TCT沉降染色實(shí)驗(yàn)記錄電子教案

1、Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。TCT沉降染色實(shí)驗(yàn)記錄-實(shí)驗(yàn)記錄實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖炀氄莆誘CT機(jī)器及手工操作過程。實(shí)驗(yàn)器材、試劑器材：全自動(dòng)TCT制片儀、震蕩器、旋渦混合器、低速水平式離心機(jī)、移液搶、15mL離心管、15mL過濾器、3mL吸管、真空泵、試管架、載玻片、蓋玻片、玻片架、染色槽、記號(hào)筆、2B鉛筆、量筒、試劑瓶、恒溫干燥箱、滴定管、TCT專用吸嘴、定時(shí)器、吸水紙、光學(xué)顯微鏡試劑：梯度離心液、細(xì)胞固定保存液、100緩沖液、異丙醇、無水乙醇、二甲苯、84消毒液、純水（蒸餾水）、蘇木素、EA/OG、95%乙醇、75%乙醇配制試劑緩沖液：1

2、00緩沖液用純水1:99稀釋。沖洗液：異丙醇和無水乙醇1:1混合廢液針清洗液：84和純化水1:20混合四、實(shí)驗(yàn)步驟將裝有樣本的細(xì)胞固定保存液瓶編號(hào)如下：實(shí)驗(yàn)編號(hào)12345樣本號(hào)4025926073647293736472714025926473647295取樣本體積1mL2mL3mL2mL4mL在離心管上用記號(hào)筆寫編號(hào)如下：日期2012.12.252012.12.252012.12.252012.12.252012.12.25實(shí)驗(yàn)編號(hào)12345取樣本體積1mL2mL3mL2mL4mL在筆記本上記錄如下：日期2012.12.252012.12.252012.12.252012.12.252012

3、.12.25實(shí)驗(yàn)編號(hào)12345樣本號(hào)4025926073647293736472714025926473647295操作類型上機(jī)上機(jī)上機(jī)上機(jī)手工取樣本體積1mL2mL3mL2mL4mL將標(biāo)本瓶放在震蕩器上振蕩30秒，使其充分混勻。在離心管中加入4mL梯度離心液，用移液槍通過過濾器，加入對(duì)應(yīng)體積的細(xì)胞保存液。取下過濾器丟掉。將離心管放入離心機(jī)中，以轉(zhuǎn)速1080轉(zhuǎn)2分鐘，完成后取下離心管，用真空泵洗掉上面的液體，使離心管中剩下4mL液體，再放入離心機(jī)中，以轉(zhuǎn)速2000轉(zhuǎn)十分鐘。取出離心管，倒掉上清液。（1）上機(jī)的離心管，直接把底部接觸漩渦混合器，混合30s。（此次未進(jìn)行操作，此為失誤，導(dǎo)致細(xì)胞重疊

4、）（2）手工的5號(hào)離心管，在離心管中加入500800L緩沖液。在混合器上震蕩30秒，使底部的細(xì)胞呈懸浮狀態(tài)（此次錯(cuò)加入沖洗液，為失誤，導(dǎo)致染色失敗）在玻片上用鉛筆寫上：日期2012.12.252012.12.252012.12.252012.12.252012.12.25實(shí)驗(yàn)編號(hào)12345取樣本體積1mL2mL3mL2mL4mL（1）上機(jī)操作：放入標(biāo)本離心管、吸嘴、玻片、染色槽、把TCT儀左側(cè)的H2O（緩沖液）、ALC（沖洗液）、HEMA（蘇木素）、EA/OG管道插入對(duì)應(yīng)的試劑瓶中。（2）手工操作：在離心管取出300500L細(xì)胞保存液倒入已放好的染色槽中，沉降十分鐘（1）上機(jī)的離心管：開機(jī)，開

5、電源機(jī)器自檢，進(jìn)入?yún)?shù)設(shè)置界面左右鍵選擇標(biāo)本數(shù)4按設(shè)置建選程序按充管鍵充管完成充管后，按設(shè)置鍵返回按運(yùn)行鍵，自動(dòng)運(yùn)行。（2）手工的離心管：沉降完后，倒掉上清液。加入沖洗液兩次（第一次直接倒掉第二次過35s倒掉可1次時(shí)間放長(zhǎng)些再倒掉）。加蘇木素2分鐘，2次緩沖液，1次沖洗液，沖盡殘液。加EA/OG，2分鐘，兩次沖洗。上機(jī)的離心管運(yùn)行完，按設(shè)置返回。然后，上機(jī)和手工都是取下染色槽，拿出玻片，用玻片架將玻片放入2缸95%酒精、2缸無水乙醇中，進(jìn)行震洗。干封：用恒溫干燥箱、烘箱、或吹風(fēng)機(jī)用中性樹膠、蓋玻片封片。濕封：過二甲苯顯微鏡觀察（清晰度、染色深淺、有無雜質(zhì)、粘液，胞漿、胞核區(qū)分清楚，細(xì)胞數(shù)量，主要觀察中層細(xì)胞,中層細(xì)胞是藍(lán)色,上層細(xì)胞是紅色,腫瘤細(xì)胞的胞核比正常細(xì)胞的大）。清洗機(jī)器：（1）按排管鍵排管（2）按照顯示屏提示，將管道從蘇木素（HEMA）、EA/OG中取出放入對(duì)應(yīng)的清洗液：純水和75%乙醇中，按運(yùn)行。完成后，取