，注射完畢壓住針眼，拔去針頭，繼續(xù)壓迫數(shù)分鐘止血（圖圖12兔耳緣血管分布脈注射法圖13兔耳緣靜5、青蛙和蟾蛛淋巴囊內(nèi)注射蛙及蟾蛛皮下有多個淋巴囊，對藥物易吸收，但皮膚無彈性，藥液容易從穿刺孔逸出。因此，給任何一個淋巴囊注藥均不能直接刺入。如作腹淋巴囊注射時，將針頭從股部上端刺入肌層，進入腹壁皮下淋巴囊再注藥，作胸部淋巴囊注射時，針頭由口腔底部穿下頜肌層而達胸部皮下；作股淋巴囊注射時，應從小腿皮膚刺入，通過膝

13、關節(jié)而達大腿部皮下。注入藥液量一般為0.250.5mL（圖圖14蛙的皮下淋巴囊1 .頜下囊2.胸囊3.腹囊4.股囊5.脛囊6.側(cè)囊7.頭背囊四、動物的麻醉和取血1實驗動物的麻醉在一些動物實驗中，特別是手術等實驗，為減少動物的掙扎和保持其安靜，便于操作，常需對動物采取必要的麻醉。由于動物屬間的差異等情況，所采用的麻醉方法和所選用的麻醉劑亦有所不同。1.1 常用的麻醉劑動物實驗中常用的麻醉劑分為三類，即揮發(fā)性麻醉劑、非揮發(fā)性麻醉劑和中藥麻醉劑。1.1.1 揮發(fā)性麻醉劑這類麻藥包括乙醛、氯仿等。乙醛吸入麻醉適應于各種動物，其麻醉量和致死量差距大，所以安全度也大，動物麻醉深度容易掌握，而且麻醉后蘇醒較

14、快。其缺點是對局部刺激作用大，可引起上呼吸道黏膜液體分泌增多，再通過神經(jīng)反射可影響呼吸、血壓和心跳活動，并且容易引起窒息，故在乙酸吸入麻醉時必須有人照看，以防止麻醉過深而出現(xiàn)上述情況。1.1.2 非揮發(fā)性麻醉劑這類麻醉劑種類較多，包括巴比妥鈉、戊巴比妥鈉、硫噴妥鈉等巴比妥類的衍生物，氨基甲酸乙脂和水合氯醛。這些麻醉劑使用方便，一次給藥可維持較長的麻醉時間，麻醉過程較平衡，動物無明顯掙扎現(xiàn)象。但其缺點是蘇醒較慢。1.1.3 中藥麻醉劑動物實驗時有時也用到像洋金花和氫澳酸冬食若堿等中藥麻醉劑，但由于其作用不夠穩(wěn)定，而且常需加佐劑麻醉效果才能理想，故使用過程中不能得到普及，因而，多數(shù)實驗室不選用這類

15、麻醉劑進行麻醉。1.2 動物的麻醉方法1.2.1全身麻醉吸入法：用一塊圓玻璃板和一個鐘罩或一個密閉的玻璃箱作為揮發(fā)性麻醉劑的容器，多選用乙叫做麻藥。麻醉時用幾個棉球，將乙醛倒入其中，迅速轉(zhuǎn)入鐘罩或箱內(nèi)，讓其揮發(fā)，然后把待麻醉動物投入，約隔4s6min即可麻醉，麻醉后應立即取出，并準備一個蘸有乙醛的棉球小燒杯，在動物麻醉變淺時套在鼻上使其補吸麻藥。本法最適于大、小鼠的短期操作性實驗的麻醉，腹腔和靜脈給藥麻醉法：非揮發(fā)性和中藥麻醉劑均可用作腹腔和靜脈注射麻醉，操作簡便，是實驗室最常采用的方法之一。腹腔給藥麻醉多用于大鼠、小鼠和豚鼠，較大的動物如兔、狗等則多用于靜脈給藥進行麻醉。由于各種麻醉劑的作用長短以及毒性的差別，所以在腹腔和靜脈麻醉時，一定要控制藥物的濃度和注射量（詳見附錄表2）。1.2.1 局部麻醉局部麻醉一般應用0.5%1.0%鹽酸普魯卡因注射；眼、鼻、咽喉、黏膜表面麻醉可2%鹽酸可卡因溶液，滴入后數(shù)秒鐘即可出現(xiàn)麻醉。1.2.2 麻醉注意事項1、靜脈注射必須緩慢，同時觀察肌肉緊張性、角膜反射和對皮膚夾捏的反應，當這些活動明顯減弱或消失時，