大腸桿菌生長曲線的制備

1、大腸桿菌生長曲線的制備一、實驗?zāi)康? 了解細菌生長曲線特點及測定原理；2學習用比濁法測定細菌的生長曲線。二、基本原理將少量細菌接種到一定體積的、適合的新鮮培養(yǎng)基中， 在適宜的條件下進行培養(yǎng)，定時測定培養(yǎng)液中的菌量，以菌 量的對數(shù)作縱坐標，生長時間作橫坐標，繪制的曲線叫生長 曲線。它反映了單細胞微生物在一定環(huán)境條件下于液體培養(yǎng) 時所表現(xiàn)出的群體生長規(guī)律。依據(jù)其生長速率的不同，一般 可把生長曲線分為延緩期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期。這四 個時期的長短因菌種的遺傳性、接種量和培養(yǎng)條件的不同而 有所改變。因此通過測定微生物的生長曲線，可了解各菌的 生長規(guī)律，對于科研和生產(chǎn)都具有重要的指導(dǎo)意義。測定微生物

2、的數(shù)量有多種不同的方法，可根據(jù)要求和實驗室 條件選用。本實驗采用比濁法測定，由于細菌懸液的濃度與 光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度計測定菌懸 液的光密度來推知菌液的濃度，并將所測的OD值與其對應(yīng) 的培養(yǎng)時間作圖，即可繪出該菌在一定條件下的生長曲線， 此法快捷、簡便。三、器材1菌種：大腸桿菌2培養(yǎng)基：LB培養(yǎng)基（蛋白胨10g酵母膏5g Nacl 10g pH7.07.2）3儀器和器具：721分光光度計，比色杯，恒溫搖床，無菌 吸管，試管，三角瓶。四、方法與步驟1種子液制備取大腸桿菌斜面菌種1支，以無菌操作挑取1環(huán)菌苔， 接入LB培養(yǎng)基中，靜止培養(yǎng)18h作種子培養(yǎng)液。2標記編號取11支無

3、菌試管，分別編號為0、1.5、3、4、6、8、 10、12、14、16、20h。3接種培養(yǎng)吸取2.5ml種子液加入裝有60mlLB培養(yǎng)基的錐形瓶 中，混勻。分別取5ml加入到11根試管，于37C下振蕩 培養(yǎng)。然后分別按對應(yīng)時間將試管取出，立即放冰箱中貯存, 待培養(yǎng)結(jié)束時一同測定OD值。4生長量測定將未接種的LB培養(yǎng)基傾倒入比色杯中，選用600nm 波長分光光度計上調(diào)節(jié)零點，作為空白對照，并對不同時間 培養(yǎng)液從0h起依次進行測定，對濃度大的菌懸液用未接種 的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基適當稀釋后測定，使其OD值在 0.10.0.65以內(nèi)，經(jīng)稀釋后測得的OD值要乘以稀釋倍數(shù)，才是培養(yǎng)液實際的OD值。五、實驗報告1將測定的OD值填入下表:時間01.534681012141620光密度值（OD600）2以上述表格中的時間為橫坐標，OD600值為縱坐標，繪 制大腸桿菌的生長曲線。3思考：（1）用本實驗方法測定微生物生長曲線