微生物的生理生化反應

1、l在生活細胞中存在的化學反應稱之為代謝。在生活細胞中存在的化學反應稱之為代謝。l微生物在代謝活動中的生理生化反應呈現出很微生物在代謝活動中的生理生化反應呈現出很大的多樣性。大的多樣性。l淀粉的水解實驗淀粉的水解實驗l糖發(fā)酵實驗糖發(fā)酵實驗l吲哚、甲基紅、吲哚、甲基紅、V-PV-P 反應反應l微生物對大分子的淀粉不能直接利用，必須靠產生的胞外淀粉酶將其分解后才能吸收利用。l微生物的胞外酶（如淀粉酶、脂肪酶等）將大分子物質的分解過程可以通過觀察細菌菌落周圍的物質變化來證實。l淀粉遇碘液呈藍色，但在淀粉被細菌水解的區(qū)域，遇碘不再呈藍色，這可作為細菌產生淀粉酶的證據。 1 1、淀粉的水解試驗、淀粉的水解

2、試驗l菌種：菌種：枯草芽孢桿菌，大腸桿菌?？莶菅挎邨U菌，大腸桿菌。l培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：固體淀粉培養(yǎng)基。固體淀粉培養(yǎng)基。l溶液或試劑：溶液或試劑：盧戈氏碘液。盧戈氏碘液。l器材：器材：無菌培養(yǎng)皿，接種環(huán)，試管架。無菌培養(yǎng)皿，接種環(huán)，試管架。操作步驟： （1）無菌操作制備淀粉固定培養(yǎng)基平板。 （2）將枯草芽孢桿菌、大腸桿菌分別在同一平板不同的部分劃線接種，在平板的反面分別寫上菌名。 （4）將平板倒置在37溫箱中培養(yǎng)24h。 （5）觀察各種細菌的生長情況。滴入少量盧戈氏碘液于平皿中,輕輕旋轉平板,使碘液均勻鋪滿整個平板。+枯草大腸結果：l將結果填入下表。“”表示陽性，“”表示陰性。2 2、糖發(fā)酵試驗、

3、糖發(fā)酵試驗l糖發(fā)酵試驗是常用的鑒別微生物的生化反應。某些細菌能利用糖類作為碳源和能源，使糖類分解而產酸產氣或產酸不產氣。不同種的細菌對于各種糖類利用能力不同，分解產物也不同。l大腸桿菌能分解乳糖和葡萄糖產酸并產氣；l普通變形桿菌只能分解葡萄糖產酸產氣，不能分解乳糖。l傷寒桿菌分解葡萄糖產酸不產氣，不能分解乳糖。 1.菌種：大腸桿菌，普通變形桿菌斜面各一 支。 2.培養(yǎng)基：葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管和乳糖發(fā) 酵培養(yǎng)基試管各3支（內裝有倒置的杜漢氏 小管）。 3.儀器或其他用具：試管架，接種環(huán)等。 產酸指示劑、倒置小管l1.用標簽紙在各試管外壁上分別標明發(fā)酵培養(yǎng)基名稱和所接種的細菌菌名。l2.取葡萄糖發(fā)

4、酵培養(yǎng)基試管3支，分別接入大腸桿菌，普通變形桿菌，第三支不接種，作為對照。l另取乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管3支，同樣分別接入大腸桿菌，普通變形桿菌，第三支不接種，作為對照。l在接種后，輕緩搖動試管，使其均勻，防止倒置的小管進入氣泡。 3.將接種過和作為對照的6支試管均置37培養(yǎng)2448h。 4.觀察各試管顏色變化及杜漢氏小管中有無氣泡。l實驗報告 將結果填入下表?！?”表示產酸或產氣，“-”表示不產酸或不產氣。l吲哚試驗（吲哚試驗（indol testindol test）l甲基紅試驗（甲基紅試驗（methyl red testmethyl red test）lV.P.V.P.反應（反應（Voges-

5、Prokauer testVoges-Prokauer test）l了解試驗原理及其在腸道菌鑒定中的意義和方法。l吲哚試驗、甲基紅試驗、伏-普試驗主要用來鑒別大腸桿菌與產氣腸桿菌（Enterobacter aerogenes）。l主要是用于水的細菌學檢查，因為大腸桿菌雖非致病菌，但在飲水中若大腸桿菌超過一定數量則表示受糞便污染；l而產氣腸桿菌則廣泛存在于自然界中，因此，檢查水時要將二者區(qū)分開來。 l有些細菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸產生吲哚和丙酮酸。吲哚與對二甲基氨基苯甲醛結合，就會形成紅色的玫瑰吲哚。l色氨酸水解反應l吲哚與對二甲基氨基苯甲醛反應l大腸桿菌吲哚反應陽性，產氣腸桿菌為

6、陰性。l某些細菌在糖代謝過程中，將培養(yǎng)基中的糖分解為甲酸、乙酸、乳酸等，使培養(yǎng)基變酸，加入培養(yǎng)基中的甲基紅指示劑pH4.2（紅色）-6.3（黃色），可使培養(yǎng)基由原來的桔黃色變?yōu)榧t色，即甲基紅陽性反應。l大腸桿菌發(fā)酵葡萄糖產酸;l產氣腸桿菌將有機酸轉化為非酸性末端產物,如乙醇、丙酮酸等。l某些細菌可利用葡萄糖產生丙酮酸，丙酮酸進行縮合，脫羧變成乙酰甲基甲醇，此物在堿性條件下能被空氣中的氧氣氧化成二乙酰。二乙酰與蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成紅色化合物，即伏-普反應陽性，沒有紅色化合物產生則為陰性。l產氣腸桿菌伏-普反應陽性，大腸桿菌伏-普為陰性。 l菌種 大腸桿菌，產氣腸桿菌；l培養(yǎng)基 蛋白胨水

7、培養(yǎng)基，葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基；l溶液或試劑 甲基紅試劑，40KOH，5-萘酚，乙醚，吲哚試劑等。l1接種與培養(yǎng) (1)將大腸桿菌、產氣腸桿菌分別接種于2支蛋白胨水培養(yǎng)基中（做吲哚試驗），置37溫室中培養(yǎng)2天。 (2)將上述二菌分別接種于2支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中（做甲基紅試驗與伏-普試驗），置37溫室培養(yǎng)2天。l2觀察結果 (1)吲哚試驗 于培養(yǎng)48小時后的蛋白胨水培養(yǎng)物內加34滴乙醚，搖動數次，靜置13分鐘，待乙醚上升后，沿管壁徐徐加入2滴吲哚試劑，在乙醚和培養(yǎng)物之間產生紅色環(huán)狀物為陽性反應。 (2)甲基紅試驗 培養(yǎng)48小時后，將葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)物分為兩小管（其中一管留做伏-普試驗），在一管內加甲基紅試劑2滴，培養(yǎng)基變紅色者為陽性，黃色者為陰性。 (3)伏普試驗 培養(yǎng)兩天后，將另一支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)物內加入510滴40KOH，然后加入等量的5-萘酚溶液，用力振蕩，再放入37溫箱中保溫1530min，以加快反應速度。培養(yǎng)物呈紅色者，為陽性。1結果將實驗結果填入下表?！?”表示陽性反應；“-”表示陰性反應。 2思考