消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型課件

1、消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型第一節(jié) 急性胃炎動(dòng)物模型 急性胃炎動(dòng)物模型 Wistar大鼠，雄性，300g實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一、酸制劑誘發(fā)急性胃炎模型急性胃炎動(dòng)物模型大鼠禁食24h，在清醒狀態(tài)下，用下述試劑或物質(zhì)灌胃：（1）水楊酸制劑（如20 mmol/L阿司匹林或水楊 酸溶液）按100 mg/kg體重灌胃；（2）2ml 10 mmol/L的醋酸或2ml 不同濃度的鹽酸（1，10，100 mmol/L）；（3）2ml 同種動(dòng)物膽汁或2 mmol/L的?；悄懰幔唬?）15%的乙醇； （2）-（4）可單獨(dú)或幾種合用（2ml左右）灌胃； 操作方法急性胃炎動(dòng)物模型 4h后處死動(dòng)物，剖檢可見(jiàn)胃內(nèi)發(fā)生急性彌漫性炎癥改變。 胃

2、粘膜表面有淺表糜爛、出血，粘膜層內(nèi)見(jiàn)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。結(jié) 果病 變急性胃炎動(dòng)物模型 堿性腸液倒流入胃，刺激胃粘膜可引起炎癥，即膽汁反流性胃炎。常見(jiàn)于原發(fā)性或繼發(fā)性幽門(mén)功能紊亂或胃切除術(shù)后。本法取上部小腸的堿性腸液注入已結(jié)扎幽門(mén)的同種大鼠胃內(nèi)，使之對(duì)胃粘膜產(chǎn)生持續(xù)刺激，形成胃炎。造模原理二、膽汁返流性胃炎模型急性胃炎動(dòng)物模型Wistar大鼠，雄性，180 220g實(shí)驗(yàn)動(dòng)物二、膽汁返流性胃炎模型急性胃炎動(dòng)物模型1. 制備上部小腸液；2. 向胃內(nèi)注入小腸液，2 ml/只（正常對(duì)照組注入2 ml生理鹽水）?？p合腹壁，腹腔注射阿托品5 mg/kg體重，以抑制胃液分泌，利于胃粘膜損傷模型的形成； 3. 處死

3、大鼠，開(kāi)腹，結(jié)扎賁門(mén)，取出胃，沿胃大彎剪開(kāi)。用濾紙吸干表面水分，立即稱(chēng)量胃重，以胃濕重/體重之比（胃系數(shù)）表示胃水腫程度。4. 肉眼觀(guān)察并計(jì)數(shù)整個(gè)胃粘膜出血點(diǎn)數(shù)，作為損傷指數(shù)。操作方法急性胃炎動(dòng)物模型 模型組動(dòng)物胃系數(shù)和損傷指數(shù)明顯增加，肉眼觀(guān)察模型組胃粘膜充血、水腫，皺襞減少，顏色暗紅，并有大量散在出血點(diǎn)。結(jié) 果急性胃炎動(dòng)物模型第二節(jié) 慢性胃炎動(dòng)物模型三、大鼠慢性萎縮性胃炎模型病因:酗酒、用藥不當(dāng)、飲食習(xí)慣不良、幽門(mén)螺桿菌感染、自身免疫。造模評(píng)價(jià)：組織病理學(xué)是評(píng)價(jià)造模成功的最主要指標(biāo)，主要觀(guān)察和測(cè)量胃粘膜厚度、粘膜肌層厚度、腺體數(shù)量、壁細(xì)胞數(shù)量、固有層炎細(xì)胞浸潤(rùn)程度和腸化生發(fā)生率等。 造模方

4、法綜合法一 膽汁（去氧膽酸鈉）+熱水+主動(dòng)免疫 綜合法二 去氧膽酸鈉+熱糊+主動(dòng)免疫 綜合法三 去氧膽酸鈉+酒精+氨水+吲哚美鋅氨水單因素法 綜合法復(fù)制伴有幽門(mén)螺桿菌感染的慢性萎縮性胃炎模型: 飲用去氧膽酸鈉水; 免疫損傷; 飲寒涼膽汁; 飲食不潔和/或肌飽失常； HP灌胃。第三節(jié) 急性胃潰瘍動(dòng)物模型潰瘍病的病因致潰瘍因素:胃酸、胃蛋白酶、非甾體抗炎藥不合理應(yīng)用、幽門(mén)螺桿菌感染等。防御因素：粘液-碳酸氫鹽屏障、粘膜屏障、粘膜血流量、胃上皮細(xì)胞的更新、表皮生長(zhǎng)因子和內(nèi)生性前列腺素等。潰瘍的形成主要由于防御因素和致潰瘍因素的平衡失調(diào)所致。 應(yīng)激法 幽門(mén)結(jié)扎法 藥物法 醋酸法 常用的方法急性胃潰瘍動(dòng)

5、物模型 在抗?jié)兯幬锼幮W(xué)試驗(yàn)中，水浸應(yīng)激法、幽門(mén)結(jié)扎法和醋酸法制備的胃潰瘍模型為必做實(shí)驗(yàn)，利血平法和乙醇法可任選其一。乙醇組胺促胃液素腎上腺類(lèi)固醇水楊酸鹽血清素利血平保泰松等一、應(yīng)激性胃潰瘍模型應(yīng)激性胃潰瘍模型應(yīng)激刺激 造模機(jī)制血管收縮 胃運(yùn)動(dòng)亢進(jìn) 副交感神經(jīng)-垂體-腎 上腺系統(tǒng)興奮性應(yīng)激性潰瘍胃酸、胃蛋白酶和 胃泌素分泌胃粘膜缺血、缺氧和 抵抗力交感神經(jīng)興奮性應(yīng)激性胃潰瘍模型Wistar大鼠，160-180g，雌雄不限。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物器 材大鼠固定鋼板或束縛籠；恒溫水浴裝置。 應(yīng)激性胃潰瘍模型應(yīng)激束縛籠應(yīng)激性胃潰瘍模型禁食（不禁水）24h，將動(dòng)物固定（籠或固定器）。垂直浸于1820的恒溫水浴槽中

6、，水面浸至劍突水平。水浸泡7h后取出，處死動(dòng)物，立即開(kāi)腹檢查。胃的固定及處理。操作方法應(yīng)激性胃潰瘍模型水浸3h，胃粘膜即發(fā)生損傷；7-8h胃粘膜可出現(xiàn)多發(fā)性、出血性糜爛小點(diǎn)；20h胃粘膜病變相當(dāng)嚴(yán)重，但潰瘍改變不超過(guò)粘膜肌層，且以*腺胃（含胃體和胃竇）為重。 應(yīng)激性潰瘍?cè)谙傥覆垦匮茏咝蟹植?，表面覆蓋凝血塊，去除凝血后可見(jiàn)深褐色條索狀潰瘍。結(jié) 果應(yīng)激性胃潰瘍模型長(zhǎng)度（寬度、點(diǎn)數(shù)）潰瘍程度的評(píng)定應(yīng)激性胃潰瘍模型1.潰瘍指數(shù)： 潰瘍的長(zhǎng)徑大于lmm者，直接測(cè)量其長(zhǎng)度，每lmm為1分； 寬度大于l mm，則計(jì)分加倍 長(zhǎng)度和寬度都小于l mm，按潰瘍點(diǎn)數(shù)計(jì)，每點(diǎn)計(jì)0.5分。將每只動(dòng)物的累計(jì)總分作為該動(dòng)

7、物的潰瘍指數(shù)，在組間進(jìn)行比較。 記分潰瘍程度的評(píng)定應(yīng)激性胃潰瘍模型1.潰瘍指數(shù)： 點(diǎn)狀淤血為1分； 線(xiàn)狀淤血、長(zhǎng)度小于1 mm為2分； 12 mm為3分； 34 mm為4分； 大于5 mm為5分；將全胃分?jǐn)?shù)的總和作為該大鼠的潰瘍指數(shù)。 模型組潰瘍指數(shù)給藥組潰瘍指數(shù)潰瘍抑制百分率 100% 模型組潰瘍指數(shù)潰瘍程度的評(píng)定應(yīng)激性胃潰瘍模型.根據(jù)潰瘍指數(shù)推算： 發(fā)生潰瘍的動(dòng)物數(shù)潰瘍發(fā)生百分率 100% 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)胃潰瘍發(fā)生率高，重復(fù)性較好。中樞抑制劑、抗膽堿藥、制酸藥對(duì)其有明顯對(duì)抗作用。方法簡(jiǎn)單，結(jié)果可靠，迄今仍是研究抗?jié)兯幬锏某Ｓ媚Ｐ?。水溫?yīng)保持恒定。動(dòng)物禁食期間，如自食糞便會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。模型評(píng)

8、價(jià)與注意事項(xiàng)應(yīng)激性胃潰瘍模型應(yīng)激束縛籠的大小應(yīng)與動(dòng)物匹配，松緊度合適。雌性大鼠更易引起應(yīng)激性潰瘍。受試藥物一般在應(yīng)激前3060 min給予。雷尼替丁0.135 g/kg西咪替?。浊柽潆遥?.0 g/kg體重模型評(píng)價(jià)與注意事項(xiàng)應(yīng)激性胃潰瘍模型二、幽門(mén)結(jié)扎法胃潰瘍模型 幽門(mén)結(jié)扎法胃潰瘍模型 通過(guò)手術(shù)結(jié)扎幽門(mén)，使胃內(nèi)胃酸、胃蛋白酶潴留，對(duì)胃粘膜造成侵蝕而形成潰瘍。 成年大鼠，雄雌均可。造模機(jī)制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物幽門(mén)結(jié)扎法胃潰瘍模型1. 給藥3天。實(shí)驗(yàn)前大鼠禁食(24h)不禁水。2. 自胸骨劍突下沿腹中線(xiàn)切開(kāi)腹壁，切口約2-3cm。在左側(cè)肋緣部位用手指輕輕上推暴露胃。3. 在胃幽門(mén)下穿結(jié)扎線(xiàn)（勿傷及血管）將幽

9、門(mén)結(jié)扎，注意勿將鄰近的其他器官、血管結(jié)扎。同時(shí)經(jīng)十二指腸給予受試藥?？p合腹壁切口，用紗布包扎切口。操作方法幽門(mén)結(jié)扎法胃潰瘍模型幽門(mén)結(jié)扎法胃潰瘍模型4. 幽門(mén)結(jié)扎后，停止供水供食，術(shù)后18h處死大鼠，取胃固定、剖檢。5. 沿胃大彎剪開(kāi)胃壁，洗凈胃內(nèi)容物，將胃壁展開(kāi)，胃粘膜面向上用大頭釘固定在蠟板上。 6. 用肉眼或放大鏡觀(guān)察胃粘膜面，記錄每只動(dòng)物產(chǎn)生的潰瘍數(shù)、潰瘍程度、潰瘍面積（或潰瘍指數(shù)）及病變的情況。幽門(mén)結(jié)扎法胃潰瘍模型幽門(mén)結(jié)扎法胃潰瘍模型結(jié)果 形成的潰瘍主要發(fā)生在對(duì)胃液抵抗力較弱的前胃部（瘤胃），多為圓形或橢圓形。但病變較表淺，屬于胃粘膜急性出血性糜爛，與人類(lèi)胃潰瘍的典型病變差距較大。幽門(mén)

10、結(jié)扎法胃潰瘍模型病變?cè)u(píng)價(jià) 1. 潰瘍面積 通過(guò)潰瘍中心量取的最大縱徑和橫徑S=（d1/2）（d2/2） 式中S為潰瘍面積，d1為通過(guò)潰瘍中心量取的最大縱徑，d2為通過(guò)潰瘍中心量取的最大橫徑。 可計(jì)數(shù)*前胃部潰瘍面積，以其總和作為潰瘍指數(shù)。 幽門(mén)結(jié)扎法胃潰瘍模型病變?cè)u(píng)價(jià)2. 潰瘍程度（Okabe法） 在解剖顯微鏡下測(cè)量潰瘍面積，將每只 鼠潰瘍面積的綜合分為5個(gè)等級(jí)作為潰瘍指數(shù)：潰瘍面積總和(mm2)： 1-12 13-25 26-37 38-50 50mm2或穿孔潰瘍指數(shù): 1級(jí) 2級(jí) 3級(jí) 4級(jí) 5級(jí)幽門(mén)結(jié)扎法胃潰瘍模型病變?cè)u(píng)價(jià)根據(jù)潰瘍指數(shù)可進(jìn)一步計(jì)算： 潰瘍抑制百分率= 100%潰瘍發(fā)生百分

11、率=100% 對(duì)照組潰瘍指數(shù)-給藥組潰瘍指數(shù)對(duì)照組潰瘍指數(shù)形成潰瘍動(dòng)物數(shù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)幽門(mén)結(jié)扎法胃潰瘍模型造模方法簡(jiǎn)單，潰瘍發(fā)生快，成功率可達(dá)85%100%；用于觀(guān)察藥物對(duì)潰瘍形成的預(yù)防作用。本法規(guī)定大鼠禁食4872 h。如大鼠體重小于180 g，禁食2448 h，這樣動(dòng)物可以耐受手術(shù)；若大鼠體重超過(guò)180 g，禁食4872 h，可提高胃潰瘍發(fā)生率。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，大鼠單籠飼養(yǎng)，籠底網(wǎng)眼應(yīng)足以使糞便容易漏下，防止動(dòng)物因自食糞便而影響潰瘍形成。 評(píng)價(jià)和注意事項(xiàng)幽門(mén)結(jié)扎法胃潰瘍模型在幽門(mén)結(jié)扎時(shí)，勿影響胃壁血管，勿牽扯幽門(mén)和用器械鉗夾胃壁，干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。結(jié)扎時(shí)間的長(zhǎng)短、室溫可直接影響潰瘍的形成。觀(guān)察藥物對(duì)

12、潰瘍的影響時(shí)，動(dòng)物應(yīng)預(yù)先給藥或同時(shí)給藥，若粗制劑可采用灌胃給藥，應(yīng)確認(rèn)胃內(nèi)藥物已排空后方能結(jié)扎幽門(mén)。粗制劑可在結(jié)扎幽門(mén)的同時(shí)采用十二指腸內(nèi)注入給藥較好。給藥方法也可以連續(xù)給藥5 d，每天1次，第3天給藥后開(kāi)始禁食，末次給藥后3 h手術(shù)結(jié)扎幽門(mén)。評(píng)價(jià)和注意事項(xiàng)幽門(mén)結(jié)扎法胃潰瘍模型三、乙醇誘發(fā)胃損傷模型急性胃潰瘍乙醇法1.破壞胃粘膜屏障的完整性減少胃粘膜中前列腺素、氨基己糖含量；降低胃粘膜血流量；減小胃粘膜跨膜電位差；破壞主細(xì)胞減少粘液分泌；引起胃粘膜微循環(huán)障礙等。2. 細(xì)胞內(nèi)鈣超載和細(xì)胞凋亡。 急性胃潰瘍乙醇法造模機(jī)制成年大鼠，性別不拘。大鼠禁食不禁水24 h；最后1次給予受試藥（給藥體積為1.

13、0 ml/100g體重）后3 h，灌服無(wú)水乙醇1 ml/只；1h后開(kāi)腹取胃，以10%甲醛液胃腔內(nèi)固定后檢查胃粘膜損傷程度。評(píng)價(jià)損傷程度以各組動(dòng)物的潰瘍指數(shù)進(jìn)行組間比較。陽(yáng)性對(duì)照藥可選用雷尼替丁，劑量0.135 g/kg體重，灌胃給予。 急性胃潰瘍乙醇法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物操作步驟 15分鐘即可造成明顯的胃粘膜損傷，且時(shí)間越長(zhǎng)損傷越嚴(yán)重。損傷主要發(fā)生在*腺胃部表現(xiàn)為粘膜充血、水腫、細(xì)胞壞死，伴有糜爛、出血及縱行的條索狀出血壞死。急性胃潰瘍乙醇法結(jié) 果乙醇性胃潰瘍的程度與乙醇的濃度成正比，一般乙醇濃度40以上可引起胃黏膜明顯損傷， 80以上時(shí)出現(xiàn)明顯破潰、壞死，因此制備胃潰瘍模型時(shí)多采用75以上乙醇或無(wú)水乙醇

14、。也可用鹽酸-乙醇(50%乙醇-O.15mmol/L鹽酸)給大鼠灌胃(1ml/100mg)造成潰瘍，稱(chēng)為酸乙醇性潰瘍。 急性胃潰瘍乙醇法模型評(píng)價(jià)及注意事項(xiàng)四、利血平誘發(fā)胃潰瘍模型急性胃潰瘍利血平法 利血平是外周交感神經(jīng)阻滯藥，能耗竭腎上腺素能神經(jīng)末梢內(nèi)兒茶酚胺類(lèi)遞質(zhì)，引起胃粘膜損傷?？蓽p弱腎上腺素能神經(jīng)的功能，使迷走神經(jīng)興奮性相對(duì)升高，胃酸分泌增加，胃及血管平滑肌收縮加強(qiáng)；可耗竭中樞及外周神經(jīng)以及其他組織的多巴胺，使多巴胺的細(xì)胞保護(hù)作用減弱；可減少胃粘膜NO含量，降低胃粘膜的抗損傷能力，從而引起胃潰瘍。 急性胃潰瘍利血平法造模機(jī)制成年小鼠，雄雌均可。 動(dòng)物禁食不禁水24 h后，灌胃給予受試藥后

15、1 h，腹腔注射利血平5 mg/kg體重，18 h后處死動(dòng)物，取胃按上述方法用10%甲醛液固定，沿胃大彎剪開(kāi)胃，平鋪于白紙上，觀(guān)察潰瘍發(fā)生情況。急性胃潰瘍利血平法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物操作步驟損傷主要發(fā)生在腺胃部，可呈現(xiàn)條索狀出血點(diǎn)、瘀血斑或糜爛灶。利血平的劑量不宜過(guò)大，否則動(dòng)物容易死亡。給利血平后處死動(dòng)物的最佳時(shí)間，可根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定。該模型的穩(wěn)定性與動(dòng)物體質(zhì)、禁食時(shí)間、利血平劑量、室溫等因素有關(guān)，應(yīng)盡量控制實(shí)驗(yàn)條件一致。陽(yáng)性藥對(duì)照可以選用雷尼替丁0.135 g/kg體重，或西咪替?。浊柽潆遥?.0 g/kg體重，均灌胃給予。急性胃潰瘍利血平法結(jié)果及評(píng)價(jià)五、吲哚美辛誘發(fā)胃潰瘍模型 急性胃潰瘍利血平法造

16、模原理環(huán)氧合酶是花生四烯酸合成前列腺素的關(guān)鍵限速酶。前列腺素E通過(guò)增加粘液和碳酸氫鹽分泌、促進(jìn)粘膜血流增加、細(xì)胞保護(hù)等機(jī)制，在維持胃粘膜防御和修復(fù)功能中起重要作用。環(huán)氧合酶受抑制，可使胃粘膜生理性前列腺素E合成減少。大劑量吲哚美辛顯著抑制環(huán)氧合酶活性，致使胃粘膜防御因素減弱而形成潰瘍。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重160180 g大鼠，雌雄各半。操作方法大鼠禁食不禁水24h，皮下注射吲哚美辛2030mg/kg體重；7h后處死動(dòng)物，觀(guān)察潰瘍情況并測(cè)量潰瘍指數(shù)。潰瘍主要位于腺胃部，表現(xiàn)為與長(zhǎng)軸平行的線(xiàn)狀、點(diǎn)狀淤血。陽(yáng)性對(duì)照藥可選雷尼替丁，灌胃給予。吲哚美辛粉用5%碳酸氫鈉溶液配（10 mg/ml），再用蒸餾水稀釋

17、成2mg/ml。此溶液為等張，pH（7.58.0）。模型評(píng)價(jià)與注意事項(xiàng)本模型胃潰瘍發(fā)生率高，重復(fù)性好，缺點(diǎn)是潰瘍比較表淺。胃損傷程度與動(dòng)物體質(zhì)、禁食時(shí)間、吲哚美辛劑量、給予后的時(shí)間等有關(guān)。觀(guān)察藥物的抗?jié)冃Ч话銘?yīng)預(yù)先給藥，給藥后3060 min再給吲哚美辛。可采用阿司匹林口服或腹腔注射（150 mg/kg體重）復(fù)制類(lèi)似的胃潰瘍模型。第四節(jié)慢性胃潰瘍動(dòng)物模型慢性胃潰瘍動(dòng)物模型一、醋酸誘發(fā)慢性胃潰瘍模型慢性胃潰瘍動(dòng)物模型 在大鼠胃漿膜面浸漬或在漿膜下注射一定量的醋酸，由于醋酸的腐蝕作用使胃粘膜損傷而造成潰瘍。潰瘍呈圓形或卵圓形，深?？衫奂拔副诟鲗樱斐纱┩感詽?。潰瘍的形狀、部位及組織學(xué)上胃壁組

18、織的壞死和修復(fù)情況均與人類(lèi)潰瘍類(lèi)似。潰瘍愈合過(guò)程緩慢，常出現(xiàn)反復(fù)，是一種慢性頑固性潰瘍。該潰瘍模型多用于研究藥物對(duì)慢性潰瘍愈合過(guò)程的影響。 成年大鼠，性別不限。慢性胃潰瘍動(dòng)物模型造模機(jī)制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物1. 胃粘膜注射法2. 胃漿膜浸蝕法 慢性胃潰瘍動(dòng)物模型操作方法1. 胃粘膜注射法大鼠禁食24h，自由飲水，乙醚麻醉，常規(guī)消毒開(kāi)腹，暴露胃。在腺胃部前壁的竇體交界處，用小號(hào)注射針在漿膜下注入30%醋酸0.03ml，然后緩慢出針，勿使醋酸溢出。用生理鹽水清洗胃壁創(chuàng)面，將胃送回腹腔，縫合腹壁創(chuàng)口。手術(shù)后常規(guī)喂養(yǎng)，術(shù)后24h按體重隨機(jī)分組，模型組灌胃給予蒸餾水，給藥組給予不同劑量受試藥物，每天1次，連續(xù)給予1

19、0 d。術(shù)后第11天處死動(dòng)物，剖腹，結(jié)扎幽門(mén)及賁門(mén)，胃內(nèi)注入10%甲醛液10ml，將胃放入同一濃度甲醛液中再固定10min，使胃的內(nèi)外層固定以便測(cè)量。慢性胃潰瘍動(dòng)物模型操作方法2. 胃漿膜浸蝕法用直徑5.5 m的圓形濾紙片蘸滿(mǎn)冰醋酸，貼在腺胃部前壁漿膜面30 s，同法重復(fù)1次，然后用適量生理鹽水清洗掉冰醋酸，將胃送回腹腔，縫合腹壁創(chuàng)口。也可在腺胃部前壁的竇體交界處將內(nèi)直徑5mm、長(zhǎng)30mm的玻璃管垂直放置于漿膜面上，向管腔內(nèi)加入冰醋酸0.2ml，使其接觸漿膜面1.5min，然后用生理鹽水棉簽蘸去冰醋酸。慢性胃潰瘍動(dòng)物模型操作方法術(shù)后35 d可形成潰瘍，潰瘍一般呈圓形、卵圓形或不規(guī)則形，中心凹陷

20、，四周微隆起，密布毛細(xì)血管。已愈合的潰瘍，周?chē)杂新∑?，表面紅潤(rùn)，可見(jiàn)愈合的痕跡。一般術(shù)后第5日潰瘍形成最為嚴(yán)重，以后緩慢愈合，但病變有反復(fù)。直徑6mm以下的潰瘍40天可完全愈合;大的潰瘍可殘留80-200天。慢性胃潰瘍動(dòng)物模型病 變大鼠慢性胃潰瘍模型慢性胃潰瘍模型成功率高，重現(xiàn)性好，潰瘍深而大，*與人類(lèi)的慢性潰瘍極為相似，因而可作為篩選治療慢性胃潰瘍藥物的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。一般促進(jìn)粘膜修復(fù)藥、抗胃蛋白酶藥對(duì)醋酸性潰瘍有明顯的促進(jìn)愈合作用；制酸藥、抗膽堿藥也具有促進(jìn)潰瘍愈合效果。慢性胃潰瘍動(dòng)物模型評(píng)價(jià)和注意事項(xiàng)操作過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格消毒，籠具也應(yīng)消毒，以免術(shù)后感染影響藥物的觀(guān)察治療。注射的部位要求一致，必需將

21、醋酸注入到漿膜下，切勿穿透粘膜注入胃腔內(nèi)，發(fā)現(xiàn)有誤者應(yīng)棄去以免影響結(jié)果。潰瘍?cè)畹拇笮∨c注射醋酸的量有關(guān)，醋酸的量要準(zhǔn)確，否則形成的潰瘍差異較大。慢性胃潰瘍動(dòng)物模型評(píng)價(jià)和注意事項(xiàng)二、幽門(mén)螺桿菌感染性胃潰瘍模型 慢性胃潰瘍動(dòng)物模型造模原理Hp含有大量尿素酶，能迅速分解食物中尿素產(chǎn)生氨，氨中和胃酸使局部pH值增高，使細(xì)菌不被胃酸殺滅。Hp能分泌產(chǎn)生細(xì)胞毒素，引起細(xì)胞損傷，使細(xì)胞空泡化，導(dǎo)致胃粘膜完整性破壞，從而形成胃炎及胃、十二指腸潰瘍。單純給動(dòng)物灌服一定量的Hp菌液，只能在感染動(dòng)物的胃粘膜造成炎癥反應(yīng)，很少引起胃粘膜破損、潰瘍。因此，多在動(dòng)物胃潰瘍模型的基礎(chǔ)上，使動(dòng)物感染Hp。常用動(dòng)物有小鼠、大鼠

22、、沙土鼠等。操作方法BALB/c小鼠：在胃大彎竇部粘膜掛上帶有腐蝕性藥物的棉線(xiàn)，造成胃潰瘍，在此基礎(chǔ)上感染幽門(mén)螺桿菌，加重病變程度。SD大鼠：先用熱烙法復(fù)制胃潰瘍，在此基礎(chǔ)上灌胃給予Hp菌液。沙土鼠：動(dòng)物禁食禁水1 d，第2天灌胃給予50%乙醇0.3 ml。之后繼續(xù)禁食禁水，第2天灌胃給予HP菌液上、下午各1次，隔日上午再灌胃給予菌液1次。第五節(jié)急性和慢性肝損傷動(dòng)物模型常用的肝損傷物質(zhì)四氯化碳D-半乳糖胺 硫代乙酰胺 刀豆蛋白A 一、四氯化碳急性肝損傷模型CCl4是無(wú)色透明液體，不溶于水。在肝內(nèi)CCl4經(jīng)NADPH和肝微粒體細(xì)胞色素P450混合功能氧化酶的作用，生成活潑的三氯甲基自由基（CCl

23、3）和氯自由基。這些自由基能與細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞膜上大分子發(fā)生共價(jià)結(jié)合，引起富含不飽和脂肪酸的生物膜發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化，導(dǎo)致膜結(jié)構(gòu)和功能完整性的破壞，肝細(xì)胞損傷壞死。三氯甲基自由基還能抑制細(xì)胞膜和微粒體膜上鈣泵的活性，使Ca2+內(nèi)流增加，從而引起細(xì)胞中毒死亡；三氯甲基自由基能與蛋白質(zhì)形成共價(jià)鍵，損害線(xiàn)粒體使NADH及ATP在肝內(nèi)生成減少，脂肪酸氧化受抑制，影響肝臟能量生成障礙，并使三酰甘油和脂肪酸在肝細(xì)胞內(nèi)蓄積。造模機(jī)制結(jié) 果 大鼠用CCl4 0.2ml/100g體重做皮下注射；用CCl4 0.5ml/kg體重一次性口服。根據(jù)所用CCl4劑量和時(shí)間的不同，肝臟的損傷程度不同；一般在給予CCl4后1624

24、 h血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）活性升高，并能反映肝損傷的程度；形態(tài)學(xué)上表現(xiàn)為肝小葉中央?yún)^(qū)壞死和脂肪變性。操作步驟1CCl4肝損傷模型是最常用的急性肝損傷模型，造模方法簡(jiǎn)單，成功率高，重復(fù)性好，價(jià)格低廉。2CCl4劑量不宜過(guò)大，以免造成動(dòng)物中毒死亡。3CCl4是無(wú)色澄清的有毒液體，難溶于水，一般用花生油、橄欖油、豆油等植物油混合成所需濃度。4用CCl4復(fù)制肝損傷模型的主要缺點(diǎn)是，不同動(dòng)物個(gè)體肝損傷的程度差異較大。小鼠接受CCl4后肝臟病理學(xué)改變與血清ALT等生化指標(biāo)改變的相關(guān)性不如大鼠好。5CCl4可從呼吸道、皮膚吸收，對(duì)人體有毒性，注意防護(hù)。注意事項(xiàng)與模型評(píng)

25、價(jià)二、D-半乳糖胺急性肝損傷模型D-半乳糖胺本身并無(wú)毒性，也不直接損傷肝細(xì)胞。D-半乳糖胺是肝細(xì)胞磷酸尿嘧啶核苷的干擾劑，進(jìn)入體內(nèi)后與磷酸尿苷結(jié)合，形成磷酸尿苷-半乳糖胺復(fù)合物，致使磷酸尿苷耗竭，從而使依賴(lài)其生物合成的核酸、糖蛋白、脂糖等物質(zhì)的合成受抑制，限制了細(xì)胞器及酶的生成和補(bǔ)充，細(xì)胞器、生物膜受損、鈣離子內(nèi)流，從而造成肝細(xì)胞損傷。D-半乳糖胺引起細(xì)胞膜損傷可能與細(xì)胞膜中糖成分的改變有關(guān)，即已糖代替了中性糖介入細(xì)胞膜，導(dǎo)致膜分子結(jié)構(gòu)發(fā)生變化。二、D-半乳糖胺急性肝損傷模型D-半乳糖胺致急性肝損傷的劑量取決于動(dòng)物狀態(tài)等因素，劑量一般按500850 mg/kg體重，也有用200400 mg/k

26、g體重，一次性腹腔注射，224 h出現(xiàn)不同程度的肝損傷。如劑量超過(guò)1000 mg/kg體重時(shí)，常造成廣泛性肝壞死或動(dòng)物中毒死亡。一般于注射D-半乳糖胺后2436 h血清ALT、AST活性升高，血清膽紅素總量增加，血清總蛋白和清蛋白含量明顯降低，鏡檢可見(jiàn)肝細(xì)胞變性、壞死，組織化學(xué)顯示肝細(xì)胞糖原和RNA減少，脂肪堆積。二、D-半乳糖胺急性肝損傷模型方法簡(jiǎn)便，成功率高，重復(fù)性好，其病變僅限于肝臟，在引起肝壞死的劑量下，不引起其他臟器病變，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員安全。因此，D-半乳糖胺肝損傷模型是目前公認(rèn)的研究病毒性肝炎發(fā)病機(jī)制和藥物治療效果的較好模型。D-半乳糖胺與CCl4所致肝損傷的組織學(xué)改變明顯不同。CCl

27、4損傷主要表現(xiàn)在肝小葉中央靜脈周?chē)鷧^(qū)大量肝細(xì)胞壞死和出血，脂肪變性十分明顯；而D-半乳糖胺引起的損傷則呈彌漫性、多發(fā)性片狀壞死，脂肪變性不如CCl4明顯，細(xì)胞內(nèi)有大量PAS染色陽(yáng)性的毒性顆粒，嗜酸性小體較多見(jiàn)，與人類(lèi)病毒性肝炎的肝損傷類(lèi)似。四、刀豆蛋白A急性肝損傷模型Con A是一種植物蛋白，是可活化T細(xì)胞的絲裂原。Con A進(jìn)入小鼠體內(nèi)后可引起與人類(lèi)類(lèi)自身免疫性肝炎相似的肝損害。Con A誘發(fā)肝損害主要與下列因素有關(guān)：活化T淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞因子釋放，如TNF-、IL-2、IFN-等與早期肝細(xì)胞損害關(guān)系密切其他如粘附分子、趨化因子、一氧化氮、肝細(xì)胞凋亡等也參與了Con A所致肝損傷

28、的發(fā)病過(guò)程。四、刀豆蛋白A急性肝損傷模型小鼠尾靜脈注射Con A 3 h后，即見(jiàn)血漿ALT、AST開(kāi)始升高，8 h后升高明顯，升高的趨勢(shì)和速度與Con A劑量呈正相關(guān)。當(dāng)給予Con A劑量為20 mg/kg體重，2 h后肉眼可見(jiàn)肝臟淤血、變暗，并逐漸加重，8 h后逐漸減輕。光鏡下可見(jiàn)肝內(nèi)大量T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，在門(mén)管區(qū)尤為明顯，部分門(mén)管區(qū)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)呈“套袖”樣改變，肝竇內(nèi)紅細(xì)胞淤積。注射后8 h可見(jiàn)肝細(xì)胞核破裂和凋亡小體等，肝內(nèi)有點(diǎn)狀、片狀肝細(xì)胞壞死，壞死區(qū)內(nèi)見(jiàn)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。四、刀豆蛋白A急性肝損傷模型本模型是由淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的肝損害模型，很好地模擬了人類(lèi)病毒性肝炎、自身免疫性肝病等疾病，是研究這

29、些肝病發(fā)病機(jī)制和治療藥物的較理想模型。Con A所致肝損害，無(wú)需預(yù)先致敏，一次性尾靜脈注射后2 h即可見(jiàn)肝細(xì)胞損害，8 h肝損害達(dá)高峰，制作快速、簡(jiǎn)便。Con A致肝損害具有劑量依賴(lài)性，選用劑量0.1530 mg/kg體重時(shí)，肝損害程度隨藥物劑量加大而加重。當(dāng)劑量達(dá)20 mg/kg體重以上時(shí)，8 h內(nèi)出現(xiàn)小鼠死亡。病變具有肝臟特異性，Con A靜脈注射后8 h，組織病理學(xué)檢查未發(fā)現(xiàn)肺、腎、脾、心等肝外器官損傷。五、四氯化碳慢性肝損傷模型 造模原理 四氯化碳反復(fù)多次給藥，易造成慢性肝中毒，致使肝細(xì)胞變性、壞死及纖維組織增生，甚至發(fā)生肝硬化。由于肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，靜脈回流受阻，肝靜脈與門(mén)靜脈高壓，促

30、進(jìn)肝內(nèi)動(dòng)靜脈吻合支形成，造成肝細(xì)胞供血減少，血清清蛋白降低，血清轉(zhuǎn)氨酶活性升高。由于肝內(nèi)纖維組織增生，血清總羥脯氨酸含量下降。五、四氯化碳慢性肝損傷模型操作方法每周皮下注射遞增濃度的CCl4（劑量為0.2 ml/kg）1次，濃度由低向高逐漸增加，依次為5%、10%、20%和30%，每23周遞增一個(gè)濃度，連續(xù)3個(gè)月。末次注射CCl4 48h后，測(cè)定血清ALT、AST活性、血清總蛋白、清蛋白及總羥脯氨酸含量。取出大鼠肝臟，稱(chēng)重，計(jì)算肝臟系數(shù)（g/100 g），并對(duì)肝臟進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。藥物作用的觀(guān)察多采用預(yù)防給藥，即從注射CCl4之前34 d開(kāi)始，每日1次，連續(xù)3個(gè)月。陽(yáng)性對(duì)照藥可用聯(lián)苯雙酯0.

31、15 g/kg體重。五、四氯化碳慢性肝損傷模型注意事項(xiàng)1所用CCl4濃度開(kāi)始不宜過(guò)高，否則易引起動(dòng)物死亡；CCl4濃度增加的速度可根據(jù)動(dòng)物狀態(tài)掌握，當(dāng)大部分動(dòng)物狀態(tài)不佳并出現(xiàn)死亡時(shí)，不應(yīng)增加濃度。2采用頸背部皮下注射CCl4，個(gè)別動(dòng)物可出現(xiàn)局部炎癥和硬結(jié)，因此應(yīng)每日更換注射部位第六節(jié) 肝纖維化和肝硬化動(dòng)物模型肝纖維化 肝纖維化是指各種致肝臟損傷因素長(zhǎng)期反復(fù)作用于肝臟，引起肝細(xì)胞變性、壞死和炎癥，在修復(fù)過(guò)程中導(dǎo)致ECM異常增多和過(guò)度沉積的病理過(guò)程。 肝纖維化的形成，主要是由于肝星狀細(xì)胞激活，ECM成分生成過(guò)多，降解相對(duì)不足，膠原等ECM在肝內(nèi)大量沉積所致。在我國(guó)肝纖維化和肝硬化的主要病因是病毒性

32、肝炎、血吸蟲(chóng)病、酒精中毒、工業(yè)毒物、藥物、膽汁淤積、循環(huán)障礙和代謝紊亂等。肝纖維化與肝硬化的區(qū)別？ 肝細(xì)胞彌漫性變性、壞死 肝內(nèi)纖維組織增生 肝細(xì)胞結(jié)節(jié)狀再生這三種病變反復(fù)交錯(cuò)進(jìn)行肝內(nèi)血循環(huán)改建假小葉形成肝硬化一、四氯化碳肝纖維化肝硬化模型 如果長(zhǎng)期反復(fù)多次給予CCL4 ，可導(dǎo)致肝內(nèi)纖維增生，逐漸形成肝硬化。 該模型較為可靠，復(fù)制時(shí)間較短，肝纖維化進(jìn)展穩(wěn)定，適合于肝纖維化發(fā)生、發(fā)展過(guò)程的動(dòng)態(tài)觀(guān)察和研究，是目前國(guó)內(nèi)外常采用的動(dòng)物模型。 一、四氯化碳肝纖維化肝硬化模型操作方法1皮下注射40%50% CCl4植物油溶液，首次5 ml/kg體重，以后2 ml/kg體重，每周2次，共10周。動(dòng)物自由飲水

33、進(jìn)食。2制備肝臟組織石蠟切片，HE和膠原纖維染色，進(jìn)行病理學(xué)檢查。一、四氯化碳肝纖維化肝硬化模型結(jié)果第2周：肝小葉中央?yún)^(qū)出現(xiàn)片狀肝細(xì)胞變性壞死，未見(jiàn)明顯纖維組織增生。第4周：除肝細(xì)胞變性壞死外，肝內(nèi)開(kāi)始形成較薄的纖維間隔。第6周：肝臟纖維間隔進(jìn)一步增厚，有假小葉形成。第8周：肝組織正常結(jié)構(gòu)破壞，形成厚的纖維間隔，并分割形成假小葉。實(shí)驗(yàn)中大鼠成活率在60%左右。二、四氯化碳復(fù)合因素模型造模原理采用皮下注射CCl4，喂飼玉米面、高脂、高膽固醇食物和飲用酒精等復(fù)合因素復(fù)制肝纖維化肝硬化模型。玉米面蛋白質(zhì)含量只能滿(mǎn)足大鼠正常蛋白質(zhì)需要量的一半，且缺乏色氨酸和蛋氨酸，這些氨基酸均屬于趨脂物質(zhì)，它們的缺乏

34、會(huì)導(dǎo)致肝脂肪變，以致纖維化。飼料中加入膽固醇又增加機(jī)體對(duì)膽堿的需要量，酒精也增加對(duì)膽堿的需要量，從而加速肝脂肪變的發(fā)展。高脂食物有利于形成肝細(xì)胞脂肪變性，脂肪變性的肝細(xì)胞對(duì)CCl4損傷作用敏感。酒精能增強(qiáng)CCl4的毒性作用，可直接引起肝細(xì)胞線(xiàn)粒體損傷。復(fù)合因素造成大量肝細(xì)胞壞死，肝網(wǎng)狀支架塌陷，纖維組織增生，最后發(fā)展為肝硬化。二、四氯化碳復(fù)合因素模型結(jié)果大鼠體重下降。第2周時(shí)肝細(xì)胞變性、壞死，表現(xiàn)為小葉中心出現(xiàn)小片狀肝細(xì)胞氣球樣變、脂肪變性、壞死和間質(zhì)輕微炎癥反應(yīng)，鏡下未見(jiàn)明顯纖維增生。血清ALT、AST活性升高，血清清蛋白含量減少，肝臟羥脯氨酸含量增加。第4周為纖維增生改變，除肝細(xì)胞變性壞死

35、外，肝內(nèi)開(kāi)始有纖維間隔形成。第6周時(shí)為假小葉形成改變，肝臟纖維間隔進(jìn)一步增寬，肝組織正常結(jié)構(gòu)被破壞，有假小葉形成，導(dǎo)致肝硬化。二、四氯化碳復(fù)合因素模型模型評(píng)價(jià)1CCl4加高膽固醇和酒精飲食所致大鼠肝纖維化，是目前國(guó)內(nèi)外常采用的動(dòng)物模型。該模型可靠，復(fù)制時(shí)間較短，肝纖維化進(jìn)展穩(wěn)定，適合于肝纖維化、肝硬化發(fā)生發(fā)展過(guò)程的動(dòng)態(tài)研究，是值得應(yīng)用的一種模型。2如果動(dòng)物體重較前一次下降30%以上，可停止注射CCl4 1次，以減少動(dòng)物死亡率。壞死后性肝硬化門(mén)脈性肝硬化（假小葉）靈長(zhǎng)類(lèi)肝小葉A：正常肝小葉 (Mallory染色)；B，C：肝硬化(Masson trichrome)第九節(jié) 胰腺炎模型發(fā)病機(jī)制胰液內(nèi)

36、無(wú)活性 有活性的 的胰蛋白酶原 胰蛋白酶 引起胰腺自身消化 其他酶反應(yīng)引起胰蛋白酶被激活的原因：（1）膽汁返流；（2）胰液分泌亢進(jìn)；（3）病毒感染、外傷、藥物等造成腺泡的損傷。膽汁和腸液中的腸激酶激活一、急性胰腺炎模型?；悄懰徕c膽胰管逆行注射法 造模機(jī)制正常情況下主胰管的壓力高于總膽管，膽汁不會(huì)進(jìn)入胰管。但當(dāng)膽總管阻塞時(shí)，膽道內(nèi)的膽汁可被壓入主胰管，引起急性胰腺炎。早期?；悄懰徕c可直接導(dǎo)致胰腺腺泡細(xì)胞或小導(dǎo)管壁的細(xì)胞溶解，進(jìn)一步的損害可能是膽鹽激活胰酶，如胰蛋白酶、磷脂酶等，產(chǎn)生腺泡自身消化。采用胰管逆行注射法誘發(fā)動(dòng)物急性胰腺炎，是根據(jù)胰管、膽管共同通路和膽汁反流理論，模擬人類(lèi)膽源性胰腺炎的發(fā)

37、病機(jī)制大鼠的膽管和胰管為共同開(kāi)口的管道，解剖上稱(chēng)為膽胰管，從膽胰管上分出68支胰管的分支進(jìn)入胰腺實(shí)質(zhì)。操作方法 大鼠實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水12h，3%戊巴比妥鈉（40mg/kg）腹腔注射麻醉。上腹正中切口進(jìn)入腹腔，提起胃和十二指腸，顯露出胰腺，辨認(rèn)膽胰管走向，于肝門(mén)處用微型無(wú)損傷動(dòng)脈夾夾閉膽總管，以防藥液逆流進(jìn)入肝臟。用4號(hào)鈍針頭朝胰腺方向穿刺十二指腸前壁，在其漿膜下潛行通過(guò)十二指腸乳頭穿入膽胰管，用手指固定針頭，緩慢（約2min）注入3.5%或5%牛磺膽酸鈉溶液1ml/kg體重。操作方法 另一種穿刺方法是，用4號(hào)針頭緊貼膽胰管匯入十二指腸處，自腸外穿刺膽胰管。注射完畢拔除針頭后繼續(xù)按住穿刺處約1m

38、in。檢查無(wú)漏膽，逐層關(guān)腹。假手術(shù)組僅翻動(dòng)胰腺和十二指腸后關(guān)腹。術(shù)后15 處死動(dòng)物，解剖時(shí)肉眼觀(guān)察胰腺大體變化。取胰腺等組織，10%中性緩沖甲醛液固定，常規(guī)制備石蠟切片，在光鏡下觀(guān)察胰腺等臟器的改變。取血測(cè)定血清淀粉酶水平。結(jié) 果 術(shù)后15 h血清淀粉酶水平明顯升高。肉眼觀(guān)察，胰腺充血腫脹，包膜緊張，出現(xiàn)不同程度出血壞死，腹腔內(nèi)可見(jiàn)血性腹水，胰腺周?chē)缶W(wǎng)膜和腸系膜出現(xiàn)淡黃色的皂化斑。胃腸道明顯水腫，腎臟明顯增大，顏色晦暗。光鏡檢查，于術(shù)后15 h可見(jiàn)胰腺組織大片出血、凝固性壞死及脂肪壞死，壞死區(qū)之間有大量中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤(rùn)，表現(xiàn)為急性出血壞死性胰腺炎。模型評(píng)價(jià)本模型在病因、發(fā)病機(jī)制及胰腺病變等方面與人類(lèi)急性胰腺炎相似，是目前被公認(rèn)的、比較常用的復(fù)制急性胰