生藥中各類成分及定性定量分析方法課件

1、生藥中各類成分及定性定量分析Which compounds occur in herbal drugs? How to qualify and quantify these compounds?一、黃酮類 (flavonoids)具有2-苯基色原酮(flavone)結(jié)構(gòu)的化合物 色原酮2-苯基色原酮一、黃酮類 (flavonoids)C6-C3-C6 1、結(jié)構(gòu)類型（Structures）黃酮(flavone) 黃酮醇(flavonol) 二氫黃酮(dihydroflavone) 二氫黃酮醇(dihydroflavonol) 異黃酮(isoflavone) 二氫異黃酮(dihydroisofla

2、vone) 查耳酮(chalcone) 橙酮(aurones) 黃烷 (flavanes) 花色素 (anthocyanidins) 雙黃酮 (biflavone) 2、黃酮類的分布與活性 (distribution & bioactivity)豆科：葛根、甘草、槐米、大豆唇形科：黃芩菊科：水飛薊、紅花、蒼耳子鳶尾科：射干、鳶尾小檗科：淫羊藿香蒲科：蒲黃松科、柏科、銀杏科：銀杏葉（雙黃酮）3、理化性質(zhì)(physico-chemical properties)性狀：結(jié)晶性固體顏色：黃色，與分子中交叉共軛體系及助色 團(tuán)類型、數(shù)目、及取代位置有關(guān)溶解度: 苷易溶于熱水，能溶于水、醇、堿 水; 苷元易

3、溶于醇、EtOAC、乙醚、 堿水酸堿性酸性，因有酚-OH7，4-二-OH 7或4-OH 一般-OH 5-OH NaHCO3 Na2CO3 1NaOH 5NaOH微弱堿性 (吡喃環(huán)上的1-位氧原子的未共用電子對) 745HCl-Mg還原反應(yīng)：生藥粉末 醇提 濾液 橙紅-紫色金屬鹽絡(luò)合反應(yīng)：鄰二酚羥基；3- 羥基，4酮基；5- 羥基，4酮基 鎂鹽、鋁鹽、鋯鹽、鉛鹽反應(yīng) 有色絡(luò)合物 HCl、Mg粉顯色反應(yīng)Bright-yellow comoles compoundAl3+Al3+4、黃酮類主要定量方法 （Major quantitative methods ）總黃酮測定（UV法） 原理：黃酮類化合物

4、常可與某些試劑（如硝酸鋁和亞硝酸鈉等）形成穩(wěn)定的有色絡(luò)合物 應(yīng)用：紫外-可見分光光度法（山楂葉中總黃酮-藥典方法） 藥材提取物亞硝酸鈉硝酸鋁氫氧化鈉500 nm處測定4、黃酮類主要定量方法 （Major quantitative methods ）單體黃酮測定 薄層掃描法(TLCS) 高效液相色譜法（HPLC）對照品 蘆丁(rutin) (1)；金絲桃苷(hyperoside) (2)；木犀草素-7-O-D-半乳糖苷(luteolin-7-O-D-galactoside) (3)；忍冬苷(lonicerin) (4)；tricin-7-O-D-glucopyranoside (5)；chrys

5、oeirol-7-O-neohesperidoside (6)；tricin-7-O-neohesperidoside (7)和槲皮素(quercetin) (8)1OHHGlc(6-1)rhaH2OHHGalH3OHHHGal4OHHOHGlc(6-1)rha5OMeOMeHGlc6OMeHHGlc(2-1)rha7OMeOMeHGlc(2-1)rhaR1R2R3R48OHHOHH應(yīng)用：HPLC法測定金銀花中木犀草苷和蘆丁12345678123478AB金銀花黃酮類化合物色譜圖(A) 對照品; (B) L. japonica二、蒽醌類(anthraquinones) 蒽醌 (anthraqu

6、inones)1、結(jié)構(gòu)類型（Structures）氧化蒽酚 (oxanthranol) 蒽酚 (anthranol) 二蒽醌 (dianthraquinones）二蒽酮 (dianthrone) 蒽酮 (anthrone) 2、蒽醌苷的分布與活性 (distribution & bioactivity) 蓼科：大黃、何首烏、虎杖 豆科：番瀉葉、決明子 百合科：蘆薈 茜草科：茜草、巴戟天顏色：多顯黃色或橙紅色，多具熒光性狀：結(jié)晶體，具升華性溶解度：苷元溶于甲醇、乙醇、乙醚、氯仿，幾不溶于水 ；苷易溶于水、稀醇, 可溶甲醇、乙醇，難溶于苯、乙醚等 。3、理化性質(zhì)(physico-chemical

7、properties)酸性：酸性強(qiáng)弱與酚羥基數(shù)目及位 置有關(guān)-COOH（NaHCO3 ） 2個(gè)以上-酚OH（Na2CO3 ） 1個(gè)-酚OH （1%NaOH ） 2個(gè)以上-酚OH （5%NaOH ） Borntrager反應(yīng) 含蒽醌的乙醇溶液+堿水溶液 紅色 溶液黃色+乙醚振搖 分取醚層，乙醚層黃色 水層紅色，醚層無色 H+堿水鑒別反應(yīng) 醋酸鎂絡(luò)合反應(yīng) 樣品乙醇液滴于濾紙上 噴0.5% Mg(Ac)2 MeOH試液 顯色4.蒽醌衍生物主要定量分析方法 總蒽醌: UV法測定 原理：與醋酸鎂絡(luò)合反應(yīng) 應(yīng)用：UV法測定番瀉葉中總番瀉苷含量藥材番瀉苷提取物FeCl3HCl乙醚提取物0.5% Mg(Ac)

8、2 MeOH515nm4.蒽醌衍生物主要定量分析方法 單體蒽醌: 薄層掃描法和高效液相色譜法 sennoside Asennoside B番瀉葉中番瀉苷A和B的色譜圖1.結(jié)構(gòu)類型三萜皂苷（triterpenoid saponins）：皂苷元為30個(gè)碳原子組成的三萜類衍生物(酸性皂苷) 五環(huán)三萜(pentacyclic triterpenoids) 四環(huán)三萜(tetracyclic triterpenoids)三、皂苷類(saponins) 甾體皂苷(steroidal saponins) 甾體皂苷的皂苷元由27個(gè)碳原子組成(中性皂苷) 螺甾烷醇 (spirostanol)型 異螺甾烷醇(iso

9、spirostanol)型 呋甾烷醇(furostanol)型 變形螺甾烷醇(pseudo-spirostanol)型2. 皂苷的分布與活性甾體皂苷：百合科（麥冬、知母）、薯蕷科三萜皂苷：五加科（人參、三七）、豆科（甘草、黃芪）、桔?？疲h參、桔梗）、葫蘆科（土貝母、絲瓜根）、石竹科（太子參）、鼠李科（酸棗仁）3.皂苷的理化性質(zhì)吸濕性：多為白色的無定形粉末，具吸濕性。 溶解性：可溶于水、甲醇、乙醇，不溶于乙醚、苯等極性小的有機(jī)溶劑; 易溶于水飽和的丁醇或戊醇。泡沫試驗(yàn)醋酐-硫酸反應(yīng) (Liebermann-Burchard 反應(yīng))鑒別反應(yīng) 4.皂苷主要定量分析方法 總皂苷:中國藥典用重量法測定

10、桔梗中三萜總皂苷。4.皂苷主要定量分析方法 單體皂苷： HPLC-UV：人參中三萜皂苷類成分人參皂苷 Rg1、Re、Rb1的測定，檢測波長為203nm；重樓中重樓皂苷I、II的測定，檢測波長為210nm。 HPLC-ELSD：黃芪中三萜皂苷類成分黃芪甲苷；知母中甾體皂苷類成分菝葜皂苷元。山銀花中皂苷類成分的高效液相色譜分析 R1R21ara(2-1)rha(3-1)glc(4-1)glcglc(6-1)glc2ara(2-1)rha(3-1)glcglc(6-1)glc3ara(2-1)rhaglc(6-1)glc4Hglc(6-1)glc5ara(2-1)rha(3-1)glc(4-1)gl

11、cH6ara(2-1)rha(3-1)glcH7ara(2-1)rhaH色譜柱：Zorbax SB-C18(2504.6mm，5.0m)；柱溫：25；流動相：A 乙腈-醋酸(95:0.5) ， B 0.5% 醋酸；梯度洗脫：29%A(0-10min)，29-46%A(10-25 min)，46%A(25-30min)；檢測器：蒸發(fā)光散射檢測器；漂移管溫度：106；氮?dú)饬魉伲?.6L/min。 山銀花中皂苷類成分的高效液相色譜圖A: 混合對照品 B: 山銀花 L. confusaRRLCESI TOF MS 快速測定三七中12個(gè)三萜皂苷1.生物堿結(jié)構(gòu)類型 吡咯烷類 (pyrrolidine)吡啶

12、類 (pyridine) 喹啉類(quinoline)異喹啉類(isoquinoline)喹唑酮類(quinnazolidone) 吲哚類(indole)莨菪烷類(tropane) 亞胺唑類(imidazole) 嘌呤類(purine) 四、生物堿類(alkaloids) 2.生物堿的分布毛茛科：烏頭、黃連防己科：防己、北豆根罌粟科：罌粟、延胡索茄科：蔓陀羅、洋金花百合科：百合、貝母豆科：山豆根、苦參黃連素（小檗堿） 抗菌毛果蕓香堿 治療青光眼山莨菪堿（6542） 抗膽堿高三尖山酯堿 抗白血病長春新堿 抗腫瘤延胡索乙素 鎮(zhèn)痛苦參堿 抗癌利血平 降壓石杉堿甲 抗老年癡呆秋水仙堿 抗痛風(fēng)麻黃堿 平

13、喘嗎啡 鎮(zhèn)痛。 。 。 。AlkaloidsEffect3. 生物堿理化性質(zhì) 多數(shù)生物堿為結(jié)晶狀固體 ,一般無色;多數(shù)生物堿具左旋光性;多數(shù)生物堿具堿性。溶解度：游離生物堿極性較小，不溶或難溶于水，能溶于氯仿、乙醚、苯、丙酮、乙醇等有機(jī)溶劑，也能溶于稀酸的水溶液而生成鹽類。生物堿鹽類易溶于水和乙醇，不溶或難溶于有機(jī)溶劑。生物堿的沉淀反應(yīng) 碘化鉍鉀：生物堿 + Dragendorff試劑（BiI3 KI） 桔紅、紅棕 碘化汞鉀: 生物堿+ Mayer試劑 (HgI2KI) 白、淡黃貝母生物堿薄層色譜圖 1、 2陰性對照 3.西貝素苷對照品 4. 西貝素對照品 5. 樣品990716 6. 樣品

14、990718 7. 樣品990720 8、9伊貝母藥材對照: 展開系統(tǒng)為乙酸乙酯：丙酮：甲酸：水（5：3：0.5：1）：展開系統(tǒng)為氯仿-甲醇-水（40：10：1） III罌粟殼薄層色譜（1-11 罌粟殼）展開劑：甲苯-丙酮-乙醇-濃氨試液（20：20：3：1）顯色：依次噴碘化鉍鉀試液和亞硝酸鈉試液嗎啡可待因罌粟堿4. 生物堿含量測定 總生物堿： 酸性染料比色法。 酸堿滴定法，如中國藥典對制川烏中酯型生物堿的測定。4. 生物堿含量測定 單體生物堿：薄層掃描法：兩面針生物堿測定- 中國藥典高效液相色譜法: 通常采用離子對色譜或離子抑制色譜法 貝母生物堿的高效液相色譜分析 對照品：貝母辛（peimi

15、ssine）、鄂貝啶堿（ebeiedine）、去氫鄂貝啶堿（ebeiedinone）、湖貝甲素（hupehenine）、異浙貝甲素（isoverticine）、貝母素甲（verticine）、貝母素乙（verticinone）和西貝素（imperialine） 貝母生物堿高效液相色譜圖A4 6123 5 78 ISB 1 2 3 5 6 ISC IS 4 1對照品浙貝母伊貝母五、強(qiáng)心苷類(cardiac glycosides)是一類對心肌有興奮作用，具有強(qiáng)心生理活性的甾體化合物1.結(jié)構(gòu)類型強(qiáng)心甾烯型蟾蜍甾烯型強(qiáng)心三要素： C17內(nèi)酯環(huán)； C/D 順式； a-去氧糖五、強(qiáng)心苷類 (cardiac

16、 glycosides)2.強(qiáng)心苷的分布夾竹桃科：羊角拗、黃花夾竹桃蘿摩科：香加皮、白前、白薇玄參科：洋地黃、毛花洋地黃百合科：萬年青3.強(qiáng)心苷理化性質(zhì) 甾體母核的反應(yīng)：Liebermann-Burchard 反應(yīng)-去氧糖顯色反應(yīng)：Keller-Kiliani反應(yīng) 五元不飽和內(nèi)酯環(huán)反應(yīng)：如Legal反應(yīng)、Keddes反應(yīng)（與某些芳香硝基化合物形成有色加成物 ） 鑒別反應(yīng) 4.強(qiáng)心苷定量分析方法 總強(qiáng)心苷：不飽和內(nèi)酯環(huán)的反應(yīng)-紫外-可見分光光度法；單體強(qiáng)心苷：TLCS、HPLC、GC 如中國藥典（2019年版）使用高效液相色譜法測定蟾酥中強(qiáng)心苷類成分華蟾酥毒基和脂蟾酥毒配基 AB狹葉洋地黃Dig

17、italis lanata Ehrh. 中強(qiáng)心苷類HPLC分析生藥中多類成分的同時(shí)含量分析Simultaneous ditermination of multi-type compounds in crude drugs Why ? Multi-compounds, multi-targets How ? Hyphenated techniquesExample-1 金銀花中多類成分的測定(HPLC-MS)對照品HPLC-MS圖樣品HPLC-MS圖樣品HPLC-MS圖Example-2 山銀花中綠原酸和三萜皂苷的同時(shí)測定 (HPLC-UV-ELSD)Example-3 金銀花中多類成分的測定 (HPLC-VWD-ELSD)中藥指紋圖譜指紋是靈長類動物手指末端指腹上由凹凸的皮膚所形成的紋路，也可指這些紋路在物體上印下的印痕。當(dāng)人的手指接觸到物品時(shí)，通?？稍谠撐锲飞狭粝轮讣y，這些印痕最常在犯罪學(xué)、法醫(yī)學(xué)上