4普通光學(xué)顯微鏡的使用及微生物簡單染色

1、實(shí)驗(yàn)四、普通光學(xué)顯微鏡的使用及微生物的簡單染色 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?1.學(xué)習(xí)普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造和功能；2.學(xué)習(xí)微生物的簡單染色，觀察細(xì)菌的形態(tài)。實(shí)驗(yàn)材料： 顯微鏡 載玻片 香柏油 擦鏡紙 雙層瓶 染色劑 滴管 菌液 普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造及原理光學(xué)部分鏡座、鏡臂、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺(tái)、推動(dòng)器、調(diào)節(jié)器等 光源、物鏡、目鏡、聚光器及虹彩光圈等 機(jī)械部分普通光學(xué)顯微鏡為光學(xué)部分目鏡物鏡調(diào)焦螺旋推進(jìn)器調(diào)光螺旋電源開關(guān)聚光器和虹彩光圈載物臺(tái)光源物鏡放大倍數(shù)：4:低倍10:低倍40:高倍100:油鏡目鏡放大倍數(shù)：1015 物鏡轉(zhuǎn)換器顯微鏡放大倍數(shù)目鏡放大倍數(shù)物鏡放大倍數(shù)顯微鏡使用總原則：先低倍后高倍先粗調(diào)后微

2、調(diào)放大倍數(shù)：1015 放大倍數(shù)：4:低倍10:低倍40:高倍100:油鏡油鏡的使用原理透鏡光線加油前玻片光線香柏油或液體石蠟加油后透鏡玻片四、油鏡的原理： 放大倍數(shù)可100倍之大，焦距很短，光強(qiáng)度最大。 油=1.52（香柏油）介質(zhì)折射率 水=1.33 空氣=1 玻璃=1.55香柏油對(duì)光的折射率與玻璃相似，光線直接通過香柏油進(jìn)入物鏡而不發(fā)生折射，不但增加了照明度，而且使油鏡的數(shù)值孔徑增加，用NA表示，一般在1.21.4。低高倍鏡頭等干鏡NA都低于1.0。若以可見光的平均波長為0.55m來計(jì)算，數(shù)值孔徑通常在0.65的高倍鏡只能分辨出距離不小于0.4m的物體而油鏡的分辨率卻可達(dá)到0.2m左右?？梢?/p>

3、顯微鏡的放大效能是由數(shù)值孔徑?jīng)Q定的。分辨率（最大可分辨距離）= /2NA顯微鏡使用的主要步驟：取鏡檢查對(duì)光夾片低倍物鏡調(diào)光、調(diào)焦找目標(biāo)，移中央換高倍找目標(biāo)教師評(píng)分清潔還鏡。 顯微鏡用畢后的處理拔掉電源插頭 下降載物臺(tái) 取干凈擦鏡紙拭去鏡頭上的香柏油 取干凈擦鏡紙蘸少許二甲苯擦去鏡頭上的殘留油跡 取干凈擦鏡紙擦去殘留的二甲苯 將顯微鏡的各部位還原，物鏡轉(zhuǎn)成“八”字形，擦干凈鏡體，罩上防塵罩。實(shí)驗(yàn)任務(wù)： 1、每個(gè)同學(xué)自己動(dòng)手單染三張片子進(jìn)行觀察。其中老師檢查一片。 返回實(shí)驗(yàn)步驟1、涂片左手持菌液試管,右手持接種環(huán)在火焰中灼燒,冷卻后從試管中取菌液一滴,在潔凈載玻片上做一涂膜;從固體斜面或平板上取菌時(shí),用無菌接種環(huán)取少量菌體,涂抹均勻于預(yù)先滴有的一滴自來水地玻片上; 2、干燥在空氣中自然干燥或在火焰快速通過干燥(與熱固定同步進(jìn)行).3、熱固定用鑷子夾住涂片一端,在火焰上連續(xù)通過幾次;以載玻片在手背上試感覺不燙為宜.4、染色在固定好的菌膜上滴加美蘭染色劑，染色劑量以剛好蓋住菌膜為宜，染色1min.5、水洗 倒去染液，用自來水沿玻片一端沖洗，直至流下的水無色為止。6、干燥 用吸水紙吸干7、鏡檢七、實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求： 1、根據(jù)觀察的球，桿菌的觀察實(shí)況畫示意圖，各一圖。2、用油鏡觀察時(shí)，為什么要求載玻片上加香柏油？3、思考題(4)影響顯微鏡分辨率的因素有哪些？