病理技術(shù)員培訓(xùn)

1、病理技術(shù)員培訓(xùn)概述v 病理學(xué)是研究疾病的病因、發(fā)生機(jī)制、病理變化、結(jié)局和轉(zhuǎn)歸的一門學(xué)科。v 病理學(xué)是一門基礎(chǔ)學(xué)科，但又是聯(lián)系基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)的橋梁。包括病理解剖學(xué)和病理生理學(xué)。v 病理學(xué)常用研究方法： 1.尸體解剖 2.活體組織學(xué)檢查 3.脫落細(xì)胞學(xué)檢查 4.動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 5.組織和細(xì)胞培養(yǎng) 1.尸體解剖： 遺體病理解剖、觀察正確診斷、查明死因 、解釋臨床癥狀和體征等臨床現(xiàn)象及時(shí)發(fā)現(xiàn)和確診新疾病，特別是傳染病提供第一手科研材料 2.活體組織學(xué)檢查： 局部手術(shù)、嵌取、穿刺針吸肉眼和鏡下病理觀察良惡性腫瘤診斷和疑難病例確診乳腺癌：對(duì)乳房腫塊診斷不清，懷疑非實(shí)質(zhì)病變者可采取穿刺針吸小塊組織做病理檢查，

2、方法簡(jiǎn)單診斷可靠率高，尤其對(duì)鑒別診斷有重要價(jià)值。如通過各種方法均未取得結(jié)果而仍診斷不清，直接切取活體組織檢查。前列腺癌：直腸指診DRE，在前列腺癌的篩選檢查中必不可少且簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、方便和穿刺活檢以早期發(fā)現(xiàn)前列腺癌。前列腺癌的確診必須通過病理活檢證實(shí),經(jīng)直腸超聲引導(dǎo)下前列腺穿刺活檢術(shù)操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確性高、安全、并發(fā)癥少。胃癌：3.脫落細(xì)胞學(xué)檢查：腫瘤的普查和早期發(fā)現(xiàn)、早治療（1）宮頸癌：陰道脫落細(xì)胞檢查為早期最有效的檢查（2）乳腺癌：乳頭溢液者，可收集液體涂片送病理查找癌細(xì)胞。（3）肺癌：反復(fù)痰中查癌細(xì)胞，獲陽(yáng)性結(jié)果，有確診價(jià)值（4）食道癌：食管拉網(wǎng)細(xì)胞學(xué)，初篩，承受度和敏感性較低，約束了其廣泛使

3、用（5）膀胱癌：尿脫落細(xì)胞檢查：是一種簡(jiǎn)單易行又無(wú)創(chuàng)傷的膀胱癌檢查方法，對(duì)膀胱癌的診斷有重要價(jià)值，膀胱癌病人約85%尿脫落細(xì)胞檢查可呈陽(yáng)性。 5.動(dòng)物實(shí)驗(yàn): 6.組織和細(xì)胞培養(yǎng)： 第一節(jié) 標(biāo)本制作的常規(guī)工作 1.清潔工作： 工作實(shí)驗(yàn)室要干凈整潔，固體廢棄物要存放于醫(yī)用垃圾袋內(nèi)，防止污染，保持水管通暢。 2.接受標(biāo)本工作： 核對(duì)檢查申請(qǐng)單、送檢標(biāo)本及標(biāo)志，對(duì)于送檢的微小標(biāo)本必須認(rèn)真核對(duì)容器內(nèi)或?yàn)V紙上是否有組織及數(shù)量，容器無(wú)名字的應(yīng)立即寫上名字；檢查標(biāo)本固定液是否充足，按順序存放。 3.標(biāo)本登記工作： 將檢查后的標(biāo)本登記在登記卡，包括驗(yàn)收日期和病理編號(hào)，編號(hào)寫在申請(qǐng)送檢單右上角，按順序排放，為取材

4、做準(zhǔn)備。 4.標(biāo)本取材工作： 先核對(duì)再取材，取材后在按編號(hào)放置，脫水盒背面詳細(xì)記錄取材情況，并寫上日期和簽上取材人姓名。第一節(jié) 標(biāo)本制作的常規(guī)工作 5.取材后標(biāo)本進(jìn)行固定、脫水、包埋、切片、染色。 6、染色后貼標(biāo)簽送診斷室觀察，診斷發(fā)出后及時(shí)登記診斷結(jié)果，切片蠟塊及時(shí)歸檔。 7.存放溶液試劑及染料的容器必須及時(shí)貼標(biāo)簽，注明名稱和配制日期。 8.配制強(qiáng)酸試劑、揮發(fā)易燃試劑注意安全。 9.室內(nèi)不用的電器、燈火須及時(shí)關(guān)閉。 10.染色液、脫水液如有沉渣，應(yīng)過濾后備用。第二章 組織切片程序 冰凍切片 石蠟切片 火棉膠切片 先取 材再固 定 冰 凍 -沖 水 脫 水 透 明 乙醚酒精 浸 蠟 膠液滲透

5、石蠟包埋 火棉膠包埋 冰凍切片 切 片 切 片 染 色 染 色 染 色 封 固 封 固 封 固一、標(biāo)本取材 切取病變組織或擬研究的組織 應(yīng)選擇病變或可疑病變的組織。必要時(shí)選取病變與正常組織交界處。 切取標(biāo)本的原則是求準(zhǔn)而不是求量多，所以切取組織宜小不宜大，以不超過24x24mm2為佳，厚度以35mm為度，過大過厚會(huì)影響對(duì)標(biāo)本的固定，另方面也影響切片的制作。 病理科標(biāo)本檢查和取材制度 1、標(biāo)本的檢查和取材由病理醫(yī)師承擔(dān)。 2、病理醫(yī)師通過肉眼仔細(xì)觀察標(biāo)本，判斷病變的部位、大小、浸潤(rùn)深度及與切緣和周圍組織的關(guān)系，然后挑選有代表性的部位取材，做病理切片。取材必須遵從規(guī)范要求，以保證診斷的準(zhǔn)確性，提供

6、準(zhǔn)確的TNM分期信息和其他與治療、估計(jì)預(yù)后相關(guān)的信息。 3、取材前應(yīng)核對(duì)申請(qǐng)單編號(hào)與標(biāo)本的編號(hào)、標(biāo)本的份數(shù)是否相符，申請(qǐng)單與標(biāo)本應(yīng)有雙標(biāo)記和雙核對(duì)，并仔細(xì)閱讀申請(qǐng)單中的內(nèi)容，初步判斷病變的性質(zhì)，做到對(duì)病變心中有數(shù)。 4、標(biāo)本檢查和取材應(yīng)按照有關(guān)的操作規(guī)范進(jìn)行；應(yīng)當(dāng)對(duì)大體標(biāo)本進(jìn)行細(xì)致的觀察，并有相應(yīng)的文字記錄。 5、取材結(jié)束后必須核對(duì)組織塊，并在取材記錄單上標(biāo)示；隨后將記錄單交病理技術(shù)人員，供切片染色后核對(duì)使用。 6、組織塊應(yīng)該每塊分別編號(hào)，并做到一一對(duì)應(yīng)。 7、取材后剩余的標(biāo)本應(yīng)妥善保存，保存至病理報(bào)告發(fā)出后2周時(shí)間。 8、剩余的病理標(biāo)本和標(biāo)本容器屬于醫(yī)療廢棄物，應(yīng)按照“醫(yī)療廢物”的規(guī)定處理，

7、不可隨意丟棄。 9、科室質(zhì)量與安全管理小組定期對(duì)取材質(zhì)量進(jìn)行自查，及時(shí)總結(jié)和發(fā)現(xiàn)問題，制定措施，持續(xù)改進(jìn)取材質(zhì)量。標(biāo)本取材原則： 1.應(yīng)詳細(xì)描述標(biāo)本的數(shù)量、大?。╩m、cm、多量時(shí)聚堆測(cè)量)、形狀、色澤、和質(zhì)地等 2.小量小標(biāo)本，應(yīng)全部取材 3.多量小標(biāo)本，取材后剩余者應(yīng)保管好備用 4.粘膜和皮膚應(yīng)“立埋”以便觀察各層結(jié)構(gòu)大標(biāo)本取材： 記錄標(biāo)本的手術(shù)類型 描述和記錄標(biāo)本大小（三維長(zhǎng)度、形狀、色澤、表面、質(zhì)地等）球形標(biāo)本可測(cè)直徑 切面：沿大面切開，描述和記錄其特點(diǎn)，如實(shí)性或囊性，各占比例，色澤、質(zhì)地、出血壞死，囊壁厚度，內(nèi)容物顏色等 前列腺、甲狀腺、胰腺等臟器應(yīng)間隔一定距離做多個(gè)平行破面，以免漏

8、掉微小腫瘤. 取代表性區(qū)域，并與正常組織交界處取材 完整瘤體要帶包膜，如甲狀腺、乳腺 取材塊的大小2cmx1.5cmx0.3cm 編號(hào)：數(shù)量、剩余組織記錄“留”，全部取材時(shí)記錄（全包）一包等，微小組織試做 重取材要記錄 活體小組織(小標(biāo)本)取材： 組織標(biāo)本體積小,在取材時(shí)應(yīng)特別小心,用伊紅讓標(biāo)本著色,并用插鏡紙包裹,以防丟失,應(yīng)標(biāo)明粒數(shù).多瓶組織應(yīng)將附號(hào)標(biāo)清楚.標(biāo)本的來(lái)源與收集(一)1、臨床活檢2、尸體解剖3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（二）1、檢查申請(qǐng)單的姓名，標(biāo)本的件數(shù)是否與之相符合。2、標(biāo)本是否符合要求。取材注意事項(xiàng)1. 及時(shí)、盡可能新鮮2. 迅速固定、冷藏3. 刀要快，不要擠壓組織 4. 注意研究目的

9、培養(yǎng) 定量 對(duì)比觀察 臨床診斷臨床病理取材注意事項(xiàng)1、檢查申請(qǐng)單的姓名是否與標(biāo)本標(biāo)注的姓名相符2、檢查申請(qǐng)單所列標(biāo)本是否與實(shí)際標(biāo)本吻合。3、檢查申請(qǐng)單所列標(biāo)本件數(shù)是否與實(shí)際標(biāo)本件數(shù)吻合。二 組織固定概念：用化學(xué)試劑保持尸體、器官、組織和細(xì)胞固有形態(tài) 結(jié)構(gòu)的過程謂固定 所用的化學(xué)試劑謂固定劑或固定液。目的：防止自溶、腐敗，保持良好結(jié)構(gòu)原理：使組織及細(xì)胞內(nèi)蛋白凝固； 使有關(guān)成分沉淀、變性，成為不溶性物質(zhì)方法：浸泡 灌注：局部灌注、全身灌注 蒸汽熏蒸 固定的作用 固定的作用不僅是使細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)凝固，終止或減少外源性酶和內(nèi)源性酶的反應(yīng)，防止細(xì)胞自溶，以保持組織的固有形態(tài)和結(jié)構(gòu)，更重要的是保存組織或細(xì)胞

10、的抗原性，不但使抗原不致失活，還要使抗原不發(fā)生彌散，以免在免疫組化染色時(shí)產(chǎn)生過深的背景。固定的目的1、能防止細(xì)菌的腐蝕和抑制組織的自溶2、能凝固或沉淀細(xì)胞內(nèi)或組織液的蛋白等3、使組織硬化，便于切塊4、對(duì)某些具有傳染性的標(biāo)本，能防止其擴(kuò)散5、保存組織細(xì)胞中固有的物質(zhì)6、保存好大體標(biāo)本7、可增強(qiáng)染色固定時(shí)間: 常規(guī)組織病理學(xué): 可長(zhǎng)時(shí)間固定 細(xì)胞病理學(xué)：可長(zhǎng)時(shí)間固定 細(xì)胞化學(xué)：不宜過長(zhǎng)，約1小時(shí)為宜固定后處理： 充分洗滌 固定時(shí)間越長(zhǎng)，洗滌時(shí)間也應(yīng)相應(yīng)增加固定的注意事項(xiàng)一般應(yīng)在離體30分鐘內(nèi)固定,越及時(shí)越好,并將組織上的血液,分泌物沖洗干凈固定劑的量一般不少于組織塊總體積的4倍以上，一般為10-1

11、5倍，容器勿過小。固定的時(shí)間應(yīng)視組織的種類和大小決定,一般小組織4-6小時(shí),大組織18-24小時(shí)或更長(zhǎng)。有特殊要求的須用特殊的固定劑;超微結(jié)構(gòu)觀察：低溫固定不同組織在固定時(shí)應(yīng)注意特殊的處理方法不同組織在固定時(shí)應(yīng)注意特殊的處理方法 為防止組織因固定劑作用而發(fā)生變形，對(duì)軟薄組織如神經(jīng)、肌腱、腸系膜等應(yīng)先平攤魚吸水紙上，在投入固定劑中，可防止蛋白質(zhì)凝固而引起的扭曲變形； 對(duì)含氣體而浮于液體表面的組織如肺，可連以重物使其下沉，或在組織上覆蓋脫脂棉，以防止組織表面干燥。固定液的選擇1、盡量選擇對(duì)組織收縮少，滲透快的固定液2、選擇較通用的固定液，既能做好HE的染色，又能做免疫組化標(biāo)記3、特殊的病例選擇特殊

12、的固定液如：狂犬病丙酮磷酸酶丙酮糖原無(wú)水酒精 。固定液的分類.醛類：甲醛、戊二醛、多聚乙醛、丙稀醛等.氧化劑類：四氧化餓（奧酸）、高錳酸鉀、重鉻酸鉀等.蛋白變性類：醋酸、甲醇、乙醇等.其它：氯化汞，苦味酸等。固定液甲醛溶液：福爾馬林，F(xiàn)ormeldehyde 4甲醛，或 10福爾馬林 40甲醛 用于無(wú)特要求的組織常規(guī)固定 乙醇（Ethyl Alcohol）: 95% 用于細(xì)胞涂片常規(guī)固定，糖原固定乙醇乙醚混合固定液: 95% ： 95%乙醇+ 95%乙醚（1:1） 用于細(xì)胞涂片巴氏染色固定液的使用（一）甲醛（formaldehyde） 一般市售的含37-40%，平時(shí)使用都把它看為100%。它由

13、甲醛氣體飽和于水而成。比重為1.12，有一股刺鼻的氣味。甲醛與組織蛋白質(zhì)類的反應(yīng)是多樣而復(fù)雜的，因?yàn)樗芎投喾N不同的功能基團(tuán)結(jié)合。如近來(lái)的抗原修復(fù)就是認(rèn)為組織中的蛋白與醛產(chǎn)生交聯(lián)蛋白后，要將它們顯示出來(lái)，就必須應(yīng)用溫度高達(dá)92以上的抗原修復(fù)液，才能將其交聯(lián)的醛鍵打開，與后來(lái)的抗體結(jié)合，將其表達(dá)出來(lái)。甲醛的優(yōu)點(diǎn)：1、收縮較小2、固定較為均勻，穿透力強(qiáng)3、能使組織硬化并富有彈性4、能保存脂肪及脂類物質(zhì)5、成本較低甲醛的缺點(diǎn)：1、成分不純，含少量的甲醇，影響酶反應(yīng)2、含少量的甲酸，易產(chǎn)生色素3、不能固定尿酸和糖類物質(zhì)4、易揮發(fā)、污染環(huán)境5、易產(chǎn)生醛基、封閉抗原應(yīng)用甲醛配成的固定液有：1、緩沖福爾馬林

14、固定液（neutral buffered formaaldehyde） NaH2PO4H2O 4g Na2HPO4（無(wú)水）65g 蒸餾水 900ml 甲醛 100ml2、10%福爾馬林固定液 甲醛 10ml 自來(lái)水 90ml3、10%福爾馬林鹽固定液 甲醛 10ml 自來(lái)水 90ml NaCl0.9g4、Bouin氏固定液 苦味酸飽和水溶液 75ml 甲醛 25ml 冰醋酸 5ml5、Zonker氏液 氯化汞 5g 重鉻酸鉀 2.5g 硫酸鈉 1g 水 100ml注：該固定液固定時(shí)間為16-24h，染色前應(yīng)用碘酒除去汞鹽的沉淀，否則會(huì)影響染色后切片的觀察。（二）酒精（alcohol） 有無(wú)水酒

15、精（99.8%）和工業(yè)酒精（95%）在病理技術(shù)方面，酒精是一種重要的試劑，它可配成不同的濃度來(lái)進(jìn)行脫水，如：60%、70%、80%、90%、95%等，在切片染色前，用酒精來(lái)除去二甲苯，在染完色后則用其來(lái)脫水。應(yīng)當(dāng)注意的是，組織脫水時(shí)應(yīng)根據(jù)組織的大小、器官或部位、取材的大小來(lái)確定脫水時(shí)間，一般認(rèn)為濃度越低，脫水時(shí)間可以相對(duì)延長(zhǎng)，如70%可用來(lái)長(zhǎng)期保存標(biāo)本，但如果在100%的酒精里時(shí)間就不能太長(zhǎng)，否則組織易脆不利于切片。酒精可以與其它試劑混合，配成混合固定液，如AAF固定液。酒精的優(yōu)點(diǎn)：1、可以保存糖原和尿酸結(jié)晶。2、能在任何比例的情況下與水混合。3、能溶解苯類物質(zhì)，為染色法中的橋梁試劑。4、能脫

16、去切片上的水份。5、可配成混合固定液。6 、可作為保存標(biāo)本的固定液。7 、可用來(lái)消毒。灑精的缺點(diǎn)：1、可溶解脂類及脂肪物質(zhì)。2、可沉淀白蛋白，球和核蛋白。3、滲透力不強(qiáng)。4、可脫去某些已著染切片的顏色。5、不作為單獨(dú)的固定液。6、價(jià)格昂貴。三、石蠟包埋制樣組織塊脫水： 逐級(jí)乙醇脫水 透明：二甲苯 浸蠟：65C 包埋：溶解蠟（一）脫水 脫水就是利用脫水劑將組織內(nèi)的水分置換出來(lái)，以利于有機(jī)溶劑石蠟的滲入，這一過程稱為脫水。 脫水劑：乙醇 一般情況下,應(yīng)將大小標(biāo)本分別脫水.標(biāo)本脫水從低濃度開始,一般人標(biāo)本從70%或75%乙醇,動(dòng)物標(biāo)本從50%乙醇開始。脫水后組織收縮、變脆。人工脫水程序(適應(yīng)于3mm

17、厚的組織塊)1、30%酒精 24h 2、50%酒精 24h 3、70%酒精 24h4、80%酒精 24h 5、90%酒精 12h 6、95%酒精 4h 7、95%酒精 4h細(xì)小組織脫水程序（適合于胃、腸鏡活檢，肝、肺、腎穿刺活檢的組織）1、80%酒精10-15min2、90%酒精10-15min3、95%酒精10-15min4、100%酒精10-15min5、二甲苯5-10min6、石蠟15-20min1、人工脫水法優(yōu)點(diǎn)：（1）可根椐不同的組織選擇最佳時(shí)間。（2）可避免細(xì)小的組織經(jīng)受不必要的脫水時(shí)間,防止組織的硬脆（）可靈活掌握，隨時(shí)進(jìn)行觀察和調(diào)整2、人工脫水法的不是之處：（1）需耗人力；（2

18、）必須在白天完成，晚上無(wú)法進(jìn)行換液；（3）如機(jī)器發(fā)生故障，組織塊被擱置在外邊，致使組織干涸，影響了制片的質(zhì)量。Shandan全封閉電腦控制全自動(dòng)組織脫水機(jī) 該機(jī)由電腦、反應(yīng)缸和試劑儲(chǔ)存缸三部分構(gòu)成。 電腦屏幕可顯示時(shí)間、溫度、所需時(shí)間、是否用真空負(fù)壓等，可根據(jù)不同的時(shí)間要求，編制9套不同的組織脫水程序。1、正常室溫脫水程序A、10%福爾馬林 2hB、90%酒精 1.5hC、95%酒精 1.5hD、95%酒精 1hE、95%酒精 1hF、100%酒精 1h2、加溫脫水程序 應(yīng)用正常室溫的脫水時(shí)間，再編入加溫程序，加溫的溫度一般在37-403、真空負(fù)壓脫水程序 應(yīng)用正常室溫的脫水時(shí)間，再編入真空負(fù)

19、壓脫水程序4、周末程序A、10%福爾馬林10hB、90%酒精10hC、95%酒精10hD、95%酒精10hE、95%酒精10hF、100%酒精2hG、100%酒精2hH、100%酒精2hI、二甲苯1hJ、二甲苯1hK、石蠟65真空負(fù)壓1hL、石蠟65真空負(fù)壓1h該機(jī)的特點(diǎn)：1、容量大，一次可處理250-300個(gè)包埋盒。2、全部密閉，試劑不易揮發(fā)，保護(hù)了環(huán)境。3、帶有定期的攪動(dòng)裝置，使組織固定均勻，脫水徹底，浸蠟充分。4、脫水過程可使用真空負(fù)壓和加熱。5、該機(jī)占地量小。脫水方法及注意事項(xiàng):1.常用試劑為乙醇。 2.快速石蠟切片常用丙酮為脫水劑，尸體解剖標(biāo)本一般在無(wú)水乙醇后加丙酮。 3.因?yàn)槊撍畡?/p>

20、的新舊影響脫水時(shí)間,必須靈活掌握,根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室情況,定時(shí)更換脫水劑. 可用作固定液,也是一種比較好的脫水劑。脫水能力強(qiáng)、速度快,可配制不同濃度進(jìn)行脫水。但一般情況下,多用在無(wú)水酒精的補(bǔ)充脫水。 丙酮脫水性比酒精強(qiáng),但容易使組織過度硬化,所以應(yīng)適當(dāng)掌握脫水時(shí)間。（二）脫鈣 骨和其他鈣化組織制片時(shí)應(yīng)先脫鈣再切片。將組織置于脫鈣劑中，每日更換新鮮液、直至組織軟化為止。 常用脫鈣劑是5%-10%硝酸溶液。硝酸510ml 和蒸餾水加至100ml。作用迅速，對(duì)組織不膨脹，但每日需要更換新鮮溶液，最好早晚各一次，一般13天完成。 脫鈣時(shí)間視組織大小和含鈣多少而定，以大頭針可輕松刺入為準(zhǔn)。 1取材：骨組織固定

21、于10%福爾馬林24小時(shí)后再鋸 取厚度約0.5厘米骨片。2固定：再以10%福爾馬林固定2天。3將組織置于脫鈣劑5%-10%硝酸溶液中，每日更換新鮮液、直至組織軟化為止。4流水沖洗24小時(shí)（除酸）。5進(jìn)行常規(guī)脫水，透明，浸蠟，切片。（三） 透明 透明的目的: 因?yàn)榇蠖鄶?shù)脫水劑不能和石蠟相混合,組織內(nèi)的水份脫干凈后,必須通過透明劑的作用,才能便于浸蠟包埋. 既能溶于乙醇又能溶于石蠟 因在此過程中，組織中的乙醇被透明劑取代，使其折光率接近組織蛋白的折光率，組織呈不同程度的透明狀光線可以透過，故稱透明。 常用透明劑種類及注意事項(xiàng):1.二甲苯是最為常用的一種透明劑，還有很多種，如三氯甲烷（氯仿），香柏油

22、，苯酚，松節(jié)油等。2.透明要注意的關(guān)鍵是時(shí)間： 透明時(shí)間不夠，石蠟不能完全進(jìn)入組織，影響到包埋切片 ；但是如果透明過度，組織發(fā)硬發(fā)脆影響切片質(zhì)， 故組織在二甲苯中不能久留.特別是肝脾等組織.3.制片過程有兩次透明： 第一次組織脫水后透明； 第二次切片染色透明。（四）浸蠟1.組織經(jīng)透明后，在熔化的石蠟內(nèi)浸漬的過程，稱浸蠟。2. 組織經(jīng)過透明后要浸入石蠟內(nèi),目的是去除組織中的透明劑(二甲苯)而代之以石蠟,并滲入組織內(nèi)部,把軟組織變?yōu)橛羞m當(dāng)?shù)挠捕鹊南瀴K以便切片. 3.一般浸蠟須經(jīng)過2到3次,石蠟的溶點(diǎn)為54-60度左右,目前常用的脫水機(jī)上是兩個(gè)蠟缸.浸蠟時(shí)要注意掌握好石蠟的溫度和浸蠟的時(shí)間浸蠟作用1

23、、可起到填充、支撐的作用。 組織經(jīng)酒精、二甲苯的作用后，其中有許多物質(zhì)被溶解去，如脂肪及脂類物質(zhì)、糖原等。因而遺留下許多腔隙，妨礙了切片。在切片時(shí)由于誘導(dǎo)劑的作用下石蠟可以浸入到物質(zhì)的各個(gè)角落，當(dāng)石蠟冷卻時(shí)，浸入到各處的石蠟就填充在各處的空隙，包括血管和器官等。使組織保持原有的形狀，也使包埋后蠟塊保持平整，便于切片。2、使切片能完整的切除并保持切片的美觀浸蠟的方法傳統(tǒng)浸蠟法 將透明好的組織放入熔化的石蠟中浸漬一定的時(shí)間。真空負(fù)壓浸蠟法 將透明好的組織放入浸蠟缸中，然后移入真空負(fù)壓箱內(nèi)，或者脫水機(jī)自身配有的真空負(fù)壓裝置進(jìn)行浸蠟。 浸蠟時(shí)間，真空負(fù)壓數(shù)見表。注意 為了盡可能排除透明劑，浸蠟可以分兩

24、級(jí)或三級(jí)進(jìn)行。以熔點(diǎn)較低（54度以下）的軟石蠟作為第一步，然后再換為熔點(diǎn)較高（60-62度）的石蠟作為第二步，第三步。浸蠟時(shí)間14小時(shí)，或更長(zhǎng)，并使之過夜則較易切割 。但過長(zhǎng)會(huì)使組織脆硬，切片時(shí)易破碎，過短，浸蠟不夠，難以制成高質(zhì)量切片。（五） 包埋 包埋，就是將已經(jīng)經(jīng)過固定，脫水，透明，浸蠟的組織塊從最后的蠟浴取出置入充滿熔融石蠟的包埋框內(nèi)，包埋成塊，使組織和包埋劑相熔一體并迅速冷卻，這個(gè)程序稱為包埋。 包埋劑凝固后，進(jìn)一步加強(qiáng)了組織的硬度和韌度而便于進(jìn)行切片。包埋時(shí)的注意事項(xiàng)：1、所使用的鑷子，包埋框，最好放于37的恒溫箱內(nèi)，以免這些物質(zhì)過冷（在冬天時(shí)）而過早冷卻包埋的石蠟，影響包埋的質(zhì)量

25、，這種現(xiàn)象在沒有石蠟包埋機(jī)的單位較為明顯。2、打開脫水盒，取出組織塊，將一平整的大的一面朝下，并用鑷子壓平，使其保持在一水平面上。 3、每包埋完一塊，應(yīng)附上標(biāo)簽，以免出差錯(cuò)或張冠李戴。如為塑料包埋盒，則可少去這一步，極為方便。4、對(duì)于管腔的組織如血管、腸、氣管等應(yīng)豎起來(lái)包埋對(duì)于皮膚及胃、腸、等組織應(yīng)辯認(rèn)好方向。仔細(xì)包埋。5、細(xì)小多塊的組織，可包埋在一個(gè)蠟塊，但應(yīng)保持在同一平面上，以免影響切片。6、包埋完后，蠟面凝固，便可放入水中加速硬化，如帶有冷凍設(shè)備的包埋機(jī)，則可少去這一步。7、包埋時(shí)組織塊不能使其冷卻凝固，應(yīng)保持組織塊上的蠟處于熔化狀態(tài)，這樣包埋時(shí)才能和包埋蠟溶為一體。如果組織塊自身的蠟先

26、凝固，包埋后的蠟塊切片時(shí)組織與邊蠟分離切不成佳片嚴(yán)重的會(huì)崩掉，影響切片。修切蠟塊 應(yīng)用包埋框包埋的組織塊，切片前一定要將其切好，組織塊與邊蠟應(yīng)保持有0.5cm的厚度，才有利于切片。1、有利于切片，使切片能連續(xù)切出。2、減少損傷刀口延長(zhǎng)刀口的壽命，以利多切蠟塊。3、有利于切片的裱貼。例如一張載片要裱兩塊組織時(shí)，修切好的蠟塊，就能使它們擺得整齊。 1.組織取材2毫米厚度，固定于福爾馬林?jǐn)?shù)小時(shí) 后再換以新鮮福爾馬林固定數(shù)小時(shí)。2.組織流水沖洗612小時(shí)。3.70酒精24小時(shí)。4.85酒精24小時(shí)。5.95酒精（）24小時(shí)。6.95酒精（）24小時(shí)。7.100酒精（）24小時(shí)。8.100酒精（）2小時(shí)

27、。9.二甲苯（）0.51小時(shí)。10.二甲苯（）0.5小時(shí)。11.浸蠟（）2小時(shí)。12.浸蠟（）2小時(shí)。13.組織包埋。 快速切片診斷是在數(shù)十分中或半小時(shí)左右制成切片并作出診斷的一種手段，主要用于手術(shù)中決定手術(shù)的切除范圍和手術(shù)方式。快速切片的方法包括冰凍切片和快速石蠟切片。 制作快速石蠟切片時(shí)，切取組織應(yīng)該薄小，從固定、脫水到浸蠟的全過程都要加溫，一般是先將各種試劑在超聲波快速石蠟脫水儀中預(yù)熱，恒溫下操作，整個(gè)過程大約在1015分鐘即可完成 快速石蠟包埋法操作過程（1）先取病變組織于AAF中固定35分鐘。（2）95酒精1分鐘。（3）無(wú)水酒精1分鐘（4）正丁醇1/3丙酮2/3混合液1分鐘（5）二甲

28、苯1分鐘（6）浸蠟12分鐘（7）包埋 （六） 組織切片切片機(jī)類型： 旋轉(zhuǎn)式切片機(jī) 滑動(dòng)式切片機(jī)（六） 組織切片 石蠟切片的步驟：1.切片前先把切片刀磨鋒利，將修好蠟塊置冰箱冷凍后放在切片機(jī)上2.將蠟塊固定于切片機(jī)頭上的夾座內(nèi)，調(diào)整到稍離開切片能夠切到的位置上，注意蠟塊組織切面與切片刀口成5-10度夾角。3.再調(diào)整蠟塊組織切面恰好與刀口接觸，旋緊刀架，固定好機(jī)頭。4.根據(jù)需要調(diào)整切片厚度，一般3-5m為宜。切片的步驟：5、搖動(dòng)切片機(jī)手輪先進(jìn)行修整切片，直到切出完整的最大組織切面后，再進(jìn)行切制。6、實(shí)踐中可用右手轉(zhuǎn)動(dòng)切片機(jī)手輪，左手用毛筆托起蠟片，協(xié)調(diào)地進(jìn)行切片操作。7、切下的切片帶，一端用鑷子輕

29、輕拉起，應(yīng)盡可能將切片帶拉直展開，用毛筆將切片帶從刀口向上挑起，拉下切片帶，然后輕拖鋪于水箱內(nèi)展平，水溫45-55為宜。石蠟切片的步驟： 8、切片附貼前，可先涂蛋白甘油，防止切片在染色時(shí)脫片；附貼后放溫箱內(nèi)（65左右）烘烤10-30min，也可置于微波爐內(nèi)溫火一分鐘后切片上石蠟完全融化，然后染色。冰凍切片法： 常用低溫冷凍切片機(jī) 快速將新鮮組織固定在冷凍切片機(jī)中，冷凍數(shù)分鐘即可切片，數(shù)分鐘即可完成，稍后進(jìn)行快速染色。 常用于手術(shù)中快速診斷或組織化學(xué)染色和保存脂肪做特殊染色 組織切片注意事項(xiàng): 1、持蠟器一定要將蠟塊挾緊挾牢，以免使其跳動(dòng)而影響切片。2、刀一定要保持無(wú)口、鋒利，一次性刀片做到這一

30、點(diǎn)較容易，大刀片要做到上述要求就比較困難。因此就要認(rèn)真地磨好刀才能保證切片的質(zhì)量。3、裱片的水溫不能過高或偏低，高者可溶化所切出的切片，低者則展不開切片，使切片留有皺紋，最適的水溫應(yīng)是比石蠟的溶點(diǎn)低2-5，如石蠟的溶點(diǎn)為60-62，裱片的水溫則可達(dá)55-57，余者類推。4、對(duì)于細(xì)小的組織，應(yīng)特別小心修切，防止一刀切下，全部皆休的情況。5、對(duì)于多塊細(xì)小的組織，原則上是每一細(xì)小的組織都應(yīng)有一個(gè)切面。修切的時(shí)候更應(yīng)特別小心。6、每切完一塊，裱于載片后應(yīng)隨時(shí)刻上編號(hào)，以防止差錯(cuò)或混亂的現(xiàn)象發(fā)生，減少差錯(cuò)的苗頭。7、挑切片的毛筆，應(yīng)選用細(xì)小柔軟的毛筆為佳，用時(shí)向上挑，決不能往下，以免刀口傷及毛筆。石蠟切

31、片常可出現(xiàn)的問題1、石蠟切片不能形成帶狀的原因是室溫低，蠟塊周邊不整齊。2、石蠟切片，切片卷起的原因是刀的傾斜角度過大或刀不快。3、石蠟切片出現(xiàn)的皺折的原因是石蠟溶點(diǎn)低，純度不足。4、石蠟切片出現(xiàn)厚薄不均勻的主要原因是組織塊挾不牢固或組織堅(jiān)硬如肌瘤等。5、石蠟切片出現(xiàn)波浪狀的原因是組織塊太硬或骨組織末完全脫鈣。6、石蠟切片，當(dāng)切片放入水中裱片時(shí)，切片周圍的蠟迅即向四邊散開，其主要原因是組織脫水不徹底，浸蠟浸不進(jìn)去。包埋蠟中含有二甲苯。7、石蠟切片，當(dāng)切片切出后蠟塊向上時(shí)，把已切出的切片帶走并損壞的原因是切片刀背面留有殘余石蠟。8、組織切片常見的人為性色素沉著物是福爾馬林色素，常見的器官是肝、脾

32、。9、組織切片常見的外源性色素是碳末，常見的器官是肺。10、石蠟切片時(shí)切片刀的最宜角度是 5-3011、一般所稱呼的標(biāo)準(zhǔn)室溫是2012、組織浸蠟的溫度最好為13、石蠟溶點(diǎn)的最高度高2-3即65。冰凍切片一、種類：1、低溫恒冷箱切片法2、二氧化碳冰凍切片法3、甲醇循環(huán)制冷冰凍切片法4、半導(dǎo)體冰凍切片法5、氯乙烷冰凍切片法二、冰凍切片的目的1、在手術(shù)進(jìn)行中。突然發(fā)現(xiàn)病人的病變與原診斷不相符合或者懷疑時(shí)需要病理給予確定。2、了解淋巴結(jié)內(nèi)是否有轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞或者轉(zhuǎn)移的程度，以利于確定以后的治療措施。3、對(duì)于已確定惡性腫瘤的病人則需要了解其手術(shù)范圍是否足夠，上下切緣是否有殘存的腫瘤細(xì)胞。4、在剖腹探查所

33、發(fā)現(xiàn)的腫塊。5、顯示組織中的脂肪類物質(zhì)。6、某些酶的顯示如ATP酶琥珀酸脫氫酶等。7、神經(jīng)病理學(xué)中的某些染色法。8、對(duì)某些物質(zhì)所進(jìn)行的免疫熒光的研究。三、冰凍切片的操作（1）本室現(xiàn)有Shandon-AS620E型冷凍切片機(jī)的主要性能。左邊的切片臺(tái)可達(dá)到-60左右，冷凍箱內(nèi)在0-30間可任意調(diào)節(jié)，箱面上有電子控制板，裝有急速冷凍，即放上標(biāo)本啟動(dòng)該鍵機(jī)器馬上進(jìn)行冷凍工作并持續(xù)10分鐘；有冷凍臺(tái)溫度顯示冷凍箱內(nèi)溫度顯示；有即時(shí)除霜內(nèi)溫度顯示；有即時(shí)除霜鍵，啟動(dòng)該鍵機(jī)器可持續(xù)工作15分鐘，將工作間頂部后面的制冷柵上的霜除掉；有照明鍵，啟動(dòng)該鍵可照明工作間；有消毒鍵當(dāng)進(jìn)行一星期的工作后，啟動(dòng)該鍵可對(duì)工作

34、間進(jìn)行消毒；有工作間面的密鎖鍵啟動(dòng)鍵可將工作間鎖住，除此之外該機(jī)的左邊有四個(gè)按鍵兩個(gè)為快速自動(dòng)進(jìn)退、兩個(gè)為微小進(jìn)退、另有一個(gè)手動(dòng)旋鈕，調(diào)節(jié)修塊時(shí)的進(jìn)退。（2）切片取末經(jīng)固定的組織不能太大太厚，厚者冰凍費(fèi)時(shí)，大者難以切完整。最好2424 4mm。（3）取出組織支承器，放平擺好組織周邊滴上包埋劑，速放入冷凍臺(tái)上冰凍，小組織應(yīng)先取一組織支承器滴上包埋劑讓其凍成一個(gè)小臺(tái)再放上細(xì)小組織，滴上包埋劑。（4）將冷凍好的組織塊夾緊于切片機(jī)上修平切面。（5）調(diào)好厚度，根椐不同的組織而定，一般在5-10um.（6）調(diào)好防卷板，制作冰凍切片的調(diào)節(jié)，關(guān)建在于防卷板的調(diào)節(jié)，這就要求要細(xì)心，準(zhǔn)確，將其調(diào)校，調(diào)校至適當(dāng)?shù)奈?/p>

35、置，此時(shí)切片。冰凍切片在第一時(shí)間順利地在刀與防卷板之間通過，平整地躺在持刀器的鐵板上。這時(shí)便可掀起防卷板，取一載片，將其附貼上即可。（7）用于附貼切片的載片，不能存放入冷凍的地方，于室溫存放即可。因?yàn)楫?dāng)附貼切片時(shí)，從室溫中取出的溫差，當(dāng)溫度較高的載片附貼上溫度低的切片時(shí)，由于兩種物質(zhì)溫度的差別，當(dāng)它們碰撞在一起時(shí)，分子間的彼此轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生了一種吸附力。使切片與載片牢固地附貼在一起。如果用冷藏的載片附貼切片，就沒有這種現(xiàn)象發(fā)生。（8）應(yīng)視不同的組織選擇不同冰凍度。冷凍箱中冷凍度的高低，主要根椐不同的組織而定，不能一概而論，例如：切未經(jīng)固定的腦組織，肝臟組織和淋巴結(jié)組織等，冷凍箱的溫度可調(diào)在-10-

36、15左右。切甲狀腺，脾、腎、肌肉等組織,則應(yīng)調(diào)在-15 -20左右。切帶有脂肪的組織如乳腺組織，應(yīng)調(diào)在-25左右，如為大量的脂肪組織時(shí)，應(yīng)調(diào)至-30。四、冰凍切片時(shí)的注意事項(xiàng)1、防卷板和切片及持刀架上的地方應(yīng)保持干凈經(jīng)常用毛筆挑除切片殘余及用柔軟的紙張擦。因?yàn)榘駝┏３ＹN在上述的地方。如果不把它們?nèi)コ?，就?huì)影響切片。使切片不能完整切出。2、應(yīng)用于冰凍切片的組織不能過大過厚，過大難以切出好片過厚冰凍費(fèi)時(shí)，最好的取材應(yīng)在24 24 2cm。3、冰凍組織前組織放于組織支承器上應(yīng)視組織的走勢(shì)來(lái)給予放置，然后四周加上包埋劑，保持周邊的整齊，如出現(xiàn)凹凸不平的地方，可用刀子將其修平，才不致于影響切片。4、

37、組織塊不須經(jīng)各種固定液固定，尤其是含水的固定液在未能達(dá)到固定前更不能使用。臨床快速冰凍切片不須要預(yù)先固定，一是為了爭(zhēng)取時(shí)間，二是固定了的組織反而增加了切片的難度。如果使用了未完全固定的組織做冰凍切片，就會(huì)出現(xiàn)冰晶，這是因?yàn)楹芤旱墓潭ㄒ涸诮M織未經(jīng)固定前，其中的水份也會(huì)滲入到組織當(dāng)中去，當(dāng)冰凍發(fā)生時(shí)，這些水份就存留于組織中形成了冰晶。5、當(dāng)切片時(shí)，如果發(fā)現(xiàn)組織冰凍過度時(shí)，可將冰凍的組織取出來(lái)，于室溫中停留片刻，以利于軟化組織，使其不致于過度冰凍。五、冰凍切片的快速染色1、用普通染色進(jìn)行染色（HE染色）（1）固定、切片用電吹風(fēng)吹干后于10%的福爾馬林鹽或純丙酮中固定2分鐘后自來(lái)水沖洗。（2）滴少

38、許蘇木素染液于切片上于酒精燈上加熱染色，當(dāng)見有蒸汽時(shí)即可中止染色，快速水洗、分化、用熱水促其藍(lán)化、伊紅對(duì)比染色、酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封固。2、超聲波快速染色法（1）固定：切片的固定與上同。（2）把水洗后的切片插入裝有蘇木素的玻璃瓶中超聲波處理30sec或1min,水洗、分化、放于裝有熱水的玻璃瓶中、超聲波處理30sec,酒精脫水，二甲苯透明封固。結(jié)果：經(jīng)上述各種方法處理后所制作的切片。細(xì)胞核呈藍(lán)色，軟骨基質(zhì)鈣鹽深藍(lán)色，胞漿呈深度不同的粉紅色，嗜酸性顆粒為鮮紅色，膠原纖維量粉紅色，肌纖維呈鮮紅色，彈力纖維呈亮紅色，切片完整，未見有冰晶出現(xiàn)。第六章 切片染色與封固一、染色： 利用染料在組

39、織切片上給與顏色，使其與組織或細(xì)胞內(nèi)的某種成分發(fā)生作用，經(jīng)過透明后通過光譜吸收和折射，使其各種微細(xì)結(jié)構(gòu)能顯現(xiàn)不同顏色，這樣在顯微鏡下就可顯示出組織細(xì)胞的各種成分。 一、染色 目的: 將組織切片浸入染色劑內(nèi),使組織或細(xì)胞等成分染上不同的顏色 產(chǎn)生不同的折射 ,以便在光學(xué)顯微鏡下觀察. 方法: 蘇木素- 伊紅染色稱常規(guī)染色,又稱HE染色. 其他染色方法稱特殊染色(特染).染色原理 1、化學(xué)反應(yīng)： 利用組織細(xì)胞內(nèi)酸堿性的不同，其與陰陽(yáng)離子結(jié)合力的不同，染色也不同。如：細(xì)胞核呈酸性堿性染料(氧化蘇木素)深藍(lán)色 細(xì)胞漿呈堿性酸性染料(伊紅染料)不同深淺的紅色2、物理作用： 毛細(xì)管作用及滲透作用 吸收和溶

40、液作用：如復(fù)紅溶液為紅色，所染 組織也為紅色，但干燥復(fù)紅為綠色 吸附作用染色術(shù)語(yǔ) 媒染劑：與染料或組織發(fā)生結(jié)合作用，促進(jìn)染色能力的物質(zhì)，如鐵明礬、鉀明礬等。 促染劑：能使組織易于著色的物質(zhì)，它與媒染劑不同，不直接參與染色反應(yīng)，如醋酸、碳酸等。 分化劑：如酸堿類分化劑，又稱退色劑；氧化退色劑，主要用于漂白作用。染色步驟:脫蠟（1）二甲苯I 5分鐘（2）二甲苯II（應(yīng)完全透明） 5分鐘逐級(jí)降濃度酒精水化脫二甲苯（3）無(wú)水酒精I(xiàn)（變?yōu)椴煌该鳎?12分鐘（4）無(wú)水酒精I(xiàn)I 12分鐘（5）95% 酒精 12分鐘 （6）80% 酒精 12分鐘（7）自來(lái)水洗 片刻染色步驟（8） 蒸餾水 片刻（9） 蘇木素液

41、染核 1015分鐘（10）自來(lái)水沖洗 片刻（11）1%鹽酸酒精分化 0.51分鐘（12）流水沖洗 片刻（13）碳酸鋰飽和水溶液反藍(lán) 1分鐘（14）流水沖洗 5-10分鐘（15）復(fù)染 05伊紅水溶液（對(duì)比染色） 25分鐘染色步驟: 逐級(jí)升濃度酒精脫水（若為醇溶伊紅可直接人90酒精） （16）自來(lái)水洗（分化伊紅） 片刻（17）95酒精I(xiàn) 12分鐘（18）95%酒精 II I2分鐘（I9）無(wú)水酒精 I 12分鐘（20）無(wú)水酒精I(xiàn)I l2分鐘 透明（21）二甲苯I 510分鐘（22）二甲苯II 510分鐘 （23）蓋玻片下封固 染色結(jié)果: 細(xì)胞核：藍(lán)色，軟骨基質(zhì)鈣鹽等深藍(lán)色；細(xì)胞漿深淺不同的粉紅色，嗜

42、酸性顆粒鮮紅色；膠原纖維呈粉紅色，肌纖維呈鮮紅色，彈力纖維呈亮紅色，紅血球?yàn)榻奂t色，蛋白基質(zhì)為粉紅色。 HE（Hematoxin Eosin,HE染色 1蘇木素染色配方： 蘇木素 1g 純酒精 10ml 鉀明礬 20g 蒸餾水 200ml 氯化汞 0.5g 2伊紅染色配方： 伊紅 0.5-1g 蒸餾水 99ml伊紅染液 配方：伊紅Y（水溶） 0.5lg 蒸餾水 99ml 若取用伊紅Y（醇溶性）應(yīng)溶于99ml75或95的乙醇中。若在伊紅液中加人0.5毫升冰醋酸，可加速其染色過程，并使胞漿的色澤更為艷麗HE染色過程中的要點(diǎn)： 切片脫蠟務(wù)必干凈徹底 脫苯和酒精要徹底 蘇木素染色液配制及鹽酸酒精分化較

43、為重要 各級(jí)水洗應(yīng)充分及伊紅染色要適當(dāng) 切片固封樹膠要適當(dāng)染色時(shí)的注意事項(xiàng)（1）切片烘烤以切片附貼牢固為原則，否則容易掉片。（2）切片脫蠟一定要徹底，不然會(huì)導(dǎo)致染色深淺不一。（3）切片染蘇木素前可令其無(wú)水化，這樣可延長(zhǎng)蘇木素的壽命。因?yàn)槊看稳旧?，切片水洗，然后進(jìn)入染液雖然每次帶入的水分很少，但隨著次數(shù)的增加，所帶入的水分足可以稀釋染液影響染色的質(zhì)量。（4）切片在蘇木素的染色時(shí)間應(yīng)充分寧過勿不足。對(duì)于初學(xué)者來(lái)說更應(yīng)過染，否則分化會(huì)過度導(dǎo)致染色過淺。（5）切片分化時(shí)，要根椐不同的組織來(lái)確定分化時(shí)間，并不斷積累經(jīng)驗(yàn)。（6）伊紅染色時(shí)間也要充分，經(jīng)低濃度灑精時(shí)應(yīng)仔細(xì)觀察，必要時(shí)快速通過，以免過于褪色

44、。（7）切片致無(wú)水酒精后，不要在控干無(wú)水酒精時(shí)讓切片干涸，可以不經(jīng)控干直接地進(jìn)入碳酸二甲苯（也可以進(jìn)入二甲苯酒精混合1：1）碳酸有較強(qiáng)的吸水性透明也好很適合南方地區(qū)。（8）切片從二甲苯中取出封固時(shí)，切不能讓其干涸，因南方地區(qū)空氣潮濕干涸的切片與空氣接觸，可吸收其水份。這樣的切片很容易裉色。切片不干涸，表面被著二甲苯，由于它不溶于水起到與水隔絕的作用。（9）滴中性樹膠封蓋切片，膠不能太濃，太濃膠難以均勻鋪開，且易產(chǎn)生氣泡，又不能太稀過稀的膠由于二甲苯含量較多，當(dāng)切片干燥時(shí)，二甲苯揮發(fā)掉，膠封的切片收縮，即可導(dǎo)致一半切片沒有被膠封固的結(jié)果。最合適的膠應(yīng)是滴下成珠。（10）封固切片時(shí)，盛膠的瓶子及瓶

45、蓋四周不要留有余膠，否則瓶蓋難以打開。因此每次用完后都必須將其擦干凈。當(dāng)打不開瓶蓋時(shí)應(yīng)放入烤箱中烘烤，即可打開。 （11）標(biāo)簽附貼要認(rèn)真，不要貼得歪歪斜斜，影響切片的外觀.1、切片機(jī)的使用，應(yīng)如何注意保養(yǎng)？ 切片機(jī)座應(yīng)注意平穩(wěn)，切片時(shí)應(yīng)注意搖轉(zhuǎn)速度的快慢要盡量保持均勻一致。滑動(dòng)面要經(jīng)常滴上機(jī)油，以利于滑動(dòng)及旋轉(zhuǎn)自如和防銹，切片完后除去殘蠟，取下切片刀，先用濕布擦去余蠟，繼用干布擦干，再用油布擦一遍，最后用罩蓋好切片機(jī)，以防灰塵落于機(jī)上，影響機(jī)器的運(yùn)轉(zhuǎn)。2、化學(xué)試劑使用時(shí)的注意事項(xiàng)（1）已打開的藥品或染色時(shí)的玻璃瓶染色液，每次用后即隨手蓋緊，以免揮發(fā)，易揮發(fā)易吸潮的藥品用后蠟封。（2）易燃的試劑

46、要遠(yuǎn)離火種，謹(jǐn)防火災(zāi)，因病理科有較多的易燃化學(xué)試劑。（3）強(qiáng)酸，強(qiáng)堿試劑或有腐蝕性的廢染液，不要直接倒入下水道，以免腐蝕下水道，造成不必要的損失。（4）易變質(zhì)或易氧化失效的試劑，應(yīng)標(biāo)明配制日期，妥為保存，有的只能一次性用完，因此,應(yīng)本著節(jié)約的原則，用多少，配多少，切勿造成浪費(fèi)。3、石蠟切片刀應(yīng)怎樣保養(yǎng)好？ 切片刀要經(jīng)常磨，保持鋒利無(wú)刀口，每次用完后用布擦干凈，再用油布擦，以防刀口生銹影響切片。4、如何使樹膠處于中性狀態(tài)？ 取少量無(wú)水碳酸鈉，加入到封固用的樹膠中攪拌后放置數(shù)日取其上清液，即為中性樹膠。5、切片染完蘇木素后的分化，應(yīng)該如何控制和注意什么問題？（1）分化液中鹽酸不能高于1%，否則會(huì)因分化過強(qiáng)而將已著色的顏色大部分脫水，造成染色過淺。（2）對(duì)各種組織應(yīng)視情況而定，如淋巴結(jié)的切片，應(yīng)分化較長(zhǎng)時(shí)間等。（3）分化完后，應(yīng)在顯微鏡下觀察，如發(fā)現(xiàn)核中的物質(zhì)不清楚，則應(yīng)繼續(xù)分化至清晰為止。（4）要認(rèn)真操作，細(xì)心觀察，不斷總結(jié)。6、切片欠佳表現(xiàn)在