檢測系統(tǒng)分析性能驗證及確認

1、檢測系統(tǒng)分析性能驗證及確認宋鑒清-論語衛(wèi)靈公 檢測系統(tǒng)：是指完成一個檢驗項目所涉及的儀器、試劑、校準品、操作程序、質(zhì)控品、樣品、質(zhì)量控制、保養(yǎng)計劃、操作者等的組合。檢測系統(tǒng)的用途：為患者提供準確的檢驗結(jié)果。 要記?。簡螁我粋€試劑盒上的所謂分析性能，一定不就是試劑盒的！因為只有試劑沒有儀器的合作，就沒有這些分析性能！ 同樣，儀器廠商宣傳的那些分析性能一定是在該儀器上使用了某個廠商的試劑盒才具有的！ 因此所有的分析性能一定是一個檢測系統(tǒng)的！不是試劑盒的、也不是某個儀器的！常見檢測系統(tǒng)配套檢測系統(tǒng)-性能驗證： A+A+A 封閉系統(tǒng) A+B+B 配套開放系統(tǒng)自建檢測系統(tǒng)-性能確認： A+B+C 非配套

2、開放系統(tǒng)LDH 乳酸脫氫酶性能特征(羅氏)-1LDH 乳酸脫氫酶性能特征(羅氏)-2ISO 15189認可準則的要求驗證（verification）確認（validation）定義通過提供客觀證據(jù)證明給定項目滿足規(guī)定的要求通過提供客觀證據(jù)對特定的預(yù)期用途或應(yīng)用要求已得到滿足的認定。適用范圍配套檢測系統(tǒng)固定組合的檢測系統(tǒng)標準方法。非標準方法、實驗室設(shè)計或制定的方法、超出預(yù)定范圍使用的標準方法和修改過的確認方法（自建檢測系統(tǒng)）。完成者臨床實驗室獨立完成廠商，方法的研究和開發(fā)者，或臨床實驗室。性能指標精密度，正確度，可報告范圍，有時還有檢出限。精密度，正確度，可報告范圍，檢出限，干擾，攜帶污染等。目

3、的滿足廠商聲明或預(yù)期用途。滿足檢驗預(yù)期用途的特定要求。CNAS CL02：2012 5.5.1.3性能驗證與確認的區(qū)別性能驗證項目的選擇（一）5.5檢驗方法和程序的分析性能驗證內(nèi)容至少應(yīng)包括正確度、精密度和可報告范圍。 CNAS-CL38：2012醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則在臨床化學檢驗領(lǐng)域的應(yīng)用說明5.5檢驗方法和程序的分析性能驗證內(nèi)容至少應(yīng)包括：檢出限，精密度（包括重復性和中間精密度）、符合率，并 應(yīng)明確檢驗項目的預(yù)期用途，如篩查、診斷、確認。CNAS-CL39：2012醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則在臨床免疫學檢驗領(lǐng)域的應(yīng)用說明性能驗證項目的選擇（二）5.5尿液干化學分析儀性能驗證的內(nèi)容

4、至少應(yīng)包括陰性和陽性符合率CNAS-CL41：2012醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則在體液學檢驗領(lǐng)域的應(yīng)用說明5.5血液分析儀的性能驗證內(nèi)容至少應(yīng)包括正確度、精密度、可報告范圍等。CNAS-CL43：2012醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則在臨床血液學檢驗領(lǐng)域的應(yīng)用說明WS/T 403-2012臨床生物化學檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量指標WS/T 406-2012臨床血液學檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量要求WS/T 408-2012臨床化學設(shè)備線性評價指南WS/T 492-2016臨床檢驗定量測定項目精密度與正確度性能驗證EP5-A3.Evaluationofprecisionofquantitativemeasur

5、ementprocedures;approvedguideline-thirdedition.2014EP15-A3.Userverificationofprecisionandestimationofbias；approvedguideline-thirdedition.2014EP9-A2.MethodComparisonandBiasEstimationUsingPatientSamples;ApprovedGuidelineSecondEditionEP6A.EvaluationoftheLinearityofQuantitativeMeasurementrocedures:AStat

6、isticalApproach;ApprovedGuidelineEP10A2.PreliminaryEvaluationofQuantitiveClinicalofLaboratoryMethods;ApprovedGuidelineSecondEdition.性能驗證相關(guān)的基本概念精密度（precision）:在規(guī)定的條件下，對同一或類似被測對象重復測量所得示指或測得值間的一致程度。精密度的度量通常以不精密度（SD、方差或CV）表示。批（Run）：在檢測系統(tǒng)真實性和精密度穩(wěn)定的間隔期，一般不超過24小時或不少于2小時。正確度(trueness)：無窮多次重復測量所得量值的平均值與一個參考量

7、值間的一致程度。與系統(tǒng)測量誤差有關(guān)，與隨機測量誤差無關(guān)，以偏倚（Bias）表示。準確度(accuracy)：單次檢測結(jié)果與參考值間的一致程度，以總誤差（TE）表示。性能驗證相關(guān)的基本概念線性（linearity）：檢測樣本時，在一定范圍內(nèi)可以直接按比例關(guān)系得出分析物含量的能力。總誤差(total error)：實驗室用某方法在多次獨立檢測中分析某樣品所得各個結(jié)果值與靶值之差在一定置信區(qū)間內(nèi)的最大允許范圍。靈敏度(analytical sensitivity)：校準曲線的斜率，即對于規(guī)定量的變化分析程序產(chǎn)生信號的變化。檢測限(detection limit)：分析程序具有適當?shù)拇_定檢出的分析物的

8、最小濃度或量。檢測限依賴于空白讀數(shù)大小。性能驗證的實施過程 對檢驗程序的性能驗證涉及到多方面工作，為了得到可靠結(jié)果，實驗室負責人或?qū)嶒炛鞒秩藨?yīng)對此項工作有一個概括了解，先制定一個方案，包括如下工作： 1、性能驗證項目的選擇、質(zhì)量目標確定、性能驗證方案制定及實施工作計劃； 2、實驗前準備（人員培訓、儀器維護及校準、樣本留取及制備）； 3、實驗操作、數(shù)據(jù)收集、處理； 4、結(jié)論。分析質(zhì)量指標的確定分析質(zhì)量指標（analytical quality specifications）;又稱質(zhì)量目標（quality goals）、質(zhì)量規(guī)范（quality specification）、質(zhì)量標準（qualit

9、y standards）和分析性能目標（analytical performance goals）。判斷臨床檢驗結(jié)果精密度、正確度和準確度水平高低的指標，或臨床檢驗結(jié)果應(yīng)達到的精密度、正確度和準確度要求，通常用不精密度、偏倚和總誤差來表示。層次模式設(shè)定策略協(xié)議條款1評價分析性能對特定床決策的影響特定臨床情況下的質(zhì)量規(guī)范2評價分析性能對一般臨床決策的影響A.基于生物變異的一般質(zhì)量規(guī)范B.基于醫(yī)療觀點的一般質(zhì)量規(guī)范3專業(yè)建議A.國家或國際專家小組指南B.個別或?qū)W會工作組專家指南4由法規(guī)機構(gòu)或室間質(zhì)量評價組織者制定的質(zhì)量規(guī)范A.由法規(guī)機構(gòu)制定的質(zhì)量規(guī)范B.由室間質(zhì)量評價組織者制定的質(zhì)量規(guī)范5已發(fā)表的

10、當前技術(shù)水平數(shù)據(jù)A.已發(fā)表的能力驗證和室間質(zhì)量評價的數(shù)據(jù)B.已發(fā)表的特定的方法學設(shè)定質(zhì)量目標的層次模式和方法質(zhì)量目標質(zhì)量目標精密度驗證 采用2個濃度的質(zhì)控物，每天分析1個批次，每個濃度重復檢測4次，連續(xù)5天。數(shù)據(jù)經(jīng)過離群值檢驗，收集220=40個有效數(shù)據(jù)，并通過統(tǒng)計分析評價方法計算總精密度和批內(nèi)精密度，與允許范圍進行比較，判斷結(jié)果是否接受。將估計的批內(nèi)精密度和室內(nèi)精密度與本室規(guī)定的相應(yīng)的允許范圍(CV批內(nèi)1/4總允許誤差，CV總行業(yè)標準)比較，判斷驗證是否通（同時參考CLIA規(guī)定的TEa、廠商聲明）。 參考臨床檢驗方法學評價EP15-A2WS/T 492-2016方法精密度分析方案結(jié)果匯總儀器

11、名稱：日立7600-210項目濃度水平濃度水平精密度CV%允許范圍判定結(jié)果驗證值判定結(jié)果精密度CV%允許范圍判定結(jié)果驗證值判定結(jié)果CACV批內(nèi)0.77%1.25%通過0.0621 通過CV批內(nèi)1.20%1.25%通過0.0783 通過CV總1.41%2.0%通過0.1254 通過CV總1.77%2.0%通過0.1258 通過PCV批內(nèi)1.20%2.50%通過0.0444 通過CV批內(nèi)1.17%2.50%通過0.0579 通過CV總1.38%4.0%通過0.0584 通過CV總2.01%4.0%通過0.1130 通過MGCV批內(nèi)1.59%3.75%通過0.0678 通過CV批內(nèi)1.24%3.75

12、%通過0.1008 通過CV總2.56%5.5%通過0.1261 通過CV總2.43%5.5%通過0.2103 通過臨床血液學批內(nèi)精密度 試驗方案批內(nèi)精密度以連續(xù)檢測結(jié)果的變異系數(shù)為評價指標，使用1份正常濃度水平的臨床標本，按常規(guī)方法重復檢測11次，計算后10次的算術(shù)平均值、標準差及變異系數(shù)，與允許的變異系數(shù)進行比較，判斷結(jié)果是否接受。（參考WS/T 406-2012臨床血液學檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量要求）日間精密度 試驗方案日間精密度以室內(nèi)質(zhì)控在控結(jié)果的變異系數(shù)為評價指標，使用Sysmex配套質(zhì)控品（低值、中值、高值）當前批號累積的變異系數(shù)，與允許的變異系數(shù)進行比較，判斷結(jié)果是否接受。（參考WS

13、/T 406-2012臨床血液學檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量要求）臨床血液學臨床案例臨床案例1 1臨床案例臨床案例1 1臨床案例臨床案例1 1正確度驗證 WS/T 406-2012臨床血液學檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量要求WS/T 492-2016臨床檢驗定量項目精密度與正確度性能驗證EP9-A3:Measurementprocedurecomparisonandbiasestimationusingpatientsamples;approvedguideline-thirdedition.2013EP9-A2：MethodComparisonandBiasEstimationUsingPatientSamp

14、les;ApprovedGuideline-SecondEdition，2002EP15-A2：UserVerificationofPerformanceforPrecisionandTrueness,2005EP15-A3.Userverificationofprecisionandestimationofbias；approvedguideline-thirdedition.2014臨床血液學1試驗過程1.1 樣本的準備選取10份檢測結(jié)果在參考區(qū)間內(nèi)的新鮮臨床樣本。1.2 試驗步驟 10份標本分別在該儀器上檢測2次，記錄各項目20次檢測結(jié)果，計算均值； 相同樣本在臨檢室標準儀器（J-300

15、1-LJ）上同樣檢測2次，記錄各項目20次檢測結(jié)果，計算均值，設(shè)為靶值； 該儀器檢測結(jié)果均值與靶值計算偏倚。1.3 質(zhì)量控制 整個試驗階段檢測儀器狀態(tài)正常，各批次質(zhì)控結(jié)果均符合要求。2 試驗數(shù)據(jù)分析 各試驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析方法參考臨床血液學檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量要求。3 試驗結(jié)果的判定標準各項目的偏倚應(yīng)符合表6的要求。正確度初步評價 先用5個定值PT樣品進行正確度初步評價，每個樣品測量1次，計算5個樣品與靶值之間的平均偏倚，若允許偏差（衛(wèi)生行業(yè)標準）初步評價通過，直接進行正確度確認；若不通過則進行校準，初步評價通過后再進行正確度確認。檢測PT樣品5份，每個樣品重復測量3次，計算每個樣品均值與靶值的

16、相對偏倚；檢測參考方法定值的新鮮血清樣品5份，每個樣品重復測量3次，計算每個樣品重復測量的均值與靶值的相對偏倚；用實驗方法和參考方法同時檢測40份新鮮樣品，每天測量10個樣品，每個樣品測量1次，連續(xù)4天。以參考方法結(jié)果為橫座標X，實驗方法為縱座標Y，繪制散點圖，計算回歸方程，計算參考區(qū)間兩端和醫(yī)學決定水平處的相對偏倚。 （-EP9-A3EP9-A3）偏倚允許偏差，正確度得到確認。確認實驗方法有證參考物質(zhì)（CRMs）：已用參考方法或決定性方法定值，可從美國國家標準局（NIST）或其他國際組織認可的提供者獲得;從能力驗證試驗（PT）中獲得的參考物：如CAP和衛(wèi)生部檢驗中心能力驗證試驗中提供的調(diào)查品

17、;廠商提供的正確度確認物或質(zhì)控物;室間質(zhì)量評價計劃中使用的質(zhì)控物;由第三方提供的已用不同方法定值的物質(zhì)。定值參考物質(zhì)檢測的回收實驗比 對 試驗方案收集樣本20份，其濃度應(yīng)均勻分布整個分析測量范圍。采用試驗方法和比較方法分別檢測20份樣本，試驗持續(xù)4天，每天測定5份樣本。每種方法對于每個樣本重復測定2次，將樣本按1、2、3、4、5的順序進行第一次測定，再按反向順序測定第二次。順序中的樣本濃度盡量隨機排列。其測定結(jié)果經(jīng)過方法內(nèi)、方法間離群值檢驗，X值合適范圍檢驗，離散度均勻性檢查等步驟，繪制散點圖，粗略分析方法間是否呈線性關(guān)系。通過線性回歸分析估計在醫(yī)學決定水平處的預(yù)期偏倚的95%可信區(qū)間大??；或

18、者如數(shù)據(jù)離散度均勻，可計算各濃度的平均偏倚及平均百分比偏倚大小。將兩種偏倚與偏倚的允許范圍進行比較以判定是否符合要求。參考臨床檢驗方法學評價EP9-A2WS/T 407-2012 醫(yī)療機構(gòu)內(nèi)定量檢驗結(jié)果的可比性驗證指南方法內(nèi)離群值檢驗實驗方法差值絕對值的均值：0.19 接受限為前者4倍：0.77 實驗方法相對差值絕對值的均值：0.02 接受限為前者4倍：0.07 比較方法差值絕對值的均值：0.21 接受限為前者4倍：0.85 比較方法相對差值絕對值的均值：0.02 接受限為前者4倍：0.08 方法間離群值檢驗E值：0.22 E的控制限=4*E=0.878E值：0.0146 E的控制限=4*E=

19、0.0585 X值合適范圍的檢驗CNAS-CL38：2012醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則在臨床化學檢驗領(lǐng)域的應(yīng)用說明質(zhì)控數(shù)據(jù)比對分析臨床案例臨床案例2 2臨床案例臨床案例2 2臨床案例臨床案例2 2臨床案例臨床案例2 2臨床案例臨床案例2 2臨床案例臨床案例2 2臨床案例臨床案例2 2可報告范圍臨床可報告范圍分析測量范圍線性評價方法1.目測法:主觀、粗略、不能確定每個點的線性程度；2.改良Doumas方法（平均斜率法）； 3.CAP設(shè)備委員會（IRC）采用的多項式回歸分析方法(CAP-IRC法)；4.CLSI EP-6A法（定量檢驗方法的線性評價）。樣本來源1.病人標本；2.低濃度的標本（或推

20、薦的稀釋液）稀釋高濃度標本；3.病人樣本中添加分析物（如CaCl2、Glu)、加入量原則上少于總體積的10%；4.商業(yè)質(zhì)控物/校準物/線性驗證物質(zhì)。項目名稱項目名稱線性范圍線性范圍水平水平1 1質(zhì)控均值質(zhì)控均值水平水平2 2質(zhì)控均值質(zhì)控均值鉀1.5-10.0 4.017.519鈣0.05-52.413.24血糖0.11-41.66.8419.85肌酐92總蛋白1-13052.2760.95丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶4-100083195.3肌酸激酶3-2300233.1623.9低密度脂蛋白0.026-18.103.0794.57淀粉酶3-1500130.9262.5膽固醇 0.13-20.77 4.8117.313線性：0.11-41.66.8419.856.8419.85平均斜率法評價分析測量范圍（改良Doumas方法）試驗方案選取接近儀器標注的分析測量范圍上限（其樣本濃度不低于標定分析范圍上限的85%）和下限的兩個分析濃度的樣本(H和L)，按照1L、0.8L0.2H、0.6L+0.4H、0.4L+0.6H、0.2L+0.8H、1H的比例關(guān)系配制6個系列濃度的樣本。對每個混合樣本進行多次(至少2次)檢測。經(jīng)統(tǒng)計后擬合回歸線ybx+a。試驗結(jié)果的判定標準將擬