4-分子流行病學(xué)

1、動(dòng)物病毒性疾病分子流行病學(xué)研究方法 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院何后軍 教授聯(lián)系電話(huà)-mail: hehoujun分子流行病學(xué)1972年Kilbourne 博士在美國(guó)傳染病學(xué)會(huì)第10次年會(huì)上作了題為“流感的分子流行病學(xué)”的報(bào)告。 1977年法國(guó)Higginson認(rèn)為“分子流行病學(xué)”是應(yīng)用復(fù)雜精細(xì)的技術(shù)進(jìn)行生物材料的流行病學(xué)研究。1982年P(guān)erera與Weinstein在分子流行病學(xué)基礎(chǔ)上,提出了“癌癥分子流行病學(xué)” (molecular cancer epidemiology)一 產(chǎn)生的背景(一)疾病預(yù)防控制中的需求傳染性疾病 耐藥性質(zhì)粒；病原體變異；新發(fā)現(xiàn)傳染病。

2、慢性非傳染病 多病因、多階段、多基因、長(zhǎng)潛隱期。人群易感性 生物個(gè)體間的遺傳和環(huán)境不同，易感性差異很大；傳統(tǒng)流行病學(xué)無(wú)法有效測(cè)量。實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué) 實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)的病因假設(shè)和防治措施的人群檢驗(yàn)。一 產(chǎn)生的背景(二)分子生物學(xué)的快速發(fā)展理論的突破 如：DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)，遺傳中心法則，遺傳密碼子，RNA逆轉(zhuǎn)錄，斷裂基因，操縱子模型，限制性?xún)?nèi)切酶，DNA聚合酶，DNA連結(jié)酶，染色體外遺傳物質(zhì)等。技術(shù)的創(chuàng)新 凝膠電泳技術(shù)，核酸體外擴(kuò)增，DNA測(cè)序，蛋白質(zhì)測(cè)序，分子雜交，基因克隆，色譜技術(shù)，計(jì)算機(jī)應(yīng)用。定義分子流行病學(xué)(molecular epidemiology)是應(yīng)用先進(jìn)的技術(shù)測(cè)量生物標(biāo)志的分布情況，結(jié)合流行病學(xué)

3、現(xiàn)場(chǎng)研究方法，從分子或基因水平闡明疾病的病因及其相關(guān)的致病過(guò)程，并研究疾病的防治和促進(jìn)健康的策略和措施的科學(xué)。 生物標(biāo)志（biological marker，biomarker，簡(jiǎn)稱(chēng)M） 指能代表生物結(jié)構(gòu)和功能的可識(shí)別物質(zhì)。分子事件（molecular event）或分子生物標(biāo)志（molecular biomarker）主要指代表生物結(jié)構(gòu)和功能的生物大分子特征。如DNA、RNA、蛋白質(zhì)等?，F(xiàn)代流行病學(xué)遇到的難題（1）傳染病方面：病原生物的多樣性和多變性，如流感病毒、艾滋病毒 ；抗生素廣泛應(yīng)用，耐藥性病原體不斷出現(xiàn)；新發(fā)現(xiàn)的傳染病，SAS等 傳統(tǒng)表型研究 從分子或基因水平闡明 （2）研究個(gè)體的發(fā)

4、病差異 根本闡明個(gè)體差異必須從分子水平研究 （3）證實(shí)疾病的病因 (三)分子流行病學(xué)的發(fā)展研究?jī)?nèi)容更加豐富 傳染病、慢性非傳染病、健康狀態(tài)。研究手段越來(lái)越多 主要是分子生物學(xué)方法和技術(shù)。應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大 流行病學(xué)、預(yù)防醫(yī)學(xué)、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、遺傳學(xué)、環(huán)境科學(xué)和人類(lèi)學(xué)等。研究的水平不同： 傳統(tǒng)流行病學(xué)：宏觀(guān)水平或表型 分子流行病學(xué)：微觀(guān)水平或基因水平所解決的問(wèn)題不同： 傳統(tǒng)流行病學(xué)：可闡明暴露與發(fā)病之間的聯(lián)系，但不能揭示疾病發(fā)生的機(jī)制（黑匣子）。 分子流行病學(xué)：既可闡明暴露與疾病之間的聯(lián)系，又可揭示疾病發(fā)生的機(jī)制。即可以闡明疾病的自然史。二、與傳統(tǒng)流行病學(xué)的關(guān)系 暴露 - 暴露(E)與劑量(ED

5、) 結(jié)局 -健康態(tài)(HC) 機(jī)體臨床態(tài)(CD) (健康疾病連續(xù)帶) 傳統(tǒng)流行病學(xué)分子流行病學(xué) 暴露生物標(biāo)志- 外暴露標(biāo)志(EEM)與劑量(EED) 內(nèi)暴露標(biāo)志(IEM)與劑量(IED) 生物作用標(biāo)志(BAM)與劑量(BAD) 健康疾病連續(xù)帶：健康態(tài)亞健康態(tài)潛在疾病態(tài)臨界疾病態(tài)亞臨床態(tài)臨床態(tài) 效應(yīng)生物標(biāo)志： HCM EBEM ASFM PM SCCM CDM 易感生物標(biāo)志-易感標(biāo)志與水平(SM & SL)三、與分子生物學(xué)的關(guān)系 研究對(duì)象不同: 分子生物學(xué)：個(gè)體 分子流行病學(xué)：群體 研究?jī)?nèi)容和方向有所不同: 分子生物學(xué)：基礎(chǔ)研究（方法學(xué)研究） 分子流行病學(xué)：應(yīng)用研究（指導(dǎo)疾病治）分子流行病學(xué)的特點(diǎn)

6、與傳統(tǒng)流行病學(xué)的區(qū)別 1.研究水平不同 宏觀(guān)水平 微觀(guān)水平 2.所解決問(wèn)題不同 揭示“黑匣子”之謎與分子生物學(xué)的區(qū)別 1.研究對(duì)象不同 個(gè)體 群體 2.研究?jī)?nèi)容和方向有所不同 側(cè)重基礎(chǔ)，側(cè)重應(yīng)用分子流行病學(xué)的主要研究?jī)?nèi)容傳染病病因及流行規(guī)律的探討非傳染病病因及病因致病機(jī)制研究疾病易感性的測(cè)定疾病防治措施的研究疾病治療效果和預(yù)后評(píng)價(jià)生物標(biāo)志（測(cè)量指標(biāo)）的研究暴露測(cè)量及其與疾病的關(guān)系效應(yīng)測(cè)量及其與疾病的關(guān)系易感性測(cè)量及其與疾病的關(guān)系疾病防治效果評(píng)價(jià) 傳染病病因及流行規(guī)律的探討對(duì)已知傳染病，通過(guò)分子流行病學(xué)研究可闡明病原體特點(diǎn)，能更準(zhǔn)確地分析其傳染源和傳播途徑；對(duì)新發(fā)現(xiàn)的傳染病，可以盡快確定傳染病的

7、病因和流行規(guī)律。1、研究已知傳染病的病原體和流行特點(diǎn)基因水平研究病原體 快速準(zhǔn)確闡明 其特點(diǎn)分析病因、傳染源和傳播途徑 利于防治流行或爆發(fā)時(shí) 病原體的鑒定和分型十分重要傳統(tǒng)：從表型進(jìn)行鑒定、分型 不穩(wěn)定或無(wú)法進(jìn)行分型現(xiàn)在：從分子或基因水平鑒定、分型 直接反映其遺傳本質(zhì)、特點(diǎn) 穩(wěn)定可靠2、研究新發(fā)傳染病病原體和流行特點(diǎn)新發(fā)傳染病分子流行病學(xué)研究方法查找病原體，確定遺傳特點(diǎn)闡明病因、傳播規(guī)律和流行特點(diǎn)如庚肝的發(fā)現(xiàn)和心肌V.分離 非傳染病病因及病因致病機(jī)制研究病因復(fù)雜 環(huán)境因素+遺傳因素通過(guò)分子流行病學(xué)的研究方法可闡明疾病發(fā)生的遺傳本質(zhì)、環(huán)境因素致病的分子基礎(chǔ)，為疾病的防治提供理論依據(jù)。二、疾病易感

8、性的測(cè)定個(gè)體對(duì)疾病都存在一定的感受性，稱(chēng)之易感性以往認(rèn)為：只有傳染病才有確定易感性 特異Ab傳染性疾病的易感性與機(jī)體某些基因類(lèi)型有聯(lián)系，決定免疫反應(yīng)的方式與強(qiáng)度慢性病也存在易感性，與個(gè)體基因型別或序列或其表達(dá)產(chǎn)物有關(guān) 遺傳易感性三、疾病防治措施的研究傳染病的預(yù)防 通過(guò)分子流行病學(xué)手段，可以研究疫苗的預(yù)防效果、疫苗株引起的感染以及疫苗的逃逸株等問(wèn)題。非傳染病的防治 分子流行病學(xué)通過(guò)研究病因的致病機(jī)制，為三級(jí)預(yù)防奠定理論基礎(chǔ)。 以腫瘤為例四、疾病治療效果和預(yù)后評(píng)價(jià)從分子或基因水平評(píng)價(jià)治療措施的效果及判斷預(yù)后，更客觀(guān)、快速、準(zhǔn)確、節(jié)約對(duì)基因治療，可能是唯一可行的評(píng)價(jià)方法。通過(guò)檢測(cè)患者體內(nèi)是否有導(dǎo)入的

9、基因及導(dǎo)入的基因表達(dá)情況，判斷治療效果。生物標(biāo)志與分子生物學(xué)標(biāo)志生物標(biāo)志(biological markers，biomarkers)是宿主生物材料(組織、體液、細(xì)胞)中可測(cè)量的細(xì)胞的、生物化學(xué)的、免疫的或分子的改變。 是可以測(cè)量的、能代表生物結(jié)構(gòu)和功能的大分子物質(zhì)，如DNA、RNA或蛋白質(zhì)等。分子生物學(xué)標(biāo)志(molecular biomarkers) 能反映分子水平、基因水平的DNA損傷、變異和表達(dá)的蛋白質(zhì)分子的生物標(biāo)志。生物標(biāo)志的分類(lèi)在暴露-疾病鏈中，一般可將生物學(xué)標(biāo)志分為:體內(nèi)劑量標(biāo)志、生物有效劑量標(biāo)志、生物學(xué)反應(yīng)標(biāo)志、疾病標(biāo)志，此外，尚有易感性標(biāo)志：起著重要作用,是決定疾病能否發(fā)生的主

10、要因素。常用按疾病發(fā)病過(guò)程進(jìn)行分類(lèi)，根據(jù)疾病發(fā)生的不同階段出現(xiàn)不同的標(biāo)志,分為三類(lèi)：暴露標(biāo)志、易感性標(biāo)志和效應(yīng)或疾病標(biāo)志五、生物標(biāo)志暴露標(biāo)志(exposure marker) 與疾病或健康狀態(tài)有關(guān)的暴露因素的生物標(biāo)志，包括外暴露標(biāo)志和內(nèi)暴露標(biāo)志。 效應(yīng)標(biāo)志 指宿主暴露后產(chǎn)生功能性或結(jié)構(gòu)性變化的生物標(biāo)志，如突變的基因、畸變的染色體等。 易感標(biāo)志 指宿主對(duì)疾病發(fā)生、發(fā)展易感程度的生物標(biāo)志。 外暴露標(biāo)志：是指暴露因素進(jìn)入機(jī)體之前的標(biāo)志和劑量生物性：微生物、寄生蟲(chóng)、生物毒素等;非生物性：某些化學(xué)和物理因素，如吸煙煙霧、環(huán)境物質(zhì)等。內(nèi)暴露標(biāo)志：指暴露因素進(jìn)入機(jī)體之后的標(biāo)志生物性病原因子：可以是生物病原因

11、子本身、其代謝產(chǎn)物或與宿主體內(nèi)生物大分子結(jié)合產(chǎn)物，像病毒整合基因、生物毒素-DNA加合物等非生物性病原因子：可以是體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)分子、代謝產(chǎn)物或與宿主靶體結(jié)合物等，如暴露于苯并(a)芘后，在淋巴細(xì)胞中能檢測(cè)到特異的DNA加合物。易感性標(biāo)志(susceptibility marker)易感性標(biāo)志：指宿主對(duì)疾病發(fā)生、發(fā)展易感程度的生物標(biāo)志，如宿主的遺傳特征、營(yíng)養(yǎng)、免疫、機(jī)體的活動(dòng)狀態(tài)等。是在暴露之前就已存在的遺傳性或獲得性的可測(cè)量指標(biāo)，決定著機(jī)體對(duì)疾病發(fā)生、發(fā)展的易感程度?？梢蕴接懠膊“l(fā)生的個(gè)體差異。效應(yīng)標(biāo)志(effect marker)或疾病標(biāo)志(disease marker)宿主暴露于某種因素后產(chǎn)生

12、結(jié)構(gòu)或功能性變化的生物性標(biāo)志，如突變的基因、畸變的染色體、特異抗體、細(xì)胞因子等。 在病后的不同階段，其效應(yīng)標(biāo)志不同生物標(biāo)志的篩選要求：具有較好的特異性和穩(wěn)定性 檢測(cè)方法具有較高的靈敏度，特異度高檢測(cè)方法快速、簡(jiǎn)便依據(jù)：研究目的、生物學(xué)標(biāo)志的本身特性、在疾病過(guò)程中的意義、檢測(cè)方法、生物學(xué)標(biāo)志與所要代表的特定階段的關(guān)聯(lián)程度。 生物標(biāo)志特性分子特性 化學(xué)結(jié)構(gòu)、組成、物理特性和穩(wěn)定性等時(shí)相特性 即生物學(xué)標(biāo)志存在的時(shí)間長(zhǎng)短及其在暴露至疾病不同階段的表現(xiàn)和意義。 變異性 - 個(gè)體內(nèi)變異 生物標(biāo)本采集時(shí)間、部位等不同造成 - 個(gè)體間變異 不同生物個(gè)體的檢測(cè)結(jié)果不相同 - 群體間變異 不同生物群體的檢測(cè)結(jié)果不

13、相同 - 儲(chǔ)存變異 生物標(biāo)志的生物特性、儲(chǔ)存條件、儲(chǔ)存時(shí) 間等都會(huì)影響其檢測(cè)結(jié)果生物標(biāo)志檢測(cè)方法實(shí)用性 研究樣本一般較大一定的實(shí)驗(yàn)室條件可信性 可信性強(qiáng) 有效性 靈敏度和特異度，注意區(qū)分流行病學(xué)的靈敏度和實(shí)驗(yàn)室測(cè)量中所謂的敏感性的不同暴露測(cè)量外暴露研究 指環(huán)境因素暴露，分為生物性因素和非生物性因素。作為分子流行病學(xué)測(cè)量的生物標(biāo)志一般是生物性病原因子，如病原生物、生物毒素等。生物性病原因子檢測(cè)鑒定 流感嗜血桿菌 病原生物進(jìn)化變異規(guī)律研究 O157大腸桿菌確定傳播途徑 S.munchen菌感染 非生物性因素的暴露測(cè)量 吸煙煙霧 可研究病原生物分型、分類(lèi)和檢定是最有效手段、研究病原生物變異的規(guī)律等。

14、這是傳染病分子流行病學(xué)的重要使命。內(nèi)暴露研究傳染性疾病 應(yīng)用分子生物學(xué)方法直接檢測(cè)病原體的生物大分子物質(zhì)如核酸、蛋白質(zhì)等，使我們能夠準(zhǔn)確地判斷人體是否感染疾病，即感染狀況；用分子生物學(xué)技術(shù)鑒定各感染者所感染病原體之間的遺傳關(guān)系，可追蹤傳染源 慢性非傳染性疾病 內(nèi)暴露水平 生物作用水平效應(yīng)測(cè)量傳染病 免疫效應(yīng)：測(cè)定體內(nèi)抗體變化可以判斷機(jī)體感染狀態(tài)。 病理性效應(yīng)：測(cè)量機(jī)體損害性的生物標(biāo)志可以判斷病原生物感染的病理效應(yīng)。 慢性非傳染病 基因表達(dá)異常和代謝異常 基因突變或染色體畸變 健康狀態(tài)：一個(gè)群體從疾病到健康或從健康到疾病也是一個(gè)連續(xù)帶。通過(guò)健康狀態(tài)相關(guān)生物標(biāo)志分布的研究，如生長(zhǎng)、發(fā)育和衰老，可以

15、為探討影響健康的因素、制訂促進(jìn)健康的策略和措施提供科學(xué)依據(jù)。 易感性測(cè)量探明遺傳病易感(致病)基因、分布規(guī)律、影響因素和防制手段， 傳染病和寄生蟲(chóng)病的易感性水平高低可以從兩個(gè)方面評(píng)判，一是特異抗體水平，二是對(duì)該病原體致病的遺傳易感性。第二方面則是分子流行病學(xué)研究的重要內(nèi)容之一。 疾病防治效果評(píng)價(jià)預(yù)防評(píng)價(jià)：分子生物學(xué)技術(shù)可用于傳染病的預(yù)防效果評(píng)價(jià)中，如疫苗接種后的免疫學(xué)效果、也可以對(duì)不同人群采取措施與否的感染情況進(jìn)行分析。另外也可用于預(yù)防接種發(fā)病研究。 治療評(píng)價(jià)：應(yīng)用分子流行病學(xué)進(jìn)行治療措施的效果評(píng)價(jià)比以臨床診斷為依據(jù)的效果評(píng)價(jià)要節(jié)約時(shí)間、費(fèi)用和人力，而且更加客觀(guān)。 應(yīng)用生物學(xué)標(biāo)志的意義能精確測(cè)

16、量暴露因素及其水平；揭示生物學(xué)反應(yīng)的早期事件;判定宿主的易感性;提高篩檢和診斷疾病的準(zhǔn)確性和精確性;評(píng)價(jià)治療措施或干預(yù)措施的效果;估計(jì)疾病的預(yù)后;有效控制病因推斷過(guò)程中的混雜因素;揭示疾病的發(fā)病機(jī)理。分子流行病學(xué)應(yīng)用的主要研究方法 測(cè)量指標(biāo) 標(biāo)本采集 現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查研究方法 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù) 研究設(shè)計(jì) 資料分析 測(cè)量指標(biāo)的選擇的原則生物標(biāo)志應(yīng)特異、穩(wěn)定標(biāo)本采集、儲(chǔ)存方便檢測(cè)方法比較簡(jiǎn)單、實(shí)用，而且操作規(guī)范，便于 與同類(lèi)研究結(jié)果比較檢測(cè)方法靈敏度和特異度高測(cè)量指標(biāo)暴露指標(biāo) 最好能代表接觸劑量或生物作用劑量 易感性指標(biāo) 一般選擇抗體水平作為傳染病易感性指標(biāo)，易感基因及其表達(dá)產(chǎn)物等作為心腦血管病、惡性腫瘤、

17、糖尿病、遺傳病等慢性非傳染病的易感性標(biāo)志。效應(yīng)指標(biāo) 一般以最早期生物效應(yīng)標(biāo)志作為探索暴露因素的致病作用或干預(yù)措施的短期效果評(píng)價(jià)指標(biāo)，如抗體產(chǎn)生、代謝異常、基因表達(dá)異常等選擇結(jié)構(gòu)和功能改變作為確定暴露的致病作用和早期診斷、早期預(yù)防的指標(biāo)臨床診斷標(biāo)志作為干預(yù)措施長(zhǎng)期效果評(píng)價(jià)或預(yù)后的指標(biāo)標(biāo)本采集生物標(biāo)本 一般包括病原的和人體的生物標(biāo)本。常用的有：微生物標(biāo)本、血液（血清）標(biāo)本、組織標(biāo)本、其他生物標(biāo)本（如唾液、胃液、尿液、精液、頭發(fā)、媒介生物等） 生物標(biāo)本庫(kù) 通常將儲(chǔ)存有一種類(lèi)型或多種類(lèi)型生物標(biāo)本，并能保持它們的生物活性以供研究之用的系統(tǒng)稱(chēng)為生物標(biāo)本庫(kù)(biological specimen bank,

18、 BSB)，如血清庫(kù)、組織庫(kù)、病原生物庫(kù)等。生物標(biāo)本采集和儲(chǔ)存 分子流行病學(xué)研究成功的關(guān)鍵要求在采集和儲(chǔ)存過(guò)程中不能受到“污染” 儲(chǔ)存的生物標(biāo)本在任何時(shí)候進(jìn)行檢測(cè)都可以獲得一致的結(jié)果所有的生物標(biāo)本都應(yīng)有詳細(xì)的背景材料和鑒別標(biāo)識(shí)現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查研究方法傳統(tǒng)的現(xiàn)場(chǎng)流行病學(xué)研究方法 ,即描述性研究、分析性研究與干預(yù)性研究均可應(yīng)用于分子流行病學(xué)。一般需要的樣本量相對(duì)較小 不宜作大規(guī)?，F(xiàn)場(chǎng)調(diào)查研究 分子流行病學(xué)在橫斷面研究中多是小樣本抽樣調(diào)查，在分析性研究中多為病例對(duì)照研究、隊(duì)列與病例對(duì)照結(jié)合的巢式病例對(duì)照研究、病例-病例研究等，在實(shí)驗(yàn)性研究也多采用小樣本隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)室技術(shù)標(biāo)本的采集與儲(chǔ)存：生物標(biāo)本：病原

19、的、動(dòng)物的生物標(biāo)本。 生物標(biāo)本庫(kù)（biological specimen bank, BSB）：是指儲(chǔ)存有一種類(lèi)型或多種類(lèi)型生物標(biāo)本，并能保持它們的生物活性以供研究之用的系統(tǒng)。 常用的生物標(biāo)本：微生物標(biāo)本、血液標(biāo)本、組織標(biāo)本、其他生物標(biāo)本（如唾液、胃液、尿液、精液、頭發(fā)、媒介生物） 生物標(biāo)本儲(chǔ)存: 冷藏（0短期儲(chǔ)存, -80長(zhǎng)期儲(chǔ)存） 生物標(biāo)本采集和儲(chǔ)存是研究成功的關(guān)鍵 要求： （1）在采集和儲(chǔ)存過(guò)程中不能受到“污染”，包括外界生物的、化學(xué)的和其他標(biāo)本的“交叉污染”。 （2）儲(chǔ)存的生物標(biāo)本在任何時(shí)候進(jìn)行檢測(cè)都可以獲得一致的結(jié)果。 （3）所有的生物標(biāo)本都應(yīng)有詳細(xì)的背景材料和鑒別標(biāo)識(shí)。實(shí)驗(yàn)室常用檢

20、測(cè)技術(shù)核酸技術(shù) 核酸電泳圖譜 核酸酶切電泳圖譜 核酸分子雜交 核酸體外擴(kuò)增 核酸序列分析 PCR蛋白質(zhì)技術(shù) 凝膠電泳、蛋白轉(zhuǎn)印雜交、色譜分析、蛋白質(zhì)測(cè)序酶學(xué)技術(shù) 多位點(diǎn)酶電泳法 生物芯片技術(shù) 基因芯片 其他技術(shù) 免疫學(xué)技術(shù) 如酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、熒光免疫試驗(yàn)(FIA) 等；色譜技術(shù) 如高效液相色譜技術(shù)(HPLC)等研究設(shè)計(jì)要點(diǎn)：研究假設(shè)的建立： 力求明確，并有相應(yīng)的分子生物學(xué)技術(shù)可予以檢驗(yàn)。研究模式的選擇： （見(jiàn)調(diào)查研究方法）生物標(biāo)志的選擇： 既要考慮到標(biāo)志物的特異性、檢測(cè)的敏感性、穩(wěn)定性以及費(fèi)用等，更要考慮研究的假設(shè)或目的。 以上構(gòu)成了分子流行病學(xué)研究設(shè)計(jì)中的三個(gè)相互聯(lián)系的基本要

21、素，而研究假設(shè)首當(dāng)其沖。 遺傳因素的考慮 應(yīng)與遺傳流行病學(xué)研究設(shè)計(jì)一并考慮。宏觀(guān)資料的收集：不應(yīng)忽視偏倚的控制： 選擇偏倚：樣本選擇偏倚、標(biāo)本采集偏倚（如采集的部位、時(shí)間、機(jī)體狀態(tài)、方法等） 信息偏倚：檢測(cè)偏倚、標(biāo)本儲(chǔ)存偏倚（儲(chǔ)存條件和時(shí)間）。 混雜偏倚：也可出現(xiàn)。輔以動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究問(wèn)題 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)可以較好控制 影響因素，連續(xù)采樣、動(dòng)態(tài)觀(guān)察研究樣本量的估計(jì)問(wèn)題 原理和方法同一般流行病學(xué)研 究設(shè)計(jì)。 資料分析傳統(tǒng)流行病學(xué)分析 生物標(biāo)志發(fā)生率、檢出率、危險(xiǎn)度；均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差等 血清流行病學(xué)分析 抗體的幾何平均滴度、陽(yáng)性率、感染率等 遺傳多態(tài)性分析 等位基因頻率、遺傳多態(tài)度、雜合度等遺傳關(guān)系分析過(guò) 遺傳一

22、致性(如相似系數(shù)S)、遺傳差異(如 遺傳距離D) 遺傳關(guān)系樹(shù)等研究設(shè)計(jì)研究目的 充分考慮創(chuàng)新性、實(shí)用性、可行性 測(cè)量指標(biāo) 生物標(biāo)志是否特異、穩(wěn)定，標(biāo)本采集是否方便，是否有靈敏而特異的檢測(cè)方法測(cè)量方法 簡(jiǎn)便、成熟，靈敏度和特異度高 調(diào)查方法與樣本 樣本有代表性，適量結(jié)果與分析 設(shè)計(jì)中要預(yù)測(cè)研究結(jié)果，并根據(jù)選擇的測(cè)量指標(biāo)和測(cè)量方法確定資料分析方法 質(zhì)量控制 注重現(xiàn)場(chǎng)質(zhì)量控制的同時(shí)，特別重視實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制 注意事項(xiàng) 預(yù)實(shí)驗(yàn) 基因型(genotype)：具有相同遺傳結(jié)構(gòu)的一類(lèi)生物體。 克隆(clone)：廣義 許多生物特征（表型或基因型）相同的生物體，雖然分離來(lái)源、地區(qū)、時(shí)間可能不同，但它們的這些特

23、征幾乎只能解釋為共同來(lái)源，則這些生物體稱(chēng)為一個(gè)克隆。狹義 一個(gè)生物體的無(wú)性繁殖群體，稱(chēng)為一個(gè)克隆?？寺∪?clone cluster)：遺傳關(guān)系非常緊密的多個(gè)生物克隆，可以劃分為一個(gè)克隆群。實(shí)例一研究題目 人漢坦病毒病（SNV）與病毒宿主關(guān)系的確定測(cè)量標(biāo)志 （SNV）/鹿鼠組織、血清、肺；死者取肺組織、存活者采集外周血單核細(xì)胞（介質(zhì)） 測(cè)量方法 PCR、Western blotting研究設(shè)計(jì)SNV 病毒的序列患者住宅的鹿鼠、附近對(duì)照住宅的鹿鼠、遠(yuǎn)處對(duì)照住宅的鹿鼠，所攜帶SNV 病毒的序列比對(duì)；用蛋白印跡法進(jìn)行SNV 的 IgM和IgG抗體檢測(cè)患者和死亡者的感染情況；用反轉(zhuǎn)錄PCR(RTPCR

24、)擴(kuò)增SNV RNA 中的特征片段 ,比較該片段上患者體內(nèi)病毒與鼠攜帶病毒的基因序列，應(yīng)用種系發(fā)生分析法判定病毒與宿主的聯(lián)系。結(jié)果分析從基因水平證明了該病毒是由鹿鼠傳染給人的；證明暴露地點(diǎn)為家庭居住地結(jié)論：本研究將先進(jìn)的分子生物學(xué)技術(shù)和流行病學(xué)現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查有機(jī)地結(jié)合起來(lái)。采用分子流行病學(xué)方法 ,有力地證實(shí)了 SNV 病毒是經(jīng)鹿鼠傳播給人的 ,并明確了暴露地點(diǎn) ,有助于深入研究相關(guān)因素 ,以有效地控制漢坦病毒肺綜合征的發(fā)生與流行。實(shí)例二 研究目的研究布魯氏菌的生物標(biāo)志測(cè)量指標(biāo)布魯氏菌的核苷酸序列同源性測(cè)量方法 基因外重復(fù)回文PCR(REPPCR)、細(xì)菌內(nèi)基因重復(fù)一致PCR(ERICPCR)和核酸測(cè)序 研究設(shè)計(jì)