銀杏葉提取物脂質(zhì)體片劑的制備及檢測課件

1、銀杏葉提取物脂質(zhì)體片劑的制備吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實驗教學(xué)中心1、目的要求2、實驗流程3、實驗簡介4、實驗原理5、實驗步驟6、實驗結(jié)果目的要求1.掌握乙醇注入法制備脂質(zhì)體的工藝2.了解噴霧干燥法的原理3.掌握干法制粒壓片的一般工藝4.掌握多沖壓片機的使用方法及片劑質(zhì)量的檢查方法5.了解高效液相色譜檢測方法的原理實驗流程脂質(zhì)體混懸液脂質(zhì)體粉末脂質(zhì)體片劑分散性載體噴霧干燥片重差異硬度試驗溶出度試驗干法制粒實驗簡介銀杏科植物銀杏Ginkgo biloba L的干燥葉。銀杏葉 以銀杏的葉為原料，采用適當(dāng)?shù)娜軇崛〉挠行С煞指患囊活惍a(chǎn)品。 銀杏葉提取物主要包含兩類化合物，即銀杏黃酮和銀杏內(nèi)酯，在心腦血管疾

2、病的預(yù)防和治療方面有卓越的療效和優(yōu)越的安全性，用于癖血阻絡(luò)引起的胸痹、心痛、中風(fēng)、半身不遂，舌強語塞；冠心病穩(wěn)定型心絞痛、腦梗塞等。具有多靶點多種成分協(xié)同作用。 銀杏葉提取物我國和歐美發(fā)達(dá)國家在天然藥物和保健食品中都常用。銀杏葉雖有廣泛的藥理活性，但其有效組分銀杏黃酮親水性和親脂性均差，口服難以吸收，生物利用度較低。為了增加對銀杏葉藥效成分的吸收、提高生物利用度脂質(zhì)體 銀杏葉提取物制劑實驗原理60年代初，Begkan等發(fā)現(xiàn)磷脂分散在水中可形成多層封閉囊泡，類似洋蔥結(jié)構(gòu)。第一個上市用于皮膚病藥品：益康唑脂質(zhì)體凝膠于1988年瑞士Cilag制藥公司注冊第一個上市用于治療真菌感染的藥品：注射液兩性霉

3、素B脂質(zhì)體于1990年美國一家公司注冊在愛爾蘭上市銷售第一個抗癌藥物脂質(zhì)體阿霉素脂質(zhì)體：美國Sequus制藥公司于1995年底在美國獲得FDA批準(zhǔn)一、脂質(zhì)體實驗原理脂質(zhì)體是利用磷脂雙分子層膜所形成的囊泡包裹藥物分子而形成的制劑。磷脂是雙極性的，一頭親水，一頭親脂，親水基朝外頭，親脂基朝內(nèi)尾，2個磷脂分子“尾”部相對構(gòu)成了一個雙層分子結(jié)構(gòu)。1.脂質(zhì)體定義當(dāng)兩親性分子（磷脂）分散在水相時，分子的疏水尾部傾向于聚集在一起，避開水相，而親水頭部暴露于水相，形成具有雙分子層結(jié)構(gòu)的封閉囊泡。在囊泡內(nèi)水相和雙分子膜內(nèi)可以包裹多種藥物，類似于超微囊結(jié)構(gòu)。這種將藥物包封于類脂質(zhì)雙分子層薄膜中所制成的超微球形載體

4、制劑，稱為脂質(zhì)體，一般由磷脂和膽固醇構(gòu)成 見結(jié)構(gòu)示意圖實驗原理脂質(zhì)體對細(xì)胞的作用機理：由于脂質(zhì)體與細(xì)胞膜（生物膜）結(jié)構(gòu)相似，脂質(zhì)體的主要成份磷脂等類脂物也是細(xì)胞膜的主要成份，所以脂質(zhì)體與細(xì)胞膜之間有很強的親合力。脂質(zhì)體的膜與生物膜融合，脂質(zhì)體所包含的活性成份被釋放而進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，或者整個脂質(zhì)體被細(xì)胞吞噬，活性成份在細(xì)胞內(nèi)被吸收。2.脂質(zhì)體原理實驗原理脂質(zhì)體系一種人工細(xì)胞膜，由磷脂為骨架膜材及附加劑組成。磷脂：天然磷脂（豆磷脂，卵磷脂等） 合成磷脂（二棕櫚酰磷脂酰膽堿，二硬脂酰磷脂酰膽堿）附加劑：膽固醇，也是兩親性物質(zhì)，與磷脂混合使用，可制備穩(wěn)定的脂質(zhì)體，其作用是調(diào)節(jié)雙分子層流動性，減低脂質(zhì)體膜的

5、通透性。3.脂質(zhì)體組成實驗原理小單室(層)脂質(zhì)體：粒徑在2050nm，凡經(jīng)超聲波處理的脂質(zhì)體混懸液，絕大部分為小單室脂質(zhì)體；大單室脂質(zhì)體：粒徑約為2001000nm，用乙醚注入法制備的脂質(zhì)體多屬這一類。多室(層)脂質(zhì)體：粒徑約在4003500nm；4.脂質(zhì)體分類實驗原理5.1 薄膜分散法一種經(jīng)典的制備方法，它可形成多室脂質(zhì)體，經(jīng)超聲處理，得到小單室脂質(zhì)體。特點是操作簡便，但包封率較低。5.2 反相蒸發(fā)法制備多層脂質(zhì)體或大單室脂質(zhì)體的方法，此法包封率高。5.脂質(zhì)體制備方法實驗原理5.3 注入法根據(jù)所用溶解磷脂的溶劑，可分為乙醚注入法和乙醇注入法。乙醇注入法是將磷脂、膽固醇和脂溶性藥物及抗氧劑等溶

6、于適量的乙醇中，在攪拌下慢慢滴入5060水性溶液中，蒸去乙醇，即可形成脂質(zhì)體。此法適于實驗室小量制備脂質(zhì)體。乙醇注入法制備脂質(zhì)體，脂質(zhì)體混懸液一般可保留1020乙醇。實驗原理5.4 冷凍干燥法適于在水中不穩(wěn)定的藥物制備脂質(zhì)體。5.5 熔融法適于制備多相脂質(zhì)體，制得的脂質(zhì)體穩(wěn)定，可加熱滅菌。5.6 過膜擠壓法磷脂溶于有機溶劑中，脂溶性藥物可加在有機溶劑中實驗原理1.定義為了解決脂質(zhì)體混懸液在貯存期間易發(fā)生聚集、融合、藥物滲漏以及天然磷脂易氧化、水解等問題而提出的概念，系將脂質(zhì)體膜材和藥物的混合溶液在減壓攪拌下逐步分布到一種可溶性固體載體表面，形成可自由流動的粉體狀制劑。由于尚未形成脂質(zhì)體混懸液，

7、因此稱之為前體脂質(zhì)體，使用前加水或緩沖液水化即形成脂質(zhì)體混懸液。二、前體脂質(zhì)體實驗原理 減壓干燥法 流化床包衣法 冷凍干燥法 噴霧干燥法2.前體脂質(zhì)體制備方法實驗原理常利用改進(jìn)的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，使膜材與藥物的混合溶液在減壓旋轉(zhuǎn)下逐步在固相載體表面形成一層磷脂薄膜，干燥后得流動性良好的前體脂質(zhì)體顆粒。機理類似于薄膜分散法。需用有機溶劑；磷脂在載體表面的分布不均勻；操作較復(fù)雜；水溶性藥物包封率低；脂溶性藥物有較高的包封率。適用于蛋白質(zhì)類藥物、脂溶性藥物。2.1 減壓干燥法實驗原理載體、輔料粉碎過篩，與藥物混合均勻或制粒，將脂質(zhì)體和表面活性劑溶于有機溶劑后，用流化床轉(zhuǎn)動，以切線噴方式噴于粉末或粒子表面，

8、噴完后干燥，取出篩分得前體脂質(zhì)體。機理為采用包衣材料磷脂對粉末進(jìn)行包衣?？梢源罅恐苽淇诜蛲庥玫那绑w脂質(zhì)體粉末，問題是磷脂黏性較大，干燥過程較一般的包衣材料困難。2. 2 流化床包衣法實驗原理磷脂、藥物及載體等成分溶解或分散到適宜的溶劑中，分裝入西林瓶或安瓿瓶后，冷凍干燥成粉?？上戎苽渲|(zhì)體，再經(jīng)凍干制備。機理是水不經(jīng)過液相而直接升華為水汽。制備過程中磷脂及藥物均較穩(wěn)定，但成本較高。適用于熱敏性藥物。2.3 冷凍干燥法實驗原理將膜材、附加劑及藥物等溶解或分散在適宜溶劑中，經(jīng)噴霧干燥制得粉末狀前體脂質(zhì)體?？上戎苽渲|(zhì)體，再經(jīng)噴霧干燥制備。機理：機械作用霧化后，與熱空氣接觸，水分迅速汽化。成本低，

9、生產(chǎn)周期短。問題是操作溫度較高，可能會引起磷脂和藥物的氧化。適用于脂溶性和水溶性藥物、中藥提取物。2.4 噴霧干燥法實驗原理2.4.1 干燥原理將液態(tài)物料濃縮至適宜的密度后，使霧化成細(xì)小霧滴，與一定流速的熱氣流進(jìn)行熱交換，使水分迅速蒸發(fā)，物料干燥成粉末狀或顆粒狀的方法。實驗原理2.4.2 基本過程藥液自導(dǎo)管經(jīng)蠕動泵輸送至噴頭后，進(jìn)入噴頭的壓縮空氣將藥液自噴頭經(jīng)渦流器利用離心力增速成霧滴噴入干燥室，再與熱氣流混合進(jìn)行熱交換后很快即被干燥。當(dāng)開動鼓風(fēng)機后，空氣經(jīng)濾過器、加熱器加熱至設(shè)定溫度后，自干燥塔上部沿切線方向進(jìn)入干燥塔，干燥塔內(nèi)一般保持在120以下，少部分干燥的細(xì)粉落入收集器內(nèi)，大部分干燥的

10、粉末隨熱空氣進(jìn)入分離室后捕集于另一收集器中，熱廢氣自排氣口排出。實驗原理 噴霧干燥基本過程示意圖實驗原理2.4.3 優(yōu)點1）干燥過程非常迅速，幾秒內(nèi)結(jié)束；2）干燥過程中液滴溫度不高,產(chǎn)品質(zhì)量較好；3）噴霧干燥后產(chǎn)品不需進(jìn)一步磨碎，簡化工序；4）噴霧干燥時，可以調(diào)節(jié)改變干燥條件而調(diào)整產(chǎn)品質(zhì)量指標(biāo)（如粉末的容積密度，粒大小等）；5）產(chǎn)品具有良好的分散性，流動性和溶解性；6）密閉且負(fù)壓，保證了生產(chǎn)的衛(wèi)生條件。實驗原理2.4.4 缺點1）體積傳熱系數(shù)小，單位產(chǎn)品耗熱量大，熱效率低；2）設(shè)備體積龐大而復(fù)雜；3）一次性投入較大；4）干燥時物料易發(fā)生黏壁。實驗原理片劑是應(yīng)用最廣泛的劑型之一，壓片的工藝流程中

11、各工序都直接影響片劑的質(zhì)量。1.優(yōu)點:劑量準(zhǔn)確、質(zhì)量穩(wěn)定、服用方便、成本低。2.制片的方法：制顆粒壓片 結(jié)晶直接壓片 粉末直接壓片 3.制顆粒的方法：干法和濕法。三、片劑實驗原理干法制料壓片的工藝流程： 混合均勻主藥輔料（填充劑、粘合劑或崩解劑）- 干法制粒混合粉料- 干顆粒 -壓片 實驗原理顆粒的制造是制片的關(guān)鍵。干法制粒，是將藥物和輔料的粉末混合均勻、壓縮成大片狀或板狀后，粉碎成所需大小顆粒的方法。該法靠壓縮力使分子間產(chǎn)生結(jié)合力，其制備方法有壓片法和滾壓法。干法制粒壓片法常用于熱敏性物料、遇水易分解的藥物，方法簡單，省工省時。實驗原理欲制好顆粒，首先必須根據(jù)主藥的性質(zhì)選好粘合劑或填充劑，藥

12、物與輔料的性質(zhì)要相近，這樣可以避免混合不均勻。因為物料的堆密度、粒度分布等物理性質(zhì)相近時混合的均勻性才好，特別是當(dāng)主藥含量少的時候，成品需要做含量均勻度，如果混合不好問題就大了。不溶性潤滑劑最后加入。注意：一定要等其他的敷料混合均勻后，再加入不溶性潤滑劑，并且要控制好混合時間，否則會影響崩解和溶出。實驗原理1.定義溶出度系指藥物活性成分從片劑、膠囊劑或顆粒劑等制劑在規(guī)定條件下溶出的速率和程度。凡檢查溶出度的制劑，不再進(jìn)行崩解時限檢查。藥物只有固體制劑中的活性成分溶解之后，才能為機體吸收。溶出度試驗?zāi)苡行У貐^(qū)分同一藥物制劑生物利用度的差異，是控制固體制劑內(nèi)在的重要指標(biāo)之一。四、溶出度實驗原理2.

13、測定方法中國藥典（2010年版）規(guī)定了3種測定方法，分別是籃法、漿法和小杯法。本實驗采用的小杯法。儀器裝置主要包括攪拌槳、溶出杯以及漿桿與電動機相連裝置。小杯法儀器裝置實驗原理攪拌槳 形狀如圖所示。漿桿上部直徑為9.75mm 0.35mm，漿桿下部直徑為6.0mm0.2mm；漿桿旋轉(zhuǎn)時，漿軸與溶出杯的垂直軸在任一點的偏差均不得大于2mm;攪拌槳旋轉(zhuǎn)時，A，B兩點的擺動幅度不得超過0.5mm。小杯法攪拌槳結(jié)構(gòu)實驗原理溶出杯由硬質(zhì)玻璃或其他惰性材料制成的透明或棕色的、底部為半球形的250ml杯狀容器，內(nèi)徑為62mm3mm，高為126mm6mm；溶出杯配有適宜的蓋子，防止在試驗過程中溶出介質(zhì)的蒸發(fā)；

14、蓋上有適當(dāng)?shù)目祝行目诪闈{桿的位置，其他孔供取樣或測量溫度用。溶出杯置恒溫水浴中或其他適當(dāng)?shù)募訜嵫b置。實驗原理1.定義以高壓液體為流動相的液相色譜分析法稱高效液相色譜法（HPLC）。其基本方法是用高壓泵將具有一定極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑泵入裝有填充劑的色譜柱，經(jīng)進(jìn)樣閥注入的樣品被流動相帶入色譜柱內(nèi)進(jìn)行分離后依次進(jìn)入檢測器，由記錄儀、積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色譜信號或進(jìn)行數(shù)據(jù)處理而得到分析結(jié)果。五、高效液相色譜實驗原理2.特點1）分離效能高2）選擇性好3）靈敏度高4）分析速度快5）適用范圍廣(樣品不需氣化，只需制成溶液即可)實驗原理3.分類按固定相不同可分為液-液色譜法和液-固色譜法。

15、按色譜原理不同可分為分配色譜法和吸附色譜法。目前，化學(xué)鍵合相色譜應(yīng)用最為廣泛，如C18（ODS），它是在液-液色譜法的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的。將固定液的官能團(tuán)鍵合在載體上，形成的固定相稱為化學(xué)鍵合相，不易流失是其特點，一般認(rèn)為有分配與吸附兩種功能，常以分配作用為主。實驗原理4.分類根據(jù)固定相與流動相極性的不同，液-液色譜法又可分為正相色譜法和反相色譜法，當(dāng)流動相的極性小于固定相的極性時稱正相色譜法，主要用于極性物質(zhì)的分離分析；當(dāng)流動相的極性大于固定相的極性時稱反相色譜法，主要用于非極性物質(zhì)或中等極性物質(zhì)的分離分析。實驗原理5.系統(tǒng)組成5.1 高壓輸液系統(tǒng)由貯液罐、脫氣裝置、高壓輸液泵、過濾器、梯度洗

16、脫裝置等組成。1）貯液罐由玻璃、不銹鋼或氟塑料等耐腐蝕材料制成。貯液罐的放置位置要高于泵體，以保持輸液靜壓差，使用過程應(yīng)密閉，以防止因蒸發(fā)引起流動相組成改變，還可防止氣體進(jìn)入。實驗原理2）流動相流動相常用甲醇-水或乙腈-水為底劑的溶劑系統(tǒng)。流動相在使用前必須脫氣，否則很易在系統(tǒng)的低壓部分逸出氣泡，氣泡的出現(xiàn)不僅影響柱分離效率，還會影響檢測器的靈敏度甚至不能正常工作。脫氣的方法有：加熱回流法、抽真空脫氣法、 超聲脫氣法、在線真空脫氣法等。實驗原理3）高壓輸液泵是高效液相色譜儀的關(guān)鍵部件之一，用以完成流動相的輸送任務(wù)。對泵的要求是：耐腐蝕、耐高壓、無脈沖、輸出流量范圍寬、流速恒定，且泵體易于清洗和

17、維修。高壓輸液泵可分為恒壓泵和恒流泵兩類，常使用恒流泵（其壓力隨系統(tǒng)阻力改變而流量不變）。實驗原理5.2 進(jìn)樣系統(tǒng)1）手動進(jìn)樣系統(tǒng)常用六通閥進(jìn)樣器進(jìn)樣，進(jìn)樣量由定量環(huán)確定。操作時先將進(jìn)樣器手柄置于采樣位置（LOAD），此時進(jìn)樣口只與定量環(huán)接通，處于常壓狀態(tài)，用微量注射器（體積應(yīng)大于定量環(huán)體積）注入樣品溶液，樣品停留在定量環(huán)中。然后轉(zhuǎn)動手柄至進(jìn)樣位置（INJECT），使定量環(huán)接入輸液管路，樣品由高壓流動相帶入色譜柱中。實驗原理2）自動進(jìn)樣器具有操作方便、準(zhǔn)確度高、自動控制、遠(yuǎn)程監(jiān)控等特點。具有超大樣品臺，進(jìn)行編程后，可在非人工監(jiān)視下連續(xù)工作，進(jìn)而提高了工作效率，減少了操作誤差。 實驗原理5.3

18、色譜柱由柱管和填充劑組成。柱管多用不銹鋼制成。柱內(nèi)填充劑有硅膠和化學(xué)鍵合固定相。在化學(xué)鍵合固定相中有十八烷基硅烷鍵合硅膠（又稱ODS柱或C18柱）、辛烷基硅烷鍵合硅膠（C8柱）、氨基或氰基鍵合硅膠等，在中藥制劑的定量分析中，主要使用ODS柱。由于ODS屬于非極性固定相，在分離分析時一般使用極性流動相，所以屬反相色譜法。常用流動相有甲醇水或乙腈水等，洗脫時極性大的組分先出柱，極性小的組分后出柱。實驗原理5.4 檢測器在高效液相色譜法中主要使用紫外檢測器（UVD），可分為固定波長、可變波長和二極管陣列檢測器三種類型，以可變波長紫外檢測器應(yīng)用最廣泛。檢測器由光源、流通池和記錄器組成，其工作原理是進(jìn)入

19、檢測器的組分對特定波長的紫外光能產(chǎn)生選擇性吸收，其吸收度與濃度的關(guān)系符合光吸收定律。實驗步驟1 銀杏葉提取物脂質(zhì)體粉末的制備1.1 試劑銀杏葉提取物、蛋黃卵磷脂、膽固醇、脫氧膽酸鈉、甘露醇、無水乙醇1.2 器材恒溫磁力攪拌器、超聲波清洗器、鐵架臺、溫度計、噴霧干燥儀、10mL注射器、100ml燒杯、50ml燒杯實驗步驟1.3 處方銀杏葉提取物 200mg脫氧膽酸鈉 67mg蛋黃卵磷脂 225mg甘露醇 735mg實驗步驟1.4 操作1）藥物相的配制：取處方量的銀杏葉提取物和脫氧膽酸鈉置于100ml燒杯中，加入去離子水50ml和乙醇5ml中，即得。2）磷脂相的配制：取處方量的蛋黃卵磷脂置于50m

20、l燒杯中，加入7ml乙醇，60水浴保溫。3）脂質(zhì)體混懸液的制備：取藥物相置磁力攪拌器上，加熱至5060，用10ml注射器吸取磷脂相，30s內(nèi)注入到藥物相中，保持溫度繼續(xù)攪拌10min，取下磁力攪拌器，即得。實驗步驟4）待噴霧溶液的制備：向脂質(zhì)體混懸液中加入處方量的甘露醇，常溫攪拌10min使溶解，等待噴霧干燥。5）噴霧干燥：安裝噴霧干燥儀，調(diào)節(jié)進(jìn)口溫度為130，進(jìn)料流量為450ml/h，進(jìn)行噴霧干燥。噴霧干燥結(jié)束后，收集粉末，并稱重。實驗步驟2 銀杏葉提取物脂質(zhì)體片劑的制備2.1 試劑自制銀杏葉提取物脂質(zhì)體粉末、微晶纖維素、聚維酮K302.2 器材干法制粒機、多沖壓片機實驗步驟2.3 處方脂質(zhì)

21、體粉末 20g微晶纖維素 1g聚維酮k30 0.2g(0.26g/片)實驗步驟2.4 操作稱取脂質(zhì)體粉末、微晶纖維素和聚維酮k30，混合均勻。加入到干法制粒機中，調(diào)節(jié)送料頻率、壓片頻率和制粒頻率，得到均勻性和流動性均好的干顆粒。計算片重，調(diào)節(jié)多沖壓片機的填充量和片厚，進(jìn)行壓片。實驗步驟3 銀杏葉提取物脂質(zhì)體片劑的檢測3.1 試劑濃鹽酸、色譜級甲醇、色譜級磷酸3.2 器材硬度計、脆碎度檢測儀、溶出儀、數(shù)顯控溫電熱套、提取回流裝置、移液槍、高效液相色譜儀、實驗步驟3.3 外觀評價應(yīng)片形一致，表面完整光潔，邊緣整齊，色澤均勻。 3.4 片重差異取20片精密稱定重量，求得平均片重，再稱定各片的重量。按下式計算片重差異。 單片重-平均片重片重差異100% 平均片重實驗步驟藥典規(guī)定，0.3g以下的藥片的重量差異限度為7.5；0.3g或0.3g以上者為5。超出重量差異限度的藥片不得多于2片，并不得有1片超過限度的1倍。本實驗所制片劑重量差異限度按7.5%規(guī)定。實驗步驟3.5 硬度試驗用硬度計測試片劑的硬度，當(dāng)片劑破碎時，記錄硬度計顯示的壓力即為硬度。測36片，取平均值。能承受4060N的壓力即為合格。實驗步驟3.6 溶出度試驗采用小杯法。以去離子水為溶出介質(zhì)，超聲脫氣，取100mL置于漿杯中。待溶出介質(zhì)溫度恒定在370.5后，取銀杏葉提取物脂質(zhì)體片6片，置于漿杯中，設(shè)定轉(zhuǎn)速100