（組織分離方法）學習資料單

1、第二章菌種的來源第五節(jié)：組織分離方法mi種類型所謂菌種分離指的是在無菌操作條件下，由泡子萌發(fā)、子實體組織分離或者種木等基質分離，讓其在適宜的條件下生長繁殖而得到純 菌絲體的過程。菌種通常分為母種、原種、栽培種三種。根據(jù)食用菌種類的不同可選用不同的分離方法，可分為組織分離法、泡子分離法和基內菌絲分離法三種。目前常采用的是組織分離法 和孑包子分離方法。二、組織分離法概念組織分離指的是在無菌操作條件下，利用子實體內部組織（菌肉、菌柄）、菌核或菌索來分離獲得純菌種的方法。食用菌的子實體實際 上就是雙核菌絲的扭結物，它具有很強的再生能力，因此，只要切取小塊組織，把它接種到適宜的培養(yǎng)基上，適溫培養(yǎng)，就能得

2、到純菌 絲體。這是一種無性繁殖方法，所得菌種遺傳性穩(wěn)定，無變異現(xiàn)象, 能夠保持原品種的優(yōu)良性狀，而且取材廣泛，操作簡便，容易成功。在生產(chǎn)上常被用于菌種的復壯、新品種的選育和栽培種優(yōu)良性狀的穩(wěn) 定等作用。組織分離最好采用正處于旺盛生長中的幼嫩子實體或菇蕾作為分離材料，采取菌蓋與菌柄交接處的組織進行分離，效果最好，對于 那些有內或外菌幕保護的菇類來說，取在菌幕保護下的幼嫩菌褶接 種，生活力更加旺盛。對于某些菌根菌，則取用靠近基部的菌柄組織 才能成活。根據(jù)分離材料的不同，組織分離法又包括子實體組織分離，適用 于絕大多數(shù)食用菌；膠質菌類組織分離法，適用于黑木耳、毛木耳、 銀耳等；菌核組織分離，適用于如

3、茯苓、豬苓、雷丸等；菌索組織分 離法，適用于蜜環(huán)菌、假蜜環(huán)菌等；生長點分離法，適用于金針菇等。三、子實體組織分離法操作：子實體組織分離是通過分離培養(yǎng)食用菌子實體的菌肉組織獲得 菌種的方法，適用于平菇、草菇、香菇等絕大多數(shù)食用菌。但不同食用菌子實體的各種組織及不同部位生長分裂的旺盛程 度不同，因此在切取子實體組織部位時應該有所選擇。多數(shù)食用菌選擇切取部位是子實體菌蓋與菌柄交接處的菌肉或 菌蓋的邊緣部位的菌肉。在無菌條件下，子實體表面用75%酒精擦拭消毒，將解剖刀插入 菌柄lcm左右，雙手把子實體從菌柄處掰開，留下左手一半子實體， 右手持接種刀，灼燒并冷卻后，在菌蓋與菌柄交界處挑取米粒大小一 塊組

4、織，迅速移接到試管斜面中央，置適溫下培養(yǎng)，待菌絲長滿斜面 即為母種。若技術熟練，子實體表面不經(jīng)消毒處理，也可直接掰開子 實體進行分離。大多數(shù)傘菌均可采用這種方法進行分離。但有些菇類, 如紅菇、乳菇等，它們的菇體細胞已抱囊化，再生力極弱，分離時可 選取菌柄未破損的子實體，在無菌條件下，菌柄經(jīng)75%酒精做表面消 毒，掰斷菌柄，用接種刀伸入菌柄內部，刮切著生內壁的球狀絨毛移 接在斜面上，適溫下培養(yǎng)即可。（配視頻1,用老師畫外音，配背景 音樂，視頻長度與老師講授保持一致）I、膠質菌類組織分離法:膠質菌類，如黑木耳、毛木耳、銀耳等，組織層較薄，具有一定 韌性，組織分離較為困難，成功率較低。（一）黑木耳。

5、取耳片進行組織分離，具體步驟可按照“子實體組織分離法”中有關操作方法進行。與菇類相比，黑木耳只是在組織的 切取方式上有所不同。黑木耳切取的部位是子實體腹面部分的膠質 體。（二）銀耳。銀耳耳片薄，具有一定的復水性，表面消毒易殺死耳片內的組織，不易獲得菌絲。只有取銀耳膠質團內的組織進行分離,才有可能得到銀耳菌絲或銀耳菌絲與香灰菌絲的混合菌絲體。五、核組織分離法:是從食用菌菌核分離培養(yǎng)獲得純菌絲的一種方法，如茯苓、豬苓、雷丸等，子實體不易采集，常見的是菌核。菌核組織分離與子實體組 織分離的方法基本相同。其分離方法是在超凈工作臺上，對菌核進行 表面消毒，以無菌操作的方法將菌核從中切成兩半，在中心位置挑取 黃豆粒大小組織塊，接種于培養(yǎng)基上，于25C溫度下培養(yǎng)。六、菌索織織分離法:是從食用菌菌索中分離培養(yǎng)得到純菌絲的方法，如蜜環(huán)菌、假蜜環(huán)菌等。它們是以特殊結構的菌索進行繁殖的。其分離方法是在超凈 工作臺上，挑取生命力旺盛的菌索尖端部分，進行表面消毒，以無菌 操作的方法使用解剖刀除去菌索的黑色外皮層即菌鞘，抽出白色菌髓 部分，切成小段移接到培養(yǎng)基上，于25CT培養(yǎng)。七、生長點分離法: 是從食用菌菌柄與菌蓋的連接處獲得純菌絲的一種方法，適用于菇小、蓋薄、柄中空的傘菌