薄層色譜標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、文件薄層色譜標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程編號(hào)S0F?09?1015版本2頁碼1/4編制日期替代/審定日期頒發(fā)質(zhì)量保障部批準(zhǔn)日期生效年1月20日發(fā)放質(zhì)保中心依據(jù)：GMP與藥品生產(chǎn)質(zhì)量檢驗(yàn)的要求目的：建立一個(gè)薄層色譜鑒別的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程范圍：各種檢驗(yàn)中薄層鑒別的操作1?定義：薄層色譜法，系將細(xì)粉狀的吸附劑或載體涂布于玻璃板、塑料板或鋁基片上，成一均勻薄層，經(jīng)點(diǎn)樣、展開與顯示以后，再與適宜的對(duì)照物質(zhì)按同法所得的色譜圖作對(duì)比,用于進(jìn)行藥品的鑒別，雜質(zhì)檢查或含量測(cè)定的方法。2.儀器與材料2.1 展開室：可選用適合薄層板大小的玻璃缸并有嚴(yán)密的蓋子、底部平整。必要時(shí)在展開槽蓋處可涂抹少量凡士林增加密閉性，但需注意勿沾污薄層板

2、或溶入展開劑。2.2 玻璃板：除另有規(guī)定外，用5cmx20cm、10cmx20cm或20cmx20cm的規(guī)格。也可用載玻片進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)。各種薄層板要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。玻璃板的質(zhì)量有一定要求，厚度為2mm或34mm,預(yù)制板一般使用1mm的玻璃板。應(yīng)有良好的平面性，可用鏡面玻璃或浮法玻璃，還應(yīng)有一定的耐熱性，以使在烘烤時(shí)不致破裂。2.3 涂布器：有手工涂布器和自動(dòng)涂布器（用于定量分析），均應(yīng)能使吸附劑或載體在玻璃板上涂開層符合厚度要求的均勻薄層？2.4 點(diǎn)樣器：玻璃毛細(xì)管2.5 吸附劑或載體首選為硅膠G、硅膠GF254.硅膠H、硅膠HF254,其次有硅藻土、硅藻土G、氧化鋁、氧化鋁

3、G、微晶纖維素、微晶纖維素F254等。其顆粒大小，一般要求為直徑1040Pm。其比表面積可達(dá)約600m2/g。由于硅膠的質(zhì)量、顆粒大小、分布均勻程度直接影響分離度及檢出限度。而且不同廠家生產(chǎn)的硅膠，其質(zhì)量也有差別，甚至同一廠家生產(chǎn)的不同批號(hào)也會(huì)有分離效果不同的差別。因此要使薄層分離的結(jié)果比較穩(wěn)定，應(yīng)嚴(yán)格控制硅膠質(zhì)量。3薄層板的制備薄層板分為無粘合劑（軟板）和有粘合劑（硬板）兩種.前者系將吸附劑直接放在洗凈干燥的玻璃板一端,置涂布器上并調(diào)節(jié)好一定的涂布厚度,一般為0.25?0.5mm供分析用）.由于使用中易被分散,現(xiàn)多采用含有粘合劑的薄層板。1.1 吸附劑（硅膠G）勻漿的制備除另有規(guī)定外,將1份

4、吸附劑和3份水在研缽中向一方向研磨混合,去除表面的氣泡后,備用。一般水應(yīng)少些為好,以能調(diào)制成適當(dāng)?shù)某矶?使涂層均勻一致為度,這樣制成的薄層板較緊密,分離效果好.硅膠CM板是取羧甲基纖維素鈉粉（一般0.25%?0.75%）適量，加熱煮沸溶解,放冷,備用.鋪板時(shí)取其上清液使用。1.2 鋪板1.2.1 傾注法取適量調(diào)制的吸附劑漿,倒入準(zhǔn)備好的玻璃板上,用洗凈玻棒涂鋪成一均勻的薄層再稍加振動(dòng),使整板薄層均勻.本法簡(jiǎn)便,但板面一致性差。1.2.2 平鋪法在水平臺(tái)面上，依次放置適量的玻璃板，另在玻璃板兩邊加上玻璃條做成框邊（框邊的厚度稍高于中間玻璃板約0.25?1mm）,然后將吸附劑勻漿倒入中間玻璃板上,

5、用有機(jī)玻璃板或玻璃棒向一定方向均勻地將吸附劑刮平,再逐片輕輕振動(dòng),使整板薄層均勻.本法可以一次平鋪多塊薄層板,簡(jiǎn)便易行,缺點(diǎn)同上,上述兩種方法制成的薄層板,只適用一般定性分離。1.2.3 涂鋪器法取適量調(diào)制的吸附劑勻漿,倒入涂布器中,在玻璃板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.2?0.3mm）,取下涂好薄層的玻璃板于室溫下，置水平臺(tái)上晾干，即得。用涂布器制備薄層時(shí)涂布器移動(dòng)的速度會(huì)影響薄層的厚度.移動(dòng)快薄層就薄,反之則厚。因此操作者需要熟練掌握移動(dòng)的速度.此外,薄層的厚度與水的比例、勻漿稠度等有關(guān)。本法可一次鋪成幾塊薄層板，且分離效果和重現(xiàn)性好，可用于定量分離。1.3 薄層的干燥（活化）涂布

6、好的薄層板應(yīng)先平置于室溫晾干，然后再在110C烘0.5h.立即置有干燥劑的干燥箱中,備用.使用前檢查其均勻度（可通過透射光和反射光檢視）。涂布后的薄層不可立即進(jìn)行干燥,否則表面易產(chǎn)生凹點(diǎn).烘干的溫度和時(shí)間對(duì)薄層板的活度有關(guān)，應(yīng)嚴(yán)格控制.烘好的薄層板保持時(shí)間不宜太長(zhǎng)，最好隨用隨制。4 檢定方法4.1 點(diǎn)樣用點(diǎn)樣器（一般用平頭微量注射器）點(diǎn)樣于薄層板上,速度應(yīng)平穩(wěn),點(diǎn)樣原點(diǎn)的大小對(duì)最后色點(diǎn)面積影響較大,必須減少原點(diǎn)樣品向深層擴(kuò)散,使原點(diǎn)集中,一般為圓點(diǎn),直徑24mm的范圍,可根據(jù)各品種的點(diǎn)樣量進(jìn)行選擇,防止造成原點(diǎn)"超載"或使展開時(shí)產(chǎn)生"繞行"現(xiàn)象,會(huì)使斑點(diǎn)

7、拖尾或重疊.點(diǎn)樣量一般不超過10PL（在空氣中點(diǎn)樣以不超過10min為宜）？點(diǎn)樣基線距底邊約2.0cm點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為度.點(diǎn)樣時(shí)必需注意勿損傷薄層表面。4.2 展開4.2.1 展開室如需預(yù)先用展開劑飽和，可在室中加入足夠量的展開劑，并在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條，一端浸入展開劑中，密封展開室的蓋，使系統(tǒng)平衡。4.2.2 由于對(duì)飽和的要求不同,如有的需用展開劑將展開室飽和,有的需將薄層板置展開室中先一并用展開劑飽和,有的需先用一種溶劑飽和后,再用展開劑展開,有的可不必飽和等,故需按各品種要求操作,避免產(chǎn)生"邊緣效應(yīng)"。4.2.3 將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開室的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5?1.0cm（切勿將樣點(diǎn)浸入展開劑中），密封室蓋，待展開至規(guī)定距離（一般為10?15cm）,取出薄層板,晾干,按各品種項(xiàng)下的規(guī)定檢測(cè)。4.2.4 常用上行法展開,此外,也可使用下行展開法,徑向展開法、單向多次展開法、雙向展開法等。4.3 顯色展開后的薄層板須將溶劑揮盡后,按各品種項(xiàng)下規(guī)定條件顯色.但本法可采用具腐蝕性試劑如硫酸等