高中生物實(shí)驗(yàn)教參奧賽實(shí)驗(yàn)教材

1、 生物實(shí)驗(yàn)的根本技術(shù)第一節(jié) 細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)【知識(shí)概要】一、玻片標(biāo)本的制作技術(shù)制作玻片標(biāo)本對(duì)認(rèn)識(shí)生物體的形態(tài)結(jié)構(gòu)具有重要意義。玻片標(biāo)本有臨時(shí)玻片標(biāo)本如涂片、壓片、臨時(shí)裝片和永久玻片標(biāo)本如永久裝片、切片。1涂片法涂片法是將材料均勻地涂布在載玻片上的一種制片方法。涂片材料有單細(xì)胞生物、小型藻類、血液、細(xì)菌培養(yǎng)液、動(dòng)植物的疏松組織、精巢、花藥等。涂片時(shí)應(yīng)注意：1載玻片必須清潔。2載玻片要持平。3涂層須均勻。涂抹液滴在載玻片中間偏右，用解剖刀刃或牙簽等涂勻。4涂層要薄。用另一載玻片作推片，沿滴有涂抹液的載玻片面二載玻片夾角應(yīng)為3045由右向左輕輕推動(dòng)，涂成均勻一薄層。5固定。如需固定可用化學(xué)固定劑或枯燥

2、法細(xì)菌固定。6染色。細(xì)菌用亞甲基藍(lán)，血液用瑞氏染液。染色液要蓋住全部涂面。7沖洗。用吸水紙吸干或烤干。8封片。長(zhǎng)期保存用加拿大的樹膠片片。2壓片法壓片法是將生物材料置于載玻片和蓋片之間，施加一定壓力，將組織細(xì)胞壓散的一種制片方法。壓片法的一般過(guò)程：1取材。觀察細(xì)胞分裂，應(yīng)選取細(xì)胞分裂旺盛、新鮮的組織細(xì)胞為材料。如根尖、莖尖分生組織、骨髓細(xì)胞、花藥花粉母細(xì)胞。精巢精母細(xì)胞等。2固定。材料固定可根據(jù)需要而定，取材后立即壓片觀察，可不作單獨(dú)固定處理與染色同步進(jìn)行；取材后不立即視察，可將材料用固定液一般用醋酸酒精固定液固定。固定224小時(shí)因材料而異后用95乙醇清洗，保存于70乙醇中，備用。3離析。對(duì)細(xì)

3、胞不易散開材料用水解別離液如1N HCl或鹽酸一酒精液處理，一般處理620min，解離后經(jīng)水漂洗前方能染色。4染色。染色劑種類很多。觀察染色體常用醋酸洋紅染色液染色。5壓片。將材料放在載玻片上，加一滴清水或染液，蓋上蓋玻片用拇指輕輕壓片。6觀察。壓片后，即可在顯微鏡下觀察。3裝片法裝片法是將生物材料采取整體封固制成玻片標(biāo)本的方法，用此法可制成臨時(shí)或永久裝片。裝片材料有：微小生物如衣藻、水綿、變形蟲、水螅，植物的葉表皮；昆蟲的翅、足、口器，人的口腔上皮細(xì)胞等。裝片法制作時(shí)應(yīng)注意：1手持載玻片時(shí)，應(yīng)注意持平，或放在平臺(tái)上。滴水時(shí)水量要適當(dāng)，以恰好被蓋玻片蓋滿為度。2應(yīng)將材料用解剖針或鑷子展開不使重

4、疊，展平在同一平面上。3放蓋玻片時(shí)，從一側(cè)慢慢蓋在水滴上，防止出現(xiàn)氣泡。4染色時(shí)，將一滴染色液滴在蓋玻片的一側(cè)，用吸水紙從另一側(cè)吸引，使蓋玻片下的標(biāo)本均勻著色。著色后，用同樣的方法，滴一滴清水，把染色液吸出后，在顯微鏡下觀察。二、顯微鏡根本實(shí)驗(yàn)技術(shù)1低倍鏡4X、10X的使用方法顯微鏡操作主要包括兩個(gè)方面：1光度調(diào)節(jié)。正確對(duì)光是能否成功地觀察到物象的首要條件。對(duì)光時(shí)，先把聚光器上提，翻開可變闌，轉(zhuǎn)動(dòng)反光鏡，這時(shí)一邊看鏡內(nèi)視野，一邊調(diào)節(jié)聚光器螺旋，直至視野內(nèi)得到均勻而明亮的光線。2焦距的調(diào)節(jié)。調(diào)焦時(shí)，先把觀察的切片，用推進(jìn)器對(duì)正通光孔中央。然后分兩步調(diào)焦。先用粗調(diào)器定焦，用左眼看目鏡，使粗調(diào)器慢慢

5、上升，直到能清楚地看到標(biāo)本為止。隨后調(diào)節(jié)細(xì)調(diào)器，使鏡筒微微升降，至物象更清晰為止。2高倍鏡40X的使用方法1將在低倍鏡中找到的物象欲放大局部移到視野中央。2轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器，使40X物鏡對(duì)準(zhǔn)通光孔，轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)從側(cè)面注視物鏡，以防鏡頭緊壓玻片。3調(diào)節(jié)細(xì)調(diào)螺旋，使物象清晰。3油鏡100X的使用方法l先用低倍鏡找到欲觀察細(xì)微結(jié)構(gòu)，將其結(jié)構(gòu)移至視野中央換高倍鏡。2下降鏡臺(tái)，在玻片標(biāo)本上滴一滴香柏油，轉(zhuǎn)換油鏡。從側(cè)面注視油鏡，把鏡臺(tái)上升，使油鏡頭浸在香柏油滴中。3轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)螺旋，使物象清晰，進(jìn)行觀察。4觀察完畢，用鏡頭紙擦去油鏡頭和玻片上的香柏油，再用少許二甲苯或乙醚 / 無(wú)水乙醇把鏡頭擦干凈。4安裝指針的簡(jiǎn)易

6、方法將目鏡的上蓋一片透鏡旋下，剪取一小段頭發(fā)其長(zhǎng)度約等于目鏡的半徑，用鑷子夾住一端，將另一端蘸少許中性膠，將其粘在目鏡內(nèi)壁的金屬光欄一鐵圈上。稍干后，旋緊上蓋，即可使用。三、單細(xì)胞的計(jì)數(shù)方法在細(xì)菌培養(yǎng)和體外細(xì)胞培養(yǎng)，以及環(huán)境監(jiān)測(cè)血液檢查中常常需要統(tǒng)計(jì)細(xì)菌、細(xì)胞、單細(xì)胞藻類、原生動(dòng)物、血細(xì)胞、花粉等數(shù)量。細(xì)胞計(jì)數(shù)方法的原理是把一定體積的細(xì)胞液體，在顯微鏡下直接計(jì)算其個(gè)數(shù)，利用所得結(jié)果推算出每毫升水體中的單細(xì)胞數(shù)。具體方法如下：1水滴計(jì)數(shù)法用管口圓而平滑、大小適宜的吸管，吸取1mL水，然后測(cè)定這一吸管1rnL水可滴出多少滴水反復(fù)測(cè)定，直到準(zhǔn)確為止。這樣可以計(jì)算出該吸管滴出的每一滴水的體積。用吸管取

7、樣時(shí)，如果單細(xì)胞是活動(dòng)的要用碘殺死后，再計(jì)數(shù)；如果樣品濃度太大，計(jì)數(shù)困難，按倍數(shù)稀釋到適宜的濃度；另外，取樣前必須攪拌，攪拌后，立即取樣。取樣后，在顯微鏡下計(jì)數(shù)，得到一滴水中細(xì)胞數(shù)的平均值后，可依以下公式求出1mL水體中所含細(xì)胞的數(shù)目。1mL水體中含細(xì)胞數(shù)計(jì)數(shù)平均值定量吸管每毫升的滴數(shù)稀釋倍數(shù)2血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法血球計(jì)數(shù)板是由一塊厚玻片特制而成，其中央有兩個(gè)計(jì)數(shù)室。每個(gè)計(jì)數(shù)室劃分出9個(gè)大方格見以下圖，每格面積1mm2，加蓋玻片后的深度為0.1mm。因此，每大方格容積為0.1mm。另外，中央大方格以雙線等分為25個(gè)中方格。每個(gè)中方格又分16個(gè)小方格，供細(xì)胞計(jì)數(shù)用。 1 2 3 4血球計(jì)數(shù)板的構(gòu)造l

8、頂面觀 2側(cè)面觀 3放大后的網(wǎng)格 4放大后的計(jì)數(shù)室計(jì)數(shù)方法：首先用吸管吸取少許稀釋倍數(shù)的單細(xì)胞懸液，從蓋片端滴一小滴不宜過(guò)多，液體自行向內(nèi)滲入，靜置數(shù)分鐘后，再放在微鏡下觀察計(jì)數(shù)。一般選取計(jì)數(shù)室內(nèi)四個(gè)角及中央五個(gè)中方格80小方格計(jì)數(shù)，假設(shè)細(xì)胞位于小方格的線上，應(yīng)遵循“數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線的原那么，以減少誤差。計(jì)數(shù)應(yīng)重復(fù)3次，取其平均值。數(shù)完畢后，依下式計(jì)算：每1mL懸液細(xì)胞數(shù)或每克細(xì)胞數(shù)80個(gè)小方格細(xì)胞總數(shù) / 8040010000稀釋倍數(shù)四、顯微測(cè)微尺的應(yīng)用方法顯微測(cè)微尺是在顯微鏡下測(cè)量生物細(xì)微結(jié)構(gòu)的測(cè)微工具，用它測(cè)量細(xì)胞各局部的厚薄和大小。顯微測(cè)微尺見以下圖包括目鏡測(cè)微尺目尺和物

9、鏡測(cè)微尺臺(tái)尺，測(cè)量時(shí)須將其配合使用方可到達(dá)測(cè)量目的。目鏡測(cè)微尺為一圓形玻片，玻片中央有一橫線刻有大小格的等距離線。物鏡測(cè)微尺有一特制的玻片，中央圓圈內(nèi)有一1mm長(zhǎng)分為100個(gè)等距小格的刻線，每一小格即10m。目鏡測(cè)微尺 物鏡測(cè)微尺顯微測(cè)微尺測(cè)量方法：首先須算出目鏡測(cè)微尺的每一格在不同倍物鏡下各為多少m。即取下接目鏡卸下透鏡，裝上目鏡測(cè)微尺。然后將物鏡測(cè)微尺放在鏡臺(tái)中央，眼觀目鏡，調(diào)好焦距，使兩種測(cè)微尺上的刻度平行并重疊在一起。按下面公式計(jì)算出目鏡測(cè)微尺每格的實(shí)際長(zhǎng)度。目鏡測(cè)微尺每格的長(zhǎng)度m物鏡測(cè)微尺的格數(shù) / 目鏡測(cè)微尺的格數(shù)10計(jì)算出目鏡測(cè)微尺每格的實(shí)際長(zhǎng)度后，再在鏡臺(tái)上放上需要測(cè)量的物體標(biāo)

10、本或玻片標(biāo)本，即可用目鏡測(cè)微尺測(cè)出它們的長(zhǎng)度。五、顯微結(jié)構(gòu)圖的繪制技巧生物繪圖是科學(xué)記錄的一種方法。繪圖時(shí)應(yīng)注意：1繪科學(xué)圖以精確為主，不能藝術(shù)加工渲染。2只在紙的一面繪圖。繪圖時(shí)要用2H以上繪圖鉛筆，紙面力求整潔。3繪圖大小適宜，布局合理。一般要求圖畫在紙的稍偏左側(cè)，留出圖注的位置。4圖的各局部的位置和比例，應(yīng)與顯微鏡中實(shí)際觀察的一致，而要注意突出顯微結(jié)構(gòu)的每個(gè)特征。5顯微構(gòu)造圖的點(diǎn)線不要重復(fù)描繪。以實(shí)線表示輪廓，虛線表示被遮蔽但需表現(xiàn)的輪廓，用圓點(diǎn)的疏密來(lái)表示明暗、凹凸等層次。點(diǎn)點(diǎn)時(shí)筆尖直立。點(diǎn)的大小、疏密要均勻、整齊、渾圓。6繪圖時(shí)，一般先草擬輪廓圖，經(jīng)檢查無(wú)誤后，再以準(zhǔn)確、清晰的線作最

11、后的描繪。【解題指導(dǎo)】例1 用顯微鏡觀察洋蔥根尖細(xì)胞的有絲分裂，要看清各時(shí)期細(xì)胞內(nèi)染色體的變化情況，目鏡、物鏡的合理搭配應(yīng)該是 A 目鏡24X、物鏡10X，NA0.25B 目鏡 5X、物鏡40X，NA0.65C 目鏡10X、物鏡40X，NA0.65D 目鏡24X、物鏡40X，NA0.65析 此題屬鏡像亮度問(wèn)題。鏡像亮度與物鏡鏡口率NA平方成正比，與總放大倍數(shù)成反比。由此，在總放大倍數(shù)相同情況下，要使物像亮度增加，應(yīng)該使用高鏡口率NA的物鏡與低倍目鏡配合，根據(jù)這一原理應(yīng)選擇C。例2 在觀察顯微鏡時(shí)，經(jīng)常遇到以下5種現(xiàn)象：1視野亮度晃眼；2視野不圓；3對(duì)光時(shí)視野中出現(xiàn)窗欞、樹影等物現(xiàn)象；4只見視野

12、不見圖像；5圖像結(jié)構(gòu)不完整，試分析出現(xiàn)這些現(xiàn)象的可能原因，并提出排除方法。析 1視野亮度晃眼，可能原因：反光鏡直射強(qiáng)光源；光照到通光孔上緣。排除方法：用平面鏡斜對(duì)光源；挪鏡。2視野不圓的可能原因：遮光器或轉(zhuǎn)換器沒(méi)有轉(zhuǎn)到頭；遮光器或轉(zhuǎn)換器螺絲動(dòng)。排除方法：把兩者轉(zhuǎn)到頭彈簧片入槽；擰緊螺絲。3對(duì)光時(shí)視野中出現(xiàn)其他物象，其可能原因是鏡筒太高或太低，調(diào)節(jié)一下鏡筒即可消除。4只見視野不見圖像，可能是操作不仔細(xì)，低倍鏡頭偏于一旁。排除方法：將低倍鏡頭對(duì)準(zhǔn)通光孔。5圖像結(jié)構(gòu)不完整的可能原因是未根據(jù)材料的不同折光性用光，應(yīng)調(diào)節(jié)光圈使透明度一致。例3 某架顯微鏡由于磨損，低倍鏡上的放大倍數(shù)看不清，而高倍物鏡尚看

13、得出是40倍，借助實(shí)驗(yàn)臺(tái)上的哪些材料可幫你測(cè)出低信鏡的放大倍數(shù)？說(shuō)明測(cè)定方法。實(shí)驗(yàn)臺(tái)上有顯微鏡、目鏡測(cè)微尺、物鏡測(cè)微尺、刻度尺、放大鏡析 此題可利用顯微測(cè)量技術(shù)測(cè)定。利用實(shí)驗(yàn)臺(tái)上的顯微鏡和測(cè)微尺進(jìn)行測(cè)量。由于目鏡測(cè)微尺每格的實(shí)際長(zhǎng)度因不同物鏡的放大倍數(shù)有所不同，因此可以在相同目鏡下，測(cè)量變換高40X、低倍物鏡下的視野直徑，由于放大倍數(shù)與視野直徑成反比，按下式計(jì)算即可求出低倍鏡的放大倍數(shù)。高倍鏡放大倍數(shù) / 低倍鏡放大倍數(shù)低倍鏡視野直徑 / 高倍鏡視野直徑例4 在一黃粉岬幼蟲尾部45節(jié)的節(jié)間刺一針，用毛細(xì)吸管取14mL血淋巴，再用毛細(xì)吸管取1520mL生理鹽水，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)細(xì)胞數(shù)區(qū)別脂類顆粒、

14、組織碎片與細(xì)胞，計(jì)算血淋巴細(xì)胞濃度填入下表。30min重復(fù)一次針刺部位前移一體節(jié)，60min重復(fù)一次針刺部位再前移一體節(jié)。1將有關(guān)數(shù)據(jù)填入下表：時(shí)間間隔min血淋巴長(zhǎng)度amL生理鹽水bmL細(xì)胞數(shù)數(shù)25個(gè)中方格細(xì)胞密度個(gè)mL030602將細(xì)胞密度變化繪成曲線，并答復(fù)以下問(wèn)題：計(jì)數(shù)時(shí)怎樣處理壓線細(xì)胞？用一句話答復(fù)。給出計(jì)算細(xì)胞密度的公式。用一句話答復(fù)為什么血蓋片較一般蓋玻片厚。注意：針刺幼蟲時(shí)，食指與中指夾住頭部，拇指按住尾部，使其不動(dòng)。針刺不要過(guò)深，不要挑動(dòng)，以免蟲死亡或使頭部器官的細(xì)胞或雜物進(jìn)入血淋巴。蟲不可死。析 此題按血球計(jì)數(shù)極計(jì)數(shù)的方法操作，所得數(shù)據(jù)鎮(zhèn)入表中。根據(jù)繪制函數(shù)曲線原理，以時(shí)間

15、間隔為橫坐標(biāo)，細(xì)胞密度個(gè)mL為縱坐標(biāo)，繪制曲線。在計(jì)數(shù)時(shí)，對(duì)壓線細(xì)胞采取“數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線的原那么處理。計(jì)算細(xì)胞數(shù)方法：每mL懸液細(xì)胞數(shù)80個(gè)小方格細(xì)胞總數(shù) / 8040010000稀釋倍數(shù)血蓋片比普通蓋玻片厚是因?yàn)橐w住計(jì)數(shù)板上的計(jì)數(shù)室溝槽?！痉€(wěn)固練習(xí)】1某同學(xué)在做觀察洋蔥根尖細(xì)胞有絲分裂裝片時(shí)，有兩次出了過(guò)失。第一次是解離時(shí)間為2min，第二次是60min。請(qǐng)你推出實(shí)驗(yàn)結(jié)果并說(shuō)明原因。第一次是因 ，所以觀察到的是 。第二次，那么因 ，所以 。2在照明充分的情況下，在顯微鏡視野內(nèi)可看清洋蔥鱗莖表皮細(xì)胞無(wú)色的細(xì)胞壁，但看不清液泡，為了能顯示細(xì)胞質(zhì)與液泡的界面，此時(shí)應(yīng) A 改用凹面

16、反光鏡，放大光圈 B 改用凹面反光鏡，縮小光圈C 改用平面反光鏡，放大光圈 D 改用平面反光鏡，縮小光圈3在顯微鏡視野中觀察玻片標(biāo)本，物鏡測(cè)微尺和目鏡5X測(cè)微尺在0點(diǎn)處重合時(shí)，物境測(cè)微尺的80格與目鏡測(cè)微尺的55格處也相重疊時(shí)，試問(wèn)目鏡測(cè)微尺一格的長(zhǎng)度是 m；如觀察測(cè)量某種植物的細(xì)胞大小時(shí)，測(cè)量其長(zhǎng)為7個(gè)小格，那么此細(xì)胞的實(shí)際長(zhǎng)度是 m。4撕取所給葉片的下表皮，放在顯微鏡下觀察，繪出保衛(wèi)細(xì)胞及表皮細(xì)胞的特征。隨機(jī)取五個(gè)視野計(jì)算氣孔數(shù)，取其平均值，計(jì)算氣孔密度個(gè)cm2。低倍物鏡視野直徑為1.5mm，目鏡統(tǒng)一用10倍第二節(jié) 物理學(xué)和化學(xué)分析技術(shù)【知識(shí)概要】、別離技術(shù)別離技術(shù)主要是利用物理學(xué)和化學(xué)的

17、原理建立起來(lái)的各種別離、純化方法。常用的別離技術(shù)有以下幾種：1紙層析法層析技術(shù)是從一個(gè)混合物中別離和純化一種或幾種生物化合物的最簡(jiǎn)便的方法，用濾紙為支持物的層析法，叫紙層析法。紙層析用的展層溶劑大多由水和有機(jī)溶劑組成。濾紙纖維與水的親和力強(qiáng)，與有機(jī)溶劑的親和力弱，因此在展層時(shí)，水是靜止相，紙是靜止相的支持物，有機(jī)溶劑是流動(dòng)相，它沿著濾紙流動(dòng)。假設(shè)將生物樣品提取液點(diǎn)在濾紙上此點(diǎn)稱為原點(diǎn)進(jìn)行展層，樣品中的各種溶質(zhì)如葉綠體中的四種色素，各種氨基酸等即在兩相溶劑中不斷進(jìn)行分配。由于它們的分配系數(shù)不同，不同溶質(zhì)隨流動(dòng)相移動(dòng)的速率不等，于是就將這些溶質(zhì)別離開來(lái)，形成距原點(diǎn)不等的層析點(diǎn)。紙層析的具體方法：1

18、制樣。將樣品經(jīng)研磨、過(guò)濾制備成提取液；2制備濾紙條。將濾紙剪成長(zhǎng)10cm、寬1cm的紙條。在一端用鉛筆畫一橫線點(diǎn)樣線；3點(diǎn)樣。用毛細(xì)吸管將濾液沿點(diǎn)樣線畫一直的濾液細(xì)線；4層析：將層析液石油醚、丙酮、苯的混合液倒入燒杯，然后將濾紙條靠燒杯內(nèi)壁輕輕插入層析液中。5結(jié)果。幾分鐘后，出現(xiàn)層析現(xiàn)象。2電泳法電泳技術(shù)主要是根據(jù)不同物質(zhì)所帶的電荷的數(shù)量和性質(zhì)不同，因而在電場(chǎng)移動(dòng)中的速度和方向就不同。生物分子如氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、酶和核酸等都具有可電離的集團(tuán)，在溶劑中能形成帶電荷的分子，由于在不同的溶劑介質(zhì)中所帶的電荷的數(shù)量和性質(zhì)的差異，在電場(chǎng)中泳動(dòng)的速度遷移率不同，由此可以別離各種物質(zhì)成分。電泳的方法很多

19、，有紙電泳、瓊脂平板電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳等，其中較簡(jiǎn)單的是紙上電泳法，它是用濾紙作為電泳載體的一種電泳方法。紙上電泳一般操作過(guò)程以別離血清蛋白為例：1儀器準(zhǔn)備。電泳設(shè)備主要是電泳儀和電泳槽見以下圖。電泳槽是供兩極電泳別離和盛裝緩沖液之用。電泳儀提供可控電源。一般采用電壓在100500V，電流在0mA50mA或100mA。2配制緩沖液。緩沖液的種類很多，可用0.5M、pH5.6巴比妥緩沖液或 Ph8.6硼酸緩沖液。緩沖液配好后直接參加兩側(cè)電泳槽中。3裁剪濾紙。取電泳濾紙，按220cm剪裁，于一端約1/3處用鉛筆劃點(diǎn)樣線，將紙用緩沖液浸濕。4點(diǎn)樣。在點(diǎn)樣線上，用50L微量注射器點(diǎn)樣，一般為10

20、mL。點(diǎn)樣后，將濾紙放在電泳槽兩極隔板上，兩端浸入緩沖液中。5電泳。接上電源，按濾紙長(zhǎng)和寬選用電壓8Vcm和電流0.4mAcm，以點(diǎn)樣線一側(cè)為負(fù)極，向正極泳行。6烘干。取下電泳紙條在烤箱90105迅速烘干。7染色。將烘干濾紙條浸入溴酚蘭染液10min，取出以0.5醋酸溶液脫色，逐漸顯出電泳帶。8比色。將各條區(qū)帶濾紙剪下，以電泳空白濾紙為對(duì)照，在分光光比色計(jì)上比色。9計(jì)算。按光密度值計(jì)算出各局部蛋白質(zhì)的百分?jǐn)?shù)。水平電泳槽裝置3離心法離心法是一種利用物質(zhì)在溶液中的密度、大小和形狀的不同，以及它們沉降系數(shù)、質(zhì)量、浮力因子等方面的差異，通過(guò)強(qiáng)離心力的作用使其別離、濃縮、提純的技術(shù)，并可用于分子量的測(cè)定

21、。在生物學(xué)研究中，常用離心方法從組織勻漿中別離各種細(xì)胞器及各種蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子。離心的設(shè)備主要是離心機(jī)，它是利用離心力對(duì)混合液進(jìn)行別離和沉淀的專門儀器。離心機(jī)的種類很多，有低速離心機(jī)4000/ min以下、高速離心機(jī)4000/ min以上，20000/ min以下和超速高心機(jī)20000/ min以上。離心別離方法很多，常用的是差速離心機(jī)，是指低速和高速離心交替進(jìn)行，用不同強(qiáng)度的離心力使不同質(zhì)量的物質(zhì)分批別離的方法。例如，利用離心機(jī)的不同轉(zhuǎn)數(shù)rpm，即/ min和時(shí)間，從鼠肝勻漿中別離各種亞細(xì)胞組分的過(guò)程以下圖：大白鼠肝臟勻裝分級(jí)別離各種亞細(xì)胞組分圖解二、測(cè)定技術(shù)1定性測(cè)定比色法生物材料

22、化學(xué)成分的測(cè)定技術(shù)很多，在生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中最常用的簡(jiǎn)便方法是比色法。比色法是利用生物組織中的有機(jī)物與某些化學(xué)試劑相互作用，能產(chǎn)生顏色反響的原理，可以根據(jù)顏色反響鑒定生物組織中某種有機(jī)物的存在。從細(xì)胞組織中，鑒定有機(jī)物的常用比色法，參見下表。成分試劑作用顏色反響復(fù)原糖斐林Fehling試劑使自由醛或酮基的糖氧化產(chǎn)生棕紅色Cu2O沉淀蛋白質(zhì)雙縮脲試劑肽錠在堿性環(huán)境中與CuSO4結(jié)合產(chǎn)生紅紫色的絡(luò)合物淀粉碘液淀粉與碘結(jié)合藍(lán)色反響脂肪蘇丹酒精溶液脂肪與蘇丹結(jié)合紅色反響維生素A三氯化銻一氯仿溶液與SbCl3作用藍(lán)色反響維生素B1重氮化氨基苯磺酸溶液在堿性溶液中發(fā)生作用紅色反響核酸亞硫酸復(fù)紅溶液與DNA發(fā)生作

23、用呈紅色或紫色2定量測(cè)定滴定法滴定法是將一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液滴入被測(cè)物質(zhì)溶液中，當(dāng)反響到終點(diǎn)后，根據(jù)所用標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積計(jì)算被測(cè)物質(zhì)的含量，這是一種常用的容量分析法。滴定法常用的儀器是滴定管。它是帶有刻度和活栓的玻璃管，用它放送體積的溶液。滴定法的一般操作技術(shù)以維生素C定量測(cè)定為例：1樣品制備。將樣品洗凈蔬菜20g，加2草酸100g，置組織攪拌機(jī)中打成漿狀。稱取5g漿狀物倒入50mL容量瓶中以2草酸溶液稀釋至刻度。靜置10min，過(guò)濾備用。2滴定。標(biāo)準(zhǔn)液滴定：準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸Vc溶液 1mL含0.1mgVc置100mL錐形瓶中，加9Ml1草酸，微量滴定管以0.12，6-二氯酚靛酚滴至淡紅色，并

24、保持15sec即為終點(diǎn)。由所用染料的體積計(jì)算出1mL染料相當(dāng)于多少mg抗壞血酸。樣液滴定：準(zhǔn)確吸取濾液兩份，每份10mL分別放入兩個(gè)100mL錐形瓶?jī)?nèi)，測(cè)定方法同前。計(jì)算：VT / W100100g樣品中含抗壞血酸Vcmg數(shù)式中：V滴定時(shí)所用去染料毫升數(shù)。T1mL染料能氧化Vc毫克數(shù)。W10mL樣液相當(dāng)于含樣品之克數(shù)?！窘忸}指導(dǎo)】例1 葉綠體中色素的提取和別離：1提取和別離葉綠體的色素，可采用 方法。2用毛細(xì)吸管在濾紙上劃出濾液細(xì)線時(shí)，線條越細(xì)越好，這樣可以防止 ，以便取得較好的 。3葉綠體b為黃綠色，層折后的位置是在濾紙條的 。4實(shí)驗(yàn)應(yīng)盡量在通風(fēng)處進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)后一定要將手洗凈，這是因?yàn)?。析

25、提取和別離葉綠體中的色素可采用紙層析法。在點(diǎn)樣劃線時(shí)，越細(xì)越好，這樣可防止色素帶之間局部重疊，以便取得較好的別離效果。層析后，濾紙條上自上而下有4條色素帶。因?yàn)樵搶?shí)驗(yàn)使用了苯、丙酮等有毒化學(xué)藥品，實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)通風(fēng)，實(shí)驗(yàn)后要洗手，確保平安。例2 在雞血DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)中，請(qǐng)答復(fù)：1為什么使用NaCl溶液離析DNA？2為什么使用乙醇純化DNA？3為什么甲基綠能鑒定DNA？析 DNA在NaCl溶液中有一定的溶解度，并隨著NaCl溶液的溶度變化而改變。當(dāng)NaCl的質(zhì)量濃度為0.14ML時(shí)，DNA的溶解度最低。利用這一原理，可促使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。DNA不溶于乙醇，但細(xì)胞中的某些物質(zhì)

26、可以溶于乙醇。利用這一原理，可以進(jìn)一步取出較純潔的DNA。DNA遇甲基綠會(huì)被染成藍(lán)綠色。因此，甲基綠可用作鑒定DNA的特定試劑。例3 利用紙電泳法別離血清蛋白。血清蛋白中含有5種蛋白質(zhì)，依分子量由小到大排列為清蛋白A、1、2、球蛋白。試問(wèn)：1電泳后，濾紙上出現(xiàn)幾條區(qū)帶？離點(diǎn)樣線最遠(yuǎn)者是什么蛋白質(zhì)？說(shuō)明其原因。2欲計(jì)算各局部蛋白質(zhì)的百分?jǐn)?shù)，請(qǐng)說(shuō)明計(jì)算方法。析：電泳后，在濾紙上應(yīng)出現(xiàn)5條區(qū)帶，因?yàn)榉肿恿啃〉牡鞍踪|(zhì)，電場(chǎng)中泳動(dòng)的速度快，也就是遷移率大。因此，離點(diǎn)樣線最遠(yuǎn)者為清蛋白A，依次是1、2、球蛋白。計(jì)算各蛋白質(zhì)的百分?jǐn)?shù)，可通過(guò)比色法測(cè)定，在分光光電比色計(jì)上對(duì)各條區(qū)帶進(jìn)行比色，波長(zhǎng)在580nm6

27、00nm，記錄各自的光密度。然后按光密度總和TA12的各光密度值，計(jì)算出各局部蛋白質(zhì)的百分?jǐn)?shù)：清蛋白 AA / T100；球蛋白11 / T100其他蛋白質(zhì)依次類推?！痉€(wěn)固練習(xí)】5在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上有天平、100mL燒杯、培養(yǎng)皿6個(gè)、紅墨水、I2-KI溶液、蘇丹溶液、雙縮脲試劑、顯微鏡、刀片、鑷子、小麥種子、菜豆種子、蓖麻種子將以上種子分出一半浸泡使局部種子剛好發(fā)芽，然后將每種種子浸泡過(guò)的和枯燥的分別裝于培養(yǎng)皿中。試問(wèn)：1繪圖說(shuō)明培養(yǎng)皿中各種材料各局部的結(jié)構(gòu)名稱。2測(cè)定各類種子萌發(fā)所需的吸水量g水 / g種子，并寫明實(shí)驗(yàn)過(guò)程。3測(cè)定各類種子潛在的萌發(fā)率，并寫明實(shí)驗(yàn)過(guò)程。4各類種子貯存有機(jī)物有何特點(diǎn)？依

28、據(jù)是什么？6研磨葉肉細(xì)胞后放入離心管中離心，細(xì)胞壁和核物質(zhì)沉淀在管底，這些沉淀物為P1，上清液為S1。將S1倒入另一管離心，別離出橢球或球形顆粒P2和上清液S2。將S2再倒入另一離心管離心，別離出棒狀的顆粒民P3和上清液S3。再將S3倒入另一離心管離心，別離出上清液S4和含粒狀小體的沉淀物P4。而S4中只含有溶解于水的物質(zhì)。見以下圖。請(qǐng)?jiān)贏E中選正確答案填入以下各問(wèn)中。A P1 B P2 C P3 D P4 E S4 1合成蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)存在于 。2DNA含量最多的是 。3含有將CO2和H2O合成C6H12O6的反響所需酶的是 。4含有將葡萄糖分解成酒精的反響所需酶的是 。7用碘液、乙醇、蘇丹溶

29、液、鹽酸液、氫氧化鈉溶液、硫酸銅溶液、氯化鉀溶液、醋酸洋紅溶液、亞甲基藍(lán)溶液、丙酮等藥品，如何證明面粉團(tuán)用紗布包起來(lái)在清水中搓洗后，紗布中的面筋是蛋白質(zhì)？洗出來(lái)的白漿是淀粉？8將花盆橫放在轉(zhuǎn)盤上，假設(shè)轉(zhuǎn)盤以最大速度旋轉(zhuǎn)時(shí)，花枝朝什么方向生長(zhǎng)？并說(shuō)明其原因？9用小刀將數(shù)十只螢火蟲發(fā)光器割下，枯燥后研成粉末狀，取兩等分分別裝入兩只小玻璃瓶中各參加少量的水，使之混合，可見到玻璃瓶中有淡黃色熒光出現(xiàn)，經(jīng)過(guò)15min熒光消失。這時(shí)，再將ATP溶液參加其中一只玻璃瓶中，將葡萄糖溶液參加另一只玻璃瓶中，可觀察到加ATP溶液的玻璃瓶中熒光出現(xiàn)，而加葡萄溶液的瓶中沒(méi)有熒光出現(xiàn)。以上現(xiàn)象說(shuō)明了1 ；2 ；3 。第

30、三節(jié)微生物培養(yǎng)技術(shù)【知識(shí)概要】一、培養(yǎng)基的制作技術(shù)制作培養(yǎng)基是微生物實(shí)驗(yàn)的根底。培養(yǎng)基的制作有以下幾個(gè)環(huán)節(jié)：1玻璃器皿的清潔在制作培養(yǎng)基前，首先應(yīng)準(zhǔn)備好符合要求的清潔玻璃器皿。一般用肥皂液煮沸30min，或浸入用重鉻酸鉀和濃硫酸配制的洗液數(shù)10min，然后用清水沖洗，晾干后保存?zhèn)溆谩?培養(yǎng)基的制作過(guò)程1配制液體培養(yǎng)基 根據(jù)需要配制培養(yǎng)基的數(shù)量，先在大杯中注入局部蒸餾水；按培養(yǎng)基配方稱量各種成分的原料，依次參加使之溶解；補(bǔ)足需水量；如用肉膏等配制時(shí)，需加熱溶解；加熱后，補(bǔ)足因加熱所蒸發(fā)的水分，即成液體培養(yǎng)基。2配制固定培養(yǎng)基 在液體培養(yǎng)基里加凝固材料瓊脂，參加后繼續(xù)加熱使之融化，即成固體培養(yǎng)基。

31、3調(diào)整 pH值 配好培養(yǎng)基后用pH試紙測(cè)試，用10% HCl或10NaOH調(diào)到所需的pH。4過(guò)濾分裝 用濾紙或紗布趁熱過(guò)濾，將過(guò)濾液分裝于試管中，其量約為試管的1/41/3不要沾污管壁，塞上棉塞。5滅菌 將分裝好的培養(yǎng)基，經(jīng)高壓蒸汽滅菌30min，保存?zhèn)溆谩?制平面或斜面培養(yǎng)基在分裝時(shí)，如裝入培養(yǎng)皿那么成平面培養(yǎng)基。欲制成斜面培養(yǎng)基，那么將滅菌后的瓊脂培養(yǎng)基，趁熱倒入試管，蓋上棉塞，并將試管擺放在小木條支架上，呈適當(dāng)斜度見以下圖，凝固后即成斜面培養(yǎng)基，可保存?zhèn)溆谩Ｅ囵B(yǎng)基的斜面擺法4細(xì)菌培養(yǎng)基的制法培養(yǎng)不同的微生物需制備不同的培養(yǎng)基。培養(yǎng)細(xì)菌主要用牛肉膏培養(yǎng)基牛肉膏0.5g；蛋白胨1g；食鹽0.

32、5g；瓊脂1.5g；水100mL。制法是：按照配方先配好各種成分的培養(yǎng)液，加熱使之充分溶解，并補(bǔ)足所失水分。調(diào)pH為7.47.8滅菌后的pH為 7.27.6。分裝后滅菌，制成斜面，即成肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。二、分病菌技術(shù)別離菌技術(shù)主要包括接種和稀釋技術(shù)。微生物的各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)操作均應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行。1接種技術(shù)1接種設(shè)備 接種時(shí)可在無(wú)菌操作箱見以下圖或超凈工作臺(tái)上操作。無(wú)此設(shè)備條件也可直接在酒精燈上操作。接種工具有接種環(huán)、接種針和接種鉤。無(wú)菌操作箱1通氣孔；2移動(dòng)門；3手孔2接種的方法步驟 用品的消毒滅菌。接種箱和接種用品用紫外燈滅菌。雙手用75乙醇消毒。采種。菌種由窗門放入，兩手從袖套伸進(jìn)接種箱，點(diǎn)燃

33、酒精燈，用左手并排拿起有菌種的試管和培養(yǎng)試管，試管口靠近酒精燈火焰，旋松棉塞；右手的拇指和食指拿起接種環(huán)，放在火焰上燒紅滅菌。接種。用右手的中指、無(wú)名指和小指夾下兩個(gè)棉塞，把兩個(gè)試管口放在火焰上燎一下。把滅菌的接種環(huán)伸進(jìn)菌種試管，挑取一點(diǎn)菌落，再插入培養(yǎng)基試管里，在培養(yǎng)基斜面上由管底向管口連續(xù)輕輕地劃幾道曲線，使菌落涂在培養(yǎng)基上。然后抽出接種環(huán)，將試管口再在火焰上燎一燎，塞上棉塞，連續(xù)操作使所有培養(yǎng)基試管都涂上菌落。參看以下圖接種方法示意圖保溫培養(yǎng)。接種后，將試管放保溫箱37恒溫培養(yǎng)，34天后，在培養(yǎng)基上可以看到正在發(fā)育的菌落。接種方法示意圖1接種環(huán)滅菌；2采種；3接種；4試管口滅菌；5裝好棉

34、塞2稀釋技術(shù)在自然界，微生物都是混雜生活在一起的，要想研究某種細(xì)菌，必須從混雜的細(xì)菌群體中別離得到一種細(xì)菌。這種純培養(yǎng)別離菌種的方法很多，較簡(jiǎn)單的有稀釋倒平皿法。這種方法是將待別離的材料作一系列稀釋如110、1100、11000、110000等，取不同稀釋液各少許與已溶化并冷卻至45的瓊脂培養(yǎng)基相混合，傾入滅過(guò)菌的培養(yǎng)皿中，待培養(yǎng)基凝固后，保溫培養(yǎng)一定時(shí)間，即有菌落出現(xiàn)如以下圖。如果稀釋得當(dāng)，平皿中出現(xiàn)分散的單個(gè)菌落便可能由一個(gè)細(xì)菌繁殖而成，挑取此單個(gè)菌落或再重復(fù)以上操作數(shù)次，便可得到純培養(yǎng)的菌株。稀釋倒平皿別離法三、染色技術(shù)鑒別細(xì)菌主要采用革蘭氏染色法。按照細(xì)菌對(duì)這種染色反響的不同，分為革蘭

35、氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌兩大類。染色方法要點(diǎn)是：細(xì)菌先經(jīng)草酸結(jié)晶紫染色處理，用媒染劑碘液處理后，再用酒精脫色，最后番紅或沙黃復(fù)染。如果細(xì)菌不脫色不復(fù)染，呈紫色，稱為革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌用G表示，如芽孢桿菌、放線菌、酵母菌和多數(shù)球菌呈陽(yáng)性反響；如果細(xì)菌被酒精脫色而被番紅或沙黃復(fù)染成紅色的稱為革蘭氏陰性細(xì)菌用G表示，如大多數(shù)無(wú)芽孢桿菌和某些球菌、螺旋菌，呈陰性反響?！窘忸}指導(dǎo)】例1 現(xiàn)提供以下實(shí)驗(yàn)條件：顯微鏡一臺(tái)、革蘭氏染色用具一套、血球計(jì)數(shù)板一套、吸管、小燒杯、天平、測(cè)微尺一套、試管、吸水紙、二甲苯、香柏油。請(qǐng)進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)并答復(fù)以下問(wèn)題。1請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一實(shí)驗(yàn)來(lái)判斷：成型顆粒樣品A。該樣品可能含有何種生物細(xì)胞？

36、該成型顆粒樣品A中生物細(xì)胞含量為多少？個(gè)/g假設(shè)該成型顆粒全為生物細(xì)胞組成，試求出每個(gè)細(xì)胞的重量？要求寫出實(shí)驗(yàn)過(guò)程、所用器材，測(cè)定的數(shù)據(jù)、計(jì)算公式、結(jié)果等2有材料C，請(qǐng)對(duì)其進(jìn)行革蘭氏染色。判斷該細(xì)菌為何形態(tài)？染色結(jié)果如何？繪出該細(xì)胞的形態(tài)圖？要求同上析 1實(shí)驗(yàn)提供的樣品A為市售干性活酵母。先將定量樣品A用定量無(wú)菌水稀釋成菌液，然后用革蘭氏染色法鑒別該菌的類型并在顯微鏡下識(shí)別該菌的形態(tài)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果呈革蘭氏陽(yáng)性反響，再根據(jù)形態(tài)說(shuō)明該樣品可能是酵母菌。通過(guò)顯微測(cè)量，用血球計(jì)數(shù)板測(cè)定樣品A的細(xì)胞含量個(gè)/g和每個(gè)細(xì)胞的重量g個(gè)。2材料C為短桿菌。通過(guò)革蘭氏染色后，在油鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)，并繪出該細(xì)胞的形態(tài)

37、圖。例2 將10mL酵母液放在適宜溫度下培養(yǎng)，并于不同時(shí)間內(nèi)等量均勻取樣4次，分別測(cè)定樣品中酵母菌的數(shù)量和pH，結(jié)果如下表。請(qǐng)分析答復(fù)。1表中樣品的取樣先后次序?yàn)?。2對(duì)酵母菌而言，100mL該培養(yǎng)液的環(huán)境負(fù)荷量為 個(gè)。3假設(shè)第5次均勻取樣時(shí)，樣品中的酵母菌數(shù)量為760個(gè)/mm3。產(chǎn)生這一結(jié)果的原因是 。析 1根據(jù)樣品菌數(shù)，越在先菌數(shù)越少，由此取樣順序?yàn)?、4、1、3。2經(jīng)過(guò)培養(yǎng)10mL培養(yǎng)液中有菌數(shù)1210個(gè)/mm3，環(huán)境負(fù)荷量應(yīng)為1.21107。3培養(yǎng)液中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不斷被消耗，pH值減小，局部酵母菌因營(yíng)養(yǎng)缺乏不適應(yīng)而死亡并解體。【穩(wěn)固練習(xí)】10有材料A1和A2。A1為接種后經(jīng)32培養(yǎng)10小

38、時(shí)的樣品；A2為接種同樣菌種并經(jīng)培養(yǎng)12h后的樣品，假設(shè)接種后該菌種細(xì)胞即開始以指數(shù)生長(zhǎng)即12482n，這里n表示細(xì)胞分裂的次數(shù)，請(qǐng)通過(guò)試驗(yàn)測(cè)定出該微生物分裂一次所需要的時(shí)間。用G表示，單位為min要求：1判斷該生物細(xì)胞是什么？2記錄一些重要的測(cè)定數(shù)據(jù)并寫出計(jì)算公式。3寫出測(cè)定所需要的主要設(shè)備、器材。注：材料為培養(yǎng)的啤酒酵母。11有某一濃度的細(xì)菌懸液B，假設(shè)不用血球計(jì)數(shù)極，請(qǐng)用實(shí)驗(yàn)臺(tái)上給出的材料C測(cè)出該細(xì)菌懸液的濃度。請(qǐng)?jiān)谠嚲砩蠈懗鰷y(cè)定過(guò)程和測(cè)定的結(jié)果B為細(xì)菌培養(yǎng)液，C為濃度的雞血。12有平板培養(yǎng)材料D。請(qǐng)對(duì)其進(jìn)行革蘭氏染色并指出形態(tài)及革蘭氏染色結(jié)果。該材料是否有自主運(yùn)動(dòng)真性運(yùn)動(dòng)？如何簡(jiǎn)便判斷

39、？如能運(yùn)動(dòng)，請(qǐng)判斷該菌鞭毛類型。要求寫出實(shí)驗(yàn)過(guò)程及結(jié)果第四節(jié) 植物解剖與生理測(cè)定技術(shù)一、植物解剖技術(shù)見下表植物各種器官解剖與觀察方法名稱材料解剖方法觀察順序總結(jié)根洋蔥或小麥根尖壓片法縱剖面、徒手切片法橫切面，顯微鏡下觀察表皮外皮層內(nèi)皮層中柱中柱鞘、維管束根結(jié)構(gòu)特點(diǎn)莖1新生楊樹枝條2玉米幼莖1取枝條插在紅墨水中，葉片顯紅色后，用解剖刀橫切和縱切，直接觀察2徒手切片法，顯微鏡下觀察1樹皮表皮皮層韌皮部篩管木質(zhì)部導(dǎo)管髓2表皮機(jī)械組織維管束導(dǎo)管、韌皮部雙子葉木質(zhì)莖構(gòu)造特點(diǎn)單子葉草質(zhì)莖構(gòu)造特點(diǎn)葉蠶豆葉或青菜葉徒手切片法，顯微鏡下觀察上表皮氣孔葉肉柵欄組織、海綿組織葉脈下表皮氣孔葉結(jié)構(gòu)特點(diǎn)花桃花玉米雌、雄

40、花用鑷子分層解剖，將花的各局部擺在白紙上直接觀察花萼萼片數(shù)花冠花瓣數(shù)雄蕊花絲、花藥雌蕊柱頭、花柱、子房花托單性花和兩性花結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，花圖式果實(shí)桃核果番茄漿果蠶豆角果蘋果梨果用解剖刀將果實(shí)縱剖或橫剖后，直接觀察莢殼果皮外果皮、內(nèi)果皮果肉子房壁種子胎座不同果實(shí)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)二、徒手切片技術(shù)徒手切片是將要觀察的材料切成極薄的片，以到達(dá)了解其形態(tài)結(jié)構(gòu)的一種方法。徒手切片步驟如下：1選擇材料和夾持物可作徒手切片的材料有各種植物的葉片、較軟的嫩莖等。由于能作徒手切片的材料較柔軟，切片時(shí)須有夾持物輔助。夾持物一般用胡蘿卜或白蘿卜的圓錐根、馬鈴薯的塊莖等。對(duì)于較薄的葉可直接夾在夾持物的劈口中；對(duì)于較厚的材料，那么須

41、按材料大小先在夾持物的劈口上挖成適宜的凹穴，把材料加進(jìn)去，再開始切片。2正確手持材料和持刀方法應(yīng)用左手持材料，夾在拇指和食指或其他四指之間，材料略高于拇指和食指。拇指略低于食指，以免切時(shí)刀刃傷手。右手持刀剃刀或刮臉刀片，刀身要放平，刀口向著切片材料見右圖。3切片技術(shù)先將材料和刀口蘸些水，切去材料上端不整齊的一段，然后再正式切，切時(shí)要保持在同一水平面上，由左前外方向右內(nèi)方即向著自己迅速拉動(dòng)，動(dòng)作要快。切時(shí)用力靠臂，才能平穩(wěn)。切下的片，棄去較厚不適用的，對(duì)符合要求的立即侵入有水的培養(yǎng)血內(nèi)。4選片和裝片徒手切片往往厚薄不一，可放在載玻片上，在顯微鏡下檢查，選出適宜的切片。切片選好后，進(jìn)行染色，蓋上蓋

42、玻片，即可作為臨時(shí)裝片，在顯微鏡下觀察。三、光合作用強(qiáng)度的測(cè)定方法1干重法的實(shí)驗(yàn)原理植物的木質(zhì)部輸送水分，韌皮部輸送營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。如果用化學(xué)或物理的方法破壞植物葉片基柄的韌皮部而保存木質(zhì)部，就可以阻斷葉片中光合產(chǎn)物輸出，而同時(shí)保持葉片中正常水分的供給。在這樣條件下，用干重法比擬：留在植株上進(jìn)行一定時(shí)間光合作用后的半張葉片，與處理前取下并在暗中保存的半張葉片的單位面積干重差，就可以測(cè)得植物葉片的光合作用強(qiáng)度。2操作技術(shù)1選擇測(cè)定用的樣品 在麥田或棉田選擇有代表性植株的葉片葉片在植株上的部位、葉齡、受光條件應(yīng)一致，用小紙牌編號(hào)掛好。一般每個(gè)處理選用1020張葉片。2葉片基部或葉柄的處理 為了破壞葉的輸

43、導(dǎo)系統(tǒng)的韌皮部，可根據(jù)測(cè)定植物的不同而采取不同處理方法。如測(cè)棉花等雙子葉植物的葉片，可用刀片將葉柄的外皮環(huán)割掉1cm左右，然后用橡皮膏包好套上塑料套管；如測(cè)小麥等單子葉植物的葉片，可采用石蠟燙傷葉片基部的方法，即用酒精燈，在燈上外加鐵絲圈，可將裝有石蠟的小燒杯放在燈上加熱，一般在90左右，用毛筆蘸蠟在葉基部燙一下。燙后要不影響葉片的自然生長(zhǎng)角度。3剪取樣品 葉基部處理完畢即可剪取樣品，一般用打孔器取樣，也可用剪刀剪取。取樣同時(shí)記錄時(shí)間，開始進(jìn)行光合作用測(cè)定。剪取樣品時(shí)應(yīng)按實(shí)驗(yàn)編號(hào)次序分別剪下對(duì)稱葉片的一半主脈不剪下。取下的半張葉片按編號(hào)次序放入鋁制樣品盒中或夾在濕紗布中并貯于暗處。45h后再剪

44、取另外半張葉片，同樣放在鋁盒或濕紗布中。4稱量比擬 將上述葉片按光暗兩張半葉的對(duì)應(yīng)局部重疊起并壓上模板，用單面刀片割下等面積的葉片，如用打孔器取樣時(shí)，應(yīng)出取樣面積大小，然后分別存放在稱量皿或短的玻璃管內(nèi)，也可放在鋁盒中，在8090烘箱中烘至恒重約5h，然后在分析天平上稱重并做好記錄，計(jì)算出平均值和誤差。5計(jì)算結(jié)果 將上面的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)代入下面公式即可算出作物光合作用強(qiáng)度。光合作用強(qiáng)度mg干物質(zhì)dm2h光暗葉片干重差mg/ 單位葉面積dm2/ 照光時(shí)間h四、蒸騰作用的測(cè)定方法1氯化鈷檢驗(yàn)法原理植物通過(guò)蒸騰作用散失水分。氯化鈷紙枯燥時(shí)呈藍(lán)色，受潮吸水后逐漸變成粉紅色。由此，可通過(guò)氯化鈷紙檢驗(yàn)葉的蒸騰作

45、用。2操作技術(shù)1裁取兩張邊都是3cm正方形的藍(lán)色的5氯化鈷紙。在盆栽天竺葵上選擇一片葉，把一氯化鈷紙覆在葉的表皮上，取另一張氯化鈷紙覆在葉的下表皮上。然后兩面覆褶一張大于氯化鈷紙的玻璃紙，用回形針或夾子夾住玻璃紙和葉片見右圖。2也可以用玻璃膠把氯化鈷紙固定在葉的上、下外表，外包玻璃紙并夾住。3觀察氯化鈷紙顏色的變化，比擬上、下外表氯化鈷紙變化的速度和變色的程度。4實(shí)驗(yàn)結(jié)果，下外表氯化鈷變成粉紅色的時(shí)間比上外表快，且外表程度大。因葉下表皮氣孔分布多，蒸騰出的水蒸氣也多，氯化鈷易受【解題指導(dǎo)】例1 有2張無(wú)標(biāo)簽的切片標(biāo)本，根據(jù)以下觀察：切片1：橫切面圓形，紙管束排成一輪，木質(zhì)部和韌皮都相對(duì)排列，維

46、管束中有形成層，有髓，初生木質(zhì)部為外始式，次生韌皮部有纖維、篩管和伴胞。切片2：橫切面圓形，木質(zhì)部、韌皮部相對(duì)排列。維管束星散排列，無(wú)形成層，無(wú)明顯髓與表層。寫出切片屬哪類植物，何種器官。切片1 切片2 析 切片1為雙子葉植物根的結(jié)構(gòu)，切片2為單子葉植物莖的結(jié)構(gòu)。例2 有人設(shè)計(jì)了一個(gè)實(shí)驗(yàn)來(lái)證明光合作用需要CO2，他在兩支試管里裝入藍(lán)色的BTB溶液這種溶液在酸性條件下呈黃色，堿性條件下呈藍(lán)色，向管內(nèi)吹入CO2，溶液都變?yōu)辄S色。在1號(hào)管內(nèi)參加綠色水草，放在陽(yáng)光下，2號(hào)管內(nèi)也參加綠色水草，用黑紙包起來(lái)。如后，發(fā)現(xiàn)1號(hào)管內(nèi)BTB液變藍(lán)，2號(hào)管內(nèi)液體仍然黃色。因此，他認(rèn)為這個(gè)實(shí)驗(yàn)可以證明光合作用需要CO

47、2。有人認(rèn)為這個(gè)實(shí)驗(yàn)不夠嚴(yán)密，你認(rèn)為如何在上述實(shí)驗(yàn)裝置的根底上加以改良，就可以使實(shí)驗(yàn)更加嚴(yán)密地說(shuō)明光合作用需要CO2？ 。析 應(yīng)增加1支黃色BTB液的試管中不放水草，但是照光，排除BTB液遇光變色的可能?！痉€(wěn)固練習(xí)】13用所給的材料睡蓮的葉柄作徒手切片觀察，繪出結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)圖，注明特殊結(jié)構(gòu)并答復(fù)以下問(wèn)題：1有哪些特殊結(jié)構(gòu)？各有什么作用？2判斷其所處生態(tài)環(huán)境。14在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上提供體視鏡、顯微鏡、雙面刀片、單面刀片、載玻片、蓋玻片、番紅水溶液等實(shí)驗(yàn)條件，測(cè)定龍舌蘭、狗牙根、大麥、莎草4種植物的葉，試答復(fù)：1選擇填空 屬C3植物， 屬C4植物， 屬CAM植物。 耐旱性極強(qiáng)， 耐旱性較弱， 耐旱性較弱。 的最

48、高凈光合率較高。 的最高凈光合率中等， 的最高凈光合率較低。1A：龍舌蘭；lB：狗牙根；1C：大麥；lD：莎草2簡(jiǎn)答題：判斷材料1A至1D各屬C3或C4植物或CAM植物的依據(jù)是什么？1A： ； 1B： ；1一C： ；1一D： 。15以下圖是未完成的實(shí)驗(yàn)裝置，請(qǐng)利用a、b、c三支試管，新鮮葉片和必要的輔助材料，設(shè)計(jì)一個(gè)光合作用吸收CO2與呼吸作用釋放CO2的實(shí)驗(yàn)，并預(yù)計(jì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。1當(dāng)a管用于證明光合作用吸收CO2實(shí)驗(yàn)時(shí)，需 ，指示劑呈色 。2當(dāng)b管用于證明呼吸作用釋放CO2實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要 ，指示劑呈 色。3C管在實(shí)驗(yàn)中起 作用，指示劑呈 色。4用幾層紗布包上照光的d管，實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明指示劑顏色沒(méi)有變

49、化，其原因是 。16觀察兩株不同表現(xiàn)的白菜植株：一株生長(zhǎng)正常；另一株有黃化現(xiàn)象。試答復(fù)以下問(wèn)題：1使植物呈現(xiàn)這兩個(gè)表現(xiàn)差異主要是由于植物體內(nèi)兩種物質(zhì)含量不同所致，這兩種物質(zhì)是什么？2使植物呈現(xiàn)這兩個(gè)表現(xiàn)差異的外界因子是什么？3該外界因子是怎樣影響植物而造成這種差異的？17取A液高滲溶液中的一實(shí)驗(yàn)材料侵入B液蒸餾水中。在A液中取另一實(shí)驗(yàn)材料于顯微鏡下觀察其細(xì)胞結(jié)構(gòu)并繪圖。待B液中的材料浸泡20min后，取出于顯微鏡下觀察并繪圖。解釋你觀察到的現(xiàn)象。18用徒手切片法橫切黃豆芽的根，做一個(gè)典型的初生根切片裝片，畫出簡(jiǎn)圖，標(biāo)出凱氏點(diǎn)、原生木質(zhì)部、后生木質(zhì)部的位置，請(qǐng)答復(fù)選取以下哪一類染料作為染色劑？A

50、 間苯三酚、鹽酸飽和溶液 B 龍膽紫 C 亞甲基蘭 D I2-IK溶液第五節(jié) 動(dòng)物解剖與生理測(cè)定技術(shù)【知識(shí)概要】一、小型無(wú)脊椎動(dòng)物的解剖技術(shù)1蚯蚓的解剖1取材 最好取活蚯蚓經(jīng)過(guò)麻醉或加溫水的方法，然后解剖，可以見到心臟的活動(dòng)。2解剖 解剖時(shí)要腹側(cè)向下，背側(cè)向上，前端向外，后端向著解剖者。先以大頭針將前端固定解剖盤上，再以大頭針固定后端，使蚯蚓平直，然后用解剖剪在背中線這是解剖蚯蚓的特點(diǎn)從后端向前端剪背壁。3展平體壁 先用鑷子夾著一側(cè)體壁，用解剖刀割斷節(jié)間的膜，再割斷另一側(cè)隔膜，最后向左右展平體壁，為了便于觀察內(nèi)部器所在節(jié)的位置，每隔5節(jié)體節(jié)在左右各插上一個(gè)大頭針針要斜插，插至30節(jié)以后，便可不

51、按節(jié)插，插的較能固定即可。4注清水 為了觀察清楚，解剖盤內(nèi)應(yīng)放些清水，浸泡蚯蚓。5觀察 先觀察各器官的自然位置，識(shí)別各器官的形狀、顏色位置等，然后再按各器官系統(tǒng)逐步觀察。2蝗蟲的解剖1取材 已浸制保存的蝗蟲包括雌性和雄性。2外部觀察 取蝗蟲放在解剖盤上，先觀察外形，觀察順序是先整體，再?gòu)念^、胸、腹各部從前至后分別觀察。3解剖 解剖蝗蟲的方式不同于一般左右對(duì)稱的動(dòng)物。解剖蝗蟲要先沿左側(cè)氣門上方，由腹部末端向前剪開，直至前端；再沿右側(cè)同樣剪開，背壁除掉即可觀察內(nèi)部構(gòu)造。4固定蝗蟲 用大頭針固定蝗蟲材料于解剖盤上，并注入清水浸泡蟲體。5觀察 先按各器官的自然位置從前至后識(shí)別其形態(tài)、特點(diǎn)、顏色和位置等

52、，再就各器官系統(tǒng)分別觀察。二、雙筒解剖鏡的使用技術(shù)1解剖鏡的構(gòu)造雙筒解剖鏡的構(gòu)造根本上與顯微鏡相似，也分為機(jī)械裝置和光學(xué)系統(tǒng)兩局部，不過(guò)它的構(gòu)造比擬簡(jiǎn)單。機(jī)械裝置有鏡座、鏡臺(tái)、鏡筒、支柱立柱和調(diào)節(jié)手輪等局部：光學(xué)系統(tǒng)有接目鏡、接物鏡和反光鏡等局部見右圖。雙筒解剖鏡具有兩個(gè)鏡筒、兩個(gè)目鏡和物鏡，因此，使用時(shí)兩眼可以同時(shí)觀察。在鏡筒的其中一個(gè)附有調(diào)整目鏡筒目鏡調(diào)節(jié)圈，用以校正觀察者的兩眼間距離。雙筒解剖鏡只設(shè)有一對(duì)粗調(diào)焦手輪，進(jìn)行焦距調(diào)節(jié)。按目鏡和接物鏡也有各種不同的放大率，一般雙筒解剖鏡的放大倍數(shù)，從幾十倍至一百倍左右。在雙筒解剖鏡上有的有反光鏡，有的缺反光鏡；有的在鏡身上附有照明燈。鏡臺(tái)上有一

53、塊厚玻璃板和一塊一面白色一面黑色的瓷板，根據(jù)觀察物的顏色和透明度可以調(diào)換使用。2解剖鏡的使用方法把解剖鏡放在面向光源的位置，調(diào)節(jié)兩鏡筒間的距離，使適合自己的兩眼間的寬度。如觀察透明的標(biāo)本，鏡臺(tái)選用玻璃板，光源由反光鏡底下照射。如觀察不透明的標(biāo)本，鏡臺(tái)選用瓷板，深色標(biāo)本用白色一面，淺色標(biāo)本用黑色一面，光源以強(qiáng)光或燈光從上面直接照在標(biāo)本上，標(biāo)本要觀察的部位應(yīng)轉(zhuǎn)向光源。在解剖鏡下，觀察到的物象為一正立像，而且標(biāo)本移動(dòng)方向和物像的移動(dòng)方向完全一致。三、小型動(dòng)物整體裝片的制備技術(shù)整體裝片的制作，可以用于封固小形動(dòng)、植物的整個(gè)身體，或個(gè)別組織和器官，制成永久裝片后能長(zhǎng)期保存。現(xiàn)以水螅整體裝片為例說(shuō)明制作技

54、術(shù)，其步驟如下：1配制固定液固定液用波因Bouin氏固定液，即用75mL苦味酸飽和水溶液中參加25mL甲醛，在臨用時(shí)再參加5mL冰乙酸。2固定與去色固定水螅時(shí)，先在外表皿里放入少量水，用吸管把水螅從培養(yǎng)缸中吸出，放在外表皿內(nèi)。等水螅身體和觸手慢慢伸展后，用加熱的波因氏液3040固定。固定液要多些，傾倒時(shí)要迅速，倒在水螅身上，使水螅不收縮。在固定液中固定48h。然后浸入70乙醇中，每天更換一次乙醇，直至洗去標(biāo)本上因固定液而染上苦味酸的黃色為止。3染色與褪色將標(biāo)本浸入硼砂洋紅染液中，染24h。然后用1鹽酸乙醇褪色，時(shí)間為0.51min，褪色到內(nèi)部器官能看清楚為止。4脫水和透明依次將標(biāo)本浸入70、8

55、0、95乙醇及無(wú)水乙醇脫水。用二甲苯透明。5封片用樹膠封片。四、呼吸的測(cè)量技術(shù)1人體肺活量的測(cè)定方法測(cè)定肺活量有助于了解肺通氣的情況，是肺功能的指標(biāo)之一。肺容量是指肺容納的氣體量，它是肺活量同余氣量之和。肺活量那么是潮氣量、補(bǔ)呼氣量和補(bǔ)吸氣量的總和。測(cè)定肺活量需用肺活量計(jì)，測(cè)定方法如下：1校正肺活量計(jì)。測(cè)前筒內(nèi)裝水，調(diào)整指標(biāo)到“0位，吹嘴用70乙醇消毒。2測(cè)定潮氣量。受試者平靜吸氣后，捏住鼻子，向肺活量計(jì)內(nèi)呼氣，指針的讀數(shù)，即為潮氣量。3測(cè)定補(bǔ)呼氣量。受試者平靜呼氣后，捏住鼻子，向肺活量計(jì)作最大呼氣，指針的讀數(shù)，即為補(bǔ)呼氣量。4測(cè)定補(bǔ)吸氣量，先讓肺活量計(jì)內(nèi)氣體排出，提高浮筒，使筒內(nèi)存3000m

56、L新鮮空氣。受試者平靜吸氣后，對(duì)準(zhǔn)吹嘴作最大量吸氣。肺活量計(jì)減少的氣量即為補(bǔ)吸氣量。5測(cè)定肺活量。將肺活量計(jì)內(nèi)的氣體排空，指針到“0位，受試者盡量吸氣，迅速捏鼻，向肺活量計(jì)吹嘴作最大限度呼氣。指針的讀數(shù)，即為肺活量。一般要求測(cè)三次，取其中最大值作為受測(cè)者的肺活量。2人體呼出氣體中含較多CO2的測(cè)定方法根據(jù)石灰水遇CO2生成乳白色CaCO3沉淀的原理，可進(jìn)行CO2含量的測(cè)定，其方法如下：1取甲、乙兩個(gè)試管，向各管內(nèi)注入10mL15mL澄清的石灰水。2在甲試管內(nèi)插進(jìn)一根玻璃管或麥管，露出一端用70乙醇消毒。然后作深呼吸后，立即用玻璃管向試管中盡量呼氣，可以觀察到呼出氣體遇到石灰水后，變成渾濁狀的現(xiàn)

57、象。3用橡皮球朝乙試管內(nèi)的石灰水打氣，可觀察到石灰水依舊澄清，不發(fā)生變化。【解題指導(dǎo)】例1 螽斯的解剖觀察1剖開體壁，顯示血管：A按觀察要求，正確地剖開體壁；B將有血管的體壁粘貼于指定的框內(nèi)并以1枚指針的尖端指向血管。2制作裝片，示氣管系統(tǒng)與生殖腺的關(guān)系：A制作水封裝片；B在低倍鏡下以指針指出能顯示氣管系統(tǒng)與生殖腺關(guān)系的部位；C用高倍鏡觀察生殖腺處氣管系統(tǒng)的分布特點(diǎn)，并畫出氣管系統(tǒng)與生殖腺關(guān)系顯微結(jié)構(gòu)圖。3指出螽斯的排泄器官：在另1枚指針上寫出其排泄器官的名稱，并以其尖端指出該器官。4完整地取出螽斯的舌，粘貼在指定的紙上。5將螽斯的發(fā)聲器官按發(fā)聲位置完整地粘貼在指定的紙上。6寫出你所解剖的螽斯

58、的性別為 性。析 螽斯是直翅目的一種昆蟲。它是開管式循環(huán)，血管和心臟只在背側(cè)的體壁上。其發(fā)聲器官為前肢。雌性螽斯在尾部有很長(zhǎng)的產(chǎn)卵器。例2 解剖無(wú)脊椎動(dòng)物與脊椎動(dòng)物不同，一般先從解剖 開始，因?yàn)?。解剖后進(jìn)行觀察時(shí)應(yīng)有一定順序。例如：蛔蟲的觀察順序是 ；蚯蚓的觀察順序是 ；蝗蟲的觀察順序是 。析 無(wú)脊椎動(dòng)物的解剖一般從反面開始，因?yàn)闊o(wú)脊椎動(dòng)物的神經(jīng)索在腹面，消化道也靠近腹面，如果從腹面開始解剖很容易損壞內(nèi)部的一些重要結(jié)構(gòu)。解剖后，應(yīng)根據(jù)不同的動(dòng)物，按相應(yīng)的順序來(lái)觀察?；紫x的觀察順序是消化系統(tǒng)生殖系統(tǒng)排泄系統(tǒng)；蚯蚓的觀察順序是體腔消化系統(tǒng)循環(huán)系統(tǒng)生殖系統(tǒng)神經(jīng)系統(tǒng)排泄系統(tǒng)；蝗蟲的觀察順序是循環(huán)系統(tǒng)

59、呼吸系統(tǒng)生殖系統(tǒng)消化系統(tǒng)。例3 在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上放置有：分裝于三只燒杯中的水蚤、冰塊、酒精燈、鑷子、滴管、載玻片、蓋玻片、坐標(biāo)紙、顯微鏡、溫度計(jì)、秒表、0.5mm的頭發(fā)數(shù)根。請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察水蚤在常溫、低溫和高溫下心搏速率的變化情況，并答復(fù)以下實(shí)驗(yàn)問(wèn)題：1制表記錄水蚤心跳的次數(shù)。2在觀察水蚤時(shí)能否看到它的血液流動(dòng)？3用曲線表示水蚤心搏速率隨溫度的變化而發(fā)生的變化，并說(shuō)明原因。析 1觀察水蚤心博速率的方法：將三只裝有水蚤的燒杯分別處理，低溫處理用冰塊降溫至低于常溫510，高溫處理用酒精燈加溫至高于常溫510，用溫度計(jì)分別測(cè)出每只燒杯的具體溫度。然后用吸管吸取燒杯中的水蚤一只，連同少許水放在載玻片中央，

60、用鑷子夾取頭發(fā)4根，分散置于水滴內(nèi)，將水蚤圈在頭發(fā)中，立即蓋上蓋玻片，在顯微鏡低倍鏡下觀察水蚤的心臟水蚤背部的圓形囊跳動(dòng)，用秒表計(jì)時(shí)，觀察計(jì)數(shù)水蚤的心搏次數(shù)，以15s為一單位，觀察屢次取其平均值，并作好記錄。在觀察高溫和低溫處理下水蚤的心搏情況，要在1min內(nèi)操作完畢。2因水蚤血液無(wú)色，所以不能看到血液的流動(dòng)。3水蚤的心搏隨溫度降低而變慢，隨溫度的升高而加快。這是因?yàn)闇囟鹊淖兓辜?xì)胞內(nèi)生理活動(dòng)減弱或加快，對(duì)氧的消耗減少或增加的緣故?！痉€(wěn)固練習(xí)】19解剖胡蜂成蟲：1制作一氣管裝片。2繪出胡蜂消化系統(tǒng)圖，并注明各局部結(jié)構(gòu)名稱。3答復(fù)是否看到胃盲囊。提供用具：蠟盤、解剖器具、放大鏡、顯微鏡、載玻片、