實(shí)驗(yàn)四血清蛋白質(zhì)醋酸纖維薄膜電泳

1、實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)四 血清蛋白質(zhì)醋酸纖維薄膜電血清蛋白質(zhì)醋酸纖維薄膜電泳泳n目的1、掌握電泳的基本原理2、掌握電泳的基本操作原理n醋酸纖維薄膜電泳(CAME)是以醋酸纖維薄膜(CAM)作支持物的一種區(qū)帶電泳技術(shù)，將血清樣品點(diǎn)樣于醋纖膜上，在pH86的緩沖液中電泳時(shí)，血清蛋白質(zhì)均帶負(fù)電荷移向正極。由于血清中各蛋白組分等電點(diǎn)不同而致表面凈電荷量不等，加之分子大小和形狀各異，因而電泳遷移率不同，彼此得以分離。電泳后，CAM經(jīng)染色和漂洗，可清晰呈現(xiàn)清蛋白、1、2、球蛋白5條區(qū)帶。器材n 1醋酸纖維薄膜(8X2mm) 2點(diǎn)樣器 3染色皿，漂洗器，鑷子 4電泳儀：直流電源整流器，水平電泳槽試劑1巴比妥緩沖液(pH

2、8.6 I=0.06)：取巴比妥鈉12.76g，巴比妥1.66g，加蒸餾水加熱溶解后稀釋至1升。2氨基黑10B染色液：取氨基黑10B05g，甲醇50ml，冰醋酸l0ml，加水至100ml。3漂洗液：95乙醇45ml、冰醋酸5ml、蒸餾水50ml操作-準(zhǔn)備l醋纖膜的準(zhǔn)備：距離邊緣1.5cm用鉛筆作好標(biāo)記，粗糙面用于點(diǎn)樣，然后將薄膜放進(jìn)緩沖液中，自然浸潤(rùn)，約20分鐘。2電泳槽的準(zhǔn)備：水平放置，將緩沖液注入電泳槽中，兩邊的緩沖液高度要一致，架上濾紙橋，蓋上電泳槽蓋。3點(diǎn)樣：將充分浸透(指膜上沒(méi)有白色斑痕)的薄膜取出，用濾紙吸去膜上過(guò)多的緩沖液，載玻片蘸取血清(約10-20p1)，垂直印在CAM粗糙面的加樣線上，待樣品全部滲入薄膜內(nèi)后，移開(kāi)點(diǎn)樣器。操作-電泳4加樣后，將薄膜條架于支架兩端，點(diǎn)樣面朝下，點(diǎn)樣側(cè)置于負(fù)極端。薄膜應(yīng)平直無(wú)彎曲，加上槽蓋平衡5分鐘后通電電泳。5正確連接電泳槽與電泳儀對(duì)應(yīng)的正負(fù)極，開(kāi)啟電源通電。電壓10-15V/cm膜總寬。電泳4060分鐘，泳動(dòng)距離約達(dá)3.54.0cm時(shí)即可斷電。6染色:電泳完畢后斷電，用鑷子取出薄膜條投入染液5-10分鐘，染色過(guò)程中不時(shí)輕輕晃動(dòng)染色皿，使染色充分。7.漂洗 :從染液中取出薄膜條并盡量瀝去染液，投入漂洗皿中反復(fù)漂洗，直至背景漂凈為止。此時(shí)清晰可見(jiàn)5條色帶，待干。實(shí)驗(yàn)報(bào)告將薄膜條粘貼于實(shí)驗(yàn)報(bào)