醫(yī)學精品課件xb三、細胞工程的技術基礎

1、第三章細胞工程的技術基礎2021/7/15 星期四1第一節(jié)基本設備第二節(jié)基本技術2021/7/15 星期四2第一節(jié)基本設備一設備與器材二器材處理2021/7/15 星期四3一、設備與器材 大型設備類：無菌室、超凈工作臺、無菌箱、CO2培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、實體鏡、高速離心機、超速低溫離心機、冰箱、超低溫冰箱、液氮裝置。2021/7/15 星期四42021/7/15 星期四52021/7/15 星期四6培養(yǎng)箱2021/7/15 星期四72021/7/15 星期四82021/7/15 星期四9光照培養(yǎng)室2021/7/15 星期四102021/7/15 星期四11顯微鏡室2021/7/15 星期四12

2、2021/7/15 星期四132021/7/15 星期四142021/7/15 星期四152021/7/15 星期四162021/7/15 星期四172021/7/15 星期四182021/7/15 星期四19 消毒滅菌設備：蒸汽壓力消毒器 、電熱干燥箱、過濾除菌裝置 、離子發(fā)生器、耐酸耐堿容器、吸管自動沖洗器、超聲波清洗器；2021/7/15 星期四20滅菌室2021/7/15 星期四212021/7/15 星期四222021/7/15 星期四232021/7/15 星期四242021/7/15 星期四25 配液用具：水純化裝置 、離子交換樹脂裝置、電子天平、磁力攪拌器、蒸發(fā)器等； 制備、培

3、養(yǎng)、保存細胞用品：解剖器具、80200目尼龍網或不銹鋼網、血細胞計數板、培養(yǎng)器皿、細胞培養(yǎng)板（不同孔數）、渦流混懸器、恒溫水浴振蕩器、細胞凍存管、玻璃安瓿、真空低溫干燥器、厚質玻璃容器等。2021/7/15 星期四262021/7/15 星期四272021/7/15 星期四282021/7/15 星期四292021/7/15 星期四302021/7/15 星期四312021/7/15 星期四322021/7/15 星期四332021/7/15 星期四342021/7/15 星期四35二、器材處理 玻璃器皿的清洗：浸泡刷洗浸酸沖洗 橡膠用品的處理：沖洗堿煮沖洗浸酸沖洗蒸煮清洗除菌濾器的處理：高壓

4、滅菌塑料器皿的清洗：沖洗堿浸沖洗酸浸沖洗漂洗金屬器械的清洗：汽油去脂洗凈酒精擦蒸煮或高壓滅菌包裝：包裝紙、牛皮紙、硫酸紙、棉布、鋁飯盒、玻璃等，避免消毒后再污染；消毒滅菌：干烤、高壓蒸汽滅菌、濾過除菌、紫外線、射線、（甲醛）熏蒸消毒、化學消毒劑、抗生素消毒滅菌。2021/7/15 星期四36一、無菌技術1.各種滅菌方法及其適用范圍A濕熱滅菌法（高壓蒸汽滅菌法、常壓蒸汽滅菌法、間歇滅菌法）B 干熱滅菌法（火焰滅菌、干熱滅菌）C電離輻射滅菌D 紫外線殺菌E過濾除菌F化學殺菌G熏蒸滅菌法第二節(jié)基本技術2021/7/15 星期四372.無菌操作過程A 清洗 玻璃器皿的清洗 實驗材料的清洗B 滅菌 培養(yǎng)

5、材料的滅菌以藥劑滅菌法為主主要考慮：藥劑的滅菌效果、材料對藥劑的耐受力2021/7/15 星期四382021/7/15 星期四392021/7/15 星期四40 培養(yǎng)基滅菌高壓蒸汽滅菌過濾滅菌C 接種經過表面滅菌的材料，按不同的要求，經過剪切、整理后，移植到培養(yǎng)基上培養(yǎng)的過程。接種室（無菌操作室）的滅菌接種臺的滅菌工作人員注意事項2021/7/15 星期四413.實驗室生物安全概念：指那些用以防止發(fā)生病原體或毒素無意中暴露及意外釋放的保護原則、技術及實踐。傳染性微生物的危險程度分4級1級、2級、3級、4級生物安全水平（BSL）相應的也分為4級BSL 1（基礎實驗室）BSL 2（基礎實驗室）BS

6、L 3（防護實驗室）BSL 4（最高防護實驗室）2021/7/15 星期四42二、細胞制備： 機械分散法 淋巴細胞分離：肝素抗凝血劑+Hanks 稀釋 分級分離 吸取 加其它培養(yǎng)液單細胞懸 胰蛋白酶 細胞 T、B細胞分離：尼龍棉柱過濾 B細胞粘附 液的制備 酶消化法 分離法 T細胞過濾 膠原酶 CD4/CD8細胞分離：SephadaG-10柱或 流式細胞分選儀 螯合劑分散法 單核 / 巨噬細胞分離淋巴細胞不粘， （與玻面粘附） 單核 / 巨噬細胞粘附2021/7/15 星期四43三、細胞計數法：血細胞計數板或器 細胞分裝；四、細胞培養(yǎng)與傳代五、細胞形態(tài)學檢查法： 一般形態(tài)觀察利用倒置顯 普通染色觀察（Giemsa染核） 微鏡觀察法 特殊染色法：DNA（Feulgen反應）、 DNA- RNA （甲基-派洛寧）、 糖（PAS）、脂（蘇丹紅II）、 線粒體（詹納斯綠B液）、 葉綠體（吖啶橙） 2021/7/15 星期四44 吖啶橙：DNA、RNA利用熒光顯微鏡觀察法 掃描 免疫熒光染色 透射利用電子顯微鏡觀察法：掃描或透射。六、無血清培養(yǎng)液的設計和合成七、細胞的凍存、復蘇與運輸八、細胞培養(yǎng)的放大試驗（生產）九、細胞培養(yǎng)時污染的檢測、排除2021/7/15 星期四45本章內容到此結束謝謝大家歡迎研討2021/7/15 星期四46【復習思考題】常用的滅菌方