CESDS檢測方法

1、附錄XX單抗純度測定方法-CE-SDS毛細管電泳（還原和非還原）本法系采用十二烷基硫酸鈉毛細管電泳（）紫外檢測方法，在還原和非還原條件下，依據(jù)分子量大小，定量測定重組單抗產(chǎn)品的純度。參照毛細管電泳法（附錄）測定。1.毛細管電泳系統(tǒng)TOC o 1-5 h z（）檢測器：紫外檢測器，波長：。（）毛細管：非涂層熔融石英毛細管（內(nèi)徑0J），切割至總長為、有效長度為。（）孔塞大小x試劑（）樣品緩沖液：含的溶液。（）凝膠分離緩沖液：含的緩沖液（），含有適當?shù)挠H水性聚合物作為分子篩。（）鹽酸溶液（）氫氧化鈉溶液（）純的巰基乙醇（）烷基化溶液：的碘乙酰胺水溶液如稱取約碘乙酰胺，加入p超純水溶解，新鮮制備，避免

2、光照。（）參比品溶液：終濃度乙供試品處理：（）供試品溶液制備：用樣品緩沖液將供試品稀釋至/樣品緩沖液以相同稀釋倍數(shù)稀釋，為空白對照。（）非還原供試品溶液制備：取供試品溶液（）1,加入碘乙酰胺水溶液p,渦旋混勻。取空白對照5，加入碘乙酰胺水溶液5，渦旋混勻，為非還原空白對照。（）還原供試品溶液制備：取供試品溶液（）5，加入巰基乙醇溶液55如,如，渦旋混勻。取空白試劑955,，加入2-巰基乙醇溶液55如,如，渦旋混勻，為還原空白對照。如將供試品溶液和空白對照在。孵育，非還原供試品溶液孵育還原供試品溶液孵育。冷卻到室溫后轉(zhuǎn)分離心分鐘。從樣品管中分別取出5至樣品瓶中，立即進行分析。樣品分析毛細管的預處

3、理氫氧化鈉溶液在壓力下沖洗分鐘，然后用鹽酸溶液在壓力下沖洗分鐘，最后用純水在壓力下沖洗分鐘。每次運行前應進行。毛細管的預填充：凝膠分離緩沖液在壓力下沖洗分鐘。每次運行前應進行。樣品進樣：反相極性電動進樣。還原樣品進樣秒；非還原樣品進樣40秒。鹽分離：下運行分鐘，反相極性。樣品室溫度：。毛細管溫度：。進樣順序：參比品、樣品、參比品、空白。系統(tǒng)適應性（1）還原條件的系統(tǒng)適應性要求：電泳圖譜：參比品溶液的電泳圖譜應與提供的典型電泳圖譜相一致。分離度：糖基化重鏈和非糖基化重鏈能夠明顯的分辨（分離度根據(jù)實際測定數(shù)據(jù)設定）。參比品非糖基化重鏈占總重鏈的百分比：以非糖基化重鏈的修正峰面積占總重鏈的修正峰面積

4、的百分比計算。參比品溶液中非糖基化重鏈占總重鏈的百分比應在指定范圍內(nèi)（根據(jù)實際測定數(shù)據(jù)設定）。遷移時間：兩針參比品重鏈遷移時間差分?？瞻祝嚎瞻兹芤褐袘獰o干擾峰。（2）非還原條件的系統(tǒng)適應性要求：電泳圖譜：參比品溶液的電泳圖譜應與提供的典型電泳圖譜相一致。分離度：主峰與片段的分離度根據(jù)實際測定數(shù)據(jù)設定。參比品主峰百分比：以主峰的修正峰面積占總修正峰面積的百分比計算。系統(tǒng)適應性溶液主峰的相對百分含量應在指定范圍內(nèi)。遷移時間：兩針參比品主峰的遷移時間差1.分0。注：根據(jù)儀器的不同，可調(diào)節(jié)樣品進樣時的條件和毛細管種類以滿足系統(tǒng)適應性要求。樣品結果分析：還原條件：按面積歸一化法計算，以重鏈、非糖基化重鏈和輕鏈的修正峰面積分別占所有修正峰面積之和的百分比分別計算重鏈、非糖基化重鏈和輕鏈的純度，三者之和即為產(chǎn)品純度。注：根