臨床微生物學檢驗和抗菌藥物敏感性試驗進展

1、關于臨床微生物學檢驗與抗菌藥物敏感性試驗進展第一張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月第一節(jié) 概述一、現(xiàn)代感染性疾病的特點感染性疾病（infectious diseases）是指各種生物性病原(病原微生物、寄生蟲)寄生人體所引起的傳染性感染疾病和非傳染性感染疾病。 （一）疾病譜發(fā)生變遷，發(fā)現(xiàn)了很多引起傳染病的新病原 體，如嗜肺軍團菌、漢坦病毒、埃博拉病毒、尼巴病毒、朊病毒、SARS冠狀病毒等。而且已經(jīng)絕跡的舊傳染病又死灰復燃，如梅毒、結核病、霍亂等。 （二）多重耐藥株的出現(xiàn)，導致抗感染治療的困難（三）器官移植、抗腫瘤化療和放療的開展，減弱了機體的 免疫防御功能，造成醫(yī)院感染及條件性致病菌感

2、染的增加 上一頁下一頁返回第二張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月二、感染性疾病的實驗診斷方法（一）一般實驗室檢查 1.血常規(guī)檢查 2.C反應蛋白(CRP) 3.降鈣素原(PCT), PCT是嚴重細菌性炎癥和真菌感染的特異性指標，而且也是膿毒癥和炎癥活動有關的多臟器衰竭的可靠指標。如果給予足夠的刺激，免疫抑制的患者將產(chǎn)生PCT，PCT不僅是用于鑒別診斷的急性指標，而且是監(jiān)控炎癥活動的參數(shù)。 （二）病原學實驗診斷 感染性疾病的病原體的實驗診斷方法包括病原體的分離培養(yǎng)、病原體特異性抗原抗體的檢測、病原體核酸檢測等多種方法。上一頁下一頁返回第三張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月第二節(jié)細

3、菌感染的實驗診斷一、標本的采集與培養(yǎng)方法（一）標本采集原則： 1.采集標本時應無菌操作，盡量避免污染。盛放標本的容 器和培養(yǎng)基應預先進行無菌處理并貼好標簽。 2.應選擇感染部位或病變明顯的部位采集標本，避免周圍 組織、器官或分泌物中的雜菌污染。 3.根據(jù)病原體在感染性疾病的不同時期的體內(nèi)分布和排出 部位選擇在最佳時間采集適宜標本。 4.對于懷疑細菌感染的標本，盡量在抗生素使用前采集。 5.標本采集后應及時送檢。大多數(shù)細菌標本應冷藏送檢， 但是某些細菌，如腦膜炎奈瑟菌對低溫和干燥極其敏感 ，應注意保溫，盡量床旁接種，并預溫相應的培養(yǎng)基。上一頁下一頁返回第四張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6

4、月（二）常用標本的采集及培養(yǎng)方法1.血液 血培養(yǎng)是用于檢測細菌、真菌等患者血液中的微生 物的方法。 1). 采血時機：通常細菌從感染部位入血1小時后，引起機體發(fā)熱，因此，如果能夠準確預測病人發(fā)熱時間時，在發(fā)熱前半小時至一小時采血最好。當無法準確預測病人發(fā)熱時間時，可在發(fā)熱時采血。細菌性心內(nèi)膜炎患者可隨時采血。2). 采血量：成人每次每瓶最好采血8-10ml，小兒每次每瓶可采血1-5ml。3). 采血次數(shù)：成人每天采血2-3次，通常間隔半小時或1小時，在患者不同部位采血。4). 培養(yǎng)方法：通常每次將血液分別加入需氧和厭氧兩種培養(yǎng)瓶中35C同時進行培養(yǎng)。每天觀察結果。3天后如果無菌生長則報告“培養(yǎng)

5、48小時無菌生長”； 7天后如果無菌生長則報告“培養(yǎng)7天無菌生長”。上一頁下一頁返回第五張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月2.尿液 正常人體內(nèi)，膀胱中的尿液是無菌的，尿液經(jīng)尿道排出時，受尿道細菌的污染而會混有細菌，但取中段尿時，細菌數(shù)不會超過103CFU/ml。 1).標本采集：清潔外陰部位，用無菌容器留取中段尿10ml。2).培養(yǎng)方法：尿液一定要做定量培養(yǎng)，通常取1ul或10ul尿 液進行培養(yǎng)，報告時要報告1ml尿液中的菌落數(shù)，當取 1ul尿液培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)無菌生長，要報告“小于1000 CFU/ml”。3).結果解釋：通常引起泌尿系統(tǒng)感染的細菌有大腸埃希菌、 肺炎克雷伯氏菌等腸桿菌科細

6、菌及腸球菌等革蘭氏陽性球 菌。90%以上的泌尿系統(tǒng)感染為單一細菌感染，只有很少 量患者為兩種混合細菌感染，當培養(yǎng)出三種以上的細菌 時，可視為標本污染。當培養(yǎng)出大于105 CFU/ml的細菌時， 通常認為可能是尿路感染或腎盂腎炎，當培養(yǎng)出104-105 CFU/ml的細菌時，診斷不確定，當培養(yǎng)出小于103 CFU/ml的 細菌時，通常認為是標本污染。上一頁下一頁返回第六張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月3.腦脊液 中樞神經(jīng)系統(tǒng)的感染有很多原因。化膿性腦炎主 要是由細菌、真菌等引起，偶爾也由寄生蟲引起。1).標本采集：按先后順序取3管腦脊液，每管2-5ml。1號試 管：細菌檢查；2號試管：

7、生化學或血清學檢查；3號試 管；細胞計數(shù)等常規(guī)檢查。2).革蘭氏染色檢查有助于迅速查出肺炎鏈球菌或流感嗜血 桿菌等細菌性感染。3).培養(yǎng)方法：將腦脊液1500轉(zhuǎn)離心15分鐘，取沉渣進行培 養(yǎng)，5%CO2環(huán)境、35C培養(yǎng)3天。上一頁下一頁返回第七張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月4.痰 正常人體的下呼吸道是無菌的，留取痰標本時由于經(jīng) 常混入上呼吸道的分泌物，通常痰培養(yǎng)時總是可以見到上呼吸道的正常菌群。因此判斷下呼吸道中是否有致病菌，必須了解上呼吸道的正常菌群。留取的痰標本的質(zhì)量也直接影響培養(yǎng)的結果。根據(jù)痰涂片革蘭氏染色的結果可以判斷痰標本的質(zhì)量。培養(yǎng)方法：將痰液進行洗凈、均質(zhì)化處理后，接

8、種于血平板、巧克力平板、麥康凱平板。痰中的致病菌不少屬于條件致病菌，與正常菌群同時存在，在培養(yǎng)報告中應作說明，通常以報告草綠色鏈球菌和奈瑟氏菌為正常菌群的指標，同時要注明相應菌群的量。上一頁下一頁返回第八張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月5.濃汁 組織或器官的化膿性感染，其病原菌的來源可分為兩類，內(nèi)源性和外源性。內(nèi)源性的感染源是炎癥局部周圍器官中的正常菌群，由于損傷等因素造成正常棲居菌進入無菌狀態(tài)的組織內(nèi)發(fā)生感染。外源性的感染源是存在于人體外部自然界的微生物，由于外傷和直接接觸，外界微生物通過人體表面進入人體，造成感染。1). 革蘭氏染色涂片檢查：直接涂片可迅速為臨床提供最初的診斷依據(jù)

9、，對淋病奈瑟菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌等的診斷有意義。2). 培養(yǎng)與鑒定：通常將標本接種于血平板、麥康凱平板、巧克力平板等三種培養(yǎng)基，疑為厭氧菌感染時還要接種厭氧血平板。3). 對于無菌部位的感染，從分泌物中分離的細菌，一般都有臨床意義，按分離鑒定的菌種報告細菌名稱及藥敏實驗結果。上一頁下一頁返回第九張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月6.便 正常人體的腸道中棲居大量的微生物，組成人體健康極為重要的體內(nèi)微生態(tài)環(huán)境，參與營養(yǎng)、消化、吸收等作用。腹瀉是因病原菌在腸道內(nèi)大量繁殖的結果。培養(yǎng)方法：糞便中最常見的病原菌是沙門氏菌與志賀氏菌，因此通常臨床標本可接種SS平板即可，如疑為特殊菌種感染要選擇相應的選

10、擇性培養(yǎng)基，如霍亂弧菌選用TCBS，小腸結腸炎耶爾森氏菌選用NYE瓊脂平板或CIN瓊脂平板，難辨梭狀芽孢桿菌選用CCFA瓊脂平板，念珠菌選用TTC沙保羅等。7.穿刺液 穿刺液包括胸水、腹水、心包液、關節(jié)液及鞘膜液。正常的穿刺液是無菌的，有感染的情況下，只要檢出細菌，通常都可視為是病原菌，因此，革蘭氏染色直接涂片檢查很有意義，只要檢出細菌即可診斷感染的類型。培養(yǎng)須做需氧與厭氧培養(yǎng)，而且要同時接種肉湯做增菌培養(yǎng)，根據(jù)分離鑒定的細菌選擇相應的藥敏實驗進行報告。 上一頁下一頁返回第十張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月二 、細菌感染的實驗診斷方法（一）顯微鏡檢查 直接顯微鏡檢查是細菌感染實驗診斷

11、的基本方法之一，包 括染色和不染色標本檢查法。染色法可根據(jù)鏡下細菌的形 態(tài)及染色性做出初步診斷，只對特定樣品中的細菌有診斷 價值。1. 革蘭染色 革蘭染色是診斷細菌感染最簡單快速的方法，通 常根據(jù)不同的染色性和細菌形態(tài)，可以對細菌的種屬做出 初步的推測性鑒定。2. 抗酸染色 鑒定結核和麻風等分枝桿菌屬細菌的重要方法。3. 墨汁染色 用于檢查腦脊液的隱球菌，具有方便、快速、節(jié) 約成本等優(yōu)點。4. 不染色標本直接檢查法 主要用于檢查細菌的動力及運動狀 態(tài)。上一頁下一頁返回第十一張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月上一頁下一頁返回第十二張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）病原菌的分

12、離培養(yǎng)1. 很多細菌的形態(tài)和染色性缺乏明顯特征，僅憑形態(tài)學不能做確切的診斷，需經(jīng)細菌的分離培養(yǎng)，甚至純培養(yǎng)后，對細菌進行生化和血清學鑒定，方能明確感染的細菌。2. 原則上應對所有送檢標本做分離培養(yǎng)，以便獲得單個菌落后進行純培養(yǎng)，從而對細菌做進一步的生物學、免疫學、致病性或細菌的藥物敏感性等方面的檢查，最終做出確切的報告。3. 細菌培養(yǎng)時應選擇適宜的培養(yǎng)基，以便提供特定細菌生長所需的必要條件。分離培養(yǎng)后根據(jù)菌落的大小、形態(tài)、顏色、表面性狀、透明度和溶血性等對細菌做出初步的識別，然后根據(jù)生化反應結果及血清學試驗對分離菌做出鑒定。上一頁下一頁返回第十三張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月（三）

13、病原菌抗體的檢測1. 病原菌侵入機體后，其抗原性物質(zhì)能刺激機體產(chǎn)生特異 性抗體。存在于血液或其他體液中的特異性抗體，常隨 病程的進展發(fā)生變化。用已知細菌或其抗原檢測病人體 內(nèi)是否產(chǎn)生了相應的特異性抗體及其量的多少，可作為 某些病原菌感染的輔助診斷。2. 常用的血清學試驗包括：玻片或試管凝集試驗、沉淀試 驗、補體結合試驗和冷凝集試驗等，可根據(jù)病原菌的種 類加以選擇。血清學診斷一般適用于病程較長和抗原性 較強的病原菌引起的感染。3. 若以血清學試驗結果作為診斷依據(jù)時，應在急性期和恢 復期各取一份血清同時檢測，恢復期血清效價明顯升高4 倍或以上時方有診斷價值。4. 用血清學試驗檢測特異性抗體對感染性

14、疾病的診斷有兩 方面的局限：在疾病的早期，抗體難以檢測出來，因此 難以作為早期診斷的依椐;當抗體水平升高時，很難找出 抗體效價與病情之間的關系。上一頁下一頁返回第十四張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月（四）病原菌抗原的檢測抗原的檢測是用已知的特異性抗體檢測未知的細菌抗原成分。這些試驗特異、敏感、簡便，即使是在采集樣品前患者使用了抗生素，對細菌的培養(yǎng)不易成功，但細菌的抗原仍能被檢測出來。因此抗原的檢測是檢查病原菌的常用技術，可直接使用臨床標本或在細菌分離培養(yǎng)后進行。上一頁下一頁返回第十五張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月（五）病原菌的核酸檢測1. 傳統(tǒng)的微生物學鑒定技術主要根據(jù)微

15、生物形態(tài)學和生化等表型特征來進行。但有些試驗耗時長、費用高或難以順利完成。隨著分子生物學技術的發(fā)展，多種檢測病原菌核酸的實驗技術已經(jīng)被建立。這不但能有助于感染性疾病的確診，還能確定病原菌的基因型，使微生物學的檢測技術從細菌生物學檢查進展到細菌分子生物學的鑒定。2. 分子生物學診斷技術常用于檢測不能在體外培養(yǎng)或目前的培養(yǎng)技術不敏感、費用高昂或耗時長的病原體。目前常用的方法主要有聚合酶鏈反應 (polymerase chain reaction，PCR) 及核酸雜交技術( nucleotide hybridization)包括Southern印跡雜交(Southern blot)、Northem印

16、跡雜交(Northern blot)、斑點雜交(dot blot)和原位雜交(in situ hybridization，ISH)等。上一頁下一頁返回第十六張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月（六）內(nèi)毒素檢測1. 細菌內(nèi)毒素檢查法又稱鱟試驗法，它是1964年由美國學者Levih和Bang發(fā)現(xiàn)，并在1968年正式建立的一種定性或定量檢測微量細菌內(nèi)毒素的分析方法。該法具有靈敏度高、特異性強和操作簡便快捷的特點，不僅在藥學，而且在微生物學及臨床檢驗等領域應用較為廣泛。2. 鱟試驗法可廣泛用于革蘭氏陰性菌感染的快速診斷，可對患者的血液、尿液及腦脊液進行直接檢查，有助于臨床醫(yī)生及時發(fā)現(xiàn)內(nèi)毒素疾病，

17、以迅速采取果斷的治療。在公共衛(wèi)生方面，鱟試驗法可對水源、食物、飲料等進行內(nèi)毒素測定，以便將其控制在規(guī)定水平以下，預防疾病。3. 正常人血中內(nèi)毒素濃度為：0.1 EUml，超過此值即可診斷為內(nèi)毒素血癥。許多研究表明，內(nèi)毒素與多種疾病密切相關，內(nèi)毒素血癥多隨病情惡化而加重，隨病情緩解而減輕。因此，內(nèi)毒素可以作為一個衡量病情和判斷預后的參考指標。也可用于臨床治療及判定療效或篩選恰當藥物的指標之一。上一頁下一頁返回第十七張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月第三節(jié)細菌的耐藥性檢測一、細菌耐藥性的概念 細菌耐藥性( drug resistance):是指細菌對某抗菌藥 物的相對抵抗性。指病原體對反復

18、應用的化學治療藥物 敏感性降低或消失的現(xiàn)象。上一頁下一頁返回第十八張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月第三節(jié)細菌的耐藥性檢測二、細菌耐藥性的遺傳機制（一）天然耐藥指細菌對某些抗菌藥物的天然耐藥，耐藥基因源自親代，由細菌染色體基因決定而且代代相傳的耐藥性，存在于其染色體上，具有種屬特異性，天然耐藥性始終如一并可預測。（二）獲得耐藥獲得耐藥性指細菌DNA的改變導致其獲得耐藥性表型。耐藥細菌的耐藥基因來源于基因突變或獲得新的基因，作用方式為接合、轉(zhuǎn)導或轉(zhuǎn)化?？砂l(fā)生于染色體DNA、質(zhì)粒、轉(zhuǎn)座子等結構基因，也可發(fā)生于某些調(diào)節(jié)基因。獲得耐藥性大多由質(zhì)粒介導，但也有染色體介導，如金黃色葡萄球菌對青霉素

19、的耐藥。耐藥基因在質(zhì)粒、轉(zhuǎn)座子和整合子等可移動的遺傳元件介導下，進行傳播。 上一頁下一頁返回第十九張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月細菌的耐藥性天然耐藥性與抗菌藥物無關，是細菌固有的，在某種抗菌藥物發(fā)現(xiàn)或產(chǎn)生之前所分離的細菌已對該藥已具有耐藥性。獲得性耐藥A 染色體介導的耐藥 突變B 質(zhì)粒介導的耐藥 轉(zhuǎn)導、轉(zhuǎn)化、接合、易位上一頁下一頁返回第二十張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月細菌耐藥性 染色體 染色體耐藥性 - 穩(wěn)定 - 垂直傳播 - 無水平傳播 (耐藥性不會從一種細菌傳給另一種細菌) 上一頁下一頁返回第二十一張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月細菌耐藥性 質(zhì)粒 質(zhì)粒的

20、耐藥性 不穩(wěn)定,由于抗生素的使用選擇了耐藥質(zhì)粒 - 耐藥基因由一個細菌傳給另一個細菌, 甚至是不同的細菌上一頁下一頁返回第二十二張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月細菌產(chǎn)生耐藥的因素人的行為使微生物 適應生存，產(chǎn)生新的防御力 抗菌藥物是醫(yī)院中各類藥物使用范圍最廣；使用頻度最高；使用量最大的藥物抗菌藥物的大量使用和不合理使用使微生物產(chǎn)生耐藥性多重耐藥菌在全世界播散，使抗微生物化療失去效力，以致我們的治療可能又回到了抗菌藥物誕生之前的時代上一頁下一頁返回第二十三張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月自然狀態(tài)下，只占極少數(shù)（10-510-9）的耐藥菌（株）難以與占壓倒決大多數(shù)的敏感菌（株）

21、競爭：微生態(tài)定植位點的競爭、營養(yǎng)物質(zhì)的競爭及代謝產(chǎn)物的抑制等耐藥突變株在所有 當細菌增殖時耐 由于敏感菌被消除細菌群體中均存在 藥菌的比例恒定 耐藥菌存活增殖抗菌藥物選擇性壓力上一頁下一頁返回第二十四張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月第三節(jié)細菌的耐藥性檢測三、抗生素的耐藥機制 由于細菌的生命周期短、繁殖較快，因此它有很強的適應新環(huán)境的能力，接觸抗生素時能形成耐藥。常見的細菌對抗生素的耐藥機制主要有四種 ：（一）膜通透性的降低（二）改變作用靶位（三）分泌各種酶（四）主動外排返回上一頁下一頁上一頁下一頁返回第二十五張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月細菌的耐藥機制上一頁下一頁返回第二

22、十六張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月第三節(jié)細菌的耐藥性檢測四、細菌耐藥性的防治原則（一）合理使用抗菌藥物 1.制定抗生素用藥常規(guī)，供臨床選用抗菌藥物參考。 2.嚴格根據(jù)適應證選用藥物。 3.病人用藥前應盡可能進行病原學檢測，并進行藥敏試驗，作為調(diào)整 用藥的參考。 4.根據(jù)PK/PD理論，制定合理的用藥方案。（二）嚴格執(zhí)行消毒隔離制度，對耐藥菌感染的患者應予隔離，防止耐藥菌的交叉感染。（三）加強藥政管理 1.加強細菌耐藥性的檢測，建立細菌耐藥監(jiān)測網(wǎng)，掌握本地區(qū)、本單 位重要致病菌和抗菌藥物的耐藥性變遷資料，及時為臨床提供信息。 2.必須規(guī)定抗菌藥物憑處方供應。 3.畜牧業(yè)應盡量避免供臨

23、床使用的抗菌藥物作為動物生長促進劑或治療， 以避免對醫(yī)用抗菌藥物產(chǎn)生耐藥性。（四）研發(fā)新抗菌藥物上一頁下一頁返回第二十七張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月第三節(jié)細菌的耐藥性檢測五、抗生素敏感試驗（一）概念最小抑菌濃度（MIC minimal inhibitory concentration）:能夠抑制99.9%細菌生長的最小抗生素濃度。最小殺菌濃度（MBC minimal bactericidal concentration）能夠殺死99.9%的細菌的最小抗生素濃度。（二）試驗方法稀釋法紙片擴散法其他上一頁下一頁返回第二十八張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月Broth dilu

24、tion testTube dilution test for determining the minimum inhibitory concentration (MIC).上一頁下一頁返回第二十九張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月Disk diffusion test上一頁下一頁返回第三十張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月第三節(jié)細菌的耐藥性檢測六、臨床常見的耐藥菌株耐甲氧西林的葡萄球菌（MRS）耐青霉素的肺炎鏈球菌耐萬古霉素的腸球菌耐萬古霉素的金黃色葡萄球菌產(chǎn)ESBLs的革蘭氏陰性桿菌高產(chǎn)AmpC酶的革蘭氏陰性桿菌泛耐藥的銅綠假單胞菌及鮑曼不動桿菌產(chǎn)NDM-1的超級細菌上一頁

25、下一頁返回第三十一張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月第四節(jié)侵襲性真菌病的實驗診斷一、真菌感染的類型 自然界存在的真菌超過一百萬種，但僅有400種真菌能導致人類、動物或植物患病。雖然真菌在環(huán)境中普遍存在，并且是構成正常人類微生物菌群的一部分，但是由于免疫系統(tǒng)的防御作用，真菌在健康人群中極少導致疾病。根據(jù)真菌病的感染部位可以分為以下幾類：淺表真菌病皮下真菌病全身性或侵襲性真菌感染上一頁下一頁返回第三十二張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月第四節(jié)侵襲性真菌病的實驗診斷二、侵襲性真菌感染的危險因素（一）長期應用廣譜抗生素。（二）免疫抑制性治療：免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素、惡性腫瘤 患者、器官

26、移植患者、化療、放療。（三）免疫抑制性疾病：中性粒細胞減少、艾滋病。（四）體內(nèi)留置導管：中心靜脈插管、腸外靜脈營養(yǎng)、氣管插 管、放置尿管、機械通氣（五）免疫功能低下的患者：糖尿病、新生兒、腎功能衰竭、 血液透析、營養(yǎng)不良。上一頁下一頁返回第三十三張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月第四節(jié)侵襲性真菌病的實驗診斷三、侵襲性真菌感染的流行病學（一）念珠菌感染（二）曲霉菌感染（三）毛霉菌感染（四）隱球菌感染（五）組織胞漿菌感染上一頁下一頁返回第三十四張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月第四節(jié)侵襲性真菌病的實驗診斷四、侵襲性真菌病臨床診斷新進展 IFI的診斷由宿主因素、臨床特征、組織病理學和

27、真菌學檢查四方面構成，按國外指南分為確診、臨床診斷及擬診三個層次。其中確診主要依據(jù)組織病理學或血液、胸腔積液等的真菌培養(yǎng)陽性為主要依據(jù)。（一）侵襲性真菌病的臨床診斷標準1.確診IFI：組織學證據(jù)。2.臨床診斷IFI：符合1項宿主因素、1項主要臨床表現(xiàn)或2項次要臨床表現(xiàn)及1項微生物學證據(jù)。3.擬診IFI：1項宿主因素及1項微生物學標準或2項次要臨床標準。上一頁下一頁返回第三十五張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）實驗室診斷應用真菌培養(yǎng)：仍然是確診的金標準。 直接鏡檢：墨汁染色及真菌涂片檢查。 血清學診斷方法：是應用免疫方法檢測血清或其它體液中真菌細胞壁和胞質(zhì)的成分。由于IFI多繼發(fā)于

28、嚴重免疫受損患者，往往缺乏可檢測到的抗體，所以檢測真菌抗原成為目前實驗室診斷的發(fā)展方向。 1）GM試驗 2）G試驗上一頁下一頁返回第三十六張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月GM試驗 GM是曲霉菌細胞壁的成分，最初是從感染動物模型和侵襲性曲霉病患者血清中發(fā)現(xiàn)。當曲霉感染時，血液及體液（尿液、腦脊液、腹水、胸水）中會顯著增高。在感染早期血清中就能夠檢測出GM，而且常常早于臨床癥狀和影像學特征出現(xiàn)，研究顯示有2/3的患者在其它方法診斷侵襲性曲霉病前614天即可檢測到GM，連續(xù)動態(tài)監(jiān)測（每周2次）對高?；颊呔哂性缙谠\斷價值。 GM試驗的Cutoff值為0.5時敏感性增高，有利于早期診斷，但是特異性相對較差，有可能出現(xiàn)假陽性，其原因主要是一些抗原物質(zhì)與單克隆抗體產(chǎn)生交叉反應所致。例如：1） 哌拉西林/他唑巴坦的應用。2） 胃腸黏膜損傷時谷類食物中的GM抗原通過腸道入血，胃腸外營養(yǎng)時 營養(yǎng)液中的某些成分也會與GM產(chǎn)生交叉反應。3） 母