實驗十細菌生化實驗-微生物實驗

1、實 驗 十 細菌生化實驗1一、實驗目的1、證明不同微生物對各種有機大分子的水解能力不同，從而說明不同微生物有著不同的酶系統(tǒng)。2、掌握進行微生物大分子水解試驗的原理和方法。3、了解糖發(fā)酵的原理和在腸道細菌鑒定中的重要作用。4、掌握通過糖發(fā)酵鑒別不同微生物的方法。5、了解IMViC與硫化氫反應的原理及其在腸道菌鑒定中的意義和方法。 2二、實驗原理1、微生物對生物大分子的分解利用淀粉水解：淀粉酶油脂水解：脂肪酶明膠液化：蛋白酶石蕊牛乳試驗：產(chǎn)酸、產(chǎn)堿、胨化、酸凝固等。2、糖發(fā)酵試驗產(chǎn)酸：溴甲酚紫指示劑大腸桿菌：產(chǎn)氣腸桿菌：產(chǎn)氣：杜氏小管檢測大腸桿菌：產(chǎn)氣腸桿菌：3、IMViC試驗3IMViC試驗吲哚

2、試驗：甲基紅試驗（M.R.試驗）：伏-普試驗（乙酰甲基甲醇試驗）：檸檬酸鹽試驗：色氨酸酶：色氨酸吲哚對二甲基氨基苯甲醛玫瑰吲哚（紅色）大腸桿菌：產(chǎn)氣腸桿菌：產(chǎn)酸能力：強，甲基紅變紅；弱：甲基紅不變色大腸桿菌：陽性產(chǎn)氣腸桿菌：陰性葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇2,3-丁二醇乙酰甲基甲醇OH二乙酰精氨酸的胍基紅色化合物大腸桿菌：陽性產(chǎn)氣腸桿菌：陰性能否利用檸檬酸作為碳源大腸桿菌：陰性產(chǎn)氣腸桿菌：陽性4三、實驗材料1、菌種：枯草芽孢桿菌，大腸桿菌，金黃色葡萄球菌，銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa），普通變形桿菌（Proteus vularis），產(chǎn)氣腸桿菌。2、培養(yǎng)基：固體油脂培

3、養(yǎng)基，固體淀粉培養(yǎng)基，明膠培養(yǎng)基試管，石蕊牛奶試管，尿素瓊脂試管、葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管和乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管各3支，普通變形桿菌（內(nèi)裝有倒置的德漢氏小管） ，蛋白胨水培養(yǎng)基，葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基，檸檬酸鹽斜面培養(yǎng)基，醋酸鉛培養(yǎng)基。3、溶液或試劑：革蘭氏染色用盧氏碘液（Lugols iodine solution），甲基紅指示劑，40% KOH，5% -萘酚，乙醚，吲哚試劑等。 4、儀器或其他用具：無菌平板，無菌試管，接種環(huán)，接種針，試管架。5四、實驗步驟1、細菌水解大分子物質(zhì)試驗 淀粉水解試驗培養(yǎng)基：淀粉培養(yǎng)基平板菌種：大腸桿菌和枯草芽孢桿菌方法：平板上劃“十”字接種注意：接種前在平板底部作記號

4、；“十”字不要太大 油脂水解試驗培養(yǎng)基：油脂培養(yǎng)基平板菌種：大腸桿菌和金黃色葡萄球菌方法：平板上劃折線接種注意：接種前在平板底部作記號 明膠液化試驗培養(yǎng)基：試管明膠培養(yǎng)基菌種：大腸桿菌或 產(chǎn)氣腸桿菌方法：穿刺接種注意：20培養(yǎng) 石蕊牛乳試驗培養(yǎng)基：試管石蕊牛乳培養(yǎng)基（2支）菌種：粘乳產(chǎn)堿菌或銅綠假單胞菌方法：斜面劃線接種注意：觀察結(jié)構(gòu)注意牛乳產(chǎn)酸、產(chǎn)堿、凝固、胨化現(xiàn)象是連續(xù)出現(xiàn)的。6四、實驗步驟1、細菌水解大分子物質(zhì)試驗2、糖發(fā)酵試驗培養(yǎng)基：葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基和乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基（內(nèi)裝杜氏小管）（各3支）菌種：大腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌方法：分別接種于葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基和乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基7四、實驗步驟1、細菌

5、水解大分子物質(zhì)試驗2、糖發(fā)酵試驗3、IMViC試驗8IMViC試驗試驗名稱培養(yǎng)基名稱菌種名稱接種方式接種管數(shù)吲哚試驗蛋白胨水培養(yǎng)基大腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌液體1甲基紅試驗葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基液體1伏普試驗葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基液體1檸檬酸鹽試驗檸檬酸鹽培養(yǎng)基斜面19五、實驗報告1、分別記錄試驗菌種對淀粉水解、脂肪水解、明膠液化、石蕊牛奶及尿素試驗的結(jié)果。以“”表示陽性，“”表示陰性。2、記錄大腸桿菌及普通變形桿菌對葡萄糖和乳糖的發(fā)酵試驗結(jié)果。以“+”表示產(chǎn)酸或產(chǎn)氣，“”表示不產(chǎn)酸或不產(chǎn)氣。3、記錄大腸桿菌和產(chǎn)氣桿菌的吲哚試驗、甲基紅試驗、伏-普試驗、檸檬酸鹽試驗及硫化氫試驗結(jié)果，以“+”表示陽性反應?！啊北硎娟幮苑磻?、不利用碘液，你怎樣證明淀粉水解的存在？10五、實驗報告5、假如某種微生物可以有氧代謝葡萄糖，發(fā)酵試驗應該出現(xiàn)什么結(jié)果？6、為什么大